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CD44基因沉默对K562/A02细胞逆转耐药及生物学活性的研究
本研究旨在探讨CD44基因表达抑制对白血痛多药耐药细胞株K562/A02耐药性及生物学活性的影响.根据CD44基因表达序列设计有效的RNA干扰片段,将其插入质粒表达载体中,获得针对CD44 mRNA的特异性siRNA真核质粒(pGCsiRNA-CD44),转染K562/A02细胞.用实时荧光定量RT-PCR检测K562/A02细胞CD44、mdr-1和bcl-2 mRNA的表达;用MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞术(FACS)检测细胞周期;Hochest 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化.结果表明:针对CD44基因的siRNA真核质粒可有效沉默K562/A02细胞的CD44基因:与对照组相比,转染了4条pGCsiRNA-CD44质粒的K562/A02细胞CD44表达均明显受抑,以转染了siCD44-1的细胞中抑制强.转染pGCsiRNA-CD44质粒48小时后,K562/A02细胞CD44 mRNA表达水平下降64.1%(p<0.05),同时mdr-1与bcl-2 mRNA的表达量较对照组分别下降了25.6%与50.8%;K562/A02细胞IC50为(17.97±1.61)μg/ml,无义序列质粒转染后阿霉素对K562/A02细胞的IC50为(16.95±1.72)μg/ml,pGCsiRNA-CD44转染后IC50明显降低为(8.77±1.63)μg/ml(p<0.01).转染48小时后,G0/G1期细胞比例提高了10.7%;细胞出现核固缩、核边集、凋亡小体等改变.结论:特异性CD44 siRNA可显著抑制K562/A02细胞CD44基因的表达,抑制细胞增殖,诱导其凋亡.并有效逆转K562/A02细胞的多药耐药性.
关键词： CD44基因 基因沉默 K562/A02细胞 多药耐药 -
转移相关基因CD44V6表达与胃癌生物学行为的关系
CD44与肿瘤的关系是近年来较多关注的问题.CD44家族属粘附分子,作为主要的跨膜透明质酸体,可能是癌细胞获得浸润转移能力的决定因素之一[1].变异体CD44V6与人类恶性肿瘤的发生及转移密切相关[2,3].作者采用免疫组化技术对胃癌组织中CD44V6的表达进行检测,旨在探讨CD44V6在胃癌发生、淋巴结转移方面的临床意义.
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CD44及其在肿瘤研究中的进展
大量的研究表明,CD44及其异构体在肿瘤的发生和发展过程中起着重要的作用.本文综述CD44及其变异体在恶性肿瘤预后监测中的应用.
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CD44和YNZ22基因多态性与食管癌的相关性研究
目的 研究CD44和YNZ22、基因多态性与食管癌的关系.方法 应用PCR技术,对45例食管癌患者癌组织及癌旁组织进行CO44和YNZ22基因多态性分析.结果 癌组织中CO44蛋白呈高表达,明显高于癌旁组织,差异具有显著性(P＜0.01).对检出的YNZ22对应等位基因频率分布统计分析表明,食管癌患者癌组织与癌旁组织问无显著差异.结论 食管癌组织中CD44和YNZ22多态性改变与食管癌的易感性关系较密切.
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CD44基因上皮源性亚型与造血源性亚型mRNA表达之比值与人大肠癌进展转移的关系
目的:CD44分子是多种细胞表面的跨膜糖蛋白.有研究表明其变异型如含V6、V8～10外显子的变异型表达增加与大肠癌进展转移有关.进一步探讨大肠癌组织表达的上皮源性亚型与造血源性亚型之比(E/H)与肿瘤转移等临床资料间的关系.方法:应用逆转录、多聚酶链反应和Southern杂交技术、检测26例大肠癌患者癌组织和正常大肠粘膜组织CD44mRNA表达,以上皮源性亚型与造血源性亚型之比(E/H)定量.结果:E/H值癌组织明显高于相应正常粘膜组织,但未发现与肿瘤转移、浸润深度等临床资料有关.结论:CD44上皮源性亚型mRNA在大肠癌组织中表达明显增高,E/H值与大肠肿瘤进展转移无明显相关性.上皮源性亚型在肿瘤进展转移中的作用有待深入研究.
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粘附分子CD44v6在乳腺癌组织表达的研究
目的:探讨CD44v6基因在不同乳腺组织的表达及其与乳腺癌淋巴结转移的关系.方法:采用免疫组化S-P法对113例不同乳腺组织进行CD44v6表达的研究.结果:CD44v6阳性表达率在乳腺癌组织(96.7%)明显高于乳腺良性肿瘤(50.0%)和正常乳腺组织(13.3%)(P＜0.01);CD44v6表达强阳性在淋巴结转移组(92.5%)明显高于无淋巴结转移组(30.0%)(P＜0.05),但淋巴结转移灶(22.2%)明显低于原发癌灶(100%)(P＜0.05).结论:CD44v6基因高表达可作为判断乳腺癌具有转移倾向的临床参考指标.乳腺癌细胞CD44v6表达量增高可能是转移发生之前的事件.
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乳腺癌原发灶与转移灶CD44v6表达的对比研究
CD44v6是含有ExonⅡ的CD44蛋白变异体,其相对分子量为190kD.近年来的研究表明,CD44v6在多种肿瘤的发生、发展中,尤其是在转移过程中起重要作用,它在胃癌、结肠癌和直肠癌中的过度表达与肿瘤的分化、转移及预后密切相关[1,2].为进一步了解CD44v6基因在乳腺癌组织中的表达,探讨其在乳腺癌转移中的作用,我们采用RT-PCR方法,对30例乳腺癌原发灶和转移灶CD44v6基因的表达进行对比研究.
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CD44v6基因在甲状腺乳头状癌的表达及其临床意义
目的:探讨CD44v6基因在甲状腺乳头状癌的表达及其与临床病理指标的关系.方法:采用免疫组化S-P法检测了201例甲状腺乳头状癌、30例甲状腺良性肿瘤及30例正常甲状腺组织中CD44v6的表达情况.结果:(1)CD44v6在甲状腺乳头状癌的表达阳性率为71.1%,明显高于两对照组(P均＜0.01).(2)在甲状腺乳头状癌中,CD44v6在I型、Ⅱ型、Ⅲ型及包膜内型、包膜外型、腺外型之间的表达均有明显统计学差异.(3)有转移组CD44v6的阳性率为79.3%,明显高于无转移组(58.5%),其蛋白表达与颈淋巴结转移呈正相关.CD44v6阳性表达的患者发生颈淋巴结转移的可能性大.结论:CD44v6的表达与甲状腺乳头状癌的发生发展、浸润和颈淋巴结转移密切相关,检测CD44v6可以作为预测甲状腺乳头状癌颈淋巴转移潜能的有价值的参考指标.
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粘附分子CD44在膀胱癌中的表达
目的:探讨粘附分子CD44在膀胱移行细胞癌中的表达形式.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Southern印渍杂交方法,检测CD44基因在25例膀胱癌和15例非癌膀胱粘膜组织中的表达.结果:全部膀胱癌和非癌膀胱粘膜组织均表达482bp的标准型CD44,但84%的膀胱癌组织中同时表达复杂的CD44V异构体,其中16例(64%)表达约650 bp的带型,13例(52%)表达约1250 bp的带型,14例(56%)表达约1600 bp的带型,7例(28%)表达约720 bp的带型.此外,在1例膀胱癌组织中检测到大于2000 bp的带型.CD44V在膀胱癌组织中的表达随着分化程度的不良而降低,差别有显著性.结论:多数膀胱癌组织中存在变异型CD44V,表达形式复杂多样.CD44V的表达可能在膀胱癌进展中起作用.
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子宫内膜癌组织中CD44基因外显子v6的检测及临床意义
目的探讨子宫内膜癌组织中CD44基因外显子v6mRNA的异常表达及临床意义.方法采用RT-PCR法检测31例子宫内膜癌组织,10例子宫内膜不典型增生组织,10例正常子宫内膜组织中CD44基因外显子v6 mRNA的表达情况.结果正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生组织及子宫内膜癌组织中都有CD44外显子v6 mRNA表达,其表达率和相对含量依次递增,三组间有极显著差异(P<0.001).在子宫内膜癌组仅在深肌层浸润时外显子v6相对含量显著上升(P<0.05),CD44外显子v6 mRNA的异常表达与子宫内膜癌的其它临床-病理特征无关(P>0.05).结论 CD44基因外显子v6 mRNA异常表达与子宫内膜癌的早期发生和局部浸润有关.
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CD44和nm23的联合表达与非小细胞肺癌预后关系的研究
目的:探讨CD44和nm23在非小细胞肺癌组织中的联合表达及与预后的关系.方法:免疫组织化学S-P法检测86例手术切除的非小细胞肺癌组织中CD44和nm23的表达,分析其与术后生存期的关系.结果:CD44高表达率和nm23低表达率分别为47.7%(41/86)和54.7%(47/86).CD44高表达且nm23低表达与非小细胞肺癌预后较差密切相关(P<0.05).结论:CD44与nm23联合检测对判断非小细胞肺癌的预后有一定意义.
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CD44基因内含子9mRNA在子宫内膜癌中的表达及意义
目的: 探讨子宫内膜癌组织中CD44基因内含子9mRNA的表达情况及临床意义.方法:采用RT-PCR法检测31例子宫内膜癌组织,10例子宫内膜不典型增生组织,10例正常子宫内膜组织中CD44基因内含子9mRNA的表达情况.结果:正常子宫内膜组织中无CD44内含子9mRNA的表达,子宫内膜癌与子宫内膜不典型增生组织中有CD44内含子9mRNA表达;二者表达率分别为83.87%和70.00%,差异无显著性(P>0.05),相对含量分别为85.26±5.40和79.74±4.23,差异有显著性(P<0.05);在子宫内膜癌中CD44内含子9mRNA的表达情况与其临床病理特征无关(P>0.05).结论:CD44基因内含子9表达与子宫内膜癌的早期发生有关.
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CD44基因多态性与乳腺癌对蒽环类药物化疗敏感性的关系
目的:研究CD44基因rs4756195位点不同基因型乳腺癌患者对蒽环类药物化疗敏感性的差异,阐明CD44基因多态性与乳腺癌对葸环类药物化疗敏感性的关系.方法:利用Sequenom MassArray(R) iPLEX GOLD 系统检测120例接受以蒽环类药物为基础的新辅助化疗的乳腺癌患者CD44基因rs4756195位点多态性,2～3个治疗周期后,以非条件Logistic回归模型比较携带不同基因型的乳腺癌患者之间化疗总有效率和病理完全缓解率的差异.结果:携带GG基因型与携带AA和AG基因型的乳腺癌患者术前新辅助化疗总有效率差异无统计学意义(73.6％vs 69.0％,x2=0.240,P=0.625)；携带AA和AG基因型的乳腺癌患者的病理完全缓解率明显高于携带GG基因型的乳腺癌患者(55.2％vs 16.5％,x2=17.181,P=0.000；OR=13.935,95％CI=4.359～44.541,P=0.000).结论:CD44基因rs4756195位点多态性与乳腺癌对蒽环类药物的化疗敏感性有关联,携带AA和AG基因型的乳腺癌患者有较高的病理完全缓解率,提示CD44基因rs4756195位点多态性可能成为预测乳腺癌化疗疗效的指标之一.
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CD44和CYP2E1基因多态性与食管癌的相关性研究
背景与目的:食管癌是一种常见的恶性肿瘤,由于侵袭转移,手术后存活率低,而CD44和CYP2E1就是和侵袭转移相关的基因,因此我们研究了CD44和CYP2E1基因多态性与食管癌的关系.方法:应用PCR及Western blot技术等方法对45例食管癌患者癌组织及癌旁组织进行CD44表达分析和CYP2E1基因多态性分析.结果:癌组织中CD44蛋白呈高表达,明显高于癌旁组织,差异具有显著性(P＜0.01).CYP2E1三种基因型中,C1C1、C1C2基因型的表达明显高于C2C2,差异具有显著性(P＜0.05).结论:食管癌组织中CD44和CYP2E1多态性改变与食管癌的易感性关系较密切.
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单纯检测外周血CD44v6不宜作为筛选肿瘤转移的标志物
目的通过检测CD44v6剪接体在正常人外周血的表达情况,进而评价其作为肿瘤转移分子标志物的价值.方法提取50例健康志愿者的外周血单个核细胞,应用RT-PCR的办法检测CD44v6基因的表达,并对其产物进行DNA测序.结果在适当的对照控制条件下,50例外周血中有29例(58%)CD44v6 mRNA阳性.结论在普通人群外周血样本中应用RT-PCR的方法CD44v6检出率较高,因此单纯检测CD44v6不适宜作为筛选肿瘤转移的分子标记物.
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CD44V6在子宫内膜癌诊断中的进展研究
近年来,CD44基因的研究引起了学者们的高度重视,CD44分子不但在卵巢功能及细胞与细胞间质相互黏附中起作用,而且在肿瘤的生长和转移中起着重要作用.
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CD44在肿瘤细胞上皮-间充质转化及其侵袭过程中的作用
目的 探讨CD44基因对人卵巢上皮性癌(EOC)细胞上皮-间充质转化和转移能力的影响及其机制.方法 培养EOC细胞SK-OV3,取对数生长期细胞用于实验.采用基因共转染法,将细胞设为两组,CD44组用PEF CD44质粒和PSV2neo共转染(作用48、72 h),阴性对照组用PEF和PSV2neo共转染.采用划痕实验观察细胞迁移能力,倒置显微镜观察细胞形态,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Snail、Slug mRNA表达水平,Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平.结果 划痕24、48 h时,CD44组剩余划痕面积分别为(0.37±0.08)％和(0.16±0.03)％,均显著小于对照组的(0.58±0.13)％和(0.49±0.11)％,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,CD44组转染SK-OV3细胞72 h后,细胞由上皮形态转变为间质形态,即细胞由立方形或椭圆形转变为纺锤形或多角形,且细胞间连接松散.CD44作用于SK-OV3细胞48 h后,可显著上调Snail、Slug mRNA表达水平,Snail、Slug mRNA的相对表达量为1.573±0.126和2.218±0.252,均显著高于对照组的1.024±0.079和0.915±0.057,差异有统计学意义(P＜0.05);CD44转染于SK-OV3细胞72 h,E-cadherin蛋白表达水平较对照组明显减少[(0.40±0.02) ng/L],与对照组比较[(0.80±0.05) ng/L],差异有统计学意义(P＜0.05);CD44转染于SK-OV3细胞72 h可使间质细胞标志物N-cadherin与Vimentin蛋白表达水平显著增高[(1.08±0.06) ng/L和(1.26 ±0.08) ng/L],与对照组比较[(0.51±0.03) ng/L和(0.61 ±0.03) ng/L],差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CD44可通过抑制E-cadherin蛋白的表达,诱导EOC细胞发生上皮-间充质转化,进而增强EOC细胞的转移能力.
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CD44V3基因蛋白在胃癌中的表达及意义
细胞粘附分子CD44是一种细胞表面跨膜糖蛋白，为了解CD44V3表达与胃癌之间的关系，本文采用免疫组化S-P染色方法，研究了CD44V3在胃癌组织的表达情况，并探讨其临床病理意义。1 材料和方法1.1 临床资料 收集我科1996～1998年收检的进展期胃癌病理标本62例，其中男性43例，女性19例；年龄41～68岁，平均年龄58岁。按照Lauren分型法分为肠型 胃癌37例，弥漫型胃癌25例；淋巴结转移组28例，无淋巴结转移组34例。原发瘤≥5cm者21例，原发瘤＜5cm者41例。1.2 方法 用S-P免疫组化染色，按试剂盒说明操作。鼠抗人CD44V3单克隆抗体为美国R&D公司产品，S-P试剂盒为ZYMED公司产品，均购自北京中山生物工程公司。
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CD44基因多态性对原发性肝癌细胞局部T细胞亚群浸润的影响
目的 探讨CD44基因多态性对原发性肝癌细胞局部T细胞亚群浸润的影响.方法 前瞻性收集2017年1月-2017年12月吉林大学第一医院收治的原发性肝癌患者109例,根据CD44基因rs4756195位点单核苷酸多态性,将患者分为AA组、AG组和GG组,观察3组患者局部组织T细胞亚群浸润情况.采用流式细胞术检测CD4+T、CD8+T、Treg及Th17细胞,免疫组织化学法检测白介素-2(IL-2)、IL-10肿瘤生长因子-β(TGF-β)和IL-17的阳性表达,聚合酶链反应检测CD44基因rs4756195位点单核苷酸多态性.结果 AA组、AG组、GG组CD4+T细胞分别为(21.08±2.12)%、(19.43±1.98)%、(19.12±2.09)%,差异有统计学意义(P<0.05);CD8+T细胞分别为(28.83±2.52)%、(25.52±2.71)%、(24.91±2.29)%,差异有统计学意义(P<0.05);调节性T细胞分别为(6.12±1.47)%、(8.12±1.71)%、(8.24±1.92)%,差异有统计学意义(P<0.05);IL-2阳性表达率分别为82.09%、47.83%、68.42%,差异有统计学意义(P<0.05);IL-10阳性表达率分别为46.27%、69.57%、73.68%,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β 阳性表达率分别为41.79%、77.27%、78.95%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 原发性肝癌患者CD44基因rs4756195位点呈多态性分布,与肝癌组织中的免疫抑制有关.
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CD44与胃癌的侵袭和转移
CD44基因及其产物CD44蛋白在胃癌的发生、发展、转移和预后中起一定作用,CD44V可作为一项预测胃癌转移潜能的生物学指标.检测血清CD44蛋白浓度对指导术后综合治疗有一定意义.
