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血浆富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)水平与冠心病相关
目的 探索冠心病患者血浆富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)的水平及相关临床意义.方法 比较97例冠心病患者(急性冠状动脉综合征患者48例,稳定型心绞痛患者49例)和49例对照组(冠状动脉动脉造影未见明显狭窄)的血浆CYR61水平,并评价其与冠状动脉病变严重程度(Gensini评分)的相关性.结果 冠心病患者血浆CYR61水平明显高于对照组(10.47 μg/L比4.55 μg/L,P＜0.01)且血浆CYR61水平与冠心病独立相关(OR1.164,95％ CI 1.065～1.273,P＜0.01).急性冠状动脉综合征组的血浆CYR61水平显著高于稳定型心绞痛组(15.61 μg/L比8.03 μg/L,P＜0.01).血浆CYR61水平与Gensini积分正相关(P＜0.01).结论 血浆CYR61水平与冠心病独立相关,且与冠心病的类型及严重程度有关.
关键词： 富含半胱氨酸蛋白61 冠状动脉疾病 动脉粥样硬化 -
白血病患者骨髓CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2mRNA的表达及其临床意义
本研究检测白血病患者骨髓中CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA的表达水平,探讨白血病发生、发展、浸润、转移中CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2蛋白的相互作用及其临床意义,寻找新的肿瘤标记物,为白血病的诊治提供新的思路.白血病74例,男38例,女36例,年龄6 - 77岁,中位年龄45岁.对照组12例,男7例,女5例.年龄16 -78岁,中位年龄46岁.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA的水平.结果表明,各组初发急性和慢性白血病患者骨髓中CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA的表达与对照组相比均显著升高(p＜0.05).急性白血病缓解后CYR61和CTGF mRNA的表达高于对照组(p =0.039,0.025).CTGF mRNA的表达在B-ALL组表达高,高于AML、CML、CLL、T-ALL组(p=0.002,0.034,0.002,0.010).AML组CYR61与CTGF、CYR61与VEGF-C、CTGF与VEGFR-2 mRNA的表达均呈正相关(r =0.452,0.466,0.464;p =0.045,0.038,0.039),CML组CYR61与VEGF-C mRNA的表达呈正相关(r=0.882,p=0.000).急性白血病伴有髓外浸润者VEGF-C和VEGFR-2 mRNA的表达高于不伴有髓外浸润者(p=0.028,0.047).AML组VEGF-C mRNA的表达与原始细胞数呈正相关(r =0.418,p=0.034).结论:CYR61、CTGF及VEGF-C、VEGFR-2在白血病发病中相互作用,促进白血病发展、转移及浸润;且这些因子在不同类型白血病及髓外浸润中的作用存在差异.它们可能成为检测白血病的肿瘤标记物;阻断上述因子有可能阻断肿瘤的生长和转移.
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富含半胱氨酸蛋白61 RNA干扰质粒抑制血管平滑肌细胞的增殖
目的 观察富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)RNA干扰质粒(pCyr61-shRNA)对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响.方法 构建Cyr61 RNA干扰质粒转染大鼠血管平滑肌细胞,采用半定量逆转录聚合酶链反应及Western blot检测Cyr61 RNA和蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖;3H-标记胸腺嘧啶掺入法检测细胞DNA含量.结果 测序证实成功构建Cyr61 RNA干扰质粒;转染pCyr61-shRNA组mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0 01);pCyr61-shRNA组细胞数、吸光度值和DNA含量均明显降低(P<0 01).结论 Cyr61 RNA干扰质粒抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖.
关键词： RNA干扰 血管平滑肌细胞 富含半胱氨酸蛋白61 细胞增殖 基因转染 -
RNA干扰质粒抑制富含半胱氨酸蛋白61在大鼠血管平滑肌细胞中的表达
目的 观察RNA干扰质粒对大鼠血管平滑肌细胞中富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)表达的抑制作用.方法 构建Cyr61 RNA干扰质粒(pCyr61-shRNA)转染大鼠血管平滑肌细胞,采用半定量反转录聚合酶链反应及Western blot检测Cyr61 mRNA和蛋白表达.结果 测序证实成功构建Cyr61 RNA干扰质粒;转染pCyr61-shRNA组mRNA及蛋白表达均明显降低,与正常对照组和转染无关序列对照组(p-HK)相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 RNA干扰质粒抑制Cyr61在大鼠血管平滑肌细胞中的表达.
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RNA干扰质粒抑制富含半胱氨酸蛋白61在大鼠血管平滑肌细胞中的表达
目的 观察RNA干扰质粒对大鼠血管平滑肌细胞中富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)表达的抑制作用.方法 构建Cyr61 RNA干扰质粒(pCyr61-shRNA)转染大鼠血管平滑肌细胞,采用半定量反转录聚合酶链反应及Western blot检测Cyr61 mRNA和蛋白表达.结果 测序证实成功构建Cyr61 RNA干扰质粒;转染pCyr61-shRNA组mRNA及蛋白表达均明显降低,与正常对照组和转染无关序列对照组(p-HK)相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 RNA干扰质粒抑制Cyr61在大鼠血管平滑肌细胞中的表达.
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类风湿关节炎患者血清富含半胱氨酸蛋白61水平及临床意义
目的 检测类风湿关节炎(RA)患者的富含半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61,Cyr61)水平,比较不同病程患者的血清Cyr61水平,对患者血清Cyr61水平与各相关指标进行分析.方法 ELISA方法检测RA与健康对照组的血清Cyr61水平.结果 RA的血清Cyr61水平高于健康对照组(P＜0.01),早期RA的血清Cyr61水平高于中晚期患者(P＜0.05),RA的血清Cyr61水平与类风湿因子(RF)水平正相关(r=0.362,P＜0.05).结论 Cyr61可能参与RA的发病机制,水平升高可能预示RA预后不佳.
关键词： 类风湿关节炎 富含半胱氨酸蛋白61 类风湿因子 -
MIF、Cyr61和Livin在人牙龈癌中的表达及临床意义
目的 分析巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、富含半胱氨酸蛋白61 (Cyr61)和凋亡抑制蛋白(Livin)在人牙龈癌中的表达及临床意义.方法 收集牙龈癌蜡块标本35例(高分化15例,中分化12例,低分化8例),正常牙龈组织15例.采用免疫组化法检测石蜡标本MIF、Cyr61、Livin蛋白.结果 经单因素方差分析,4种标本类型MIF、Cyr61、Livin蛋白表达水平比较差异显著(P＜0.05);且高分化、中分化及低分化牙龈组织MIF、Cyr61、Livin蛋白水平均高于正常牙龈组织(P＜0.05);牙龈癌组织MIF、Cyr61、Livin蛋白阳性率均高于正常牙龈组织(P＜0.05).结论 MIF、Cyr61和Livin在人牙龈癌中高表达,且阳性检出率较高,可为牙龈癌治疗及预后提供指导.
关键词： 牙龈癌 巨噬细胞移动抑制因子 富含半胱氨酸蛋白61 凋亡抑制蛋白 -
氯沙坦抑制球囊损伤后腹主动脉富含半胱氨酸蛋白61、ERK1/2的表达
目的 观察球囊损伤后大鼠腹主动脉富含半胱氨酸蛋白61、ERK1/2的表达及氯沙坦对富含半胱氨酸蛋白61、ERK1/2表达的影响,探讨氯沙坦抑制动脉增殖的机制.方法 72只雄性Wistar大鼠分为氯沙坦组、球囊损伤组和假手术组.对球囊损伤后不同时间段的大鼠腹主动脉标本采用免疫组织化学、免疫蛋白印记分析检测富含半胱氨酸蛋白61、ERK1/2的表达.结果 7 d和14 d球囊损伤组富含半胱氨酸蛋白61、ERK1/2的表达均明显增强,与假手术组比较有显著差异(P<0.01),氯沙坦组与球囊损伤组比较均明显降低.28 d时,3组两两比较没有显著差异(P>0.05).结论 氯沙坦抑制球囊损伤后富含半胱氨酸蛋白61、ERK1/2的表达,提示氯沙坦抑制球囊损伤后内膜增生可能是通过抑制富含半胱氨酸蛋白61发挥作用的,这种抑制作用可能部分是通过ERK1/2信号转导途径介导的.
关键词： 细胞外信号调节激酶类 免疫组织化学 印迹法 蛋白质 大鼠 氯沙坦 球囊损伤 内膜增生 富含半胱氨酸蛋白61 -
氯沙坦对血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61的影响
目的 探讨氯沙坦对血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白 61 (CYR61) 的影响.方法 贴块法培养大鼠血管平滑肌细胞,分别给予不同浓度血管紧张肽Ⅱ(ATII) 和 氯沙坦,采用半定量逆转录聚合酶链反应及Western blotting 检测不同处理组平滑肌细胞 CYR61 mRNA 和蛋白表达.采用酶联免疫吸附技术检测平滑肌细胞培养介质中CYR61含量的变化.结果 10-6～10-10 mol·L-1 ATⅡ呈剂量依赖性地增加平滑肌细胞内CYR61蛋白及其mRNA表达水平,增高培养介质中CYR61 含量 (P<0.01). 10-5～10-7 mol·L-1氯沙坦预处理组中,ATⅡ刺激的平滑肌细胞CYR61蛋白及其mRNA 表达水平及培养介质中CYR61含量明显减低(P<0.01).结论 氯沙坦可拮抗ATⅡ所致的平滑肌细胞内CYR61的表达与分泌.
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Cyr61和VEGF在肝细胞癌及癌周肝硬化组织中的表达及相关性分析
目的 分析高半胱氨酸蛋白16(Cyr61)和血管内皮生长因子(VEGF)在肝细胞癌、癌周肝硬化组织中的表达及相关性,探讨其在肝癌发生过程中的作用.方法 采用免疫组化S-P法检测58例原发性肝细胞肝癌(HCC)及癌周肝硬化组织中Cyr61和VEGF蛋白的表达,并与其临床病理特征比较分析.结果 Cyr61、VEGF在癌周肝硬化组织中的表达均高于HCC,差异有统计学意义(P<0.01);Cyr61、VEGF蛋白的表达均与肿瘤的转移密切相关(P<0.05);相关性检验提示Cyr61、VEGF在HCC组织、癌周肝硬化组织中呈正相关(r=0.444,P<0.01).结论 Cyr61、VEGF异常表达与肝硬化肝癌的发展密切相关,可能在肝硬化向肝癌转化和肿瘤血管生成过程中发挥重要的作用,为肝癌的早期诊断提供了较为客观的参考指标.
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类风湿关节炎患者血清 CCN1水平变化及意义
目的观察类风湿关节炎（RA）患者血清富含半胱氨酸蛋白61（CCN1）水平变化，并探讨其临床意义。方法选择 RA 患者30例作为观察组（RA 活动期20例、稳定期10例）、健康体检者20例作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测两组血清 CCN1水平，收集实验室指标，计算28个关节疾病活动度评分（DAS28）、简化疾病活动性指数（SDAI）评分，用直线相关分析 CCN1与相关指标的关系。结果与对照组比较，观察组血清 CCN1水平升高，且 RA 活动期患者高于 RA 稳定期患者（P 均＜0．05）。RA 患者血清 CCN1水平与类风湿因子、C 反应蛋白、血沉、抗 CCP 抗体、DAS28评分、SDAI 评分呈正相关（r 分别为0．423、0．443、0．375、0．364、0．772、0．681，P 均＜0．05）。结论RA 患者血清 CCN1水平升高，CCN1可能参与了 RA 的炎症反应过程。
关键词： 类风湿关节炎 富含半胱氨酸蛋白61 细胞因子 -
Cyr61和VEGF在高氧诱导鼠视网膜新生血管中的表达
目的 研究富含半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61,Cyr61)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在高氧诱导鼠视网膜新生血管(retinal neovascularization,RNV)中的表达情况,探讨二者在RNV形成过程中所起的作用.方法 取C57 BL/6J小鼠100只,随机分为高氧组和对照组,每组各50只.采用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR法分别检测视网膜Cyr61、VEGF蛋白及mRNA的表达情况.结果 高氧组Cyr61、VEGF蛋白呈强阳性表达,主要定位于神经节细胞层、内丛状层、外丛状层和突破视网膜内界膜的新生血管.高氧组与对照组比较,视网膜Cyr61、VEGF蛋白及mR-NA表达显著增高,均有统计学意义(tCyr61蛋白=5.35、tVEGF蛋白=6.56、tCyr61mRNA=4.67、tVEGFmRNA =7.15,均为P＜0.05),且Cyr61与VEGF表达呈正相关(r蛋白=0.83、rmRNA=0.95,均为P＜0.05).结论 Cyr61-VEGF信号途径在视网膜新生血管形成的过程中可能具有潜在功能.
关键词： 视网膜新生血管 富含半胱氨酸蛋白61 血管内皮生长因子 -
富含半胱氨酸蛋白61在新生血管性眼底病中的作用
富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)是一种分泌性蛋白,具有4个不同的结构域,为其在多种细胞生命活动中发挥重要作用提供了结构基础.CYR61可调控多种细胞因子表达及信号通路,参与细胞的增生、迁移、黏附、血管新生、炎性介质调控、胚胎发育、骨及软骨的形成等过程,因其具有能显著促进新生血管形成的重要功能而受到广泛关注.本文对CYR61在新生血管性眼底病,如糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、湿性年龄相关性黄斑变性中的作用做一综述,为理解新生血管性眼底病发病机制及治疗策略提供新的思路.
关键词： 富含半胱氨酸蛋白61 新生血管形成 眼底疾病 -
富含半胱氨酸蛋白61的研究进展及其在眼科的应用
CCN家族属于基质细胞蛋白,富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)是其中第一个被克隆的基因.CYR61蛋白参与调节细胞的增生、黏附、迁移、分化、凋亡以及细胞外基质的生成.CYR61与某些细胞因子和生长因子相互作用并调节其生物活性,包括转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TN F-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、骨形成蛋白(BMPs)以及Wnt家族成员等.CYR61是血管生成及骨和软骨生成的重要调控因子,在胚胎发育、创伤修复、肿瘤的发生和发展以及其他多种疾病的发病中起着重要的作用.研究发现,CYR61在体外可促进视网膜毛细血管内皮细胞的增生、迁移及生成管状结构,糖尿病大鼠视网膜及增生型糖尿病视网膜病变(PDR)患者玻璃体内CYR61均明显增高,且与VEGF有一定的关系,CYR61很可能参与视网膜新生血管性疾病,特别是糖尿病视网膜病变(DR)的发生和发展,对CYR61在DR中的作用及通路的研究为该病的发病机制及治疗提供了新的思路.就近年来CYR61的研究进展进行综述.
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压力灌注对不同程度积水肾损伤的评价
目的:探讨急性肾盂内压升高对不同程度积水肾损伤的情况.方法:采用腰大肌包埋法分别建立新西兰大白兔轻度和重度肾积水模型,轻度积水组分为M0、M1、M2和M3组,重度积水组分为S0、S1、S2和S3组,每组6只.对应分别以0,20,60,100 mmHg压力进行灌注,48 h后取标本分别检测组织中富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)和肾损伤因子-1(Kim-1)的表达情况,并观察组织细胞的微观形态变化.结果:随灌注压力升高,轻度和重度积水肾组织均表现为肾小管细胞坏死的比例升高.轻度积水组经100 mmHg灌注后(M3),组织中Cyr 61和Kim-1的表达评分分别为4.50±0.37和4.39±0.35,和对照组(M0)相比均有显著升高(P＜0.05),但M1和M2组变化不明显(P＞0.05);与对照组(So)相比,重度积水组经60和100 mmHg灌注后(S2和S3),Cyr 61表达评分分别为4.20±0.42和4.58±0.53,Kim-1表达评分分别为4.38±0.32和4.45±0.37,均有显著升高(P＜0.05),但S1与S0比较无显著改变(P＞0.05).结论:肾盂灌注压力的升高会导致积水肾缺血损伤,不同程度积水肾耐受灌注压力的大小存在差异.
关键词： 肾积水 肾损伤 富含半胱氨酸蛋白61 肾损伤因子-1 -
早期生长反应因子1特异诱骗寡核苷酸下调富含半胱氨酸蛋白61抑制大鼠血管平滑肌细胞迁移
目的 观察早期生长反应因子1特异诱骗寡核苷酸对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞中早期生长反应因子1和富含半胱氨酸蛋白61表达的影响,初步探讨早期生长反应因子1特异诱骗寡核苷酸抑制血管平滑肌细胞迁移的机制.方法 体外培养血管平滑肌细胞并转染早期生长反应因子1特异诱骗寡核苷酸,采用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学法检测转染后不同时间点对照组与实验组血管平滑肌细胞中早期生长反应因子1及富含半胱氨酸蛋白61的mRNA和蛋白的表达变化,划痕法测定血管平滑肌细胞迁移距离.结果 早期生长反应因子1及富含半胱氨酸蛋白61的mRNA和蛋白在对照组、诱骗组及诱骗对照组中均有表达.在不同时间点,诱骗组早期生长反应因子1及富含半胱氨酸蛋白61的mRNA和蛋白的表达均低于对照组(P＜0.05).转染后48 h,对照组、诱骗组及诱骗对照组血管平滑肌细胞的迁移距离分别为105.23±7.81 μm、58.65±12.68 μm、106.47±7.60μm,诱骗组血管平滑肌细胞的迁移距离明显低于其他两组(P＜0.01).结论 对体外培养的血管平滑肌细胞转染早期生长反应因子1特异诱骗寡核苷酸可以抑制早期生长反应因子1及富含半胱氨酸蛋白61的mRNA和蛋白表达,从而抑制血管平滑肌细胞的迁移.
关键词： 早期生长反应因子1 富含半胱氨酸蛋白61 诱骗 血管平滑肌细胞 细胞迁移 -
血管紧张素Ⅱ上调血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61的表达
目的 探讨血管紧张素Ⅱ对培养鼠血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61的影响及其可能的转导通路.方法 组织贴块法培养血管平滑肌细胞,血管紧张素Ⅱ处理平滑肌细胞15 min、30 min、60 min、180 min,PD98059在血管紧张素Ⅱ刺激细胞前1 h加到培养基中,用逆转录聚合酶链反应和Western blotting检测分析富含半胱氨酸蛋白61的表达.结果 逆转录聚合酶链反应分析显示用1 μmol/L 血管紧张素Ⅱ刺激细胞培养15 min、30 min 富含半胱氨酸蛋白61的表达与对照组相比明显增加;同时细胞外信号调节激酶1/2活性高于对照组(P<0.01),60 min时仍有表达,180 min时减弱;细胞外信号调节激酶1/2特异性抑制剂PD98059(20 μmol/L)能阻断血管紧张素Ⅱ上调富含半胱氨酸蛋白61的表达并抑制增加的磷酸化细胞外信号调节激酶1/2活性.结论 血管紧张素Ⅱ通过细胞外信号调节激酶1/2促进血管平滑肌细胞上调富含半胱氨酸蛋白61表达,这可能是血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖的一个重要机制.
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富含半胱氨酸蛋白61在球囊损伤大鼠腹主动脉中的表达变化
目的 观察大鼠腹主动脉球囊损伤后富含半胱氨酸蛋白61表达的变化.方法 对球囊损伤后不同时间段的大鼠腹主动脉标本采用组织形态学观察内膜增生,采用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应、免疫蛋白印记分析检测富含半胱氨酸蛋白61的表达.结果 球囊损伤后可见新生内膜在术后7天出现,术后14天明显增厚,术后28天内膜继续增生,形成的新生内膜厚度不均,较假手术组明显增厚(P＜0.01).球囊损伤后7天、14天采用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应、蛋白印记分析检测富含半胱氨酸蛋白61的表达均明显增强,与假手术组比较差异有显著性(P＜0.01).28天时与假手术组比较差异没有显著性(P＞0.05).结论 球囊损伤后富含半胱氨酸蛋白61的表达明显增强,提示富含半胱氨酸蛋白61可能在球囊损伤后内膜增生过程中起重要作用.
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富含半胱氨酸蛋白61对转化生长因子β1活化肾脏成纤维细胞的抑制作用及机制
目的 观察富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)在转化生长因子β1(TGF-β1)活化的肾成纤维细胞(NRK-49F)中的表达,探索Cyr61的作用及可能机制.方法 (1)0.0、0.5、1.0、2.0、5.0 μg/L TGF-β1刺激活化NRK-49F细胞,Western印迹检测细胞Cyr61蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖活性.(2)质粒转染构建过表达及低表达Cyr61的NRK-49F细胞,分为对照组(转染空质粒组)、过表达组和低表达组.CCK-8法检测3组细胞培养24、48、72 h的增殖活性.5.0 μg/L TGF-β1诱导活化3组细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期,实时荧光定量PCR检测纤维化标志物(Col1α1、Co13α1、MMP9、MMP13)、细胞衰老信号通路分子(p53、p21、Rb、p16)的mRNA表达,Western印迹检测Col3、MMP9蛋白的表达.结果 (1)与0.0 μg/L TGF-β1组比较,0.5、1.0、2.0、5.0 μg/L TGF-β1组NRK-49F细胞的增殖活性均增加(均P＜ 0.05),1.0 μg/L组Cyr61蛋白表达降低,5.0 μg/L组Cyr61蛋白表达升高(均P＜0.05).(2)Cyr61过表达组NRK-49F细胞24、48、72 h的增殖活性均低于对照组(均P＜0.05),且呈时间依赖性.(3)TGF-β1刺激后,与对照组比较,Cyr61过表达组NRK-49F细胞增殖活性降低,促纤维化因子Col1α1和Col3α1表达减少,同时抗纤维化因子MMP9和MMP13的表达增加,周期停滞在G1期的细胞比例增加,细胞衰老信号通路基因p53、p21和Rb mRNA表达增加 (均P＜ 0.05),而Cyr61低表达组上述效应正好相反(均P＜0.05);3组细胞p16基因mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Cyr61抑制肾成纤维细胞增殖及纤维化表型分泌,从而减缓肾脏纤维化进程,p53/p21/Rb细胞衰老信号通路可能参与Cyr61的抑纤维化作用.
关键词： 成纤维细胞 纤维化 衰老 胞间信号肽类和蛋白质类 富含半胱氨酸蛋白61 -
7,8-二羟基黄酮对缺氧诱导下肾小管上皮细胞内质网应激的抑制作用
目的 观察7,8-二.羟基黄酮(7,8-DHF)对缺氧诱导的人近端肾小管上皮细胞内质网应激(ERS)损伤的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),采用缺氧培养箱建立细胞缺氧损伤模型,排除含血清培养基对缺氧的影响后,实验分为5组,分别为缺氧0h、4h、8h、12 h、16h组.实时荧光定量PCR(RT-PCR)法筛选缺氧诱导ERS的佳缺氧时间.用不同浓度(50、100、150、200、250 μmol/L)7,8-DHF处理HK-2细胞,采用细胞增殖与活性实验筛选7,8-DHF的安全浓度.用7,8-DHF预处理HK-2细胞缺氧模型,按以下处理因素分组:对照组、缺氧+DMSO组、缺氧+7,8-DHF组(包括100 μmol/L组和150 μmol/L组),通过检测细胞增殖与活性筛选佳给药浓度.后将细胞随机分为缺氧组、缺氧+7,8-DHF组(100 μmol/L),Western印迹法检测细胞蛋白激酶(Akt)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)、富含半胱氨酸蛋白61 (Cyr61)、ERS相关促凋亡蛋白CCAAT增强子结合蛋白(CHOP)的表达.用重组Cyr61慢病毒载体构建稳定表达Cyr61蛋白的Cyr61-HK-2细胞株进行缺氧实验,按如下处理因素分组:缺氧+空质粒转染组,缺氧+Cyr61过表达组,膜连蛋白V和碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹法检测Cyr61和CHOP蛋白的表达情况.结果 (1)与对照组细胞相比,RT-PCR实验结果显示12h为诱导ERS的佳缺氧时间(P＜0.01).(2)与对照组相比,细胞增殖与活性实验结果显示100 μmol/L的7,8-DHF组为佳给药浓度(P＜0.01).(3)与缺氧+DMSO组相比,缺氧+7,8-DHF细胞p-Akt、Cyr61表达量均明显增加,CHOP表达量明显降低(均P＜0.05);LY294002处理可抑制p-Akt的表达,减少Cyr61及增加CHOP的表达(均P＜0.05).(4)与缺氧+空质粒转染组相比,过表达Cyr61组细胞的凋亡率明显降低;Cyr61表达量明显增加,CHOP表达量明显降低(P＜0.01).结论 缺氧可诱导HK-2细胞发生ERS,7,8-DHF可能通过激活Akt通路上调Cyr61,阻止ERS下游凋亡蛋白CHOP的活化,抑制细胞凋亡以及减轻缺氧诱导的HK-2细胞损伤,提不7,8-DHF可能对AKI发挥保护作用.
