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加强基因型分析发展个体化医学
疾病的诊断,从表型(phenotype)分析发展到表型和基因型( genotype)结合分析代表着医学的革命性进步。临床分子病理学,或称分子诊断,已成为当今迅猛兴起的病理亚学科之一。它从核酸水平(DNA和RNA)研究疾病发生和发展规律,揭示疾病时外源性基因在体内的存在和内源性基因的突变及表达异常,是传统形态病理学的有益补充和发展。
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HBV-DNA荧光定量检测的临床意义
HBV的临床检测从免疫学方法到分子生物学方法是一个重大进步,分子生物学检测经历了早期的PCR凝胶电泳法、半定量法到现在的各种完全定量法.HBVDNA定量检测方法的出现从根本上突破了免疫学方法的间接检测的局限性,通过直接检测病毒的核酸水平真实地反映病毒的情况,从而对于HBV的准确诊断、有效治疗、精确预后及新药研制等各个方面具有重大意义.
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肝移植术后外周血巨细胞病毒核酸水平与T细胞亚群变化的关系
人巨细胞病毒(HCMV)感染是移植术后的常见并发症,且治疗效果差,死亡率高[1].本研究用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对肝移植术后HCMV感染进行检测,并对肝移植术后非HCMV感染和HCMV感染受者外周血T淋巴细胞亚群进行监测,了解机体免疫功能状态,指导临床治疗.
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大鼠肠巨噬细胞TNFα表达及复方大承气汤的影响
目的:探讨体外培养的肠巨噬细胞分泌TNFα的规律及地塞米松、TNFα单克隆抗体及复方大承气汤对LPS诱导的肠巨噬细胞TNFα产生的影响.方法:体外分离培养大鼠肠巨噬细胞.设对照组、脂多糖组、地塞米松处理组、TNFα单抗处理组和复方大承气汤处理组.每组分别在3 h,6 h,12 h和24 h取上清液,用放免法检测TNFα浓度.并分别收集肠巨噬细胞,提取RNA,采用RT-PCR法相对定量TNFαmRNA.结果:肠巨噬细胞经脂多糖(LPS)诱导后,各时相TNFα分泌及TNFmRNA表达均明显增加;地塞米松、TNFα单克隆抗体及复方大承气汤处理后,各时相TNFα分泌都较脂多糖(LPS)诱导组显著下降,各处理组TNFα mRNA表达在3h时与脂多糖(LPS)诱导组比较无明显差异,6h、12h、24 h,地塞米松、复方大承气汤处理组显著降低,而TNFα单克隆抗体处理组无明显差异.结论:LPS是肠巨噬细胞分泌TNFα的有效激活剂,地塞米松、复方大承气汤能从蛋白质及核酸水平抑制TNFα的产生,而TNFα单克隆抗体只能从蛋白质水平抑制TNFα的产生.
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两个大肠癌负相关新基因的研究
目的在分子水平寻找与人大肠癌的发生发展相关的新的因素,研究两个大肠癌负相关基因的结构与功能.结果已完成两个新基因的全长cDNA序列分析及染色体定位等结构研究,并进行了两基因的核酸与蛋白表达研究及功能研究.SNC6基因全长3168pb,定位于染色体22q13区带,共有12个外显子及11个内含子.SNC19全长3152bp,定位于染色体11q24区带.两个基因于1998年被国际命名委员会分别命名为ST13、ST14基因,并被列入人类基因组图谱中.对比二个新基因在正常大肠粘膜及癌组织核酸水平表达情况,癌组织低于正常粘膜,在不同肿瘤细胞系及组织中表达不一.两基因均已获得了表达蛋白.ST13已制备了单抗,经免疫组化检测表达与核酸表达结果相似,经体内外研究ST13基因有抑制大肠癌细胞系生长的作用.ST14已明确为丝氨酸蛋白酶家族成员.结论SNC6与SNC19基因可作为新的大肠癌相关基因加以研究,利用.目前仍需继续深入研究该两基因的功能.
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显微捕获分离技术在分子生物学和蛋白质研究中的应用
在科研工作中,选择各种细胞进行核酸水平和蛋白质水平的实验是为常见的工作.一般说来,细胞来源多为体外培养细胞或直接从组织中获取的细胞.培养细胞一般为单一种类的细胞,与对照组有很好的对比性,用于分子生物学实验或蛋白质研究是很好的研究材料.但长期的研究发现,细胞表型受到周围微环境,特别是周围细胞的细胞相互作用的影响,培养细胞可能因微环境改变或失去周围细胞的相互作用而使基因表型发生改变.
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肥胖基因与肥胖
正当肥胖不仅在西方国家而且也在发展中国家广泛流行之际,90年代的一个重大科学成果是:人们认识了脂肪细胞分泌的一种激素--Leptin(源自Lepto,意为“细小”、“瘦的”),故命名为“瘦蛋白”。它是肥胖基因(ob基因)的表达产物,在调节机体能量平衡及脂肪贮存方面起到重要作用。1 ob基因的结构1994年,Zhang等[1]首次从先天性肥胖C57Bl/6J ob/ob小鼠第6染色体上发现ob基因,并将其克隆。克隆的ob基因全长2.9kb,其开放读框为501 bp,编码脂肪组织特异性4.5kbmRNA,3′非编译区长达3.7kb,翻译成167个氨基酸的蛋白质。Clement[2]将人类ob基因定位于7q31.3,由3个外显子和2个内含子组成,编码167个氨基酸,内含子长度为2.9kb。外显子与内含子的组织形式人鼠间高度保守。人ob基因5′端含(TG)6CATATTT(GT)19的双核苷酸重复TATA盒样序列和顺式作用调节元件(包括3个拷贝GC盒,一个AP-2结合点及CCAAT/增强子结合蛋白质结合位点)。直接测序分析证明:大鼠的ob基因与小鼠的ob基因具有96%同源性(核酸水平及蛋白质水平);与人的ob基因相比,其同源性分别为84%(核酸水平)和82%(蛋白质水平)。
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细胞因子与慢性肾脏病的生物治疗
随着分子生物学、免疫学的迅猛发展,人们对慢性肾脏病治疗的认识发生了深刻变化.众多的研究已认识到细胞因子在肾脏病进展中起着重要的角色.运用生物治疗手段,从蛋白及核酸水平调节细胞因子表达,开辟慢性肾脏病治疗的新途径,无疑具有十分重要的理论和临床意义.本文就慢性肾脏病相关的细胞因子及其生物治疗综述如下.
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FXⅢA凝血因子蛋白与核酸水平遗传多态性研究
FXⅢA可在蛋白水平上应用于法医物证检验[1,2],它的A亚基基因座作为一个STR位点相当普遍地应用于DNA水平的法医物证检验中,是法医学中的一个特例.为此,我们首次对北京汉族人群的FXⅢA,从蛋白水平和DNA水平分别研究其遗传多态性,并获得了群体遗传学数据.