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金仓鼠神经管cDNA文库的建立
目的构建金仓鼠神经管cDNA文库,以筛选与神经管发育及神经管畸形发生相关的基因.方法用TRIZOL Reagent提取金仓鼠神经管总RNA;用LD-PCR法反转录合成双链cDNA;经蛋白酶K消化、Sfi Ⅰ酶切、CHROMA SPIN-400柱分离去除小于500bp的片段;将cDNA与载体λ Tripl EX2按一定比例连接;经体外包装,建立cDNA的噬菌体表达文库.结果cDNA文库容量为1.5×106pfu/ml,重组率为99%,平均插入片段大于1kb.结论我们初步构建的金仓鼠神经管cDNA文库为高效的cDNA文库.
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马兜铃酸对培养的叙利亚仓鼠胚胎细胞形态学转化的影响
目的大量的研究证据表明,叙利亚仓鼠胚胎(SHE)细胞转化试验可能是目前用于检测致癌物和研究化学致癌机制的试验中生物相关性强短期试验.本研究旨在检测来源于马兜铃鼠属类草药中的主要活性成分马兜铃酸(AA)引起SHE细胞形态学转化的可能性和抗氧化剂α-生育酚对AA所诱导的SHE细胞形态学转化的影响,并以此为例来说明SHE细胞转化试验可以用于检测营养保健品和中草药中可能存在的致癌或抗癌成分.方法在进行正式的细胞形态学转化试验之前,先进行了初步的剂量范围选择试验,以确定用于形态学转化试验的AA的浓度.剂量范围选择试验是在24 h染毒或7 d连续性染毒的两种条件下进行的.根据剂量范围选择试验的结果,那些引起0%～50%细胞毒性的剂量被用于24 h染毒或7 d连续性染毒的细胞形态学转化试验来检测AA引起SHE细胞形态学转化的可能性.至于α-生育酚对AA所诱导的SHE细胞形态学转化的影响,则使用了用可引起SHE细胞形态学转化浓度的AA和100 μmol·L-1 α-生育酚同时处理SHE细胞的方法进行了观察.结果在7 d连续性染毒的条件下,0.4,0.8以及1.6 mg·L-1的AA引起了SHE细胞形态学转化率的显著性升高;在24 h染毒的条件下,1.0,1.5,2.5,4.5和5.0 mg·L-1等5个剂量组的形态学转化率明显地高于阴性对照组.当在培养液中加入100 μmol·L-1 α-生育酚后,AA诱导的SHE细胞形态学转化则被抑制了16%～76%.结论本研究的结果表明,无论在24 h染毒还是7 d连续性染毒的条件下,AA都可以引起培养的SHE细胞的形态学转化.抗氧化剂α-生育酚可以抑制这种由AA引起的形态学转化.此结果提示,氧化损伤可能是AA引起细胞转化和致癌作用的机制之一.本研究的结果也表明,SHE细胞形态学转化试验对于研究开发营养保健品和中草药的机构来说是一个非常有用的工具.它可以用来检测这些产品中可能存在的致癌成分,也可以用来筛选产品中可能存在的抗癌成分.
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普通级金黄地鼠脏器潜在感染状况观察
目的了解普通级金黄地鼠感染状况.方法普通级金黄地鼠10只,断髓处死,剖检.各主要脏器称重,计算脏器系数.各脏器制片,组织病理学镜检.结果各只动物脏器均存在潜在感染;脏器的潜在感染出现率由高到低分别为:肝脏(9/10),肺脏(10/10),心脏(5/10),肾脏(5/10),脑(4/10);平均每只动物主要脏器(心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脑)潜在感染的出现率为2.9/只(2-5个/只);病变主要为各脏器可见淋巴样细胞浸润或伴有细胞、组织的变性坏死.结论普通级金黄地鼠的净化势在必行.
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黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG的纯化及抗血清的制备
目的 纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,制备兔抗金仓鼠和黑线毛足鼠血清IgG的抗血清.方法 用Hitrap Protein G亲和层析纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,经SDS-PAGE电泳鉴定纯度,标准免疫方法免疫兔子制备抗血清.结果 黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG对protein G 有很高的亲合性,用Hitrap Protein G亲和层析纯化, 得到高纯度黑线毛足鼠和金仓鼠IgG,利用纯化的IgG作抗原制备了高效价的抗血清, 免疫双扩散测定效价达1∶32和1∶16.结论 证实黑线毛足鼠和金仓鼠IgG 和Protein G 具有很高的亲和性, Protein G亲和层析是纯化黑线毛足鼠和金仓鼠IgG有效的方法之一,制备了黑线毛足鼠和金仓鼠IgG的抗血清.
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雌雄金黄地鼠血液生理生化指标的比较分析
目的 测定金黄地鼠的血液生理生化参考值,并对两性的参考值进行比较.方法 将88只4周龄金黄地鼠,80只8周龄金黄地鼠,采血后,用日本光电MEK-7222K血球分析仪测定血液生理指标,用Olympus AU400全自动生化分析仪测定血清生化指标. 结果 4周龄金黄地鼠血液生理指标中RBC、HGB、HCT、MCV和RDW性别差异有显著性 (P＜0.05), 而WBC、MCH、MCHC、PLT、PCT、MPV和PDW等性别差异无显著性 (P＜0.05);4周龄金黄地鼠血清生化指标中ALB、ALP、GLU、CA、P、CHO和TG性别差异有显著性 (P＜0.05), 而ALT、AST、TP、BUN和CREA等性别差异无显著性 (P＜0.05).8周龄金黄地鼠血液生理指标中WBC、LYM、MON 、BAS、LYM%、NEUT%、MCH、RBC、HGB、HCT、MCV、PDW和RDW性别差异有显著性 (P＜0.05), 而MCHC、PLT、MPV、PCT 、NEUT、EOS、BAS、MON%和EOS%等性别差异无显著性 (P＜0.05);8周金黄地鼠血清生化指标中ALT、ALB、BUN、GLU、CREA、P、CHO和TG性别差异有显著性 (P＜0.05), 而AST、TP、ALP和CA等性别差异无显著性 (P＜0.05).结论 金黄地鼠血液的生理生化值受多种因素影响,部分指标两性间测定值有差异,但多数指标差异不显著.
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328有无异黄酮的大豆蛋白、大豆胚芽及其提取物和大豆黄酮均可降低金仓鼠的血胆固醇水平
作者比较研究了大豆蛋白(ISP,约含等量的大豆黄酮和金雀异黄素)、用乙醇提取的无异黄酮的ISP[ISP(-)]、大豆胚芽和大豆胚芽提取物(含大量的大豆黄酮、黄豆黄素和少量的金雀异黄素)、大豆黄酮与酪蛋白的降血胆固醇的作用.
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哺乳类心脏肌浆球蛋白重链基因中的富嘧啶基内含子的唯一保守性
研究了人类和大鼠的心脏α和β-肌球蛋白重链基因 中的嘧啶基比例。编码MyH C尾的外显子均是缺少嘧啶基的。这一特殊发现，即某些内含子是富嘧啶基的，而此种富嘧 啶基状态在人类和大鼠均有保留，使所有四种等位基因共有两个富含嘧啶基的内因子，并且 每对标准基因均含有两种不同的富含嘧啶基内因子。此种强烈保守性与这些内含子的序列无 关。基于基因组序列的对比研究所得到的上述发现提示基因组序列除了编码心脏肌球蛋白重 链多肽的作用以外，还具有其他附加的功能。
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金仓鼠卵巢囊及卵巢囊淋巴孔的研究进展
卵巢系膜(mesotubarium superius,MTS)的发展程度有很大的种属差异.大多数啮齿类的卵巢系膜高度发展形成一个(几乎)完全闭口、包裹卵巢的囊,这个囊称卵巢囊(ovary bursa).淋巴孔是毛细淋巴管在间皮面的微小开口.金仓鼠的卵巢囊围绕卵巢形成完全的包裹,并且其内壁存在卵巢囊淋巴孔.本文综述了金仓鼠卵巢囊的形态结构、出生后卵巢囊及囊腔的发育以及卵巢囊淋巴孔的形态、功能,囊腔内液的引流等研究结果.
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蜂胶对致癌物诱导金仓鼠舌黏膜反应的影响
目的:研究9,10二甲基-1,2-苯并葸(9,10-dimethyl-1,2-benzanthracene,DMBA)以及蜂胶乙醇提取物(ethanol extract of propolis,EPE)对金仓鼠舌黏膜组织反应的影响.方法:60只金仓鼠按实验周期被随机分为两大组,每组再被分为EPE组、蜂胶水提取物(aqueous propolis extract,APE)组和DMBA组(n=20).测定实验鼠舌黏膜的临床和组织学改变,包括面积、容积的临床改变,鳞状上皮组织的结构和细胞学变化,并测量鳞状细胞癌组织学上的改变区域.结果:各组在第13周和第20周所测定的实验结果不存在显著差异.在第13周,EPE组出现1例单一鳞状细胞癌；在第20周,EPE组的鳞状细胞癌的发生率高,但与其他组比较差异无统计学意义.结论:蜂胶乙醇提取物对舌黏膜组织的影响以及其致癌机制还有待研究.
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叙利亚地鼠作为狂犬病暴露后免疫动物模型的研究
目的 对叙利亚地鼠(地鼠)作为狂犬病暴露后疫苗免疫效果动物模型的可行性进行研究.方法 将狂犬病病毒CVS株和CTN-1V株分别肌内感染不同周龄的地鼠和小鼠,观察动物对不同毒株的敏感性.用直接免疫荧光法检测CVS株进入地鼠脑组织的情况;用快速荧光灶抑制试验检测血清中和抗体.以不同病毒量CVS株感染8周龄雌性地鼠,确定暴露时病毒的佳感染剂量.对暴露后地鼠用疫苗进行免疫,观察疫苗的保护效果.结果 地鼠感染后7d左右出现狂犬病临床症状,同一病毒株对地鼠的致病力比小鼠强[6.4～8.0 lg半数致死量(LD50)/ml对3.4～6.5 lgLD50/ml];3周龄和8周龄地鼠对病毒的敏感性无差异.感染后5～6 d病毒进入地鼠脑组织.以3.8～4.0 lg小鼠脑内半数致死量(MICLD50)/ml的CVS株感染后6～7 d,地鼠血清中检出中和抗体.暴露后疫苗免疫结果显示,不同疫苗具有不同程度的保护效果.结论 地鼠对狂犬病病毒神经外途径感染敏感,临床症状典型,潜伏期恒定,感染后免疫血清抗体应答出现早,具备作为暴露后疫苗免疫动物模型的条件.
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蛞蝓胶囊对实验性肺气肿合并肺动脉高压的治疗作用
目的 探讨蛞蝓胶囊对实验性肺气肿合并肺动脉高压动物的治疗作用.方法 用弹性蛋白酶结合烟熏复制金黄地鼠肺气肿并肺动脉高压模型,将造模成功的金黄地鼠随机分为模型对照组,氨茶碱组,蛞蝓低、中、高剂量组,每组15只,分别给予等容量生理盐水,氨茶碱120 mg·kg-1·d-1,蛞蝓胶囊23、70、210 mg·kg-1·d-1灌胃给药,另取正常金黄地鼠15只作为正常对照组予等容量生理盐水灌胃.给药30 d后,测定右心室收缩压(RVSP)、右心室肥厚指数(RVHI)、肺泡灌洗液中巨噬细胞数,并观察肺脏组织病理学特征.结果 与正常对照组比较,模型对照组RVSP、RVHI和灌洗液中巨噬细胞数均增高,差异显著(P<0.05).治疗30 d后,与模型对照组比较,蛞蝓高、中剂量组肺气肿病变明显减轻,肺内细小动脉病变明显改善;蛞蝓高、中剂量组RVSP、RVHI和灌洗液中巨噬细胞数水平均低于模型对照组,有显著差异(P<0.05).结论 蛞蝓胶囊高、中剂量对实验性肺气肿合并肺动脉高压具有较好治疗作用,抑制肺泡巨噬细胞渗出可能为其作用机制之一.
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高温致神经管畸形相关基因CDK109克隆及其致畸相关性分析
目的 通过筛选高温致畸金黄地鼠胚胎神经管cDNA文库,克隆高温致畸相关基因CDK109.方法 利用本室构建的高温致畸胚胎神经管cDNA文库,采用噬菌斑原位杂交方法,用寡核苷酸探针筛选cDNA文库,挑取阳性噬菌斑,将其转化为质粒,再通过限制性酶切鉴定阳性克隆并测序,将该基因标记探针与孕8.5d高温致畸胚胎神经管组织和正常对照胚胎神经管组织总RNA进行NORTHERN杂交,以便确认该基因在高温致神经管畸形中的异常表达.结果 成功地从高温致畸金黄地鼠胚胎神经管cDNA文库中筛选出高温致畸相关基因CDK109全长,其在高温致畸组的表达明显高于对照组.结论 CDK109在神经管中的高表达与高温致神经管畸形密切相关.
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JNK1/2通路蛋白及凋亡基因Caspase-3在高温致神经管畸形作用中的表达
目的 探讨高温致畸MAPKs中JNK1/2通路蛋白及凋亡基因Caspase-3的表达作用及其机理.方法 孕鼠于受精第8天置42℃水浴,持续20 min后,分别于2、8、16、24、48、72 h经麻醉处死剖腹取胎,并分为高温组(2～72 h,42℃)和对照组(2～72 h,37℃).采用Western blot技术检测JNK1/2、p-JNK1/2及Caspase-3的表达量.结果 高温组JNK1/2的表达量与对照组无明显差异,各组内不同时间的表达量无明显变化;P-JNK1/2在对照组中不表达,高温组8～48 h时的表达量均高于相应的对照组(P<0.05),于16 h时表达增加为显著;Caspase-3在对照组中无表达,在高温组8～48 h时表达增加(P<0.05),于8 h时增加为显著.结论 高温刺激能促使JNK1/2发生磷酸化和凋亡基因Caspase-3的活化,这可能是高温致胚胎先天性畸形的原因之一.
关键词： 高温 诱发 金仓鼠 畸形 有丝分裂素激活蛋白激酶激酶类 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
金仓鼠肝内胆管癌微转移与血管生成的相关性研究
我们应用免疫组织化学法对金仓鼠肝内胆管癌骨髓癌细胞进行测定,探讨肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)与骨髓癌细胞含量的关系.
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初生金仓鼠蜗管发育的组织学观察
目的建立一种可用于研究先天性耳聋的动物模型.方法将出生后第一天和第五天的金仓鼠处死后,制作其耳蜗组织切片,进行观察分析.结果金仓鼠出生后第一天,其耳蜗顶周所处的发育阶段可以和人耳在第2月初胎龄时发育阶段相比,其底周则可和人第2月末胎龄时相比,生后第五天的蜗管发育则相当于人耳蜗在整个第3月胎龄的发育.结论对出生后第一天的金仓鼠施加有害因素的影响,可能有助于对整个2月胎龄的人耳蜗管发育阶段损害的病理和电生理的分析.
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仓鼠胰腺癌原位模型的建立及生物学特性
目的: 建立仓鼠胰腺癌原位模型,并研究其生物学特性. 方法: 将仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM-1接种于仓鼠胰腺背膜下,分别于第7, 14, 21, 28日各剖杀10只,肉眼及光学显微镜下观察原位肿瘤的生长、淋巴结转移及肝转移,同时观测腹水量. 结果: 仓鼠胰腺癌原位模型成活率达95%,生长迅速. 接种后第7, 14, 21, 28日原位肿瘤大小分别为(16±6),(173±44),(369±87),(974±226) mm3. 第21日,毛细淋巴管内可见癌细胞团,部分淋巴结有癌细胞转移,可见少量淡血性腹水. 第28日,淋巴结阳性率进一步增加,可见血性腹水,量明显增多;部分仓鼠发生了肝转移. 结论: 仓鼠胰腺癌细胞株 pGHAM-1原位模型建立方法简便,易复制,而且肿瘤保持了胰腺癌的生物学特性,是理想的胰腺癌研究模型.
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乙醇对金黄地鼠致畸作用的研究
①目的探讨乙醇对胚胎的致畸作用,并建立一个较理想的乙醇致畸动物模型.②方法以金黄地鼠为实验动物,以体积分数为0.25的乙醇生理盐水溶液为致畸原,以多个不同剂量(2.0,4.0,5.8和7.0 g/kg体质量)、不同给药时间(孕6～8 d)的组合进行致畸效果观察.③结果给药时间为孕第7.5天时,随给药剂量升高,吸收胎+死胎率及畸胎率明显升高,其中5.8及7.0 g/kg体质量组吸收胎+死胎率分别为34.15%,77.08%,畸胎率分别为75.68%,81.81%;给药剂量固定为5.8 g/kg体质量时,各时间组畸胎率与对照组相比差异均有统计学意义(χ2=11.22～78.02,P<0.001),但主要畸形种类不同,其中孕第7.0～7.5天出现严重的神经管畸形和眼畸形.④结论孕第7.5天腹腔注射5.8 g/kg体质量乙醇溶液,畸胎率较高,而吸收胎+死胎率相对较低,畸形严重,是一个较理想的乙醇致畸模型.
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乙醇致眼畸形和骨骼发育迟缓的形态学观察
①目的观察乙醇致畸后胚胎眼的组织学改变和骨骼发育异常.②方法从建立的乙醇致畸鼠模型上选孕 13d胚胎,采用头部连续切片,苏木精-伊红染色观察眼的发育,整胚茜素红染色观察骨化中心出现情况.③结果部分胚胎完全无视泡、视杯结构;部分胚胎可见残存的停滞在各种发育阶段的视泡、视杯残基;部分胚胎视杯形态异常.胚胎骨骼发育明显迟缓.④结论乙醇可阻碍或延迟视泡和视杯的发生和发育 ,这是乙醇致胚胎眼畸形的形态学基础.乙醇可导致胚胎骨骼发育迟缓.
