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结核分枝杆菌调节蛋白RelA结构和功能的生物信息学分析
目的 应用生物信息学方法分析预测结核分枝杆菌调节蛋白RelA的结构及功能. 方法 从NCBI数据库获取结核分枝杆菌RelA蛋白的氨基酸序列,采用ProtParam工具预测蛋白质理化性质,采用Predict-Protein工具预测二级结构和疏水性,采用TMHMM软件包和TMpred程序对跨膜区预测,采用SignalP 4.1 Server,用神经网络模型对信号肽预测,分析亚细胞定位、结构域和功能,运用SWISS-MODEL工具在线预测三维结构等. 结果 结核分枝杆菌RelA蛋白含有894个氨基酸,为不稳定性疏水性分泌蛋白,二级结构以螺旋结构和环状结构为主,无跨膜区,包含5个保守域,在胞浆中发挥生物学效应,调节(p) ppGpp合成. 结论 结核分枝杆菌RelA基因编码蛋白为不稳定性疏水性分泌蛋白,作为调节蛋白,主要参与细菌在生存压力下引起的严紧反应,调节(p) ppGpp的合成,因此可作为抗结核潜伏、持续感染治疗靶点.
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肾移植患者潜伏结核感染的实验室诊断
结核病是在世界范围内广泛流行的传染性疾病,主要是由结核分枝杆菌经呼吸道传播引起,据WHO 统计全世界有近1 /3 的人感染过结核杆菌,大部分表现为隐性感染,我国引起结核感染的主要是人型结核分枝杆菌,全国现有活动性肺结核患者约450 万,每年新发生肺结核患者约145 万.我国目前约有9 万肾移植患者,近年来每年新增5000 例肾移植病例,随着新型免疫抑制药物的应用,术后排斥反应的发生率降低了,但罹患感染的情况却日益加重,结核感染是肾移植术后常见的感染之一[1].
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结核菌素皮肤试验阳性人群是否应该接受化学预防治疗
结核病是我国常见的呼吸道传染病之一，发病率和死亡率仍居传染病之首。WHO估计全球有1/3的人口感染结核分枝杆菌（MTB），即潜伏结核感染者（LTBI），而我国是结核病高负担国家之一，大约有40%～45%的人口感染MTB。LTBI者在2年内发展成为有临床表现的活动性结核病的风险为5%～10%，如果采取化学预防，可以降低LTBI者2年内的发病率。LTBI的检测常用的方法是结核菌素皮肤试验（TST），但并非所用TST阳性人群均适宜化学预防。在我国对于TST强阳性人群，尤其是结核病的高危人群，适合采取化学预防治疗。预防方案可以是单药异烟肼，也可以是异烟肼联合利福平或利福喷汀预防治疗，疗程及给药方式没有统一标准。
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2013美国CDC潜伏结核感染指南解读
潜伏结核感染（LTBI）是结核感染的一种，发病率高，全世界近1/3的人口曾感染结核分枝杆菌（MTB），大多数分布在全球22个结核病高负担国家[1]。虽然并不是所有的LTBI都会发展成结核病。如果不治疗，有5%～10%的LTBI者将会发展成结核病。因此，早期鉴别和治疗LTBI将有助于控制结核病的发病率，而基层医疗工作者在这方面起到重要的作用。本指南为美国CDC于2013年制定，旨在为基层医疗工作者提供指导，从而有效地降低肺结核的发病率。
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T-SPOT.TB试验对某大学大学生结核杆菌潜伏感染随访研究
潜伏结核感染(latent tuberculosis infection,LTBI)是活动性结核病患者的重要来源,但是LTBI的诊断迄今还没有金标准,目前国际上主要将结核菌素皮肤试验(tuberculin skin test,TST)和(或)γ干扰素释放试验(interferon-gamma release assays,IGRAs)结果阳性但是没有结核病临床症状和影像学阳性结果者视为LTBI者.
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结核菌素试验阳性的接触者随访期间γ-干扰素释放试验的研究
背景:在进行大规模接触者调查后,对结核菌素试验(TST)阳性个体提供预防性抗结核治疗.目的:研究随访期间异烟肼(INH)的治疗效果和γ-干扰素释放试验(IGRA)的时效.设计:在大规模接触者调查期间,TST检测为阳性的对象(n=122例)纳入本研究.在2年里,每6个月抽取一次血标本用来进行两种试验.结果:122例中,36例(29.5%)完成异烟肼预防性治疗,71例(58.2%)每6个月进行一次X线筛查随访,另有15例(12.3%)未完成异烟肼预防性治疗.阳性者的总百分率在2年间保持稳定,大约在45%～50%,但随着时间的推移,个体的反应有变化.大多数初始IGRA低者,随访期间其结果仍然在临界值以下,初始IGRA结果高的仍为阳性,而IGRA初始结果为中等程度者,随访期间有多种动态类型.结论:本研究显示IGRA反应随着时间推移变异较大,提示其在潜伏感染个体随访中的应用价值有限.然而,在那些初始IGRA为中等程度结果的个体表现出不同动态类型的意义,需要进一步研究.
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吡嗪酰胺与利福平联合治疗HIV(-)结核感染的安全性
背景:西班牙四个城市9家公共卫生治疗中心.目的:比较2个月利福平+吡嗪酰胺(2RZ)与6个月异烟肼(6H)治疗潜伏结核感染(LTBI),评估其效益及安全性.设计:对传染性肺结核病人的HIV(-)接触者进行多中心的前瞻性随机比较研究.结果:352例中接受6H者199例,2RZ者153例;6H组及2RZ组治疗完成率各为73%及71%(P=0.73).因肝毒性反应(AST或ALT＞5倍正常上限值(ULN))而中断治疗者,2RZ组为10%,6H组为2.5%(P=0.007).2RZ组肝毒性反应高于期望发生率,因而未到期即终止了研究.停止治疗后肝功能均恢复正常.结论是RZ方案只应用于不适用其它治疗方案者,且需有强化观察肝功能的条件.
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外周血结核感染T细胞斑点试验对活动性结核的诊断价值
目的 探讨外周血结核感染T细胞斑点试验(Tuberculosis T cell spot assay,T-SPOT.TB)对活动性结核的诊断价值.方法 选取2015年1月-2017年6月医院收治的疑似结核病患者661例为研究对象,另选取同期110名健康对照组人群.根据临床诊断将患者分为活动性肺结核组51例,活动性结核性胸膜炎(TBP)组73例,非活动性结核组46例和非结核肺部疾病组491例.计算不同参比条件下外周血T-SPOT.TB对诊断活动性肺结核和TBP的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性似然比(LR+)、阴性似然比(LR-)和约登指数(Youden Index);分析患者组和健康对照组A抗原(ESAT-6)和B抗原(CFP-10)刺激产生的斑点形成细胞(SFCs)数目水平.结果 639例疑似活动性结核患者中外周血T-SPOT.TB阳性218例(34.12％),活动性结核(肺结核和TBP)患者T-SPOT.TB阳性率为87.10％(108/124)高于非活动性肺结核组58.70％(27/46)、非结核肺部疾病21.18％(104/491)和对照组14.55％(16/110)(P＜0.001);活动性肺结核组阳性率为96.08％(49/51)高于活动性TBP组80.82％(59/73)(P=0.013);患者组和对照组CFP-10抗原刺激产生的SFCs(CFP10-SFCs)均高于ESAT-6抗原刺激产生的SFCs(ESAT6-SFCs);活动性肺结核组ESAT6-SFCs和CFP10-SFCs合并值高于活动性TBP组、非活动性肺结核组、非结核肺部疾病组和健康对照组人群(P＜0.001);30～39岁年龄组患者合并SFCs为[1.00(0,29.50)]低于≥80岁年龄组患者[3.00(0,26.00)](P =0.001);非结核肺部疾病各亚组和不同年龄组患者T-SPOT.TB阳性率之间比较,差异均无统计学意义.与对照组、非医护人员亚组和非结核肺部疾病组比较,外周血T-SPOT.TB对活动性肺结核和TBP的诊断特征性指标差异较大,非结核肺部疾病组NPV(99.49％,96.51％)高于对照组(97.92％,87.04％)和非医护人员亚组(96.00％,77.42％) (P＜0.05).结论 潍坊地区非结核肺部疾病患者和医护人员中LTBI发生率较高;在结核高负担地区,外周血T-SPOT.TB诊断活动性结核感染受到一定限制,结果阳性应综合判断、慎重解释.
关键词： 结核感染T细胞斑点试验 活动性结核 潜伏结核感染 诊断意义 -
不同结核类型患者外周血IL-6与IL-35和IL-37及TNF-α水平的动态变化研究
目的 探讨活动性肺结核(ATB)、潜伏结核感染(LTBI)患者外周血白介素-6(IL-6)、白介素-35(IL-35)、白介素-37(IL-37)、肿瘤坏死因子-α(T NF-α)水平动态变化及意义.方法 选择医院2017年4月 -8月收治的ATB患者43例,设为ATB组,43例LTBI患者,设为LTBI组,另选择同期健康体检者43名设为对照组,通过酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测三组受试者血清IL-6、IL-35、IL-37、TNF-α水平,比较不同病情、有无胸水活动性肺结核、肺结核组治疗后患者血清指标,并通过Spearman相关分析活动性肺结核患者血清IL-6、IL-35、IL-37、TNF-α表达水平的相关性.结果 ATB组、LTBI组血清IL-6、IL-35、IL-37、TNF-α水平均显著高于对照组(P<0.05),且ATB组上述指标均显著高于LTBI组(P<0.05);伴空洞ATB患者血清IL-35、IL-37水平均显著高于非空洞患者(P<0.05);伴胸水A TB患者血清IL-6、IL-35水平均明显著高于无胸水患者(P<0.05);A TB患者治疗后血清IL-6、IL-35、IL-37、TNF-α水平均显著低于治疗前(P<0.05);Spearman相关分析发现ATB患者血清IL-6水平与 IL-35、IL-37分别正相关(P< 0.05),与 T NF-α无关,IL-35与 IL-37、T NF-α分别正相关(P<0.05),IL-37与T NF-α正相关(P<0.05).结论 IL-6、IL-35、IL-37及T NF-α对结核感染状态有一定的鉴别判断作用,IL-35等细胞因子动态变化对A TB病情程度、疗效评估有重要意义.
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鸟苷酸结合蛋白5和二磷酸腺苷核糖化因子鸟苷酸激酶1基因在肺结核患者和潜伏结核感染人群中的表达研究
目的 探讨鸟苷酸结合蛋白5(GBP5)和二磷酸腺苷核糖化因子鸟苷酸激酶1 (ASAP1)基因在肺结核患者及潜伏结核感染人群中的表达情况.方法 选取2016年8月至2017年5月确诊肺结核患者40例(肺结核组)、潜伏结核感染患者40例(潜伏结核感染组)及健康对照者40例(健康对照组),取入选者外周抗凝血4 ml,应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测这三组人群GBP5、ASAP1基因表达情况.结果 肺结核组、潜伏结核感染组和健康对照组GBP5基因相对表达量分别为1.58 ± 0.80、1.09 ± 0.68和1.04 ± 0.61,差异有统计学意义(F=7.23,P=0.001);肺结核组GBP5基因相对表达量高于潜伏结核感染组(t=2.93,P=0.004)和健康对照组(t=3.40,P=0.010),差异有统计学意义;潜伏结核感染组GBP5基因相对表达量与健康对照组比较差异无统计学意义(t=0.39,P=0.700).三组ASAP1基因表达量比较差异无统计学意义(F=0.26,P=0.770).结论 GBP5基因表达在肺结核患者、潜伏结核感染患者和健康对照者中存在差异,GBP5基因检测可能筛选出潜伏结核感染人群,可作为筛选潜伏结核感染人群的标志物.
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miRNAs谱在潜伏结核感染者和健康人血浆中的差异表达
目的 探讨潜伏结核感染者(Latent tuberculosis infection,LTBI)和健康人血浆中miRNAs的差异表达,为后续LTBI诊断实验和机制研究的开展奠定基础.方法 确定研究对象并签署知情同意书,收集黄岛区结核病防治所LTBI和山东国际旅行卫生保健中心健康人的血浆.利用高通量测序技术进行miRNAs表达谱分析,比较LTBI和健康人血浆中miRNAs谱的差异表达情况;利用实时荧光定量PCR法证实差异表达的miRNAs靶标,并采用2-△△Ct法计算miRNAs的相对表达量来明确miRNAs表达上调和下调情况.结果 高通量测序miRNAs表达谱分析发现,与健康人相比,51种miRNAs差异表达,其中17种表达上调,34种表达下调.选取其中四种miRNAs,用实时荧光定量PCR证实发现hsa-miR-126-5p表达上调,而hsa-let-7a-5p、hsa-let-7f-5p和hsa-miR-150-5p表达下调.结论 本研究筛选出多种miRNAs差异表达,荧光定量PCR证实的hsa-let-7a-5p、hsa-let-7f-5p、hsa-miR-126-5p和hsa-miR-150-5p,可作为诊断LTBI的潜在标志物.
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不同国家γ干扰素释放试验临床应用指南的概述
γ干扰素释放试验(interferon gamma release assays,IGRAs)是一种新型的快速诊断结核分枝杆菌感染的免疫学方法.目前已经有16个国家制定了IGRAs诊断结核分枝杆菌感染的应用指南.各国IGRAs应用指南主要针对以下情况进行制定的:成人活动性结核病、成人潜伏结核感染、医疗工作者潜伏结核感染、免疫抑制者结核分枝杆菌感染筛查、儿童结核分枝杆菌感染.不同国家对不同人群的IGRAs应用指南不尽相同,故我国应根据本国国情针对不同人群进行大样本研究以得出IGRAs诊断结核分枝杆菌感染的科学、有效的应用原则.
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潜伏结核感染与肿瘤坏死因子-α拮抗剂
根据结核感染的状态,人群可以分为无结核感染、潜伏性结核、活动性结核和治愈.潜伏结核感染(latent tuberculosis infection,LTBI)通常是指体内(通常是肺)存在结核杆菌,但仍未出现明显的症状.
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儿童结核病需要关注的几个问题
儿童结核病是一个严重的公共卫生问题.其临床表现缺乏特异性,痰含菌量少、标本采集困难等因素使儿童结核病诊断依然面临着巨大的挑战.儿童尤其是婴儿和5岁以下的潜伏性结核感染儿童,进展为活动性结核病的风险高,容易发生结核性脑膜炎、结核全身播散甚至死亡等严重情况.治疗儿童潜伏性结核感染的获益可能大于成人.只有关注儿童结核病的快速准确诊断、合理治疗,加大政府投入,才可能实现“儿童结核零死亡率”的愿景.
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763例儿童潜伏期结核感染调查分析
目的 进行结核菌素试验,筛查潜伏结核感染,为预防结核病提供参考依据.方法 采用随机抽样的方法抽取包头铁路地区3个月～18岁不同年龄组763人进行结核菌素试验,抽取人群均接受过卡介苗初种.结果 结核菌素试验结果分为阴性(-)、阳性(+)、中度阳性(++)和强阳性(+++).阴性率(-)3岁以后变化不大,0～3岁39.34%、3～7岁62.86%、8～14岁59.38%、>14岁41.6%.阳性率(+)3岁以后明显下降,0～3岁52.94%、3～7岁22.82%、8～14岁25%、>14岁25%.中度阳性率(++)随着年龄的增长而逐年增高,0～3岁7.72%、3～7岁10.7%、8～14岁15.63%、>14岁25%.强阳性(+++)随着年龄的增长而逐年增高,0～3岁0.11%、3～7岁3.34%、8～14岁12.5%、14岁后强阳性率明显增高为33.33%.结论 结核病的易感者主要集中于3～14岁,人体接种卡介苗后的特异性免疫力只维持5～10年.对3～14岁的儿童应加强结核病的监测.
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IL-22基因多态性与中国人群肺结核易感性的相关性研究
本研究旨在探讨白细胞介素22(interleukin 22,IL-22)基因多态性位点与肺结核易感性的关系.采用SNPscanTM多重单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分型技术,对453例肺结核患者(结核病组)和373例与患者长期密切接触者〔包括109例潜伏结核感染(latent tuberculosis infection,LTBI)者、264例健康对照者〕的 IL-22基因的4个SNP位点(rs1179249、rs2227491、rs17224704、rs2227478)多态性进行分析.结核病组、LTBI组和对照组中4个SNP位点的基因型分布经哈温平衡(Hardy-Weinberg equilibrium, HWE)检验均处于遗传平衡状态.结果显示,rs17224704位点存在AA、TA和TT基因型.>55岁人群中,此位点TA基因型在对照组中的分布显著高于结核病组(P= 0.0479,OR = 0.365,95% CI= 0.135~0.991);AA基因型在LTBI组中的分布显著低于结核病组(P=0.0276);TA基因型在LTBI组中的分布显著高于结核病组(P=0.00737,OR=0.213,95% CI=0.069~0.660).对照组和LTBI组的等位基因 T频率显著高于结核病组(P= 0.0269,OR= 0.388,95% CI= 0.167~0.897;P= 0.0250,OR = 0.322,95%CI=0.119~0.867).IL-22基因rs17224704的多态性可能与中国重庆地区汉族人群肺结核易感性显著相关,其等位基因T可能是肺结核的保护基因.
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针对潜伏结核感染的 A39 DNA 疫苗构建及其免疫原性研究
选取结核分枝杆菌潜伏相关抗原Rv2029c、结核分枝杆菌优秀抗原Ag85A和Rv3425，构建针对潜伏感染的结核分枝杆菌DNA疫苗pVAX1／Ag85A-Rv3425-Rv2029c （A39），并对其免疫原性进行研究。首先用聚合酶链反应（PCR）扩增Ag85A基因，构建重组质粒pVAX1／Ag85A （A）；PCR扩增 Ag85A-Rv3425连接片段，插入pVAX1载体，构建重组质粒pVAX1／Ag85A-Rv3425（A3）；PCR扩增Rv2029c基因，插入A3，构建重组质粒pVAX1／Ag85A-Rv3425-Rv2029c （A39）。将构建成功的重组质粒转入 HEK293T细胞，蛋白免疫印迹法验证质粒在真核细胞中得到表达。在大肠埃希菌BL21中成功表达和纯化去除信号肽的Ag85A、Rv3425和Rv2029c蛋白。用质粒免疫C57BL／6小鼠，共分为5组：PBS、pVAX1、A、A3和A39组，采用电脉冲导入免疫，每2周免疫1次，共3次，用酶联免疫斑点检测（ELISPOT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、流式细胞术等方法检测细胞免疫和体液免疫水平。结果显示，A39免疫小鼠后，能引发强烈的细胞免疫反应﹝γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素2（IL-2）高水平分泌﹞，外周血CD4＋／CD8＋ T细胞比值增加，CD8＋穿孔素＋ T细胞比例增加。结果表明，构建的A39 DNA疫苗能引发强烈的免疫反应，显示出良好的抗结核潜力，可作为结核分枝杆菌新型候选疫苗。
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结核分枝杆菌特异性效应T细胞斑点数鉴别儿童活动性结核病与潜伏结核感染的价值
目的 通过γ干扰素释放试验探讨结核分枝杆菌特异性效应T细胞斑点数(简称T细胞斑点数)鉴别儿童活动性结核病(TB)与潜伏结核感染(LTBI)的价值.方法 纳入T细胞斑点试验(T.SPOT.TB)阳性且未经过抗结核治疗的93例活动性TB(重症TB 27例,非重症TB 66例)和47例LTBI儿童,根据T.SPOT.TB结果对T细胞斑点数进行比较分析.结果 活动性TB组T细胞斑点数中位数84(6～710)显著高于LTBI组17(6～316),P=0.000;非重症TB患儿的T细胞斑点数中位数为99(6～710),显著高于重症TB的44(6～268),P=0.011,也显著高于LTBI组17(6～316),P=0.000;重症TB儿童T细胞斑点数中位数高于LTBI组儿童(44 vs 17),但差异无统计学意义(P=0.084),T细胞斑点数分布在活动性TB、重症TB、非重症TB和LTBI之间均有较大范围重叠.受试者工作特征曲线分析显示以T细胞斑点数43.5作为区分活动性TB与LTBI的佳界值,其敏感度与特异度分别为69.9%和70.2%.结论 T细胞斑点数在活动性TB尤其是非重症TB患儿显著高于LTBI儿童;T细胞斑点数的数量可反映体内的结核分枝杆菌负荷,但不能用于区分儿童活动性TB与LTBI.
关键词： 结核分枝杆菌特异性效应T细胞 儿童 活动性结核病 潜伏结核感染 γ干扰素释放试验 -
分枝杆菌噬菌体重组体TM4-RpfE的构建
目的·构建分枝杆菌噬菌体(TM4)与复苏促进因子(Rpf)的重组体(TM4-RpfE),为联合抗结核药物实现杀灭结核休眠菌、缩短结核化疗疗程奠定实验基础.方法·电转化法将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,制备重组工程菌;提取TM4基因组DNA;重叠PCR扩增目的融合基因hsp60-RpfE,多步重叠PCR扩增插入长片段HHRH (homologous+ hsp60-RpfE+ homologous);电转化法将噬菌体DNA与插入长片段HHR共同转入重组工程菌,挑取单噬菌斑进行PCR和测序验证;SDS-PAGE分析重组噬菌体的蛋白表达.结果·重叠PCR扩增出全长901 bp大小的目的融合基因hsp60-RpfE和1 873bp大小的插入长片段HHRH;PCR验证重组后的噬菌斑,分别在955bp和301 bp处出现特异性条带;SDS-PAGE分析显示重组型噬菌体在21 000处出现特异性蛋白条带.结论·分枝杆菌噬菌体重组体TM4-RpfE构建成功,初步验证目的基因RpfE得到表达.
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γ-干扰素释放试验诊断终末期肾脏病患者潜伏结核感染的荟萃分析
目的 评价γ-干扰素释放试验诊断终末期肾脏病患者潜伏结核感染的临床价值.方法 计算机检索PubMed、Web of Science、Cochrane图书馆、中文科技期刊全文数据库、中国期刊全文数据库及万方数字化期刊群,检索起止时间均为数据库建库至2014年7月,全面收集γ-干扰素释放试验诊断终末期肾脏病患者潜伏结核感染的研究.采用meta-Disc1.4软件进行荟萃(meta)分析,对其敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比等进行合并分析,并绘制汇总受试者工作特征(SROC)曲线.结果 终纳入10个研究,meta分析结果显示:以结核菌素皮肤试验(TST)为参考标准,QFT-G试验和T-SPOT试验的合并敏感性、合并特异性、合并阳性似然比、合并阴性似然比、合并诊断比值比及SROC曲线下面积分别为72％、70％、2.33、0.40、5.75、0.737 6和76％、66％、1.98、0.39、5.05、0.795 4.结论 γ-干扰素释放试验适用于进一步鉴别诊断终末期肾脏病患者是否处于潜伏结核感染,而不适用于该类患者结核菌感染的筛查.以上结果仍需要更多设计科学、合理的临床试验进一步证实.
