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获取母血中纯化胎儿有核红细胞行产前基因分析
目的探讨获取母血中纯化胎儿细胞的有效方法.方法对60名孕龄7～40周、年龄21～30岁的孕妇外周血进行不连续密度梯度离心,将分离后的细胞进行制片,显微镜下行显微操作分离胎儿有核红细胞,进行Y染色体特异性DYZ1 基因的聚合酶链反应(PCR).结果 (1)早孕期母血中胎儿NRBC检出率为20%,中孕期母血中胎儿NRBC检出率为71.4%,晚孕期母血中胎儿NRBC检出率为6.65%,三者之间有显著性差异(P<0.05);(2)用显微操作技术获得的胎儿细胞数量已满足PCR扩增所需的模板量,对胎儿性别进行预测,男胎符合率为11/13(84.6%),性别符合率为26/28(92.9%).结论不连续密度梯度离心合并显微操作技术对于无创性早期产前基因诊断意义重大.
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胎儿性别鉴定方法研究现状
迄今已发现的X连锁遗传病有200多种.包括X连锁隐性遗传病和X连锁显性遗传病.常见的X连锁隐性遗传病有血友病、红绿色盲、假肥大型肌营养不良(DMD),先天性丙种球蛋白缺乏症等.此类病的致病基因由携带者母亲传给儿子.携带者女性与健康男性所生的男孩一半发病,一半正常,而女孩表型一般正常,为预防患儿出生,可保留女胎,流产男胎.常见的X连锁显性遗传病有遗传性肾病、抗维素D佝偻病等.男性患者与健康女性结婚,儿子正常,女儿都患病,通过性别鉴定,可保留男胎,流产女胎[1].
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X连锁迟发性脊椎骨骺发育不良家系的早期产前基因诊断
目的 联合应用性别鉴定、连锁分析和致病基因检测三种方法对X连锁迟发性脊椎骨骺发育不良(spondyloepiphyseal dysplasia tarda,SEDL)家系进行产前基因诊断.方法 收集1个SEDL家系的7位成员(先证者、3名携带者及3名健康成员)外周血2 mL,抽取2位胎儿的羊水标本20 mL.用聚合酶链反应扩增2位胎儿的SRY基因和AMEL基因进行性别鉴定;应用PCR扩增产物双向直接测序方法检测SEDL基因突变;利用与SEDL基因毗邻的微卫星遗传标记DXS16进行连锁分析.结果 经SRY和AMEL基因性别鉴定2位胎儿均为男性,1位胎儿SEDL基因存在IVS2-2A→C突变,且具有与致病基因连锁的DXS16等位基因;另1名胎儿SEDL基因检测未发现上述突变,DXS16等位基因与呈野生型SEDL基因连锁.经随访,新生儿和引产胎儿的基因诊断结果与产前诊断一致.结论 SEDL基因突变检测结合微卫星DXS16多态性连锁分析和性别鉴定可以准确有效地进行X连锁迟发性脊椎骨骺发育不良家系的产前诊断.
关键词： X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良 产前诊断 性别鉴定 基因突变 连锁分析 -
中国人群Amelogenin基因的突变频率和突变类型
目的 调查Amelogenin基因在中国人群的突变频率和突变类型,评估其对性别鉴定的影响.方法 采用PowerPlex(R)16系统对8850名已知性别的中国无关个体进行Amelogenin基因内含子1区6 bp缺失的检测,统计分型异常的个体,采用Amelogenin基因其它引物体系和Y染色体短串联重复序列(Y short tandem repeats,Y-STR)基因座对突变样本进行验证并测序.结果 在男性群体中检出2例X染色体Amelogenin(AMELX)等位基因丢失的样本和2例Y染色体Amelogenin(AMELY)等位基因丢失的样本,总突变率为0.045%,男性群体中的突变率为0.085%.对丢失的AMELX等位基因测序,在其正向引物结合区检出2种点突变,推测因此产生无效等位基因,该类突变在男性群体中约为0.042%;AMELY等位基因丢失在男性群体中的突变率也为0.042%,其中1个样本在12个Y-STR基因座中有10个基因座扩增失败,推测在Y染色体上包括AMELY和Y-STR基因座在内的较大片段缺失.结论 Amelogenin基因突变会造成AMELX等位基因或AMELY等位基因丢失,将干扰性别鉴定,导致性别错判,在检验时值得注意.
关键词： Amelogenin基因 性别鉴定 突变 -
西安地区出土3000年前人牙齿DNA的提取及性别鉴定
目的 提取西安地区出土3000年前人牙齿中的DNA并进行性别鉴定,为后续的考古研究提供帮助.方法 选取西安地区出土的3000年前人牙齿35颗,应用逆向根管技术提取牙齿内部组织的DNA.设计釉原蛋白基因特异性引物,应用PCR技术进行样本的性别鉴定.结果 成功提取到30份3000年前的人基因组DNA,并对相应样本进行了性别鉴定,其中男性8例,女性22例.结论 逆向根管技术可用于古人类牙齿DNA的提取,基因学方法可补充体质人类学方法的不足,完善古代样本性别信息.
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孕妇血浆中胎儿DNA在产前诊断中的初步应用--胎儿SRY基因、STR基因型的鉴定
目的:利用孕妇血浆中游离胎儿DNA进行非创伤性产前基因诊断.方法:对65例5～41孕周孕妇血浆胎儿DNA进行SRY的PCR扩增,以检出男性胎儿DNA;同时采用短串联重复序列(STR)多态位点即CSFIPO、TPOX、THO1(CTT)三个位点的复合扩增方法对19例妊娠女性胎儿的孕妇血浆DNA进行扩增,以检出女性胎儿DNA.两种扩增均采用母体血浆直接作为模板进行.结果:SRY-PCR中,46例妊娠男性胎儿的孕妇中,有30例血浆中出现SRY基因扩增带,19例妊娠女性胎儿的孕妇血浆中仅1例孕中期者为假阳性(5.3%).本研究孕早、中、晚期的性别符合率分别为60%、84.09%、50%,总符合率为73.85%.CTT-PCR中,19例妊娠女胎孕妇血浆中有15例检出父源性等位基因即女性胎儿DNA.结论:应用孕妇血浆中胎儿DNA作产前诊断敏感性和特异性较高,尤其是在孕中期,它是一种非创伤性产前诊断方法,适用于临床.
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利用枕骨大孔形态学特征进行性别鉴定的研究进展
法医人类学主要任务就是个体识别,而性别鉴定是个体识别不可或缺的部分.目前针对性别鉴定已经有很多方法,如骨盆、颅骨等.但是在一些案件中,这些骨骼很难得到完好保存.枕骨大孔由于其独特的生理位置,而在破坏性案件现场能够很好保存.枕骨大孔的性别特征性已经得到诸多法医人类学家的研究,并取得一定成果.就枕骨大孔性别鉴定的成果作一综述.
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新生儿尿液快速聚合酶链式反应法性别鉴定
本文应用尿液聚合酶链式反应法(PCR)作新生儿快速性别鉴定.50例新生儿尿液PCR表明,男性(30例)均出现446bp的Y染色体特异性DNA扩增片段,女性(20例)则无.经电脑光盘检索,本研究尚属世界首报.
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男性个体Amelogenin基因座变异1例
1 案例资料1.1 简要案情2011年5月某日夜间,库某(男)被人用钝器致颅脑损伤而死亡.尸检见上肢有多处抵抗伤,提取中心现场床边墙壁上、院内摩托车驾驶尾灯上以及大门口地面上等多处血迹,并提取犯罪嫌疑人李某(男)血样一并送检,要求进行DNA鉴定.
关键词： 法医物证学 Amelogenin基因 性别鉴定 变异 -
Y染色体Amelogenin基因变异1例
性别鉴定是法医物证学的一项重要检验,准确的性别鉴定能给案件侦破提供非常有价值的侦查线索.目前应用DNA检验技术进行性别鉴定常用的是用一对X-Y同源引物,扩增Amelogenin片段,男性个体获得X染色体和Y染色体特异的2种产物片段,而女性仅有X染色体特异的1种产物片段,从而可以区分性别[1].对于现场检材,一旦确定性别即为个体识别提供了50%的否定率[2].但这种检验方法有时会因Amelogenin基因变异而出现误判,现报道1例.
关键词： 法医物证学 性别鉴定 Amelogenin基因 突变 -
焦磷酸测序分析短片段牙釉质蛋白基因进行性别鉴定
目的 采用焦磷酸测序技术分析短片段牙釉质蛋白基因进行性别鉴定并用于骨骼及腐败生物检材的检测.方法 应用blast软件,确定牙釉质蛋白基因(Amel)上1段含有3个SNP位点及1个插入/缺失(indel)位点的序列作为待测靶序列,设计引物,扩增该段序列,应用焦磷酸测序技术分析扩增序列,进行性别鉴定.对方法进行准确性、灵敏度、种属特异性的测试,并用于对骨骼和高度降解DNA的检测.结果 PCR产物分别为44bp( Amel X)和45bp( Amel Y),女性测序结果为:G/G,T/T,…/…,C/C,男性测序结果为:G/T,T/A,…/C,C/A,分型图谱清晰.应用本文方法检测100份已知性别的DNA样本,结果均正确无误,方法低DNA模板量为0.5ng,具有较好的人类种属特异性.用于高度降解DNA分析,较IdentifilerTM试剂盒具有更高的成功率且骨骼样本也得到清晰的分型结果.结论 本文采用焦磷酸测序技术分析Amel的方法在法医学性别鉴定中有较好的应用价值.
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用双色荧光原位杂交技术鉴定血痕性别
目的探讨荧光原位杂交技术在血痕性别鉴定中应用及其价值.方法对20例新鲜人血及20例1～2年人血痕的X、Y染色体采用双色荧光探针进行原位杂交分析.结果人新鲜血,男性X、Y信号检出的完整率为98.8%,其中Y信号的检出率为100%,女性X、X信号检出的完整率为96.5%;1～2年人血痕,男性X、Y信号检出的完整率为88%,其中Y信号的检出率为90%,女性X、X信号检出的完整率为80%;40例血液(痕)性别检测的符合率为100%.结论双色荧光原位杂交技术可以鉴定血痕性别.
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H-Y抗原的法医学应用前展
雄性特异性次要组织相容性抗原,简称H-Y抗原(male specific minor histompatibility antigen)是由Y染色体上的基因编码的一组次要组织相容性抗原,其与X染色体上的H-X抗原同源.H-Y抗原为一种雄性动物特有的物质,其在雄性个体中表达具有普遍性,分布无组织和器官特异性,其初是作为一种移植抗原被发现的.近年来很多文献报道了H-Y抗原的相关研究,作者主要综述H-Y抗原在性别控制和鉴定方面的研究,并在法医学应用方面的前景作出了一些展望.
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3个基因座的复合扩增及其在法医学性别鉴定中的应用
在实际检案中,对经常遇到的生物学检材进行SRY-DXZ1-AMEL基因座复合扩增,可避免AMEL单基因检测因男性46,XX变异者造成的性别误判.实际检案应用表明,该法适用于基层检案单位的法医学性别鉴定.现报道如下.
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中国新疆维吾尔族群体DYS389Ⅰ/Ⅱ、DYS390 基因座及单倍型遗传多态性分析
在法医检验实践中,Y染色体一直被用作性别鉴定.DYS390、DYS389 Ⅰ/Ⅱ基因座是Y染色体上分别以CTGT/CTAT为核心序列重复单位的微卫星.
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抗人SMCY抗原胶体金试纸条的研制
目的 建立一种快速检测SMCY抗原的方法.方法 采用胶体金免疫层析技术双抗体夹心检测法,在金标垫上包被胶体金标记的SMCY兔多抗,制成胶体金试纸条,用于检测12份猪、牛、狗、鸡和小鼠等动物血清以及50份人血清.结果 制作的胶体金试纸条检测人和常见动物血清具有明显的种属特异性,能够区分男女血清.结论 该方法可尝试用于鉴别男女血清,并具有一定种属特异性,其为法医学快速鉴别人类样本性别提供了研究方向.
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SMCY性别特异融合抗原的克隆表达及其抗体制备
目的 利用蛋白检测的快速性优势,研究不同性别在SMCY抗原氨基酸序列的差异,筛选出特异性氨基酸序列,并克隆表达性别特异融合抗原,制备相应抗体,建立一种快速鉴别法医物证性别的方法.方法 通过对人SMCY和SMCX进行序列分析,发现了三段差异片段,采用搭桥PCR方法获得差异片段全长基因,连接入pET-28a载体进行原核表达,用Ni柱纯化后的性别特异融合抗原免疫制备多克隆抗体,用ELISA法和western blot检测SMCY多抗与抗原的反应特异性,制作胶体金试纸条检测样本.结果 筛选出具有性别特异性的氨基酸序列,获得SMCY性别特异融合抗原,成功制备出多克隆抗体及胶体金试纸条.结论 获得SMCY性别特异融合抗原具有很好的抗原活性,制备的多克隆抗体可以与抗原特异性地结合,用于性别鉴定.
关键词： 法医物证学 性别鉴定 SMCY性别特异融合抗原 克隆和表达 多克隆抗体 -
性别鉴定中amelogenin基因座变异的研究进展
Amelogenin基因座变异，分为amelogenin引物结合区突变和包含amelogenin基因座的Y染色体微缺失两种类型，以后者为常见。Amelogenin引物结合区突变的发生机制是核苷酸点突变，包含amelogenin的Y染色体微缺失的发生机制可能是非等位同源重组或者非同源末端连接。在全世界人群中，位于印度次大陆地区的印度人群、斯里兰卡人群和尼泊尔人群amelogenin变异率非常高。 Amelogenin变异对生育能力和表型影响非常小，但在性别鉴定中会导致错误的性别鉴定结果。采用包含常染色体STR基因座、amelogenin基因座和多个Y-STR基因座的复合扩增试剂盒进行检测可有效避免因amelogenin变异导致的性别误判。
关键词： 法医遗传学 Amelogenin 综述 性别鉴定 变异 -
法医学中的性别鉴定
对用形态学、细胞学、性激素检测、 DNA重组技术和聚合酶链式反应（ PCR）等方法进行性别鉴定进行了概述，显示骨骼的性别鉴定以形态学方法为好；对能获得足够量基因组 DNA的人体组织，好用 PCR检测牙釉基因。而检测性染色质因阳性率较低，检测性激素仅适用于血痕检材， DNA分子杂交技术需要复杂的仪器及放射性同位素标记的探针，这些方法目前已较少应用。
