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利用定量蛋白组学对脓毒症外周血单个核细胞差异蛋白的研究
目的 探讨基于数据非依赖性采集高分辨率色谱-质谱技术(data independent acquisition liquid chromatography-mass spectrometry,DIA LC-MS)对于脓毒症外周血差异蛋白研究的可行性.方法 采用前瞻性研究,纳入2016年4月至2016年7月复旦大学附属上海市第五人民医院重症监护室(ICU)收治的10例脓毒症以及10例同时期入住ICU年龄性别相仿的术后未并发脓毒症的患者(疾病对照组).采用新的数据非依赖性采集技术(data independent acquisition,DIA)联合skyline数据提取软件对10例脓毒症和10例对照组的外周血单个核细胞的蛋白进行研究分析,所得的数据分别采用主成分分析法(principal component analysis,PCA)、偏小二乘法-判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)和正交偏小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)进行模式识别分析,确定外周血单个核细胞的差异蛋白,进行通路分析以及GO分析.根据PLS-DA模型变量的重要性投影(variable importance in the projection,VIP值)初步筛选可能的蛋白标志物,并对贡献大(VIP>1,P<0.05)的3个蛋白进行ELISA验证和ROC曲线的分析.结果 总共鉴定到了1062个碎片离子加和得到119个差异蛋白,其中31个蛋白上调,88个蛋白下调.通过通路分析发现与碳代谢,血小板激活,细菌侵袭上皮,补体凝血瀑布激活有关.其中高迁移率蛋白1(HMGB-1),中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL),基质金属蛋白酶8(MMP-8)用ELISA验证在脓毒症与疾病对照组的外周血单个核细胞表达中差异有统计学意义(P<0.01).ROC曲线下面积均大于0.85,有较好的敏感度和特异度.结论 利用DIA-MS技术对脓毒症外周血单个核细胞进行研究检测,PLS-DA、OPLS-DA、PCA模式识别均能用于蛋白组学数据的分析,初步筛选HMGB-1、NGAL、MMP-8是值得进一步研究的脓毒症外周血单个核细胞候选生物标志物.
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巨噬细胞亚群与肝病研究进展
巨噬细胞在肝脏的炎症免疫、损伤修复、纤维化和肿瘤的发生发展中都有非常重要的作用.肝脏在不同疾病状态下所形成的特有的微环境直接影响巨噬细胞的表型和功能,而巨噬细胞的表型和功能也直接参与肝脏疾病的进程和预后.本文就巨噬细胞的表型转换及其在多种肝病如脂肪肝、肝硬化和肝癌等发生发展中的作用和意义进行综述.
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慢性充血性心力衰竭患者新型趋化因子循环Fractalkine及其受体CX3CR1水平研究
目的：观察慢性充血性心力衰竭（CHF）患者新型趋化因子循环Fractalkine及其受体C3CXR1水平变化情况。
方法：选取CHF患者（CHF组）55例和同期我院门诊健康体检者25例为正常对照组。患者入院即刻抽取静脉血，酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清可溶性Fractalkine水平,流式细胞仪检测外周血单核细胞受体CX3CR1水平的表达；并对血清可溶性Fractalkine的水平与N末端B型利钠肽原（NT-proBNP）水平进行相关性分析。
结果：CHF组血清可溶性Fractalkine水平明显高于正常对照组（P=0.004），纽约心功能分级（NYHY）Ⅲ、Ⅳ级者明显高于Ⅱ级者；CHF组循环单个核细胞CX3CR1的表达水平较正常对照组(14.7±8.1)明显增高（P<0.05），并且随着NYHY程度加重，表达水平亦明显增高[NYHAⅡ级者为25.1±12.4，与正常对照组比（P=0.03）；Ⅲ级者为37.3±11.0，与NYHAⅡ级者比（P=0.04）；Ⅳ级者为41.7±11.1，与NYHAⅡ级者比（P=0.009），差异均有统计学意义]。血清可溶性Fractalkine的水平与NT-proBNP水平呈正相关（r=0.364，P<0.01）。
结论：循环Fractalkine及其受体CX3CR1可能参与了慢性充血性心力衰竭患者炎症免疫发病过程。关键词： Fractalkine 慢性充血性心力衰竭 炎症免疫 -
炎症免疫与前列腺增生进展有关吗?
良性前列腺增生(benign prostate hyperplasia,BPH)是引起老年男性下尿路症状的常见原因,是一种渐进性的病理过程.在51～60岁的男性中,组织性BPH发生率是41%,61～70岁占70%,81～90岁达90%[1-2].
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动脉粥样硬化动物模型构建的方法与现状
背景：通过动脉粥样硬化动物模型深入了解动脉粥样硬化发病机制和发生发展过程，对动脉粥样硬化的临床诊断和防治都具有重大意义。目的：归纳和总结动脉粥样硬化建模方法及研究思路，揭示动脉粥样硬化动物模型建立的现状和进展，比较各种建模方法的优缺点，为临床研究提供借鉴意义。方法：应用计算机检索中国生物医学文献数据库、维普中文科技期刊数据库、万方中文数据库和PubMed数据库，检索时间为1990年1月至2014年12月，以“动物模型；动脉粥样硬化”和“animal model；atherosclerosis；progression”为检索词，语言分别设定为中文和英文。按纳入和排除标准对文献进行筛选。分别以动脉粥样硬化建模方法、方法的改进以及各自方法的优缺点等几方面出发进行归纳和总结。结果与结论：共收集137篇相关文献，排除发表时间较早、重复及类似研究的文献93篇，共纳入44篇符合标准的文献。结果表明，高脂饲料喂养法建立的模型以脂质沉积为主要特征，操作性强，也较常被采用，但其造模时间较长，且形成的斑块位置不固定，从而人们在此基础上进行改进，免疫法、神经及机械损伤法、血流动力改变法、基因工程法等建立动脉粥样硬化动物模型的方法应运而生，这些方法都能加速模型的建立，也各有优缺点，它们与人类自发型的动脉粥样硬化存在一定差异，在研究动脉粥样硬化并发症时，部分结扎颈动脉法发挥了不可替代的作用；球囊损伤法形成的斑块位置确切，便于研究者实施各种干预措施后观察斑块的变化；免疫法建立的模型可为研究疫苗预防动脉粥样硬化提供线索，因此人们可根据自己的需要选择比较合适的造模方法。
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泛素-蛋白酶体抑制剂的研究及应用进展
泛素( ubiquitin,Ub)是一个由76个氨基酸残基组成的高度保守的蛋白质,属于热休克蛋白基因家族,它是一种非常小的球形蛋白,主要作用是以多聚泛素链与底物蛋白结合,从而标记降解蛋白.泛素-蛋白酶体途径(UPP)是生物体内蛋白质选择性降解的重要途径之一.近研究发现,UPP广泛参与细胞凋亡、主要组织相容性复合物(MHC) -Ⅰ类抗原的递呈、细胞周期以及细胞内信号传导等多种生理过程[1].蛋白酶体是UPP的重要组成部分,对于维持细胞功能至关重要.其抑制剂通过干扰蛋白酶体活性抑制肿瘤细胞生长,故有可能成为抗肿瘤的先导药物[2].同时,蛋白酶体抑制剂改变蛋白酶体的酶切位点活性也是免疫、炎症等研究领域的热点.
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阿托伐他汀对急性冠脉综合征患者循环中f ractalkine表达的影响
目的：观察阿托伐他汀对急性冠脉综合征患者循环中可溶性fractalkine表达的影响。方法：选择经冠脉造影证实的急性冠脉综合征（ACS）患者40例，其中急性心肌梗死（AMI）20例（AMI组）、不稳定心绞痛（UAP）20例（UAP组）。另选择20例冠脉造影阴性的高脂血症患者作为对照组。3组均给予阿托伐他汀（20 mg／次，1次／d）治疗3个月。用ELISA法检测治疗前后肘静脉血fractalkine水平；流式细胞技术检测肘静脉血CD14＋单核细胞（PBMC）中CX3CR1表达。结果：入院时，AMI组[（1047．0±348．9） pg／mL]和UAP组[（777．2±324．4） pg／mL]循环中 fractalkine水平显著高于对照组[（485．1±260．9） pg／mL ，P＜20．001、P＝0．004）]；AMI组（38．8±15．4）％和UAP组（29．2±11．9）％循环中CD14＋单核细胞CX3CR1表达率显著高于对照组[（15．2 ± 7．9）％，P＝0．009、P＝0．03]。阿托伐他汀治疗3个月后，A M I组[（740．1±269．9） pg／m L ]和U A P组[（523．8±188．5） pg／mL] fractalkine水平较治疗前显著下降（P＝0．005、P＝0．01）。结论：阿托伐他汀可明显降低急性冠脉综合征患者循环中fractalkine的表达，进而发挥抗动脉粥样硬化炎症免疫效应。
关键词： 急性冠脉综合征 阿托伐他汀 f ractalkine 炎症免疫 -
不同单核细胞亚群来源树突状细胞的特性及其在肿瘤免疫治疗中的作用
树突状细胞由多种表型特征及生物学功能特性不同的亚群组成,单核细胞源性树突状细胞是其中的重要组成群体.近年来研究表明,人体内外周血单核细胞由CD14++CD16-和CD14+CD16+两个群体组成,小鼠体内则由CD115+Ly6Chigh和CD115+Ly6Clow组成;不同亚群单核细胞可发育分化成为具有不同表型特征的树突状细胞,在体内外诱导产生不同类型的免疫应答反应.小鼠体内CD115+Ly6Clow群体是机体稳定状态下外周组织器官树突状细胞的重要前体细胞, CD115+Ly6Chigh单核细胞是炎症状态下外周淋巴器官中树突状细胞的重要来源.CD115+Ly6Chigh来源的树突状细胞,一方面可以直接提呈外周摄取的抗原,另一方面还可将MHC-Ⅰ/抗原肽复合物传递给淋巴组织中原住性树突状细胞.不同来源树突状细胞间的协同和交互作用确保机体诱发针对不同外源抗原刺激的有效免疫应答.
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中医证候上火与生物标志物之间的相关性
[目的]阐明中医证候"上火"及引起"上火"的生物标志物之间的相关性.[方法]通过整理和总结"上火"与炎症免疫、氧化应激、能量和脂质代谢、调节中枢神经递质以及菌群的文献,并通过文献中差异性分析找到引起"上火"的生物标志物,探讨这些生物标志物与中医证候"上火"之间的相关性.[结果]上火是以"炎症因子-氧化应激因子-能量相关因子"为主要指标,炎症因子主要表现为白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)等的释放与合成.氧化应激因子主要包括活性氧(reactive oxtgen species,ROS)、4-羟基壬烯酸(4-hydroxynonenal,4-HNE)、 乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、 谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)、超氧化物歧化酶3(superoxide dismutase 3,SOD3)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)等;能量相关因子主要是腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)和腺苷三磷酸(adenosine triphophate,ATP),能量代谢相关的变化主要集中在糖酵解、三羧酸循环、脂质代谢,并且这些指标同时受中枢神经系统(集中于神经递质)和菌群的影响.[结论]"上火"影响的生物标志物集中于炎症因子、氧化应激因子和能量相关因子,这为下一步找到临床可检测的生物标志物奠定了基础.
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血管紧张素Ⅱ及其受体与类风湿关节炎
血管紧张素Ⅱ及其受体是心血管疾病的重要治疗靶点,血管紧张素Ⅱ以自分泌或旁分泌的形式与1型受体(AT1R)作用,通过刺激单核细胞趋化移行、促进T淋巴细胞活化增殖、增强Th1和Th17免疫功能、抑制关节滑膜细胞凋亡,促进了类风湿关节炎( RA)患者体内的炎症免疫损伤。血管紧张素转化酶抑制剂(ACEIs)和AT1R阻断剂分别通过限制血管紧张素Ⅱ的产生和阻断血管紧张素Ⅱ与AT1R的相互作用,进而缓解RA体内的炎症免疫反应。另外,RA及其实验动物模型体内血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)表达增高,激动AT2R可以发挥缓解佐剂性关节炎( AIA)大鼠炎症免疫反应的作用。该文就近年来血管紧张素Ⅱ及其受体在RA中致病机制和治疗作用的研究进展进行综述。
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输尿管软镜联合经皮肾镜对肾结石患者炎症免疫指标及相关因子水平的影响
目的:探究输尿管软镜联合经皮肾镜对肾结石患者炎症免疫指标及相关因子水平的影响.方法:选取我院泌尿外科收治的97例肾结石患者,依据治疗方法分为对照组48例与观察组49例,对照组实施经皮肾镜碎石取石术进行治疗,观察组在对照组治疗基础上,联合输尿管软镜碎石取石术进行治疗.对比2组治疗前后炎症介质、免疫指标、甲状腺素(T H)、尿激酶(U K)、肾功能指标的变化情况.结果:治疗后,两组前列腺素E2(PGE2)、P物质(SP)、一氧化氮(NO)、过氧化脂(LPO)水平显著高于治疗前(P<0.05),且对照组PGE2、SP、NO、LPO水平显著高于观察组(P<0.05);两组CD4+、CD4+/CD8+水平显著低于治疗前(P<0.05),而CD8+水平显著高于治疗前(P<0.05),且对照组CD4+、CD4+/CD8+水平显著低于观察组(P<0.05),CD8+水平显著高于观察组(P<0.05);两组T H水平较治疗前显著降低(P<0.05),而UK水平较治疗前显著增高(P<0.05),且观察组T H水平显著低于对照组(P<0.05),UK水平显著高于对照组(P<0.05);两组尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、胱抑素C(Cy-sC)水平显著高于治疗前(P<0.05),且对照组BUN、Scr、CysC水平显著高于观察组(P<0.05).结论:联合输尿管软镜与经皮肾镜治疗肾结石,可减轻患者炎症应激反应,缓解免疫抑制现象,增强结石清除能力及降低对肾功能的损伤,具有临床推广意义.
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急性冠脉综合征患者Th/Tregs水平的变化及其临床意义
目的 研究白介素17(IL-17)、白介素35(IL-35)在急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中的表达,探讨该指标与肌钙蛋白I(cTnI)、B型钠尿肽(BNP)及左室射血分数(LVEF)等是否存在相关性.方法 选取2016年7月至2017年9月在广州中医药大学第一附属医院住院的ACS患者143例,其中ST段抬高型急性心肌梗死(STEMI)37例,非ST段抬高型急性心肌梗死(NSTEMI)45例,不稳定心绞痛61例;同期体检健康者30例为对照组.以ELISA法检测血清IL-17、IL-35水平,超声心动图Simpson法测定LVEF值.指标间相关性采用Pearson相关分析.结果 STEMI组患者的IL-35、IL-17水平[40.71±14.96)pg/mL、(45.72±13.75)pg/mL]与UAP组[(79.84±21.41)pg/mL、(15.64±9.83)pg/mL]比较差异均有统计学意义(P<0.05),而STEMI与NSTEMI组患者的IL-35水平[(45.96±17.52)pg/mL]和IL-17水平[(39.13±10.94)pg/mL]比较差异均无统计学意义(P>0.05);ACS患者IL-17水平与cTnI、BNP及D-Dimer呈负相关(r=-0.652,-0.571,-0.484,P<0.05),与LVEF呈正相关(r=0.436,P<0.05);IL-35水平与cTnI、BNP及D-Dimer呈正相关(r=0.573,0.416,0.597,P<0.05),与LVEF呈负相关(r=-0.391,P<0.05).结论 ACS患者外周血IL-17、IL-35水平在一定程度上能反映ACS的病情严重程度,可作为冠心病急性心血管事件的独立预测指标.
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固有免疫受体TLR9在鼻咽癌与癌旁组织中的表达
目的 固有免疫受体(Toll like receptors,TLRs)在鼻咽癌发病过程中起重要作用,该研究检测固有免疫受体9(Toll like receptor-9,TLR9)在鼻咽癌癌组织与癌旁组织中的表达,探讨信号因子TLR9表达与鼻咽癌临床病理之间的联系.方法 收集近1年97例鼻咽癌患者临床标本,同时收集所有病例的一般情况和临床病理特征等资料.应用RT-PCR、Western blot方法检测TLR9在鼻咽癌及癌旁组织中的基因和蛋白表达水平.采用免疫组化、免疫荧光等方法检测TLR9在鼻咽癌及癌旁组织中的分布规律,并结合临床参数探讨TLR9与鼻咽癌临床病理特征的相关性.结果 RT-PCR结果显示,与癌旁组织相比,TLR9 mRNA在鼻咽癌组织中表达明显增高,具有显著统计学意义(P＜ 0.01);Western blot结果显示,与癌旁组织相比,TLR9在鼻咽癌组织中表达明显增高,具有显著统计学意义(P＜0.01).TLR9蛋白表达在鼻咽癌组织中的增高与鼻咽癌的部分临床参数如肿瘤分化程度、临床分期等密切相关.免疫组化显示TLR9在癌旁组织中表达呈弱阳性,而在鼻咽癌组织中表达明显增强,其主要分布于肿瘤细胞以及炎性细胞等部位.免疫荧光进一步提示HLA-DR阳性的炎症细胞为TLR9因子分泌的重要来源.结论 TLR9在鼻咽癌组织中表达明显增高,且与临床参数密切相关,说明TLR9可能在鼻咽癌病理形成过程中发挥一定作用,可能作为判断临床预后的重要指标.
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CD36在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织中的表达与意义
目的 炎症在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)的发生发展过程中起着重要作用,并且炎症在CRSwNP的病理机制仍然不完全清楚.此研究主要观察清道夫受体CD36在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉的表达.方法 使用逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR),Western blot免疫印迹方法检测来自合计43例慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)或伴息肉患者的手术标本CD36的mRNA和蛋白表达.进一步通过免疫组织化学和免疫荧光技术观察CD36表达与分布规律.结果 我们的RT-PCR和Western blot免疫印迹分析的结果表明,与正常鼻黏膜组织相比,鼻息肉标本中CD36mRNA和蛋白表达显著增强(P＜0.01).免疫组织化学结果显示,CD36弱表达于慢性鼻窦炎鼻黏膜组织,而鼻息肉组织中表达较强.CD36与血管内皮标记物CD31的双染荧光结果显示,CD36阳性的细胞与CD31的阳性共标.结论 研究数据表明CD36在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉发生与发展过程可能起着重要作用.
关键词： 慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉 炎症免疫 CD36 -
IL-21R在舌鳞状细胞癌中的表达及意义
目的 炎症通过其对肿瘤微环境的影响在癌症的发展过程中起着重要作用.然而炎症与肿瘤之间的关系仍然需要进一步阐明.本研究主要观察IL-21R在舌鳞状细胞癌的表达和分布情况.方法 使用逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot免疫印迹方法检测来自54个舌鳞状细胞癌患者手术标本IL-21R的基因和蛋白表达,并且观察IL-21R表达与临床病理特征的关系.同时,进一步通过免疫组织化学和免疫荧光技术观察IL-21R表达与分布规律.结果 RT-PCR和Western印迹分析的结果表明,与癌旁组织相比,舌鳞状细胞癌标本中IL-21R基因和蛋白表达显著降低(P＜0.05).IL-21R低表达与性别、年龄、分化程度、肿瘤大小均无密切关系.这种表达特点主要与临床分期呈正相关.免疫组织化学结果显示,IL-21R主要表达于舌癌旁组织鳞状细胞和上皮细胞,而鳞状细胞癌组织中表达较弱或散在的表达.IL-21R与IL-10的双染荧光结果显示,IL-21R阳性的细胞中可见IL-10的阳性染色.结论 这些数据表明IL-21R在舌癌肿瘤发生与侵袭性过程中可能起着重要作用.
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白介素-21在喉癌组织中的表达与意义
目的 观察白介素(interleukin-21,IL-21)在喉癌(laryngeal carcinoma)肿瘤组织及癌旁周围正常组织中的表达,探讨炎症因子IL-21的表达与喉癌发病机制的关系.方法 随机收集病理检测确诊为喉癌患者的喉癌组织及癌旁正常组织,记录患者一般情况和临床病理特征等资料.应用RT-PCR、Western blot方法检测IL-21在喉癌及癌旁正常组织中的基因和蛋白表达水平.然后采用免疫组化、免疫荧光等方法检测IL-21在喉癌及癌旁正常组织结构中的分布情况,观察其在组织中的表达特点,并结合临床参数探讨IL-21与喉鳞状细胞癌临床病理特征的相关性.结果 RT-PCR显示,与癌旁正常组织相比,喉癌组织IL-21 mRNA表达明显增高,差异具有统计学意义(P＜0.01):Western blot显示,与癌旁正常组织相比,喉癌组织IL-21表达明显增高,差异具有统计学意义(P＜0.01);IL-21表达与肿瘤的部分临床参数如肿瘤分化程度、淋巴结转移程度等因素密切相关.免疫组化显示IL-21呈微弱阳性表达于癌旁正常组织中.与此相比,喉癌组织中IL-21则呈现高表达;部分肿瘤细胞及炎性细胞在细胞核和细胞浆中均有高表达和分布.免疫荧光提示HLA-DR阳性的炎症细胞可能是IL-21因子分泌的重要来源.结论 IL-21在喉癌组织中基因水平和蛋白水平表达都明显增加,与临床进展密切相关,说明IL-21在喉癌病理形成过程中起到一定的作用,可能作为判断临床预后的重要指标.
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Toll样受体4与小肠缺血的研究进展
急性小肠缺血是一种非常危重的急症,肠壁缺血、缺氧终导致大量肠管坏死和炎症因子的释放,甚至休克、多器官功能衰竭等.过度的炎症是造成机体各种损伤的基础,Toll样受体(TLR)是公认的病原体诱导炎症的主要参与者之一.TLR4可识别由病原微生物介导的先天免疫反应,TLR.与小肠缺血的损伤机制有密切关系,炎症免疫反应在小肠缺血的发生、发展中有重要作用,对TLR4进行负调控可能是预防和治疗小肠缺血的重要方法之一.通过重点探讨TLR4信号的激活在小肠缺血中的作用,有助于小肠缺血的靶向治疗.
