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miR-181b慢病毒载体的构建及其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用
目的 构建miR-181b慢病毒过表达载体,探讨其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用.方法 分别构建pSicoR-miR-181b及pmiR-Report-MAPK1过表达载体,转染HEK-293T细胞后,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测MAPK1 mRNA的表达、用Western blot检测MAPK1蛋白的表达及用双荧光素酶报告基因活性验证miR-181b与MAPK1的靶向调控关系.结果 成功构建了pSicoR-miR-181b及pmiR-Report-MAPK1重组质粒,miR-181b过表达明显抑制HEK-293T细胞MAPK1蛋白及mRNA表达水平(P＜0.05),抑制miR-181b的表达后,MAPK1的蛋白及mRNA的表达水平上调(P＜0.05).结论 成功构建pSicoR-miR-181b慢病毒载体,并证实通过靶向作用MAPK1-3'UTR的特异序列直接抑制MAPK1基因的表达.
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miRNA-181b在氧-糖剥夺致N2A细胞缺血损伤中的作用及对热休克蛋白A5表达的调节
目的 探讨miR-181b在氧糖剥夺(OGD)致N2As神经瘤细胞缺血损伤中的作用,及其对热休克蛋白(HSP)A5表达的调节.方法 应用N2A细胞OGD模型模拟神经细胞缺血损伤,MTT比色法检测N2A细胞生存率,免疫印迹法检测HSPA5蛋白表达水平,实时定量PCR法检测miR-181b和HSPA5 mRNA表达水平,荧光素酶报告基因技术检测miR-181b对HSPA5 mRNA的直接调控作用.结果 miR-181b在OGD致N2A细胞缺血损伤中表达水平明显降低(n=5);在OGD致N2A细胞缺血损伤过程中,通过上调或抑制miR-181b的表达水平可以显著影响N2A细胞的生存率(n=6);而在非OGD条件下,miR-181b表达水平的改变对N2A细胞活力无影响;miR-181b表达水平的改变可显著影响HSPA5蛋白表达水平(n=3),而非HSPA5的mRNA水平;共转染miR-181b前体(premiR-181b)或miR-181b抑制剂(anti-miR-181b)可显著抑制或增高含有HSPA5 mRNA 3’-UTR的荧光素酶报告基因的活性(n=5).结论 miR-181b通过负性调节HSPA5的蛋白表达水平,在OGD致N2A神经细胞缺血性损伤中发挥重要作用.
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miR-181b在弥漫大B细胞淋巴瘤中表达及功能研究
目的:探讨miR-181b在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中表达及其功能.方法:选择2010年3月到2012年3月来我院及常州市第二人民医院进行检查和治疗的124例DLBCL患者的淋巴组织样本,作为DLBCL组;另选择64例经检查确定为非淋巴瘤患者的健康淋巴组织,作为对照组.检测两组淋巴样本中miR-181b的表达水平,比较不同临床特征的淋巴瘤患者淋巴组织中miR-181b的表达水平,比较不同组织miR-181b表达水平的淋巴瘤患者的生存情况.结果:DLBCL患者淋巴组织中miR-181b的相对表达量显著高于健康淋巴组织(P＜0.05).Ann Arbor分期越高的患者淋巴组织中miR-181b的相对表达量越高(P＜0.05),而IPI评分越高的患者淋巴组织中miR-181b的相对表达量也越高(P＜0.05).miR-181b低表达组患者5年生存率显著高于高表达组患者(P＜0.05).结论:miR-181b在不同临床分期和预后的DLBCL患者淋巴组织中表达存在差异,它有可能成为未来对DLBCL诊断和预后监测的有效指标.
关键词： 弥漫性大B淋巴细胞瘤 miR-181b 基因表达 -
miR-181a和miR-181b抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭
目的 探讨miR-181a和miR-181b对胶质瘤细胞增殖和侵袭等影响.方法 通过实时荧光定量PCR检测miR-181a和miR-181b在胶质瘤组织和细胞株中的表达情况.我们合成miR-181a和miR-181b寡聚核苷酸及构建pre-miR-181a和pre-miR-181b表达载体,转染胶质瘤细胞,通过MTT、Transwell实验、流式检测和软琼脂实验,观察上调miR-181a和miR-181b表达后对胶质瘤细胞增殖、侵袭、转化能力和细胞凋亡的影响.结果 miR-181a和miR-181b在胶质瘤组织和细胞株较正常脑组织均呈过低表达;miR-181a表达水平与胶质瘤等级呈负相关.上调miR-181a和miR-181b表达能有效抑制胶质瘤细胞生长,降低其转化和侵袭能力,诱导凋亡.结论 胶质瘤中异常低表达的miR-181a和miR-181b可能发挥着肿瘤抑制因子作用.
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藁本内酯上调miR-181 b减轻氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞炎症损伤
目的 研究藁本内酯(ligustilide,LIG)减轻氧化低密度脂蛋白(oxidative low density lipoprotein,ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)损伤作用机制.方法 将细胞随机分为5组,对照组(正常培养细胞不加干预)、模型组(100μmol/L ox-LDL干预24 h)、LIG低浓度组、LIG中浓度组、LIG高浓度组.其中,LIG低、中、高浓度组细胞分别以10、20、40μmol/L预先孵育2 h,再用100μmol/L ox-LDL干预24 h.CCK8法检测各组细胞活力,ELISA检测细胞培养液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)的含量.qRT-PCR检测细胞内TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、NF-κB及miR-181b的mRNA水平;Western blotting测定细胞NF-κB的表达量.结果 与对照组相比,模型组细胞存活率明显下降,凋亡率增高,细胞上清中TNF-α、IL-6、ICAM-1及VCAM-1的浓度升高.LIG能显著提高细胞存活率,抑制细胞凋亡,并且能降低细胞内炎性因子水平,尤其是中、高浓度组,与模型组相比差异有显著性(P<0.01).此外,LIG能明显降低细胞内NF-κB转录及翻译水平,上调miR-181b的表达,与模型组相比差异有显著性(P<0.01).激活或抑制细胞内miR-181b表达,能有效调节细胞内炎性因子水平.结论 藁本内酯明显减轻ox-LDL诱导HUVEC损伤,其机制可能是通过上调miR-181b抑制NF-κB表达,从而减轻ox-LDL诱导的细胞炎症损伤.
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氟西汀辅助治疗前后精神分裂症患者外周血miR-181b表达差异研究
目的:探讨氟西汀治疗精神分裂症的疗效及对患者外周血miR-181b表达的影响.方法:选取我院2016年5月-2017年5月收治的精神分裂症患者160例,按照随机数字表法均分为观察组和对照组,每组80例.对照组患者给予抗精神病药物治疗,观察组患者在此基础上加用氟西汀治疗.治疗8周后检测两组患者的miR-181b表达水平,观察两组患者生活质量评分变化并记录不良反应的发生情况.结果:治疗前两组患者miR-181b表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05);同组治疗前后相比,两组患者miR-181b表达水平均显著降低(P＜0.05),观察组明显低于对照组,两组之间具有显著性差异(P＜0.05).治疗前两组患者的生活质量评分比较,差异无统计学意义(P＞0.05);治疗后两组患者的生活质量评分均高于治疗前,且观察组明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).观察组不良反应发生率与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:氟西汀可通过调控患者外周血miR-181b的表达从而发挥其抗精神病的作用,有利于提高患者的生活质量.
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miR-181b通过靶定CREB1抑制人黑素瘤A375细胞的增殖和侵袭
目的 研究miR-181b对人黑素瘤细胞系A375的增殖与侵袭能力的影响.方法 利用阳离子脂质体LipofectammeTM2000将miR-181b mimic或inhibitor转染入黑素瘤A375细胞,以使miR-181b过表达或低表达,采用MTT方法检测细胞活力变化,应用Transwell小室法检测A375细胞侵袭能力的变化,同时通过qRT-PCR检测核转录因子cAMP反应元件结合蛋白1(CREB1) mRNA的表达情况,采用Western blot检测CREB1蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,miR-181b沉默能够显著增强A375细胞增殖和侵袭能力,显著降低CREB1蛋白与mRNA的表达水平(P＜0.01);miR-181b过表达的作用与之相反.结论 miR-181b沉默增强A375细胞增殖和侵袭能力可能与降低CREB1蛋白相关.
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miR-181a和miR-181b调控bcl-2影响白内障发生机制研究
目的 探讨miR-181a和miR-181b靶向调控bcl-2及其在年龄相关性白内障发生中的作用机制.方法 临床病例系列研究.对2014年10～12月在中国医科大学附属第四医院眼科利用生物信息学软件,预测miR-181a和miR-181b可能调控的靶基因;利用Real time q-PCR方法,检测年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜和正常人眼晶状体前囊膜miR-181a、miR-181b及其预测靶基因的表达;利用Lipofectamine 2000瞬时转染miR-181a和miR-181b mimic和inhibitor,调节人晶状体上皮细胞中miR-181a和miR-181b的表达水平,利用Real time q-PCR方法验证转染效率,并检测预测靶基因的表达变化.结果 生物信息学软件预测到bcl-2可能为miR-181a和miR-181b的靶基因.与对照组相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组,miR-181a和miR-181b的表达均显著升高,而bcl-2的表达显著降低.miR-181a和miR-181b mimic转染组miR-181a和miR-181b的表达显著升高,bcl-2的表达显著降低;miR-181a和miR-181b inhibitor转染组,miR-181a和miR-181b的表达显著降低,bcl-2的表达显著升高.差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 miR-181a和miR-181b在年龄相关性白内障晶状体组织中呈高表达,其可能靶向bcl-2,对其负性调控,从而影响白内障的发病过程.
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具核梭杆菌通过调控miR-181b在结肠癌细胞中形成炎性微环境的机制
背景:具核梭杆菌(Fn)是口腔常见的致病菌,研究发现Fn与结直肠癌的发生、发展密切相关,尤其是炎症相关性结直肠癌.目的:探讨Fn感染在结肠癌细胞中形成炎性微环境的机制.方法:构建Fn感染Caco-2细胞的炎症模型,行miRNA测序.将miR-181b mimics或inhibitor转染Fn感染的Caco-2细胞.以qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测TNF-αmRNA和蛋白表达,ELISA法检测上清液中TNF-α 含量,Transwell小室法检测穿膜淋巴细胞数.结果:Fn组TNF-αmRNA和蛋白表达均显著高于对照组(P<0.05),上清液中TNF-α含量显著升高(P<0.05),穿膜淋巴细胞数量明显增多(P<0.05).miRNA测序和qRT-PCR结果均显示,Fn组miR-181b表达较对照组显著降低(P<0.05).与对照组相比,miR-181b mimics+Fn组TNF-αmRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05);而miR-181b inhibitor组TNF-αmRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05).生物信息学工具和双荧光素酶检测证实TNF-α可能为Caco-2细胞中miR-181b的靶基因.结论:Fn通过抑制Caco-2细胞中miR-181b表达而上调TNF-α表达,募集淋巴细胞形成炎性微环境.
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miR-181b 在结肠炎相关结肠癌发生过程中的表达
背景：miR-181b 与多种肿瘤的形成相关，但其在结肠炎相关结肠癌中的表达情况尚不明确。目的：探索 miR-181b 在结肠炎相关结肠癌发生过程中的变化，并初步筛选其下游可能的靶基因。方法：联合使用氧化偶氮甲烷（AOM）和葡聚糖硫酸钠（DSS）制备结肠炎相关结肠癌小鼠模型。以实时荧光定量 PCR（qPCR）检测不同时期小鼠结肠组织 miR-181b 表达。利用全基因组表达谱芯片结合 miRNA 靶基因预测软件 TargetScan、PicTar 和 miRDB 初步预测 miR-181b 的下游靶基因，并以 qPCR 法检测结肠炎相关结肠癌小鼠中靶基因的表达。结果：miR-181b 表达在结肠炎相关结肠癌形成过程中逐渐升高，但单独使用 AOM 或 DSS 均不会改变 miR-181b 水平。结合全基因组表达谱芯片和 miRNA 靶基因预测软件初步筛选出 miR-181b 可能的下游靶基因为 Ipmk、E2f5、Klf6、Prkcd、Bai3和Hic2，qPCR 法显示 Ipmk、Prkcd、Bai3、Hic2表达明显低于对照组。结论：miR-181b 表达随结肠炎相关结肠癌的发展而升高，该变化与单纯慢性炎症无关。
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上调miR-181b表达对乳腺癌细胞功能的影响
目的:探讨上调miR-181b的表达对人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞功能的影响及其可能的靶向基因.方法:应用脂质体介导的方法将miR-181b模拟物(miR-181b mimics)分别转染MDA-MB-231和MCF-7细胞后,通过MTT、Transwell和FCM法分别检测细胞增殖和迁移能力及细胞周期的变化.将含细胞周期蛋白依赖性激酶8 (cyclin-dependent kinase 8,CDK8)基因3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)的重组载体psiCHECK-2/CDK8-3' UTR和miR-181bmimics共转染入人胚肾HEK293T细胞,应用双荧光素酶报告系统验证CDK8基因3'-UTR是否有miR-181b的结合位点.蛋白质印迹法检测miR-181b mimics转染后MDA-MB-231和MCF-7细胞中CDK8蛋白的表达情况.结果:与转染miR-181b模拟物阴性对照(negative control,NC)(miR-181b mimics-NC)组比较,miR-181b mimics转染组MDA-MB-231和MCF-7细胞的增殖和迁移能力受到抑制(P＜0.05),细胞周期主要阻滞于G0/G1期(P＜0.01);psiCHECK-2/CDK8-3'UTR和miR-181b mimics共转染组HEK293T细胞的荧光素酶活性下降(P＜0.01),证实miR-181b与CDK8基因3'-UTR可特异性靶向结合.与转染miR-181bmimics-NC组比较,miR-181b mimics转染组MDA-MB-231和MCF-7细胞中CDK8蛋白的表达水平明显下调(P＜0.05).结论:上调miR-181b的表达可显著抑制人乳腺癌细胞的增殖和迁移,这种作用可能与miR-181b靶向调节CDK8的表达有关.
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术后结合替莫唑胺对神经胶质瘤患者血清miR-181b及miR-497的影响
目的:分析神经胶质瘤患者术后结合替莫唑胺对血清miR-181b及miR-497表达的影响.方法:将收治的76例神经胶质瘤术后患者随机分为A、B两组.其中A组(38例)采用司莫司汀方法治疗,B组(38例)采用司莫司汀联合替莫唑胺的方法治疗.观察比较两组患者的临床疗效,术后1、2、3年生存率,Karnofsky评分.同时收集患者治疗前、治疗后的血清样本,以检测miR-181b及miR-497表达的变化.结果:B组患者的客观有效率明显高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05);B组中位生存期以及术后1、2、3年生存率明显高于A组(P＜0.05);B组术后的Karnofsky评分显著高于A组(P＜0.05).术后血清miR-181b浓度明显提高[术后(162.34±51.79) fmol/L vs.术前(91.37±40.41)fmol/L,P＜0.05];术后血清miR-497明显提高[术后(166.23±53.68)fmol/L vs.术前(88.36±36.72) fmol/L,P＜0.05].结论:术后结合替莫唑胺能够提高神经胶质瘤患者血清miR-181b及miR-497的表达,延长患者生存期.
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癫痫持续状态大鼠模型海马区miR-181b表达的变化及意义
目的：探讨癫痫持续状态（status epilepticus，SE）大鼠模型海马区miR-181b表达的变化及意义。方法随机将30只SD（Sprague-Dawley）大鼠分为实验组和对照组，各15只，实验组建立氯化锂-匹罗卡品致SE大鼠模型，对照组以生理盐水代替氯化锂-匹罗卡品，提取两组大鼠右侧海马区脑组织总miRNA和左侧海马组织总蛋白，采用Real-Time RT-PCR检测miR-181b表达及采用Western Blot方法检测caspase-3蛋白的表达变化。结果 SE组大鼠海马区脑组织miR-181b表达较对照组有明显下降（P<0.05）， caspase-3蛋白表达明显上升（P<0.05）。结论 miR-181b可能通过调控caspase-3蛋白的表达抑制SE后海马区神经元凋亡过程。
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miR-181b及其关键靶基因PTEN和TIMP-3在肝细胞肝癌中的表达和意义
目的:研究miR-181b对PTEN和TIMP3基因表达的影响,探讨其在肝细胞肝癌(HCC)发生、发展中的作用及意义.方法:应用免疫组化和实时荧光定量PCR检测30例HCC及相应癌旁组织,10例正常肝脏组织中miR-181b、PTEN、TIMP-3表达情况,分析miR-181b、PTEN和TIMP-3的表达水平与HCC临床病理特征之间的关系.探讨miR-181b水平与PTEN、TIMP3表达的相关性.结果:在HCC组织中PTEN和TIMP-3的mRNA和蛋白的表达水平均明显低于癌旁组织及正常肝组织(P＜0 01),调控二者表达的miR-181b在HCC组织中的的表达明显增高.miR-181b、PTEN和TIMP-3的表达水平与HCC细胞的分化程度、血清中AFP表达水平、HBV感染明显有关,与患者年龄、性别、肿瘤大小等因素无关.结论:miR-181b在HCC中的表达量显著高于癌旁和正常肝组织,其表达水平与肿瘤组织细胞的分化程度、血清AFP水平及是否合并HBV感染明显相关;在HCC组织中,miR-181b的表达水平与PTEN、TIMP3的水平呈负相关.miR-181b可能通过靶向调控PTEN和TIMP3的表达来发挥其促进HCC侵袭转移的生物学作用.
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血清miR-181b及miR-210在妊娠期高血压疾病中表达及与炎性细胞因子的相关性
目的 探讨妊娠期高血压疾病(hypertensive disorders in pregnancy,HDP)患者血清miR-181b、miR-210表达变化,分析其与白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的关系.方法 HDP患者226例,其中妊娠期高血压(gestational hypertension,GH)60例(GH组)、轻度子痫前期(mild preeclampsia,MP)90例(MP组)、重度子痫前期(servere preeclampsia,SP)76例(SP组),同期健康孕妇60例为对照组.检测4组血清miR-181b mRNA、miR-210 mRNA相对表达量及IL-1β、IL-6及TNF-α水平;Pearson相关分析HDP患者血清miR-181b mRNA、miR-210 mRNA相对表达量与IL-1β、IL-6及TNF-α的相关性.结果 对照组、GH、MP、SP组血清miR-181bmRNA相对表达量(1.42±0.65、5.73±1.60、10.94±4.28、17.13±8.16)、miR-210 mRNA相对表达量(0.84±0.13、3.62±1.05、4.74±1.36、7.92±2.17),IL-1β[(2.60±0.84)、(11.26±2.53)、(17.65±6.24)、(23.92±9.16)ng/L]、IL-6[(90.26±27.45)、(106.35±33.74)、(128.42±36.18)、(151.46±40.27)ng/L]及TNF-α[(12.40±2.28)、(19.25±4.42)、(35.84±6.53)、(64.73±9.50)ng/L]水平依次增高(P＜0.05);HDP患者血清miR-181b mRNA相对表达量与IL-1β、IL-6、TNF-α呈正相关(r=0.694,P＜0.001;r=0.735,P＜0.001;r=0.846,P＜0.001)、miR-210mRNA相对表达量与IL-1β、IL-6、TNF-α呈正相关(r=0.548,P=0.003;r=0.718,P＜0.001;r=0.815,P＜0.001).结论 HDP患者miR-181b及miR-210表达上调,且上调程度与HDP病情严重程度及IL-1β、IL-6 、TNF-α水平变化相关,可能参与HDP的发生、发展.
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精神分裂症患者中西药物治疗后外周血miR-181b表达水平研究
目的:研究传统中药方剂加味癫狂梦醒汤治疗精神分裂症的微小RNA作用机制.方法:将70例精神分裂症患者分为中药组和西药组各35例,另设正常对照组10例.中药组患者口服加味癫狂梦醒汤,西药组患者口服氯氮平,正常对照组不服药,观察治疗前后各组患者PANSS评分变化情况,采用实时荧光定量PCR检测治疗前后各组患者外周血miR-181b表达水平变化情况.结果:中药组患者治疗后PANSS评分较治疗前显著下降(P＜0.05),但与西药组治疗后比较差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后中药组患者miR-181b表达水平较治疗前显著下降(P＜0.05),与西药组相当.结论:精神分裂症的发病可能与微小RNA相关,中药方剂加味癫狂梦醒汤可能通过调控miR-181b的表达发挥其抗精神病作用.
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MicroRNA-181b和microRNA-130a在冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血浆中的表达及临床意义
目的 探讨microRNA-18 1b(miR-181b)和microRNA-130a (miR-130a)在冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心痛)患者血浆中的表达及临床意义.方法 选取106例冠心痛患者和40例健康者作为对照组,收集临床资料,行冠状动脉造影检查及Gensini评分,利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测冠心病患者和对照组血浆中miR-181b和miR-130a的表达,利用受试者工作特征曲线(ROC曲线)对血浆中miR-181b和miR-130a的相对表达量在评估冠心病患者病程进展中的价值进行分析.结果 冠心病患者血浆中miR-181b和miR-130a相对表达量与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),冠心病患者血浆中miR-181b相对表达量低于对照组,而miR-130a相对表达量则高于对照组,冠心病患者中,中重度组患者血浆miR-181b相对表达量低于轻度组,而miR-130a相对表达量则高于轻度组;Pearson相关分析显示,冠心痛患者血浆中miR-181b相对表达量均与Gensini积分、脂蛋白a(Lp-a)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)呈负相关(r =-0.504、-0.382和-0.415,P＜0.05),血浆中miR-130a相对表达量均与Gensini积分、Lpa和hs-CRP呈正相关(r =0.586、0.335和0.394,P＜0.05);ROC曲线分析显示,冠心痛患者血浆中miR-181b相对表达量在评估患者病程进展时,曲线下面积0.871(95％CI:0.807,0.936),敏感性75.0％,特异性82.3％,血浆中miR-130a相对表达量在评估患者病程进展时,曲线下面积0.931(95％CI:0.887,0.976),敏感性93.2％,特异性81.2％.结论 冠心病患者血浆中miR-181b表达水平降低,而miR-130a表达水平升高,且均与患者病情严重程度有关,可作为评估患者病情进展的指标.
关键词： 冠状动脉粥样硬化性心脏病 miR-181b miR-130a 表达 -
miR-181b通过靶向调控N-myc下游调节基因2影响骨肉瘤细胞的迁移和侵袭
目的：探讨miR-181b对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法培养骨肉瘤细胞，实时荧光定量PCR检测miR-181b在骨肉瘤细胞中的表达。抑制miR-181b的表达，Transwell检测对骨肉瘤迁移和侵袭的影响；生物信息学分析miR-181b靶基因并采用荧光素酶报告基因分析miR-181b和靶基因在骨肉瘤中是否直接作用，同时采用Western Blotting检测靶基因在骨肉瘤细胞中的表达以及Transwell检测靶基因对骨肉瘤迁移和侵袭的影响。结果实时荧光定量PCR结果表明miR-181b在骨肉瘤细胞中高表达。抑制miR-181b的表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭；生物信息学分析表明N-myc下游调节基因2（NDRG2）是miR-181b直接作用的靶基因，荧光素酶报告基因分析验证了该结果；Western blotting检测表明NDRG2在骨肉瘤中低表达，而抑制miR-181b能够显著提高NDRG2的表达。抑制miR-181b的表达的同时抑制靶基因NDRG2的表达，能够逆转抑制miR-181b的表达对骨肉瘤细胞的迁移和侵袭的影响，从而显著提高骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。结论 miR-181b在骨肉瘤中过表达，NDRG2为miR-181b直接调控靶基因，抑制miR-181b能够提高NDRG2的表达从而抑制骨肉瘤细胞的迁移侵袭。
关键词： miR-181b 骨肉瘤 N-myc下游调节基因2 迁移 侵袭 -
miR-181b在前列腺组织中的表达及对前列腺癌细胞PC-3生物学功能的影响
目的:探讨miR-181b在前列腺癌组织中的表达及miR-181b对前列腺癌PC-3细胞生物学功能的影响.方法:收集27例前列腺癌手术标本及30例正常前列腺组织标本,提取总微小RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181b的表达情况.选取人前列腺癌细胞株PC-3细胞为研究对象,转染miR-181b ASO.应用实时荧光定量PCR技术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞中miR-181b 的表达情况;流式细胞术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞的凋亡变化情况;MTT实验及细胞生长曲线检测转染miR-181b ASO PC-3细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测转染miR-181b ASO PC-3细胞侵袭能力的影响.结果:miR-181b在前列腺癌组织中高表达.转染miR-181b ASO 使PC-3细胞中miR-181b的表达降低;促进了PC-3细胞凋亡;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞株PC-3增殖能力的减弱;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞PC-3侵袭能力减弱.结论:miR-181b在前列腺癌组织中高表达,封闭前列腺癌细胞中miR-181b的表达,可以促进细胞凋亡及抑制细胞的增殖及侵袭,可能在前列腺肿瘤的基因治疗中起到积极作用.
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miR-181b通过下调CYLD蛋白影响甲状腺乳头状癌细胞的增殖和凋亡
目的 探讨miR-181b通过下调CYLD蛋白影响甲状腺乳头状癌细胞的增殖和凋亡行为及其机制.方法 qPCR检测miR-181b在甲状腺乳头状癌组织和正常甲状腺组织中的表达情况及差异;Western blotting实验检测miR-181b与CYLD蛋白之间的调控作用;克隆形成实验检测抑制miR-181b后甲状腺癌细胞增殖能力的变化情况;流式细胞术实验检测抑制miR-181b后甲状腺癌细胞凋亡行为的变化情况.结果 与正常甲状腺组织相比,甲状腺乳头状癌组织中miR-181b的表达水平相对上调,差异具有统计学意义(P<0.05);在FTC-133细胞株中miR-181b的表达水平相对较高;Western blotting实验证实miR-181b能直接调控CYLD蛋白的表达水平;抑制miR-181b的表达后可以抑制甲状腺癌细胞的增殖行为,并在一定程度上促进其凋亡.结论 miR-181b可以调控CLYD的表达影响甲状腺癌细胞的增殖和凋亡行为.
