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大鼠急性心肌缺血再灌流损伤c-fos mRNA原位杂交实验研究
目的探讨急性心肌缺血和/或再灌流早期不同时间不同区域心肌细胞内原癌基因c-fos mRNA表达变化,为心肌早期缺血死后诊断提供依据.方法复制心肌早期缺血模型,大鼠分为正常、缺血及缺血再灌流组.采用原位杂交方法结合图像分析与统计学处理方法研究心肌细胞内c-fos mRNA表达情况.结果缺血10min再灌流30min,部分大鼠再灌流区心肌细胞胞浆内c-fos mRNA弱阳性反应,散在分布.缺血60min再灌流30min时达高峰,120min开始减弱.正常和单纯缺血组中缺血少于60 min组未见有阳性表达.HE染色无明显病理改变.结论原位杂交法检测c-fos mRNA方法灵敏特异,有望成为一项急性心肌缺血/再灌流早期损伤的诊断指标.
关键词： 心肌缺血 再灌流 原位杂交 c-fos mRNA -
海洛因慢性依赖大鼠神经元一氧化氮合成酶变化
目的研究海洛因药物滥用致脑神经细胞一氧化氮合成酶(ncNOS)表达的变化及法医学鉴定意义.方法采用ncNOS免疫组织化学SP法、ncNOS mRNA原位分子杂交及图像分析技术,观察大鼠海洛因慢性依赖和自然戒断大脑皮质、中脑导水管周围灰质和中脑腹侧被盖区神经细胞ncNOS的变化和ncNOSmRNA的表达.结果实验组神经细胞ncNOS含量和ncNOS mRNA表达比对照组明显增加,阳性细胞数明显增多;自然戒断组较慢性依赖组改变更加明显(P＜0.05).结论ncNOS在海洛因慢性依赖和戒断中起重要作用,脑神经细胞ncNOS免疫组织化学变化可作为海洛因药物滥用法医学鉴定的形态学依据.
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不同方式标记非放射性探针原位杂交效果评价
目的比较不同方式标记非放射性探针的原位杂交效果.方法通过两种方法标记地高辛随机引物DNA探针和反意RNA探针,在大鼠损伤模型的皮肤组织上进行原位杂交.结果两种探针均可满足要求,以反意RNA探针在阳性染色深度和背景方面效果更佳.结论RNA探针在杂交效果方面优于DNA探针.
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FNⅢcs在皮肤切创中的表达与损伤时间关系
目的研究纤维连接蛋白可变剪接片段Ⅲcs在不同损伤时间皮肤中的表达,为早期损伤时间的判定指标提供实验依据.方法DIG标记反意RNA探针,以原位杂交的方法检测大鼠和人体皮肤在损伤早期FNⅢcs表达的变化.结果(1)人体及大鼠皮肤损伤后30min皮肤网状层的毛囊、皮脂腺、血管内皮层中表达FNⅢcs的阳性细胞数开始增多,至伤后6h达到高峰,以后又逐渐减少.(2)人体皮肤FNⅢcs表达的部位与大鼠有明显的差异.结论FNⅢcs的原位检测可望成为判断早期损伤时间的有用指标;为FNⅢcs在创伤修复中的合成方式、部位和作用的研究提供了实验基础.
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大鼠脑挫伤后FN表达与损伤时程关系的研究
为寻找推断脑损伤经历时间的可靠指标，采用自制自由落体撞击法致大鼠右顶叶局灶性脑挫伤模型，于不同时间段处死大鼠后，进行纤维连接蛋白的免疫组织化学及原位杂交法研究，结果发现纤维连接蛋白及其mRNA表达水平与伤后经历时间有一定相关性，并能较好地鉴别死前脑挫伤和死后脑挫伤，可作为推断脑挫伤经历时间的参考指标之一。
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大鼠皮肤损伤后纤维连接蛋白剪接异型体的表达
运用地高辛标记纤维连接蛋白(FN)特殊位点的探针,通过原位杂交方法检测不同损伤时间大鼠皮肤各型FN剪接异型体的表达情况,结果发现:伤后大鼠皮肤各型FN的表达随时间呈增高趋势;伤后30-60min表达出正常皮肤中没有的EⅢA、EⅢB片段.PN的这一特性为法医学诊断生前、死后伤和伤后存活时间推断提供了新指标.
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大鼠脑损伤后COX-2表达变化的时间规律性研究
目的探讨大鼠脑损伤后环氧合酶2(COX-2)在神经元、神经胶质细胞中表达变化的时间规律性.方法以冲击应力σd为355.09kPa致大鼠脑损伤后,于不同时间段分别应用原位杂交、免疫组化、免疫组化双染色技术检测COX-2mRNA和蛋白的表达强度,用图像分析系统测定阳性反应物平均灰度,进行统计学处理.结果正常对照组COX-2mRNA和蛋白弱表达,伤后15min开始表达呈增强趋势,分别于伤后1,2d,表达达到峰值,平均灰度值分别为126.38±1.36、124.77±3.20,与对照组、邻近上组比较均具有显著性差异(P＜0.05),于伤后3,4d,表达达到另一峰值,平均灰度值分别为127.18±1.96、120.14±3.52,并维持高水平表达分别至伤后7,15d,平均灰度值分别为110.03±2.61、111.27±2.83,与对照组比较具有显著性差异(P＜0.05).阳性细胞多为神经元.结论脑损伤后COX-2mRNA及蛋白的表达具有时间规律性,可作为法医学推断脑损伤形成时间的指标.
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乳腺癌组织中CD44v6的原位杂交研究
应用原位杂交技术,检测乳腺癌中CD44v6 mRNA表达,探讨其与乳腺癌复发及预后的关系.
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COX-2基因在子宫内膜异位症组织的表达及其作用机制的探讨
目的观察COX-2基因在子宫内膜异位症(EMs)组织中的表达,探讨COX-2在子宫内膜异位症发病中的作用.方法应用原位杂交的方法,检测38例子宫内膜异位症组织及35例正常子宫内膜COX-2 mRNA的组织定位和表达强度.结果 COX-2 mRNA均以腺体细胞胞质表达为主,细胞核少量阳性.EMs组织中COX-2 mRNA表达增高明显,增殖期(3.11±0.56),分泌期(3.05±0.41);高于正常对照组子宫内膜增殖期(0.55±0.46),分泌期(0.57±0.43)(P＜0.001);EMs组COX-2 mRNA在增殖期和分泌期表达无明显差异(P＞0.05).结论 COX-2 mRNA的高表达可能是导致其发病机制之一,对COX-2的深入研究将为EMs治疗提供新的靶点.
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宫颈HPV感染患者宫颈局部Th1/Th2漂移情况的研究
目的:研究IL-2、IL-4在宫颈HPV感染患者宫颈局部组织中的表达及意义.方法:选取宫颈活检组织92例,采用原位杂交法检测HPV16/18 DNA、IL-2 mRNA、IL-4 mRNA在样本中的表达.结果:在HPV未感染者官颈中IL-2阳性表达率为59.1%,在HPV感染者宫颈中IL-2阳性表达率为16.7%,二者比较差异有显著性(P＜0.05).在HPV未感染者宫颈中IL-4阳性表达率为22.7%,在HPV感染者宫颈中IL-4阳性表达率为81.3%,二者比较差异有显著性(P＜0.05).结论:HPV感染后可以导致宫颈局部Th1类细胞因子IL-2的分泌减少,Th2类细胞因子IL-4的分泌增加,导致Th1向Th2的漂移.
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原位杂交技术检测HPV-DNA的应用及体会
目的 通过对活检标本检测HPV-DNA,得出原位杂交的应用体会.方法 通过原位杂交检测,结合其组织病理镜下形态特点作出总结分析.结果 降低了原位杂交假阳性和假阴性,得出一系列体会.结论 值得借鉴推广在原位杂交操作中的各个细节步骤中,应用这些体会提高原位杂交结果满意度.
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烧伤疼痛应激状态对心肌原癌基因c-fos、c-myc表达的影响
[目的]了解应激状态心肌原癌基因的表达特征.方法:复制大鼠30%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烧伤,应用组织原位杂交方法检测心肌c-fos、c-myc mRNA的表达.[结果]烧伤应激时原癌基因表达增强,大约3h达到高峰后逐渐下降,与对照组相比存在显著性差异(P≤0.05).结论:应激时心肌原癌基因c-fos、c-myc表达增强,对应激时心肌起保护作用.
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野生型p53基因在人肝癌细胞的表达及诱导其凋亡
目的:探讨野生外源性野生型p53基因对人源性肝癌细胞系生物学的影响.方法:用p53抗体对HepG2细胞系进行免疫组化检测,以了解其是否存在p53的突变;用脂质体转染法将真核表达质粒p53-pcDNA3转染人源性肝癌细胞系HepG2,用G418筛选细胞;用生物素标记P53的cDNA探针,通过RNA原位杂交方法,检测p53-pcDNA3在细胞中的表达;用流式细胞术检测细胞的凋亡指数.结果:HepG2细胞核着色成棕褐色,说明HepG2细胞系存在p53的突变;G418筛选出了阳性转染细胞;RNA原位杂交显示肝癌细胞的胞浆染成棕黄色,证明p53在肝癌细胞内得到了表达;p53通过阻止细胞周期的进行,使肝癌细胞的增殖能力下降,细胞的生长抑制率达到53.94%,细胞的凋亡指数由转染前的10.03%上升为54.17%.结论:外源性wt-p53对肿瘤细胞的基因治疗可以降低肿瘤细胞增殖能力,有效的抑制肿瘤生长,为肿瘤治疗赢得时间.
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生长激素释放肽在消化系统中的作用研究进展
1 Ghrelin简介
1999年,日本科学家Kojima利用能够稳定表达生长激素促分泌剂受体(GHS-R)的CHO(chi-nese hamster ovary)细胞株,从大鼠胃中提纯出含28个氨基酸的活性多肽,可以激活G蛋白偶联受体GHS-R,并刺激生长激素(GH)的分泌。这种生长激素促分泌素受体的内源性配体被称为ghrelin[1]。利用原位杂交方法研究显示,ghrelin的mRNA存在于胃底泌酸腺的颈部和底部。合成ghrelin的细胞是X/A样细胞,简写为Gr细胞。 -
组织微阵列探讨人乳头瘤病毒β-连结蛋白和细胞周期素D1在宫颈鳞癌的临床意义
目的 探讨宫颈浸润性鳞状细胞癌(ISCC)中β-连结蛋白(β-cat)、细胞周期素D1(CyclinD1)、Ki67及高危型人乳头瘤病毒(HPV)的表达,分析它们在宫颈鳞癌发生、发展中的作用.方法 将73例ISCC、30例高级别鳞状上皮内病变(HSIL)、32例低级别鳞状上皮内病变(LSIL)和21份正常宫颈组织(NCE)应用组织微阵列法制成组织芯片,同时采用原位杂交法检测HPV16/18,31/33 DNA的表达；免疫组织化学法检测β-cat、CyclinD1和Ki67蛋白的表达.采用x2检验.结果 ①HPV16/18,31/33在宫颈病变中的阳性表达差异有统计学意义(P＜0.01)；宫颈鳞癌中HPV16/18阳性患者易发生脉管癌栓(OR=3.875),HPV31/33阳性患者临床期别更易进展为高期别(OR =3.5).②β-cat的异常表达、CyclinD1和Ki67的阳性表达在宫颈病变中差异有统计学意义(P＜0.01)；β-cat在LSIL、HSIL和ISCC中为异质性表达.③宫颈鳞癌年龄增大则病理分期增加(OR=1.063).结论 HPV16/18,31/33的感染与宫颈鳞癌的发生密切相关,并与进展有关；Ki67可作为宫颈病变诊断的客观参考指标.
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胃癌及癌前病变p53基因改变的免疫组化和原位杂交研究
目的研究胃癌及癌前病变p53基因改变情况,探讨p53基因突变与胃癌的相关性.方法在本院近10年库存石蜡标本中选取74例胃癌、20例胃癌前病变和10例浅表性胃炎标本,用免疫组化和原位杂交的方法同时检测胃粘膜p53蛋白和p53mRNA表达.结果浅表性胃炎未发现p53基因异常;胃癌和癌前病变p53基因突变率用免疫组化方法分别为41.9%和40.0%,用原位杂交方法分别为51.4%和40.0%,免疫组化和原位杂交结果显示良好的一致性,胃癌p53基因突变率和癌前病变无显著差异,突变与胃癌分型及部位相关,而与分期关系不密切.结论p53基因突变可能和肠型胃癌和非贲门部胃癌的早期发生有关.
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转化生长因子(TGF-β1)mRNA在移植肾纤维化中分子病理机制的研究
目的:为探讨TGF-β1在同种异体肾脏移植后慢性排异反应所致肾纤维化中的作用和意义,揭示其发病机制.方法:32例慢性排异反应失功的移植肾,经手术切除后,取肾组织做常规病理观察和原位杂交,以正常肾组织为对照.结果:纤维化的肾组织TGF-β1表达较正常对照组增高,与纤维化程度呈正相关.结论:TGF-β1可能参与了肾脏移植后慢性排异反应所致肾纤维化的发生及发展.
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EBER1/2、LMP-1在鼻腔非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义
目的探讨EBER1/2、LMP-1在鼻腔非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达及意义.方法采用免疫组织化学链霉素抗生物素-过氧化酶连接法(SP法)检测CD45RO、CD3&、CD20、TIA-1、粒酶B确定肿瘤细胞免疫表型,原位杂交(In situ hubridization,ISH)方法检测EB病毒(EBV)编码的RNA(EBER1/2)、免疫组织化学方法检测EBV潜伏膜蛋白(LMP-1).结果29例鼻腔NHL中,CD48RO阳性29例(100.00%),CD3&、TIA-1、粒酶B阳性19例(65.56%),CD20全部阴性;EBER 1/2阳性率为79.62%(23/29),LMP-1阳性率为48.28%(14/29).结论EBV与鼻腔NHL密切相关,EB病毒在鼻腔非霍奇金淋巴瘤的发生发展中可能起重要作用,EBER1/2原位杂交检测及LMP-1免疫组化检测可作为鼻腔非霍奇金淋巴瘤组织学诊断的辅助依据.
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苏州地区胃癌患者HER2基因过表达和临床病理特征的研究
目的:研究苏州地区胃癌患者HER2(human epidermal growth factor receptor2)基因过表达情况和临床病理特征方法:回顾性分析苏州大学附属第一医院2015年10月-2016年10月收治的124例胃癌患者术后肿瘤组织标本,患者均来自苏州地区本地,应用荧光原位杂交(FISH)和免疫组化方法(IHC)检测HER2基因扩增和蛋白表达情况,应用 χ2检验分析HER2基因扩增和蛋白表达与胃癌患者临床病理特征间的关系.结果:124例术后肿瘤组织病理标本中阳性的患者17例(13.7%);HER2过表达与浸润深度、病理分化程度和Lauren分型有明显的相关性,差异均有统计学意义(P<0.05),而与患者的性别、年龄、大肿瘤直径、有无区域淋巴结转移、肿瘤部位及临床病理(TNM)分期等不相关.结论:在全层浸润(侵犯浆膜层)、分化较好(高+中分化)、肠型胃癌时HER2阳性率明显提高.
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应用3种方法诊断弓形虫淋巴结炎
目的 探讨研究弓形虫淋巴结炎的病理诊断.方法 应用免疫组化、原位杂交及间接原位PCR技术,检测71例(均来自可疑弓形虫感染者)经病理诊断为慢性非特异性淋巴结炎(淋巴结反应性增生)病人组织切片中的弓形虫.结果 发现在71例中弓形虫阳性病例分别为17例(23.94%)、35例(49.30%)、41例(57.75%),免疫组化与原位杂交、间接原位PCR结果 差异有统计学意义(P<0.005).结论 在病理诊断为慢性非特异性淋巴结炎(淋巴结反应性增生)的病人中,部分为漏诊的弓形虫淋巴结炎病例.免疫组化、原位杂交及间接原位PCR均能显示淋巴结组织切片中的弓形虫,但弓形虫检测结果 阳性率从高到低依次为间接原位PCR.原位杂交及免疫组化.
