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Gli2基因沉默逆转肝癌细胞系SMMC-7721的上皮间质转化
目的：探讨胶质瘤相关癌基因同源蛋白2（Gli2）对肝癌细胞系SMMC-7721上皮间质转化（EMT）和侵袭能力的影响及机制。方法合成shRNA-Gli2、shRNA-NC病毒载体，实验设shRNA-Gli2组、shRNA-NC组和空白组，转染SMMC-7721细胞。用Transwell小室和细胞黏附实验观察细胞侵袭及黏附能力；用qRT-PCR和Western blot检测细胞间Gli2、E-cadherin、N-cadherin及vimentin基因和蛋白的表达。结果在不同肝癌细胞系中，随着肝癌细胞系侵袭能力的增强，Gli2的表达逐渐增高，shRNA-Gli2组与对照组相比侵袭能力降低，同种黏附能力增加，异种黏附能力降低（P＜0.05）。 shRNA-Gli2组与对照组相比，E-cadherin 表达明显增高而N-cadherin 和vimentin 表达明显降低（ P＜0.05）。结论沉默Gli2的表达能够促进肝癌细胞SMMC-7721 EMT的反转，并降低其侵袭能力，机制可能与E-cadherin的上调和N-cadherin、vimentin的下调有关。
关键词： Gli2 上皮间质转化( EMT) SMMC-7721 侵袭 黏附 -
Gli2基因沉默对结肠癌细胞系SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响
目的 探讨胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)基因对结肠癌细胞系SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响及相关机制.方法 构建靶向Gli2基因的shRNA慢病毒载体,转染到SW480细胞中,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达;实验设干扰组、阴性对照组和空白组.用MTT法、倍增时间与集落形成实验检测细胞的增殖能力;用Transwell小室法检测细胞的迁移、侵袭能力;利用qRT-PCR和Western blot法检测细胞间Gli2、cyclinD和MMP-2基因和蛋白的表达.结果 SW480细胞转染慢病毒72h后可见明显的绿色荧光蛋白表达,干扰组较阴性对照组与空白组Gti2表达降低,细胞增殖减慢,集落形成能力减弱,倍增时间延长,迁移、侵袭能力减弱,cyclinD1和MMP-2表达下降(P＜0.05).结论 沉默Gli2的表达能够抑制SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力,机制可能与cyclinD1和MMP-2的下调有关.
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沉默Gli2基因对人肝癌细胞系SMMC-7721体外血管生成的影响
目的 探讨胶质瘤相关癌基因2(Gli2)对肝癌细胞SMMC-7721体外血管生成作用及机制.方法 设干扰组、对照组和空白组;构建靶向Gli2的shRNA重组慢病毒和阴性对照慢病毒,转染到SMMC-7721细胞,RT-qPCR和Western blot检测沉默效率;用体外血管生成实验检测血管生成能力;用ELISA检测SMMC-7721细胞上清液中VEGF-A、MMP-2分泌水平;用RT-qPCR、Western blot检测细胞内VEGF-A、MMP-2的表达差异.结果 shRNA慢病毒转染率为90％左右,干扰组与对照组和空白组相比Gli2表达降低(P＜0.05);血管生成能力减弱(P＜0.05);上清液中VEGF-A含量下降(P＜0.05);细胞中VEGF-A、MMP-2表达明显降低(P＜0.05).结论 沉默Gli2的表达能够抑制肝癌细胞SMMC-7721血管生成,其机制可能与VEGF-A、MMP-2的下调有关.
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Hedgehog信号通路在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义
Hedgehog(Hh)信号通路在肿瘤的发生和发展过程中发挥重要调控作用.本研究探讨Hh信号通路中Glil和Gli2在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)中的表达及意义.分别采用实时定量RT-PCR和免疫组织化学的方法分析检测18例NHL和10例淋巴结反应性增生组织中Glil、Gli2 mRNA和蛋白表达水平.结果表明,NHL组织中Glil和Gli2 mRNA中位表达水平经β-actin校正后分别为2.05和2.31,明显高于淋巴结反应性增生组织(分别为0.82和0.89),且Glil与Gli2 mRNA表达水平呈正相关(r=0.63,p＜0.01),Gli2 mRNA水平与NHL临床分期(p=0.03)具有相关性；Glil和Gli2蛋白在NHL中的阳性率分别为80％和68％,明显高于对照组,且Glil和Gli2蛋白表达呈正相关(r =0.62,p＜0.05)；Glil和Gli2蛋白表达均与NHL分期相关(p=0.05,p=O.0l),而Glil和Gli2基因及蛋白表达水平与NHL患者年龄比例、性别比例、B症状及分型方面无明显相关性(P＞0.05).结论:Hh信号通路中Glil和Gli2在NHL患者组织中高表达,并对NHL患者临床分期及预后具有指导意义.进一步时Hh信号通路在NHL中作用机制的深入探讨将有助于揭示NHL的发生、发展的机理,并有望成为NHL未来治疗的重要突破点.
关键词： 非霍奇金淋巴瘤 Hedgehog信号通路 Glil Gli2 -
Hedgehog 信号通路转录因子Gli2在肝癌组织中的表达及意义
目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路下游转录因子胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)在肝细胞癌组织中的表达及临床意义.方法 采用Real time RT-PCR 法及Western blot 检测20 对肝癌及癌旁组织Gli2 基因mRNA 及蛋白的表达;采用免疫组织化学法检测52 对肝癌及癌旁组织Gli2 蛋白的表达情况.结果 Gli2 mRNA 及蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织.52 例肝癌组织中Gli2 阳性表达38 例(73.1%),相应的癌旁组织Gli2 阳性表达8 例(15.4%),差异有显著性(P ＜ 0.01);且Gli2 蛋白表达与肝癌分化程度、有无血管侵犯及淋巴结转移有相关性(P ＜ 0.05).结论 Gli2 的异常表达与肝癌的发生发展及浸润转移密切相关,Gli2 可能成为肝癌的重要生物学标志和生物治疗靶点.
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细胞周期相关因子Gli2在大鼠自体移植静脉中的表达
目的 研究细胞周期相关因子Gli2在大鼠自体移植静脉中的表达变化及其与内膜增生的关系.方法 雄性Wistar大鼠36只,8周龄,体质量140 g.建立颈静脉-腹主动脉移植模型,分别于术后14 d、28 d各处死18只大鼠,取材移植血管,免疫荧光检测Gli2蛋白在移植血管新生内膜中的表达,Western印迹法观察Gli2及细胞增殖核抗原(PCNA)的表达,RT-PCR检测Gli2-mRNA的表达;以对侧颈静脉作为对照.结果 免疫组化结果显示,正常静脉、术后14 d和术后28 d移植静脉Gli2+细胞数比例分别为(3.2±0.4)%、(41.3±0.6)%和(58.3±0.6)%,正常静脉与移植静脉差异有统计学意义(P＜0.01).Western印迹法显示术后Gli2表达水平增加并与PCNA表达呈正相关(r=0.826,P＜0.01).RT-PCR结果显示术后14 d组和术后28 d组的Gli2 mRNA表达增加,分别为对照组含量的8.9和13.6倍.结论 自体静脉移植术后,Gli2在新生内膜中高表达并可能与细胞增殖相关.
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Gli2对高糖条件下肾小管上皮细胞凋亡及ROS水平影响
目的:探讨胶质瘤相关癌基因2(Gli2)对高糖条件下的肾小管上皮细胞凋亡及活性氧(ROS)水平影响.方法:用肾小管上皮细胞NRK-52E为研究对象,分别转染Gli2过表达载体和对照载体,同时用不转染的细胞作为对照,RT-PCR和Western blot检测Gli2水平,用高糖和低糖细胞培养液培养不转染的对照细胞,同时以高糖培养液培养转染Gli2过表达载体的细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针法检测ROS含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)含量,Western blot检测 Bcl-2 相关 X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Ptch相关跨膜蛋白Smoothened(Smo)水平.结果:NRK-52E细胞转染Gli2过表达载体后的Gli2 mRNA和蛋白水平均明显高于对照细胞(P＜0. 01),而转染对照载体后的NRK-52E细胞中Gli2 mRNA和蛋白水平与对照细胞相比没有差异(P＞0. 05).高糖培养后的不做转染的NRK-52E细胞凋亡率升高,ROS含量升高,SOD含量下降,细胞中Bax、Cleaved Caspase-3水平升高,Smo水平下降,与对照细胞相比差异具有统计学意义(P＜0. 01).而过表达Gli2后的 NRK-52E细胞经高糖培养后,细胞凋亡率下降,ROS含量降低,SOD含量升高,细胞中Bax、Cleaved Caspase-3水平下降,Smo水平升高,与单纯高糖培养的NRK-52E细胞相比,差异具有统计学意义(P＜0. 01).结论:高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡和氧化损伤,Gli2可以降低高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡,减轻氧化损伤.
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Gli2基因在胎鼠后肠发育后期的表达
目的探讨胎鼠后肠发育与sonic hedgehog(Shh)基因转录因子 Gli2基因表达水平的关系.方法48只妊娠Wistar大鼠随机分成2组,实验组(n=24)在孕11d按125mg/kg胃管注入1%乙烯硫脲(ethylenethiourea,ETU),对照组(n=24)给予等量蒸馏水.两组分别于孕12d、14d和16d各处死8只母鼠,每只母鼠取4只体重相似的胎鼠,取其直肠1cm提取RNA,采用半定量RT-PCR法检测Gli2基因表达.结果实验组胎鼠直肠Gli2基因表达水平明显低于对照组(P<0.05),实验组Gli2基因表达呈一低水平线,而对照组随妊娠时间呈一下降的曲线.结论Gli2基因表达水平在胎鼠后肠发育中具有重要的作用.
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外源表达持续活化型Gli2对小鼠星形胶质细胞生物学特性的影响
目的 探讨外源表达持续活化型Gli2对小鼠星形胶质细胞生物学特性的影响.方法构建可表达持续活化型Gli2的慢病毒载体,包装慢病毒颗粒,继而感染小鼠星形胶质细胞,对其生物学特性的改变进行鉴定.结果 研究发现,含有外源表达的持续活化型Gli2的小鼠星形胶质细胞在神经干细胞培养基中连续培养13 d后可获得形成细胞球的能力,且形成的细胞球与正常的小鼠神经球在形态上相近;对所形成的细胞球做免疫荧光染色,结果显示神经干细胞的特异性标志物Nestin呈阳性.结论在小鼠星形胶质细胞中外源表达持续活化型Gli2后可使其获得形成神经球样细胞球的能力.
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乙烯硫脲致畸胎鼠直肠末端Gli2基因的表达
目的探讨乙烯硫脲致畸胎鼠直肠末端sonic hedgehog(Shh)基因转录因子Gli2基因表达水平.方法妊娠Wistar大鼠24只随机分成2组,实验组(n=12)在孕11、13 d分别给予1%乙烯硫脲(125 mg/kg)胃管注入,对照组(n=12)予等量蒸馏水.孕16 d处死母鼠,实验组每只母鼠取4只体质量相似的无肛畸形胎鼠,对照组取4只体质量相似正常胎鼠,各取其直肠末端1 cm提取RNA,采用RT-PCR法检测Gli2基因表达,比较两组之间Gli2基因表达水平.结果先天性无肛胎鼠直肠末端Gli2基因表达水平明显低于正常胎鼠直肠末端(P=0.004).结论 Gli2基因表达水平减低与先天性无肛畸形的发生密切相关,乙烯硫脲致畸机制之一是影响Shh信号转导系统.
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Shh/Gli2信号轴在小鼠急性胰腺炎中的表达及意义
在慢性胰腺炎症过程中,Hedgehog(Hh)信号与组织的修复以及细胞增殖密切相关[1];而在急性胰腺炎症损伤中,Hh的作用不清楚.本研究通过诱导小鼠急性胰腺炎(AP)模型,观察Hh信号以及下游关键转录因子GLI2的表达,探讨胰腺急性损伤时组织修复的机制.
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Hedgehog信号通路在人肝癌细胞株中的表达及意义
目的 探讨Hedgehog信号通路在人肝细胞癌细胞系中的表达及意义.方法 采用半定量RT-PCR法检测PLC/PRF/5、HepG2及SMMC-7721肝癌细胞株中Shh、Ptch1、Smo、Gli1、Gli2 mRNA的表达；Western blot法检测PLC/PRF/5、HepG2及SMMC-7721肝癌细胞株中Gli2蛋白的表达.结果 除Shh外, Ptch1、Smo、Gli1、Gli2 mRNA在PLC/PRF/5、HepG2及SMMC-7721细胞中均有不同程度表达.其中,Ptch1、Smo、Gli1、Gli2 mRNA在PLC/PRF/5及SMMC-7721细胞中的表达强度显著高于成人正常肝细胞,而Gli1 mRNA在HepG2细胞中的表达量与正常肝细胞无明显差异；Gli2蛋白在成人正常肝细胞中几乎没有表达,在HepG2细胞中的表达也与正常肝细胞无明显差别,而在PLC/PRF/5及SMMC-7721细胞中,尤其是SMMC-7721细胞,Gli2的表达量异常增高.结论 Hedgehog信号通路的异常激活参与了肝细胞癌的发生发展过程,Gli2可能成为肝细胞癌重要生物学标志和生物治疗靶点.
关键词： 肝癌 Hedgehog信号通路 肝癌细胞株 Gli2 -
内源性转化生长因子-β对白血病细胞株Gli2基因表达的影响
目的 探讨转化生长因子(TGF)-β信号通路对白血病KG-1细胞株Gli基因的调控作用.方法 (1) ELISA法检测KG-1细胞培养上清液TGF-β1水平;(2)5 μmol/L SIS3作用于KG-1细胞,时间分别为6、12、24 h.处理结束后收集细胞,提取mRNA,检测Gli2的表达.结果 (1)KG-1细胞的培养上清TGF-β1水平明显低于正常人组;(2)5 μmol/L SIS3加入KG-1细胞分别作用6、12、24h,与对照组(仅加入2甲基亚砜为SIS3的溶剂)相比较,其Gli2的mRNA表达明显升高;并且随着作用时间的延长,差异更加显著.结论 KG-1细胞有低水平的TGF-β1产生,TGF-β抑制KG-1细胞Gli2的表达是通过TGF-β/Smad3途径介导的.
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Foxm1和Gli2在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义
目的 分析Foxm1、Gli2在上皮性卵巢癌组织中的表达,探讨二者在上皮性卵巢癌发生、进展及侵袭转移中的作用,为上皮性卵巢癌的诊断及其转移评估提供参考指标.方法 收集上皮性卵巢癌肿瘤标本106例,其中恶性上皮性卵巢癌标本68例,良性上皮性卵巢肿瘤标本38例;另外收集正常卵巢组织标本40例作为对照;采用免疫组化法检测上述标本中的Foxm1、Gli2的表达,分析上皮性卵巢癌组织中Foxm1、Gli2阳性表达率的关系及两者与上皮性卵巢癌临床特征的关系.结果 上皮性卵巢癌组织Foxml蛋白、Gli2蛋白表达评分均明显高于良性卵巢肿瘤组织和正常卵巢组织(均P＜0.05).有大网膜转移的上皮性卵巢癌组织的Foxm1和Gli2的阳性表达率均明显高于无大网膜转移者(均P＜0.05).Spearman相关分析显示,上皮性卵巢癌组织中Foxm1与Gli1呈正相关(r=0.517,P=0.000).结论 Foxm1、Gli2在上皮性卵巢癌组织中均高表达,两者存在一定的相关性,可能参与了卵巢癌的发生和侵袭转移过程,因此对两者表达水平进行检测,对卵巢癌的早期诊断及是否存在转移具有指导意义.
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肿瘤坏死因子-α联合转化生长因子-β1作用于原代白血病细胞对Gli2表达的影响
目的:证明肿瘤坏死因子-α(TNF-α)可以促进转化生长因子-β(TGF-β)降低原代白血病细胞Gli2的表达. 方法:(1)Western blot检测白血病细胞Gli2蛋白的表达. (2)不同浓度TGF-β1和TNF-α分别作用于原代白血病细胞后,检测Gli2基因或蛋白以及TGF-βRⅠ和TGF-βRⅡ蛋白的表达. (3)TGF-β1、TNF-α及SIS3作用于原代白血病细胞24 h后,检测Gli2蛋白的表达. 结果:(1)3株原代白血病细胞均有Gli2蛋白的表达. (2)1 ~ 10 ng/mL TGF-β1作用于原代白血病细胞12 ~ 24 h,与对照组相比Gli2基因mRNA表达降低明显;5 ng/mL TNF-α则没有显著变化. (3)5 ng/mL TNF-α作用于原代白血病细胞24 h后,与对照组相比TGF-βRⅠ和TGF-βRⅡ蛋白表达均有增高. (4)单独应用TGF-β以及联合应用TNF-α和TGF-β作用24 h后,与对照组相比Gli2基因的表达均降低明显,而且TNF-α+TGF-β组Gli2基因的表达较TGF-β组降低更明显. 结论:联合应用TNF-α和TGF-β比单独应用TGF-β能进一步减少原代白血病细胞Gli2基因的表达.
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Foxm1、Gli2在乳腺癌中的表达及临床意义
目的 检测Foxm1、Gli2在乳腺癌组织中的表达,探讨二者在乳腺癌发生、进展及侵袭转移中的作用,为乳腺癌的诊断及其转移评估提供参考指标.方法 收集乳腺肿瘤标本106例,其中浸润性乳腺癌68例,乳腺纤维腺瘤38例.另以癌旁正常乳腺组织40例为对照.采用免疫组化法检测上述标本中的Foxm1、Gli2的表达,分析乳腺癌组织中Foxm1、Gli2阳性表达率的关系及两者与乳腺癌临床特征的关系.结果 乳腺癌组织Foxm1蛋白、Gli2蛋白表达评分高于乳腺纤维腺瘤组织和正常乳腺组织(P<0.05).有淋巴结转移者的乳腺癌组织中Foxm1和Gli2的阳性表达率高于无淋巴结转移者(P<0.05).Spearman相关分析显示,Foxm1与Gli2呈正相关(r=0.517,P<0.001).结论Foxm1、Gli2在乳腺癌组织中均高表达,两者存在一定的相关性,可能参与了乳腺癌的发生和侵袭转移过程,因此对两者表达水平进行检测,可能对乳腺癌的诊断及是否转移的评估具有指导意义.
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不同临床病理特征结肠腺癌组织中Gli2、FAK表达量与癌细胞增殖、侵袭的相关性研究
目的:研究不同临床病理特征结肠腺癌组织中Gli2、黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)表达量与癌细胞增殖、侵袭的相关性.方法:选择2012年5月～2015年12月在我院接受手术切除的56例结肠腺癌患者,分别收集癌组织和癌旁组织,采用免疫组化染色法测定Gli2、FAK的蛋白阳性率,采用荧光定量PCR法测定Gli2、FAK以及增殖、侵袭基因的mRNA表达量.结果:结肠腺癌组织中Gli2、FAK的mRNA表达量和蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织;低、未分化、浆膜外浸润、Dukes分期D期结肠腺癌组织中Gli2、FAK的mRNA表达量和蛋白阳性表达率显著高于高、中分化、浆膜内浸润、Dukes分期B-C期的结肠腺癌组织;Gli2、FAK阳性的结肠腺癌组织中CyclinD1、CDK4、c-myc、N-cadherin、vimentin的mRNA表达量显著高于Gli2、FAK阴性的结肠腺癌组织.结论:结肠腺癌组织中Gli2、FAK呈高表达趋势且与肿瘤的临床病理分期相关,高表达的Gli2、FAK能够促进细胞增殖、侵袭.
关键词： 结肠腺癌 Gli2 黏着斑激酶(FAK) 增殖 侵袭 -
端粒酶逆转录酶和Gli1、Gli2在胃癌中的表达及意义
目的 探讨端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)和Gli1、Gli2在胃癌组织中的表达及意义.方法 利用免疫组化S-P两步法检测72例胃癌及其癌旁组织中hTERT、Gli1、Gli2的表达情况,并结合患者的临床病理资料进行分析.结果 hTERT、Gli1、Gli2在胃癌中的表达明显高于癌旁组织中的表达(P＜0.05),hTERT与Gli1、hTERT与Gli2的表达均呈正相关(r分别为0.502 2、0.624 6,P＜0.05).hTERT、Gli1、Gli2的表达均与淋巴结转移有关(P＜0.05).hTERT、Gli1均高表达组以及hTERT、Gli2均高表达组生存时间较短,三者均高表达组生存时间短(P ＜0.05).结论 hTERT与Gli1、Gli2在胃癌中均高表达,三者联合检测对预测胃癌转移、预后有一定指导意义.
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氧化苦参碱对胰腺癌细胞上皮间质转化及Gli2表达影响
目的 探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OM)对转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF β1)诱导的胰腺癌panc-1细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及胶质瘤相关癌基因同源蛋白Gli2表达影响.方法 常规体外传代培养panc-1细胞.取对数生长期细胞,分为对照组(Control组)、模型组(TGF β1:10 ng/mL)、OM治疗组(TGF β1 10 ng/mL+OM 1 mg/mL)及OM对照组(OM:1 mg/mL).Transwell法检测不同刺激条件下小室穿膜细胞数.Western blot法检测不同刺激条件下EMT相关蛋白及Gli2的表达情况.结果 TGF β1刺激下,小室穿膜细胞数明显增加;OM干预后穿膜细胞数减少;OM治疗组与Control组相比,穿膜细胞数无明显变化.与Control组相比,模型组中E-cadherin表达下调,而Vimentin、Snail1、Twist1及Gli2表达上调;给予OM干预后,上述蛋白表达变化被逆转;单独给予OM时,上述蛋白表达与Control组相比无明显变化.结论 OM对TGF β1诱导的panc-1细胞发生的EMT具有一定的抑制作用,其机制可能与抑制hedgehog信号通路中核心转录因子Gli2有关.
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癌基因 Gli2促进肾癌细胞的体外侵袭能力
目的：研究 Gli2与肾癌细胞侵袭之间的关系。方法：采用免疫组织化学染色的方法对41例肾癌临床标本中 Gli2的表达情况进行检测，并分析 Gli2在局部侵袭性肾癌和非局部侵袭性肾癌中的表达差异。运用肾癌细胞模型，通过过表达 Gli2质粒或添加 Gli2特异性抑制剂干预细胞，采用体外侵袭实验分析 Gli2在肾癌细胞侵袭能力中的作用，RT - PCR 检测 Gli2对细胞侵袭相关基因的调控作用。结果：Gli2蛋白在 T3-4期肾癌中的表达水平明显高于 T1-2期（P <0.05），Gli2过表达能明显促进肾癌细胞的体外侵袭能力，反之，Gli2特异性的抑制剂 Gant61则显著减弱肾癌细胞的体外侵袭能力。Gli2抑制肾癌细胞上皮标记物 E - Cadherin 的表达，上调间质标记物 N - Cadherin，Vimentin，MMP -2及 MMP -9的表达；Gli2抑制剂的作用则相反。结论：Gli2通过调控侵袭相关基因的表达促进肾癌细胞的侵袭。
