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丁酸钠对翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用
目的 探讨丁酸钠(sodium butyrate,NaB)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPFs)的抗增殖作用.方法 翼状胬肉成纤维细胞原代、传代培养,取3～5代细胞进行实验.分别加入1.25、2.5、5.0和10.0mmol/L的NaB溶液各作用12、24、48、72 h,同时以DMEM培养液为对照,以噻唑蓝比色法(MTT)在酶标仪上检测吸光度,计算出各时间段各浓度NaB对HPFs的增殖抑制影响;分别加入0、1.25、2.5、5.0和10.0mmol/L的NaB溶液作用48 h,用细胞凋亡检测试剂盒(POD)检测凋亡细胞;流式细胞仪检测NaB对HPFs细胞周期及细胞凋亡的影响.结果 MTT结果显示,NaB为1.25mmol/L组各时间段对HPFs的增殖无明显抑制作用(P＞0.05).NaB≥2.5mmol/L作用12 h后开始抑制HPFs生长(P＜0.05).10.0mmol/L组抑制率可达41.35%,随着时间的延长,各浓度组的抑制作用明显增强,至72 h,各组的抑制率分别为31.67%、47.96%、63.20%;POD法检测显示,经不同浓度NaB作用48 h后HPFs产生凋亡形态学变化,对照组及1.25mmol/L实验组未见明显凋亡细胞;2.5mmol/L组可以观察到少量凋亡细胞,5mmol/L组可见明显凋亡细胞,10mmol/L可见凋亡细胞及少量坏死细胞;流式细胞仪检测发现,HPFs经1.25、2.5、5.0和10.0mmol/L的NaB处理48 h后,G0/G1期细胞群比例增加,S期细胞群比例明显减少,2.5、5.0、10.0mmol/L NaB的DNA直方图G0/G1峰前出现了较明显的亚二倍体峰,计算得凋亡率分别为6.97%、8.58%及12.38%(P＜0.05).结论 NaB≥2.5mmol/L时能有效抑制HPFs的增殖.
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丁酸钠对尿毒症大鼠脑组织线粒体呼吸功能的影响
目的:探讨丁酸钠对5/6肾切除诱导的尿毒症大鼠脑组织线粒体功能的影响.方法:雄性SD大鼠45只,随机分为假手术组、模型组、10 mg/kg氯沙坦钾组、低剂量丁酸钠组(0.4 g/kg)和高剂量丁酸钠组(0.8 g/kg),除假手术组外,其余各组大鼠行5/6肾切除手术.术后第7周开始给药,模型组每天水饲,高剂量丁酸钠组和低剂量丁酸钠组每天分别灌胃,共给药两周.第9周始处理大鼠,比色法测定血清肌酐、尿素氮,Clark 氧电极法测定线粒体呼吸功能、试剂盒测定线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)与细胞色素C氧化酶(CCO)活性;RT-PCR测定脑组织SDHB、COXII、Gadd45b.结果:与模型组相比较,丁酸钠组血清肌酐、尿素氮含量都有降低,SDH和CCO活性均有升高,脑组织线粒体呼吸控制率(RCR)提高,SDHB、COXII、Gadd45b的表达量均有不同程度的上升,且高剂量组结果优于低剂量组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:丁酸钠能增加尿毒症大鼠脑组织中与呼吸功能相关基因(SDHB、COXII)的表达,提高脑组织线粒体呼吸链关键酶SDH和CCO活性,改善脑组织线粒体呼吸功能.
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丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的信号通路及对AQP3基因表达影响的研究
目的:探讨丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡过程的分子机理及其对水通道蛋白AOP3基因表达的影响.方法:MTT法检测不同浓度的丁酸钠对结肠癌HT-29细胞生长的影响;RT-PCR检测不同浓度的丁酸钠对细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4、p16和AQP3的基因表达水平,同时使用流式细胞仪检测细胞周期.结果:加入浓度超过2.5 mmol/L的丁酸钠后,结肠癌HT-29细胞生长受到抑制,Cyclin D1、CDK4和AQP3的表达水平下降,p16的表达水平上调,细胞阻滞于G1/S期.结论:浓度超过2.5 mmol/L的丁酸钠可以诱导结肠癌HT-29细胞凋亡,使其细胞周期阻滞于G1/S期,且这种诱导作用是剂量依赖型的,其分子通路可能是通过p16-Cyclin D1/CDK4这条信号途径,在此过程中,伴随着AQP3的基因表达水平降低.
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丁酸钠通过维持乙酰化平衡改善帕金森病模型鼠认知功能和情感障碍
目的 研究丁酸钠对帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型小鼠认知功能和情感障碍影响及机制.方法 C57BL/6J鼠随机分为对照组、MPTP组、丁酸钠组、MPTP+丁酸钠组,通过悬尾实验和Morris水迷宫实验研究丁酸钠对PD模型鼠认知功能和情感障碍的影响;Western blot和RT-PCR检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase 1,HDAC1)蛋白表达和mRNA水平.结果 与对照组比较,PD模型鼠表现为学习记忆能力下降和抑郁样行为;丁酸钠能够改善PD模型鼠抑郁行为,并明显提高PD模型鼠学习记忆能力;丁酸钠可使PD模型鼠脑组织TH和HDAC1蛋白表达和mRNA水平明显升高.结论 MPTP诱导TH蛋白表达明显降低,引起PD模型鼠认知和情感障碍,可能是干扰了组蛋白乙酰化平衡;丁酸钠能够使PD模型鼠脑组织TH表达明显升高,改善PD模型鼠认知功能和情感障碍,主要是通过保护多巴胺神经元、修复和维持组蛋白乙酰化和去乙酰化动态平衡来完成的.
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丁酸钠诱导Raji细胞表达DAPK的研究
目的探讨丁酸钠(SB)对人淋巴瘤Raji细胞生长和DAPK表达变化的影响.方法用丁酸钠作用于Raji细胞株,观察形态、增殖情况、细胞周期分布变化、死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化的变化及该酶表达的变化.结果成团悬浮生长的Raji细胞呈现贴壁生长,细胞增殖速度明显被抑制,细胞阻滞在G0/G1期;DAPK启动子去甲基化,DAPK表达量增加,细胞凋亡增加.结论丁酸钠具有诱导Raji细胞DAPK基因启动子去甲基化,使DAPK重新表达,诱导细胞凋亡的作用.
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丁酸钠和氯高铁血红素诱导K562细胞分化的信号转导机制
目的探讨丁酸钠和氯高铁血红素(hemin,Hm)诱导K562细胞向红系分化的信号转导机制.方法采用台盼蓝拒染法观察丁酸钠和Hemin对K562细胞生长曲线的影响;流式细胞仪进行细胞周期分析;联苯胺染色检测药物诱导K562细胞向红系分化作用. 结果丁酸钠和Hemin呈时间和剂量依赖方式诱导K562细胞向红系分化; ERK抑制剂PD98059增加丁酸钠、降低Hemin诱导的联苯胺阳性率;JNK抑制剂SP600125未影响丁酸钠却降低Hemin的诱导分化作用.结论在K562细胞向红系分化过程中,ERK正性调节Hemin、负性调节丁酸钠的诱导分化作用;同时 Hemin而不是丁酸钠的诱导分化过程还需要JNK的活性.
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丁酸钠和曲古抑菌素A促进K562细胞分化机制的研究及其对比
目的探讨丁酸钠与曲古抑菌素A(TSA)促进K562细胞分化的机制,并对比二者的异同.方法台盼蓝拒染实验观察药物对细胞生长曲线的影响;四氮唑盐还原试验和细胞表面分化抗原检测观察药物对细胞的分化作用;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR和Western Blot分别检察细胞周期蛋白在mRNA和蛋白质水平的表达.结果丁酸钠和TSA分别将细胞主要阻滞于G0/G1期和G2期;丁酸钠下调cyclin D1 mRNA的水平基本上不影响其蛋白质的表达,上调cyclin D3蛋白质表达水平基本上不影响其mRNA的水平;TSA与丁酸钠的作用相同;二者均可以在mRNA和蛋白质水平刺激K562细胞p21的表达.结论丁酸钠和TSA促进K562的分化是通过诱导p21和cyclinD3蛋白质的表达而完成的,丁酸钠和TSA均有望成为治疗慢性髓系白血病的药物.
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丁酸钠对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的作用
目的:观察丁酸钠对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的作用.方法:以1、2.5、5 mmol/L丁酸钠处理Eca-109细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,透射电镜观察细胞凋亡的形态,四甲基噻唑氮蓝法检测抑制细胞增殖率,TUNEL法检测细胞凋亡率.结果:Eca-109细胞经丁酸钠处理后:光镜下观察细胞变小、变圆,部分从培养瓶壁上脱落下来;电镜下细胞核体积缩小,染色质浓缩聚集于核膜处;细胞增殖受到明显抑制,1、2.5、5 mmol/L丁酸钠处理24 h、48 h和72 h后,细胞生长抑制率分别是13.38%、34.15%、39.02%,14.04%、33.33%、46.49%和31.11%、40.74%、48.15%,与低浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05～P<0.01);2.5 mmon/L丁酸钠处理24 h组与阴性对照组细胞凋亡率分别是5.5%和1.6%,差异有统计学意义(P<0.01).结论:丁酸钠可抑制食管癌Eca-109细胞增殖、促进凋亡,且呈浓度和时间依赖性.
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丁酸钠抗肿瘤作用分子机制研究进展
丁酸钠(sodium butyrate,NaB)是由结肠共生菌发酵食物纤维产生的一种短链脂肪酸(short chain fatty acid,SCFA),其生理浓度可引起多种生物效应,国内外报道NaB可抑制结肠癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、食管癌、白血病等多种肿瘤细胞的生长,促进其分化,使肿瘤细胞出现类似正常细胞的表型,并诱导细胞凋亡,抑制肿瘤的侵袭和浸润[1,2].但其作用的分子机制目前尚未完全阐明,国内外学者对此作了进一步的研究,本文就此作一综述.
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丁酸钠对CHO细胞生长及rhEPO表达量的影响
目的 优化丁酸钠的添加浓度提高rhEPO表达量.方法 设0、0.25、0.5、0.75mM丁酸钠添加浓度,24孔板培养,隔天换液,细胞计数并收集上清检测rhEPO表达量及糖耗速率,检测20天.比较单位细胞表达量、总表达量的变化及糖耗速率,选择合适的丁酸钠添加浓度.结果 丁酸钠浓度越高对细胞抑制作用越强,但对单位细胞总表达量提高越多.平衡这两种作用,0. 25mM 和0. 5mM 丁酸钠为较优选择,20 天内rhEPO 总表达量的提高分别提高了36. 1%、25. 5%,而且随着培养时间的延长可以提高得更多.结论 添加低浓度的丁酸钠可以提高rhEPO总表达量,建议在发酵中后期,添加0. 25mM 的NaBu,可以稳定并提高rhEPO 的表达量,进而延长整个发酵周期.
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丁酸钠对Bel-7402人肝癌细胞几种酶活性的影响
为了探讨丁酸钠对人肝癌细胞各种酶活性的影响,采用丁酸钠处理Bel-7402人肝癌细胞,测定其γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、酪氨酸-α-酮戊二酸转氨酶(TAT)、醛缩酶(ALD)的比活力和细胞增殖速度.结果显示,2.5mmol/L和5.0mmol/L的丁酸钠能明显抑制人肝癌细胞增殖,并使肝癌标志酶γ-GT活性及反映肝细胞恶变或损伤的ALD活性明显降低(P＜0.01,P＜0.05),而使反映肝细胞分化的TAT活性明显升高(P＜0.01,P＜0.05).结果表明,丁酸钠能引起人肝癌细胞γ-GT、TAT、ALD明显改变,提示这几种酶可作为肝癌细胞分化诱导的酶学指标.
关键词： 丁酸钠 人肝癌细胞 γ-谷氨酰转肤酶 酪氨酸-α-酮戊二酸转氨酶 醛缩酶 -
转移抑制基因KAI1在丁酸钠逆转卵巢癌细胞恶性表型作用中的变化
目的:研究丁酸钠逆转人卵巢癌3AO细胞恶性表型的机制.方法:采用MTT法观察药物对卵巢癌细胞的抑制作用,扫描电镜观察药物作用后细胞超微结构变化,免疫组化染色观察药物作用后转移抑制基因KAI1表达的变化.结果:药物对卵巢癌3AO细胞的抑制率呈剂量依赖性,药物作用后细胞微绒毛减少、变短、消失,KAI1基因免疫组化染色较对照组明显增强.结论:丁酸钠可成功逆转人卵巢癌细胞的恶性表型,转移抑制基因KAI1在肿瘤浸润转移中起着重要作用.
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丁酸钠诱导人子宫内膜癌细胞凋亡的机制
目的:探讨丁酸钠(NaB)诱导人子宫内膜腺癌细胞(HHUA)凋亡的机制.方法:用终浓度10mol/L丁酸钠诱导HHUA细胞,以DNA荧光染色、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术(FACS)等检测细胞凋亡的发生情况;用Western blot分析细胞凋亡相关蛋白的表达以及caspase-3及其抑制剂Ac-DEVD-CHO在NaB诱导细胞凋亡中的作用.结果:NaB处理后24h HHUA细胞即发生凋亡,Fas过度表达、caspase-3激活及PARP被切割始于用药后24h,至72h达高峰;Ac-DEVD-CHO能部分抑制NaB诱导的细胞凋亡.结论:NaB诱导HHUA细胞凋亡与Fas过度表达和caspase-3的激活有关.NaB可能成为一种新的抗子宫内膜癌药物.
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1株花柳珊瑚来源真菌Curvularia lunata产cytochalasin B发酵优化及其化学表观遗传修饰研究
目的 通过对中国南海花柳珊瑚来源真菌Curvularia lunata (RA16-1)进行发酵优化以提高该菌的cytochalasin B产量,并加入组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠以考察对该菌次级代谢产物的影响.方法 运用单因素试验设计,对菌株产cytochalasin B的碳源、氮源、初始pH值、盐浓度等发酵条件进行优化;运用柱色谱层析技术对加入丁酸钠的真菌Curvularia lunata (RA16-1)发酵产物进行分离,以及核磁与质谱技术对分离的化合物进行结构鉴定.结果 单因素试验表明优发酵条件为:碳源为蔗糖(30g·L-1)、氮源为蛋白胨(30 g·L-1)、发酵时间为96 h、初始pH为5.0、盐浓度为2％.此外,从加入丁酸钠的发酵产物中分离得到了4个化合物,其中2个化合物(化合物2和3)为首次从该物种中获得.结论 在优化条件下,cytochalasin B 的产量可达到2.3g·L-1.组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠的加入后使得该菌发酵产物的结构类型发生较大变化.
关键词： 花柳珊瑚来源真菌 优化 cytochalasin B 丁酸钠 -
丁酸钠诱导结肠癌Lovo细胞凋亡及其对p53靶基因的调控
目的 观察丁酸钠对结肠癌Lovo细胞p53的三个重要靶基因,p21wafl、Bax和Gadd45的调控,进一步探讨其抑制细胞增生、诱导细胞凋亡的分子机制.方法 Lovo细胞常规培养分别用1.25、2.5、5.0、10 mmol/L丁酸钠进行干预.用MTT法检测细胞增生,流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期;AnnexinV-FITC/PI双标记观察细胞凋亡;RT-PCB和Western blotting分别检测丁酸钠对p21wafl、Bax和Gadd45三种基因mRNA和蛋白的表达.结果 丁酸钠以剂量和时间依赖的方式抑制Lovo结肠癌细胞的增生,诱导其凋亡,并阻滞Lovo细胞停滞于G2/M期.p21wafl、Gadd45和Bax基因mRNA和蛋白的表达增加,其中以Gadd45的表达变化明显.结论 2.5 mmol/L以上浓度的丁酸钠以剂量和时间依赖的方式,抑制结肠癌Lovo细胞增生,诱导凋亡;丁酸钠参与结肠癌Lovo细胞周期的调控,2.5 mmol/L以上浓度的丁酸钠可以引起Lovo细胞的G2/M期阻滞;丁酸钠的上述作用可能与其调控Lovo细胞中p21wafl、Bax和Gadd45基因的表达有关.
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布氏镜检查丁酸钠影响HT-29细胞动态变化的研究
目的 观察丁酸钠对结肠癌HT-29细胞形态和生物学特性的影响.方法 多功能透射显微镜(布氏镜)动态观察丁酸钠作用前后HT-29细胞的生长状态、细胞运动及贴壁过程的变化.结果 丁酸钠5 mmol/L作用24 h后,HT-29细胞数量明显减少,细胞巢变小,巢内细胞数减少;细胞变成圆形,细胞大小趋于一致;细胞核内染色质呈块状聚集,折光性降低,呈现出凋亡细胞形态;贴壁过程明显变缓.结论 丁酸钠可以改变HT-29的生长状态,抑制其生长;布氏镜可以动态地观察药物作用前后培养细胞的形态、微细结构及运动的变化,是一项先进的、具有实用价值的检查技术.
关键词： 多功能透射显微镜(布氏镜) 丁酸钠 HT-29细胞株 -
卵巢癌细胞侵袭转移过程中KAI1基因的表达及意义
目的:探讨卵巢癌细胞SKOV3侵袭转移过程中KAI1基因的表达及意义.方法:采用MTT法观察丁酸钠对细胞的抑制作用,形态学观察SKOV3药物作用后细胞超微结构的变化,及转移抑制基因KAI1的表达情况.结果:药物对卵巢癌SKOV3细胞的抑制率呈剂量依赖性,丁酸钠作用下细胞微绒毛减少变短、消失,KAI1基因免疫组化染色较对照组明显增强.结论:转移抑制基因KAI1在卵巢肿瘤侵袭转移中起着重要作用.
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丁酸钠下调IRAK1改善肠易激综合征内脏高敏感
目的 探究丁酸钠改善肠易激综合征(IBS)内脏高敏感性机制.方法 纳入27例腹泻型肠易激综合征(IBS-D)患者及22例对照共49例参与者,免疫组化检测肠上皮IRAK1蛋白表达量,Spearman秩和检验分析IRAK1蛋白表达与腹痛程度和频率评分相关性.2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠建立IBS疾病动物模型,丁酸钠灌肠干预,结肠扩张实验观察内脏敏感性变化,ELISA检测结肠IRAK1蛋白表达水平,Spearman秩和检验分析动物结肠IRAK1表达与内脏疼痛阈值相关性.以IL-33、丁酸钠干预HT-29细胞,Western blotting观察IRAK1蛋白表达变化.结果 IBS-D患者结肠上皮IRAK1蛋白表达高于对照组,结肠上皮IRAK1表达水平与腹痛程度评分呈正相关(r=0.676,P＜0.001),与腹痛频率评分呈正相关(r=0.725,P＜0.001).丁酸钠干预可降低IBS动物结肠IRAK1蛋白表达、提高内脏疼痛阈值,动物结肠IRAK1蛋白表达与内脏疼痛阈值呈负相关(r=-0.655,P＜0.001).IL-33可使细胞IRAK1蛋白表达上调,丁酸钠预处理可减弱此效应.结论 丁酸钠可能通过下调IRAK1蛋白表达水平改善IBS内脏高敏感性.
关键词： 丁酸钠 白介素-1受体相关激酶1 肠易激综合征 内脏高敏感 -
丁酸钠联合顺铂对卵巢透明细胞癌ES-2细胞活性及增殖的影响
目的：观察丁酸钠联合顺铂对卵巢透明细胞癌ES-2细胞活性及增殖的影响。方法将对数生长期的卵巢透明细胞癌ES-2细胞随机分为观察组和对照组。观察组分别加入1、2、4、6 mmol／L的丁酸钠和5μg／mL顺铂，对照组分别加入与观察组相同浓度的丁酸钠。采用MMT法检测两组细胞活性，Western blotting 法检测两组凋亡蛋白（ c-PAPP、c-Caspase-3）和增殖蛋白（ ERK、p-ERK）相对表达量。结果观察组加入1、2、4、6 mmol／L丁酸钠和顺铂细胞活性分别为51％±3％、39％±2％、22％±2％、11％±1％，多组间及组内两两比较，P均＜0．05；对照组加入1、2、4、6 mmol／L丁酸钠细胞活性分别为88％±4％、76％±3％、69％±2％、54％±2％，多组间及组内两两比较，P均＜0．05；两组加入相同浓度丁酸钠细胞活性比较，P均＜0．05。随着丁酸钠浓度增加，两组凋亡蛋白c-PAPP、c-Caspase-3相对表达量逐渐升高，增殖蛋白ERK、p-ERK相对表达量逐渐降低。与对照组同浓度丁酸钠比较，观察组1、2、4、6 mmol／L丁酸钠和顺铂c-PAPP、c-Caspase-3蛋白表达均升高，1、6 mmol／L丁酸钠和顺铂ERK、p-ERK蛋白表达均降低；两组比较，P均＜0．05。结论丁酸钠联合顺铂可降低卵巢透明细胞癌ES-2细胞活性，抑制其增殖、促进其凋亡；丁酸钠浓度越高，上述作用越明显。
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丁酸钠对人胃癌MKN-28细胞增殖的抑制作用及其机制
目的 观察脱乙酰化酶抑制剂丁酸钠对人胃癌MKN-28细胞增殖的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 MTT法观察丁酸钠对人胃癌MKN-28细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;RT-PCR检测丁酸钠作用前后p21WAF1 mRNA的表达.结果 1.0、2.5、5.0 mmol/L丁酸钠作用24、48、72 h均可抑制 MKN-28细胞增殖,其效果具有时间、剂量依赖性(P＜0.05);丁酸钠1.0、2.5、5.0 mmol/L处理72 h后,MKN-28细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P＜0.05);细胞凋亡率分别为13.7%±0.8%、20.8%±2.4%、33.6%±2.6%,与对照组2.8%±0.4%相比P均＜0.05;与对照组比较,丁酸钠处理后p21WAF1 转录水平上调.结论 丁酸钠可显著抑制人胃癌MKN-28细胞的生长,其可能的机制是通过上调p21WAF1基因的表达,诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期.
