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Aβ42亚单位疫苗诱导的抗体与阿尔茨海默病人脑海马老年斑结合
目的观察Aβ42亚单位肽疫苗接种SD大鼠产生的抗体与阿尔茨海默(Alzheimer)病人脑海马老年斑结合的情况,以筛选Aβ42亚单位片段. 方法先以Bielschowsky改良法确定有老年斑的AD病人的脑,再将Aβ1～15及Aβ36～42亚单位疫苗和Aβ42全肽疫苗接种于SD大鼠,取后一次接种大鼠的血清与AD病人的脑切片进行免疫组织化学反应(ABC法).结果Aβ1-15亚单位片段疫苗以及Aβ42全肽疫苗诱导产生的抗血清染出的老年斑形态,以经典型(即成熟型)居多,间或有弥散型的老年斑.老年斑略呈圆形,大小不一,遍布海马的各个区域;有些老年斑则呈疏松的丝网状的球体;室管膜下和脑血管膜也见有Aβ沉积.Aβ36-42亚单位片段疫苗诱导产生的抗血清则未能染出老年斑.结论Aβ1-15亚单位疫苗以及Aβ42全肽疫苗诱导产生的抗血清,能与AD病人脑海马切片的老年斑结合;而Aβ36～42亚单位疫苗诱导产生的抗血清,则不能与AD脑片的老年斑结合.
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肿瘤抗原与肽疫苗
自从200多年前Edward Jenner发现良性的、自愈性的牛痘感染,可以保护个体对抗致命性的天花感染,这使得人们首次意识到自身的免疫系统对机体的保护作用[1].随后对抗麻疹、脊髓灰质炎等感染性疾病的疫苗获得了巨大的成功,使得免疫学家深受鼓舞,开始尝试用疫苗治疗肿瘤.
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MAG E-3/CEA(HLA-A2/A24+)肽疫苗诱导消化道肿瘤患者CTL的研究
目的:研究肿瘤患者树突状细胞经MAGE-3/CEA(HLA-A2/A24+)肽疫苗冲击后诱导特异性CTL的杀伤活性.方法:选择MAGE-3-HLA-A2/A24+或CEA-HLA-A24肿瘤患者,收集PBMNC中的贴壁细胞在含有rhGM-CSF、rhIL-4的1640中培养诱导DC细胞,第7日加入HLA-A2-MAGE-3,HLA-A24-MAGE-3、HLA-A24-CEA肽中击.以肽中击后的DC与未经纯化的T细胞混合培养诱导的CTL作为效应细胞,Mel 526,803,Raji,K562作为靶细胞,以LDH法检测特异性CTL的杀伤力.结果:未纯化的T细胞及肽冲击后的DC与该T细胞混合培养后的细胞表型变化表明CD3、CD4、CD25、CD1/CD56均无显著性差异,表达的CD8、CD86、CD…CD.RO/CD8、HLA-DR有显著性差异.T-IL-2细胞与T-DC-P细胞对Raii和K562细胞株的杀伤活性无显著性差异.T-IL-2细胞与T-DC-P细胞对Mel 526和803细胞株的杀伤活性有显著性差异.结论:肽疫苗可以诱导MAGE、CEA特异性的CTL应答.DC为基础的疫苗是肿瘤免疫治疗的重要的新方法,因其简便、快速的特点,具有良好的前景.
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噬菌体展示技术与肽疫苗的设计
近年来,噬菌体肽库的构建及筛选技术得到迅速发展和推广,现已广泛应用于基因定位、分子识别、疫苗设计等相关领域,尤其在非常规疫苗设计方面具有巨大的潜力.该疫苗设计策略是在分子免疫学抗原呈递的机制研究基础上提出的,具有安全、分子小、周期短、特异性高、易于大规模制备等特点,可以代替传统疫苗.本文就噬菌体展示技术用于肽疫苗设计的原理及前景作一综述.
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HER-2/neu基因在肿瘤免疫治疗中的研究进展
原癌基因HER2/neu是表皮生长因子受体家族中的一员,在多种人类恶性肿瘤中存在其扩增及过度表达,HER2/neu的过表达与肿瘤病人不良总体预后及较短存活期相关.近年来以HER2/neu为靶点的抗肿瘤免疫治疗发展较快,在抗HER2/neu抗体(Hereptin),多肽疫苗,DNA疫苗等方面取得了很大进展.
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以HER2／neu为靶点抗肿瘤治疗研究进展
原癌基因HER2／neu编码一种分子量185kDa单链跨膜糖蛋白-p185，即表皮生长因子受体2。多种人类腺癌存在HER2／neu扩增及过度表达。HER2／neu过度表达与肿瘤病人不良总体预后及较短存活期相关。近年来以HER2／neu为靶点抗肿瘤治疗在HER2／neu抗体、肽疫苗、酪氨酸激酶抑制剂等方面取得很大进展。
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颗粒性肽-DNA复合疫苗抗肿瘤免疫的研究
诱导有效的抗肿瘤免疫应答是肿瘤免疫治疗的主要目标,由于肽疫苗和DNA疫苗具备较高的安全性和实用性,因而成为肿瘤疫苗学领域中发展为迅速的肿瘤免疫治疗方案之一.但是这两种疫苗形式仍然具有各自的缺点,其抗原呈递动力学存在显著差异,提示这两种疫苗可能存在互补性.本研究对多肽疫苗和DNA疫苗进行综合,设计出新型肽-DNA复合疫苗,并以P815A为模式抗原,证实了该种新型疫苗激发抗肿瘤免疫的有效性.
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重要病毒CTL表位肽疫苗的研究现状
CTL表位诱导的细胞免疫在抗病毒感染中发挥重要作用.虽然在早期研究中病毒CTL表位的鉴定及其免疫学效应研究是一项复杂、耗时的工作,但随着科学家对抗原加工和提呈的深入研究,以及BIMAS、ProPred、SYFPEITHI等表位预测软件的开发,各种病毒CTL表位的鉴定及免疫效应研究变得更加科学、高效.本综述将简述CTL表位肽疫苗的优缺点及其发展前景,并对流感病毒、肝炎病毒、HIV、登革病毒等几种重要病毒CTL表位肽疫苗的研究现状及成果进行介绍.
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MAGE3-HLA-A2肽疫苗诱导胃癌患者自体CTL的研究
MAGEs(melanoma antigen genes)基因家族是由T．Boon领导的研究组首先在黑色素瘤细胞系MZ2-MEL中发现的。其基因产物被证实为是第一个人类肿瘤排斥抗原[1]。除了睾丸和胎盘外，MAGE基因在正常组织中均不表达，但在黑色素瘤、头颈肿瘤、肺癌、乳腺癌、消化道肿瘤中均有表达。DCs(树突状细胞)是存在于白细胞中少数具有将抗原递呈给CTL细胞功能的免疫细胞。从MAGE基因产物筛选的抗原肽，在β2M微球蛋白存在下和HLA分子结合，形成抗原复合物，由DCs递呈给CTL细胞，被CTL细胞表面TCR受体识别和结合，激活特异性CTL的杀伤性。MAGE肽疫苗和DC细胞诱导的CTL特异性免疫治疗被视为目前有临床应用价值的方法。消化道肿瘤是我国高发肿瘤病种，本研究组对MAGEs，CEA等作为消化道肿瘤患者免疫治疗靶抗原的应用价值进行分析研究。本文用从MAGE3基因编码蛋白中筛选出能结合HLA-A2的一段九肽作为疫苗，诱导消化道肿瘤患者DC细胞，分析了消化道肿瘤患者MAGE3基因表达的分布，HLA I类抗原位点的分布，比较了非特异性杀伤和DC细胞诱导CTL特异性杀伤的不同，对评估MAGE3-HLA-A2肽疫苗对消化道肿瘤患者免疫治疗研究提供参考。1 材料与方法1．1 病例来源、主要疫苗、试剂、细胞 本实验组152例实体瘤患者，其中，消化道肿瘤(135例)、胃癌(108例)；MAGE3-HLA-A2肽疫苗(FLWGPRALV)BACHEM AG；HLA分型试剂盒购置于北京中日友好医院；MAGE3基因检测RT-PCR试剂盒(日本TAKARA公司)；RNA提取试剂Trizol(Gibcobrl Life Technologies公司)；rhGM-CSF(哈尔滨里亚哈尔生物制品有限公司)；rhIL-4(日本Genzyme公司)；CD86，CD40，CD14单克隆抗体(丹麦DAKO公司)；MTF试剂盒(宝灵曼)；靶细胞系Mel-526(表达MAGE3-HLA-A2)由Dr Takesako惠赠。
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人乳头瘤病毒16 E7限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的穿膜肽疫苗设计及体外免疫学研究
目的:利用穿膜肽人免疫缺陷病毒(HIV)-Tat49-57的穿膜能力,设计穿膜肽人乳头瘤病毒(HPV)16 E7限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位(第49～57位氨基酸)的融合肽疫苗,并在体外研究其诱导特异性CTL的应答能力.方法:应用多肽固相合成技术,分别合成含HIV Tat49-57和人类白细胞抗原(HLA)-A 2.1限制性CTL优势表位HPV16 E749-57的18肽,和该CTL表位的9肽,并用一无关肽作对照,在体外用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验分别检测了上述18肽和9肽在HLA-A2阳性健康者外周血单个核细胞(PBMC)中诱导的表位E749-57的特异性CTL活性.结果:经质谱分析,上述多肽成功合成,纯度均在95%以上.与9肽相比,18肽能在体外诱导出明显增强的特异性CTL活性(P＜0.05).结论:在HPV16 E7HLA-A 2.1限制性CTl表位(49～57)的N-末端加上HIV-Tat49-57序列,不会影响表位的提呈效率,而且在体外能有效激发针对E749-57特异性的CTL应答,为新型抗肿瘤及细胞内感染的多肽疫苗设计提供了新思路.
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抗CD40抗体增强宫颈癌肽疫苗的治疗作用
目的：探讨抗CD40抗体对宫颈癌肽疫苗治疗作用的影响。方法将乳头状病毒结构性蛋白 E7表位肽（ E749－57，H－2Db限制性，CD8 T细胞表位）与Toll样受体7配体（Gardiquimod）组成疫苗，C57BL／6小鼠给予疫苗及抗CD40抗体免疫后取得外周血及脾组织CD8 T细胞，利用流式细胞仪分析特异性CD8 T细胞数量，Elisa检测CD8 T细胞与TC－1细胞（表达HPV E7蛋白的小鼠宫颈癌细胞）共孵育后干扰素（ INF－γ）表达水平。另取15只皮下荷瘤小鼠，监测免疫后肿瘤生长速度。结果与单用疫苗组相比，抗 CD40抗体明显增加小鼠外周血肿瘤特异性 CD8 T细胞数量（16．50±0．8185％ vs 9．747±1．834％，P＝0．0282），且内源性CD8 T细胞体外与TC－1细胞共孵育可以分泌INF－γ，体内显著抑制皮下肿瘤生长（ P＜0．001）。结论抗CD40抗体增强肽疫苗诱发的免疫应答，有潜力成为一种良好的佐剂。
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HPV16E7肽疫苗对人免疫重建荷人宫颈癌细胞株SiHa细胞SCID鼠免疫功能的影响
目的:观察HPV16E7多肽疫苗对人免疫重建荷人宫颈癌细胞株SIHa细胞严重联合免疫缺陷(SCID)鼠移植瘤的影响.方法:对SCID鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞(PBL)后24小时,皮下接种HPV16阳性的人宫颈癌细胞株SiHa细胞,建立人免疫重建荷SiHa细胞的SCID鼠模型,当移植瘤小体积达100mm3时,三次背部皮下接种疫苗,每次接种间隔二周,观察荷瘤鼠一般生物学特性,检测血浆中人IgG含量、外周血中人CD3+、CD4+、CD8+T细胞、脾重、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)以及脾细胞毒杀伤功能.实验设立空白组,仅为腹腔内注射PBL,疫苗成份仅为不完全佐剂(IFA);随机多肽组,为腹腔内注射PBL,皮下接种SiHa细胞,疫苗成份仅为随机多肽+T辅助多肽+IFA;T辅助多肽组,为腹腔内注射PBL,皮下接种SiHa细胞,疫苗成份仅为T辅助多肽+IFA;多肽治疗组,为腹腔内注射PBL,皮下接种SiHa细胞,疫苗成份为HPV16E711-20(YMLDLQ-PETT),HPV16E786-93(TLGIVCPI)+T辅助多肽+IFA.结果:各组SCID鼠血浆中人IgG水平,8周内随重建时间延长而升高(P＜0.05),多肽治疗组达2957.85μg/ml,但各组间无显著性差异;外周血中均可检测到人CD3+、CD4+、CD8+T细胞,但各组间无显著性差异(P＞0.05);与空白组比较,其他三组SCID鼠脾重均显著增加(P＜0.05).组织学观察到移植瘤局部TIL浸润及明显的出血和坏死,但经免疫组化未检测到人CD8+T细胞.与空白组比较,多肽治疗组、随机多肽组、辅助多肽组的脾细胞毒杀伤功能均显著降低(P＜0.05).结论:人免疫功能重建的荷SiHa细胞的SCID鼠体内重建的人免疫功能随荷瘤时间的延长受到抑制,多肽疫苗在一定程度上能减轻免疫抑制状态.
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多价精子抗原表位肽的设计与免疫效应研究
目的开发可供两性使用的多价合成嵌合肽疫苗.方法选择小鼠精子/睾丸特异性抗原SP17、Cyritestin中特异性氨基酸序列与牛核糖核酸酶非限制性T细胞表位作为骨架,按一定连接方式设计、合成新抗原35肽,并与弗氏佐剂混悬后免疫雌性BALB/C小鼠.结果在430A固相自动肽合成仪上成功地合成35肽,并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达95%以上;免疫后小鼠血清特异性IgG抗体滴度高达1∶6 000,阴道粘膜冲洗液中特异性IgA抗体滴度高达1∶300;小鼠脾脏淋巴细胞增殖率达50%左右,淋巴细胞分泌的INF-γ和IL-4分别为60、108 μg/ml;实验组BALB/C雌鼠妊娠率平均降至60%,每胎产仔数平均降低58%～71%.结论含有两种特异性精子抗原中特异性氨基酸序列的新抗原可激发小鼠产生较理想的特异性体液免疫和粘膜免疫,并使小鼠受孕率下降,为研制适宜于两性的多价抗生育疫苗提供了实验基础.
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WT1-235肽体外抗肿瘤效应的研究
目的:探索WT1肽体外抗肿瘤效应.方法:合成含HLA-A*0201锚定位点的9个氨基酸的WT1-235肽.PCR-SSP法筛选HLA-A*0201健康供者并鉴定细胞株HLA-A基因型别,RT-PCR鉴定靶细胞株WT1表达与否.体外分离HLA-A*0201型别的外周血单个核细胞(PBMCs),培养树突状细胞(DC),负载WT1肽并刺激活化同源淋巴细胞.进行体外CTLs杀伤靶细胞的细胞毒试验.结果:荷肽DC活化的CTLs对高表达WT1的HLA-A*0201型别细胞株SW48的杀伤效应高于不表达WT1的HLA-A*0201型别的人T细胞,也高于表达WT1但非HLA-A*0201型别的K562细胞(P<0.05)结论:WT235-242肽具有体外抗肿瘤效应并受MHC限制.
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新型颗粒性肽-DNA复合疫苗有效激发肿瘤抗原特异性CTL反应
目的设计新型抗肿瘤治疗性疫苗.方法以多聚赖氨酸为桥梁,将抗原肽与其编码基因并置于同-疫苗颗粒,进而设计出颗粒性肽-DNA复合疫苗.结果该疫苗可激发体内肿瘤特异性CTL反应,并对P815肿瘤具有特异性杀伤活性.结论该颗粒性肽-DNA复合疫苗有希望成为一种有效的肿瘤疫苗形式.
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CTL识别的HLA-A2限制性人卵巢癌相关抗原OVA66表位的鉴定
目的: 鉴定CTL识别的HLA-A2限制性人卵巢癌相关抗原OVA66表位.方法: 以细胞因子从外周血单个核细胞(PBMC)中诱导树突状细胞(DC), 通过形态学观察和流式细胞术进行鉴定.用表位预测法选取并合成两种肽分子, 分别脉冲成熟的DC, 并刺激HLA-A2+健康人自体CD8+ T细胞.1 wk后, 用脉冲肽的自体PBMC以每7 d的间隔刺激该CD8+ T细胞3次.以共接受4次抗原肽刺激的T细胞作为CTL, 用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验, 检测CTL对靶细胞的杀伤效应.用酶联免疫斑点法(ELISPOT), 检测CTL中抗原特异性分泌IFN-γ的T细胞数.结果: 形态学和流式细胞术的结果显示, PBMC可诱生成熟的DC.肽L235(FLPDHINIV)诱导的CTL, 可特异性杀伤L235脉冲的T2细胞和OVA66+、 HLA-A2+的SW480细胞, 且L235诱导的特异性分泌IFN-γ的T细胞数增加.结论: 卵巢癌相关抗原OVA66的HLA-A2限制性CTL表位L235, 能激发对肿瘤抗原的特异性免疫应答, 为制备肿瘤特异性肽疫苗奠定了实验基础.
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HLA分型及其在个体化肿瘤肽疫苗中的应用
恶性肿瘤临床治疗已经进人肿瘤综合性治疗和个体化治疗的时代,肿瘤免疫治疗也是目前肿瘤治疗研究的热点之一,尤其是个体化肿瘤肽疫苗已成为肿瘤治疗的一种新思路.人类白细胞抗原(HLA)分子和抗原决定簇的良好结合是个体化肿瘤肽疫苗、肿瘤肽刺激的树突状细胞瘤苗及体外培养后回输的抗原特异性T细胞能否产生抗肿瘤免疫作用的关键因素.本文介绍了HLA与个体化肿瘤肽疫苗的关系并分析目前HLA相关的个体化肿瘤肽疫苗的临床研究情况及我国人群HLA分布.
关键词： 人类白细胞抗原(HLA) 个体化 肽疫苗 肿瘤 -
妇科恶性肿瘤的免疫治疗
肿瘤的免疫治疗是继传统的手术、放疗、化疗之后发展起来的第四种治疗方法.近年来随着分子生物学、免疫学及基因工程学的迅速发展,使人们能在分子水平认识肿瘤的发生、发展及机体的抗肿瘤免疫机理,从而研究出了肿瘤的免疫治疗.疫苗是常用的一种主动免疫疗法,目前研究较多的是肽疫苗,树突状细胞(Dendritic cells,DC)疫苗,基因工程疫苗和抗独特型抗体疫苗.现综述如下.
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妇科恶性肿瘤的免疫治疗
肿瘤的免疫治疗是继传统的手术、放疗、化疗之后发展起来的第四种治疗方法.近年来随着分子生物学、免疫学及基因工程学的迅速发展,使人们能在分子水平认识肿瘤的发生、发展及机体的抗肿瘤免疫机制,从而研究出了肿瘤的免疫治疗.疫苗是常用的一种主动免疫疗法,目前研究较多的是肽疫苗,树突状细胞(Dendritic Cells,DC)疫苗,基因工程疫苗和抗独特型抗体疫苗.现综述如下:
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一种多价精子抗原表位肽的设计与合成
目的:开发可供两性使用的多价合成嵌合肽疫苗.方法:选择小鼠精子/睾丸特异性抗原SP"、Cyritestin中特异性氨基酸序列与牛核糖核酸酶非限制性T细胞表位作为骨架,按一定连接方式设计、合成新抗原35肽,并与等量弗氏佐剂混悬后免疫雌性BALB/c小鼠.结果:在430A固相自动肽合成仪上成功地合成了35肽,并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达95%以上;新抗原免疫小鼠后获得的特异性抗血清可识别小鼠、大鼠及人睾丸组织蛋白提取物中相应分子量的蛋白质,且血清中特异性IgG抗体滴度高达1:6 000,阴道粘膜冲洗液中特异性IgA抗体滴度高达1:300.结论:由含有两种特异性精子抗原、具有特异性氨基酸序列的新抗原所制备的抗血清可识别两种天然抗原,并在小鼠体内激发出较理想的特异性体液免疫,从而为研制适宜于两性的多价抗生育疫苗提供了实验基础.
