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心房颤动患者氯电流相关通道CIC-3基因表达的研究
目的:研究心房颤动(AF)患者心房组织氯电流相关通道ClC-3的基因表达,探讨AF时心房组织ClC-3的mRNA表达改变及其意义.方法:将71例风湿性心瓣膜病接受换瓣手术患者分为3组:窦性心律组(SR组)31例,阵发性房颤组(PAF组)7例,持续性房颤组(CAF组)33例,术中获取右心耳组织,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测心房组织ClC-3的mRNA表达的相对含量.结果:与SR组相比,PAF组心房组织中ClC-3的mRNA表达增加,但无显著的统计学意义(P>0.05),CAF组的表达明显增加(P＜0.01),并与AF时程呈明显正相关(r=0.376,P=0.001).结论:房颤患者ClC-3的mRNA表达水平的增加可能是细胞容量调节的氯电流(ICl.VOL)上调的分子基础.
关键词： 心房颤动 氯通道 半定量逆转录-聚合酶链反应 基因表达 -
左旋龙脑对人脐静脉内皮细胞氯通道和细胞容积的影响
目的 研究左旋龙脑对人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氯通道和细胞容积的作用.方法 膜片钳技术记录全细胞氯电流;siRNA 干扰技术下调ClC-3表达;动态图像分析测量细胞容积.结果20 nmol·L-1左旋龙脑能明显激活HUVECs氯电流,电流密度达(79.59 ± 4.90)pA/pF,左旋龙脑激活的电流能被氯通道阻断剂NPPB、DIDS抑制,外向电流抑制率分别为(95.57 ± 2.57)%、(97.28 ± 6.36)%;下调ClC-3氯通道表达后,左旋龙脑激活的氯电流明显减小至(27.03 ± 3.89)pA/pF;左旋龙脑能明显诱导细胞容积缩小(14.38 ± 1.58)%,氯通道阻断剂NPPB阻断左旋龙脑诱导的细胞容积改变.结论左旋龙脑能激活HUVECs的ClC-3氯通道,使Cl-外流诱发细胞容积减小.
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钩吻总碱对肝癌细胞氯通道的激活作用
目的探讨钩吻总碱对肝癌( HepG2)细胞氯通道的激活作用及对细胞容积的影响。方法活细胞图像法观察记录钩吻总碱作用后 HepG2细胞容积的变化；全细胞膜片钳技术记录钩吻总碱对HepG2细胞膜电流的作用,通过细胞外灌流高渗液,氯通道阻断剂tamoxifen和5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸( NPPB)研究电流的生理学及药理学特性。结果细胞外灌流钩吻总碱50 min,细胞体积减小(12．48±2．2)%(P<0．01),该现象可被氯通道阻断剂tamoxifen抑制。膜片钳结果显示,细胞外灌流钩吻总碱(2μmol·L-1)可激活HepG2细胞膜氯电流,该电流有明显外向优势,无电压及时间依赖性失活,其翻转电位为(-3．21±0．67)mV,接近氯离子平衡电位(-0．9 mV),可被氯通道阻断剂tamox-ifen和NPPB抑制,细胞外灌流47%高渗溶液亦可明显抑制该电流。结论钩吻总碱可引起肝癌 HepG2细胞体积缩小,诱导凋亡性容积缩小( AVD)发生,该作用可被氯通道阻断剂明显抑制,提示氯通道可能为钩吻总碱抗癌作用的靶点之一。
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DIDS对SIN-1诱导大鼠海马神经元凋亡及PARP-1/AIF表达的影响
目的 观察氯通道阻断剂4,4′-二异硫氰基芪-2,2′-二磺酸(DIDS)对NO诱导的大鼠离体海马神经元凋亡的保护作用.方法 离体培养12 d的SD大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、3-吗啡斯德酮亚胺(3-morpholinosyndnomine,SIN-1)处理组、SIN-1+DIDS组.对各组神经元分别在相应的时间点用MTT法测定细胞生存率、Hoechst 33258测定凋亡百分数、免疫化学荧光分析检测凋亡信号蛋白PARP-1/AIF的变化、Western blot 分析凋亡蛋白Caspase-3的变化.结果 DIDS呈剂量依赖性地抑制SIN-1诱导的神经元损伤,减少凋亡发生数目,并能抑制损伤所引起的Caspase-3的激活、削弱PARP-1/AIF的表达.结论 氯通道可能参与了NO诱导的海马神经元损伤,氯通道阻断剂DIDS的保护作用可能与削弱PARP-1/AIF的表达有关.
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丹参酮ⅡA对低分化鼻咽癌细胞氯通道的激活作用
目的 研究丹参酮ⅡA对低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)氯通道的激活作用并分析该通道的生理学和药理学特性.方法 采用膜片钳全细胞记录技术记录丹参酮ⅡA激活的 CNE-2Z 细胞氯电流,细胞外高张刺激或灌流氯离子通道阻断剂,观察并分析电流的特性.结果 细胞外灌流 1 nmol·L-1 的丹参酮ⅡA激活 CNE-2Z 细胞产生一个具有明显外向优势的电流,该电流没有明显的电压依赖性和时间依赖性的失活,电流的翻转电位为(-5.9±0.2)mV,接近氯离子平衡电位.渗透性容积缩小可以完全抑制该电流,氯通道阻断剂 NPPB 可以部分抑制该电流.结论 丹参酮ⅡA激活鼻咽癌细胞膜上的氯通道,诱导氯电流,该电流具有容积敏感性.
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氯通道阻滞剂抑制人肾小球系膜细胞增殖
目的 研究氯通道阻滞剂对肾小球系膜细胞增殖的作用.方法 细胞计数和3H-TdR参入量测定确定细胞增殖,应用流式细胞术检测细胞周期时相.结果 同对照组相比,氯通道阻滞剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸[5-nitro-(3-phenylpropylamino)-benzoic acid,NPPB]、尼氟灭酸使人肾小球系膜细胞数和3H-TdR参入量明显减少(P＜0.01,n=8),并呈剂量依赖关系,但不增加系膜细胞乳酸脱氢酶释放量(P＞0.05,n=8).NPPB和尼氟灭酸均使细胞周期停滞在G0/G1期(n=3).结论 氯通道阻滞剂NPPB、尼氟灭酸对人肾小球系膜细胞增殖具有抑制作用.
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ClC-3氯通道对H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响
目的 研究ClC-3氯通道蛋白过表达对H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响.方法 蛋白免疫印迹法检测ClC-3蛋白表达;形态学方法、DNA琼脂糖电泳、MTT法和流式细胞仪观察和分析H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂、细胞存活率、凋亡率及ClC-3蛋白过表达对其影响.结果 ClC-3蛋白过表达减轻H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂及细胞凋亡率,增加细胞存活.结论 提示ClC-3氯通道蛋白过表达保护H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡.
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反义ClC-3寡核苷酸促进thapsigargin诱导的PC12细胞凋亡
目的研究反义ClC-3寡核苷酸对thapsigargin诱导的细胞凋亡的影响.方法蛋白免疫印迹法检测ClC-3蛋白的表达;MTT法检测反义ClC-3寡核苷酸对TG诱导的细胞生长的影响;形态学方法、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳观察和分析PC12细胞在转染ClC-3反义寡核苷酸后,TG诱导的细胞形态、DNA含量的变化和DNA断裂的情况.结果与对照组相比,反义ClC-3寡核苷酸呈浓度和时间依赖性地抑制ClC-3蛋白的表达;使TG诱导的PC12细胞存活率降低,凋亡程度加强,差异有显著性,而正义及随义ClC-3寡核苷酸对此没有影响.结论反义ClC-3寡核苷酸对TG诱导的PC12细胞凋亡有促进作用.
关键词： ClC-3 氯通道 Thapsigargin 凋亡 -
Ca2+运动对α1-肾上腺素受体引起内源性ClC-3氯通道表达的作用
目的研究Ca2+运动对α1-肾上腺素受体引起ClC-3氯通道表达的作用.方法在A10细胞上,用RT-PCR和Western blot检测ClC-3 mRNA和蛋白质表达情况.结果苯肾上腺素(10 μmol*L-1)和thapsigargin(0.1 μmol*L-1)可促进ClC-3 mRNA和蛋白质的表达;SK&F96365(10 μmol*L-1)和genistein(10 μmol*L-1)可抑制苯肾上腺素引起的ClC-3的表达,nifedipine(10 μmol*L-1)无此作用.结论在A10细胞上,通过钙池操纵性Ca2+通道(SOCC)的Ca2+内流参与了α1-肾上腺素受体引起的内源性ClC-3氯通道的表达,而通过电压依赖性Ca2+通道(VDCC)的Ca2+内流可能与此无关.蛋白酪氨酸激酶参与了ClC-3氯通道的表达.
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高血压发展过程中脑血管平滑肌细胞离子通道的变化
脑血管重构是高血压发展过程中重要的病理生理改变,由此引起的脑卒中更日益危害人类的健康.在高血压发展过程中,脑血管平滑肌细胞上分布的多种离子通道,如钾、钙、氯等均发生变化,导致细胞内离子浓度异常,在脑血管重构的发生发展过程中发挥了重要作用.
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ClC-3氯通道研究进展
容积敏感性氯通道普遍存在于哺乳动物细胞,对维持细胞容积平衡、调节细胞电活动等多种生理功能发挥重要作用.ClC-3作为可能编码ICl.swell的基因,受到广泛关注 .本文就近年来对ClC-3氯通道在通道特点、生理作用及有关的通道调节机制等方面的研究进行了综述.
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氯通道在阿霉素诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用
目的：研究氯离子通道在阿霉素诱导的低分化鼻咽癌CNE-2Z 细胞凋亡及凋亡性容积减小中的作用。方法采用全细胞膜片钳技术记录氯电流，流式细胞术检测细胞凋亡，活细胞图像分析法检测细胞容积变化。结果（1）阿霉素诱导 CNE-2Z 细胞凋亡；（2）阿霉素诱导 CNE-2Z 细胞发生凋亡性容积减小，细胞外灌流阿霉素2 h，细胞容积减小约10％；（3）阿霉素可激活氯通道，产生一个有较明显外向优势的氯电流；（4）氯通道阻断剂5-nitro-2-（3-phenylpropylami-no）-benzoate （NPPB）明显抑制阿霉素诱导的凋亡性容积减小、细胞凋亡和氯电流。结论阿霉素可通过激活氯通道而诱导细胞凋亡，氯通道在阿霉素诱导的鼻咽癌细胞凋亡中发挥重要作用。
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冰片对鼻咽癌细胞容积敏感性氯通道的激活作用
目的：探讨冰片对低分化鼻咽癌（CNE-2Z）细胞氯通道的激活作用及对细胞容积的影响。方法采用全细胞膜片钳技术记录冰片激活 CNE-2Z 细胞膜电流，分析其电流特性；用活细胞图像法观察并测量冰片对细胞体积的影响。结果细胞外灌流冰片（20μmol· L －1）诱导 CNE-2Z 细胞膜氯通道开放，产生氯电流，该电流有明显外向优势，无电压及时间依赖性失活，其翻转电位接近氯离子平衡电位，该电流可被氯通道阻断剂 tamoxifen 抑制，细胞外灌流47％高渗溶液完全抑制该电流。细胞外灌流冰片30 min，细胞体积缩小约9.4％，该作用可被 tamoxifen 完全抑制。结论冰片可以激活低分化鼻咽癌细胞容积敏感性氯通道，导致细胞体积缩小，氯通道在冰片引起细胞体积缩小中起着重要作用。
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心脏氯离子通道的研究进展
氯通道在心脏电生理中有重要作用,其激活能改变心肌细胞膜静息和动作电位时程.心肌细胞膜和细胞器的氯通道在调节pH、容量及渗透压中起重要作用,并与免疫反应、细胞迁移、增殖、分化及凋亡有关[1,2].本文主要对心脏氯通道的种类、组织分布、功能和已知的病理生理作用作一综述.
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转染 ClC-3 siRNA 的大鼠成骨细胞增殖、分化观察
目的：观察转染ClC-3 siRNA的大鼠成骨细胞增殖、分化情况。方法原代提取成骨细胞，将细胞分为四组，Control组细胞不做任何处理，NC组细胞转染无序siRNA，Lipo组细胞转染LipofectamineTM 2000转染试剂， ClC-3 siRNA组细胞转染ClC-3 siRNA，各组细胞加载流体剪切力行力学刺激。采用MMT法检测各组细胞培养24、48、72 h时的光密度值；同时检测各组细胞碱性磷酸酶水平及成骨细胞钙化结节形成能力。结果与Control组相比，ClC-3 siRNA组细胞各时点光密度值降低（P均＜0．01）。 ClC-3 siRNA组、Lipo组、NC组、Control组成骨细胞碱性磷酸酶水平分别为（32．434±2．130）、（46．199±1．900）、（47．347±2．500）、（49．540±1．550） U／mL，钙化结节形成能力分别为25．02％±3．46％、36．83％±4．54％、38．45％±4．84％、40．57％±2．22％，ClC-3 siRNA组与Control组相比，P均＜0．01。结论转染ClC-3 siRNA可抑制大鼠成骨细胞的增殖、分化。
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氯通道在顺铂诱导的鼻咽癌细胞凋亡性容积减小中的作用
目的 探讨氯通道在凋亡诱导剂诱导的鼻咽癌凋亡性细胞容积减小中的作用以及对凋亡的影响.方法 用顺铂(cDDP)诱导建立CNE-2Z细胞凋亡模型,用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用Scion Image图像分析软件控制定时拍摄固定视野活细胞图像,检测细胞容积变化.结果 ①cDDP诱导的细胞凋亡早期即可观察到细胞容积的减小.在连续观察的6 h中,细胞体积持续减小,6 h末细胞容积减少14.2%±2.6%.②氯通道阻断剂NPPB(100 μmol/L)明显抑制cDDP诱导的凋亡性容积减小,抑制率为98.6%±1.8%.③cDDP作用CNE-2Z细胞48 h后,诱导的细胞凋亡率为23.1%±2.5%,而在NPPB的保护作用下,凋亡率下降到3.8%±0.5%,抑制率为83.5%±10.4%.结论 氯通道激活引起的细胞容积减小是介导细胞凋亡的机制之一.
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氯通道电流在离体大鼠海马缺血缺氧性神经元凋亡中的变化及SITS的拮抗作用
目的:观察氯通道电流在NO诱导大鼠海马神经元损伤中的变化.方法:离体培养12 d的SD大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、SIN-1处理组和SIN-1处理后加氯通道阻断剂SITS组,观察细胞凋亡情况,全细胞膜片钳技术记录神经元氯通道电流.结果:3组神经元凋亡率比较,差异有统计学意义(F=3.120,P=0.006).NO处理后的神经元氯通道电流增加;SITS能部分抑制神经元损伤后氯通道电流的增加.结论:氯通道可能参与了NO诱导的离体海马神经元损伤.
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反义ClC-3寡核苷酸对PC12细胞增殖的影响
目的:研究反义ClC-3寡核苷酸对PC12细胞增殖的影响.方法:PC12 细胞用Lipofectamine2000介导分别转染6.25,12.5,25.0,50.0,100.0及200.0 mg/L的CIC-3反义寡核苷酸,50 mg/LCIC-3正义寡核苷酸,50 mg/LClC-3随义寡核苷酸,以转染10 mg/L Lipofectamine2000和未转染细胞作对照. 利用MTT 以及[3H]-胸腺嘧啶掺入实验检测细胞存活率及DNA合成情况,流式细胞术检测细胞周期.结果:与未转染细胞组比较,反义ClC-3寡核苷酸可以降低PC12 细胞存活率,并抑制[3H]-胸腺嘧啶掺入到DNA,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P均<0.05).而转染脂质体、正义及随义ClC-3寡核苷酸对PC12细胞的细胞存活率、DNA合成及细胞周期均无影响(P>0.05).结论:反义ClC-3寡核苷酸通过使PC12 细胞周期被阻滞在G0/G1期而抑制细胞的增殖.
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氯通道ClC-1、ClC-2在人心房肌的表达及与心房颤动的关系
目的 研究氯通道ClC-1和ClC-2基因在人心房组织的表达及与心房颤动(AF)的关系.方法 将71例风湿性心瓣膜病接受换瓣手术患者分为三组,窦性心律(SR)组31例,阵发性房颤(PAF)组7例,慢性房颤(CAF)组33例,于术中获取右心耳组织,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心房组织ClC-1和ClC-2的mRNA相对含量.结果 ①ClC-1、ClC-2基因在人心房组织有表达.②与SR组比较,PAF组ClC-1的mRNA表达增加但无统计学意义(1.05±0.22 vs 1.01±0.13,P＞0.05),CAF组的表达明显增加(1.25±0.18 vs 1.01±0.13,P＜0.001),CAF组较PAF组亦明显增加(P＜0.01).ClC-1的mRNA表达水平与左房内径、AF持续时间呈正相关[(r=0.344,P=0.003)(r=0.405,P＜0.001)].③与SR组比较,PAF组ClC-2的mRNA表达无增加(1.03±0.14 vs1.04±0.15,P＞0.05),CAF组的表达明显增加(1.26±0.13 vs 1.04±0.15,P＜0.001),CAF组较PAF组亦明显增加(P＜0.01).ClC-2的mRNA表达与左房内径、AF持续时间呈正相关[(r=0.441,P＜0.001)(r=0.331,P=0.005)].结论 AF患者ClC-1、ClC-2的mRNA表达水平的增加可能是心房肌电重构的分子基础.
关键词： 电生理学 心房颤动 氯通道 半定量逆转录-聚合酶链反应 -
心房颤动患者心房组织囊性纤维化跨膜转运调节体氯通道基因表达
目的探讨心房颤动(简称房颤)患者心房组织囊性纤维化跨膜转运调节体(CFTR)氯通道基因的表达.方法应用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)比较窦性心律(SR)组(n=31)、阵发性房颤(PAF)组(n=7)和慢性房颤(CAF)组(n=33)患者心房组织CFTR氯通道基因的表达.结果与SR组相比,PAF组CFTR的mRNA表达有增加但未达到统计学意义(P>0.05),CAF组的表达明显增加,CAF组较PAF组亦明显增加(1.20±0.12 vs 1.08±0.18,P<0.05).CFTR的mRNA表达与左房内径呈正相关(r=0.312,P=0.008).结论慢性房颤患者心房组织CFTR氯通道基因表达上调,可能在房颤心房电重构中起作用.
关键词： 心血管病学 心房颤动 氯通道 囊性纤维化跨膜转运调节体
