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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a的原核表达及多克隆抗体的制备
目的 研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a (PBP2a)的原核表达,及PBP2a多克隆抗体的制备.方法 根据基因文库登录的mecA基因的编码序列,设计合成了1对寡核苷酸引物,应用PCR法从MRSA基因组中获得编码PBP2a全长的DNA,将此目的 基因片段克隆至pET32a(+)载体,转化E.coli BL21(DE3);经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,利用Ni2+亲和层析技术纯化目的 蛋白;用目的 蛋白免疫小鼠3～8次后,收获血清并鉴定.结果 成功构建了PBP2a原核表达载体,并获得了高效表达;利用纯化的蛋白制备了理想的多克隆抗体.结论 利用分子克隆技术,获得了高纯度的PBP2a蛋白并制备了多克隆抗体,为其进一步研究奠定了基础.
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金黄色葡萄球菌耐药基因及致病毒素基因的相关性研究
目的 研究携带TSST-1和PVL基因的金黄色葡萄球菌耐药特点、分布特征及与致病性的关系.方法 临床收集74株金黄色葡萄球菌,采用PCR法检测TSST-1、PVL和mecA基因,纸片扩散法进行17种抗菌剂的耐药性检测.结果 74株金黄色葡萄球菌中mecA基因检出率为55.4%,其中22株检出 PVL基因(30.3%),PVL阳性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为15株(36.6%),甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)为7株(21.2%),两者间差异无统计学意义(P＞0.05).5株金黄色葡萄球菌中检出TSST-1基因(6.3%),均为 MRSAMRSA耐药性严重,并呈多重耐药性,携带基因PVL和TSST-1的MRSA除对万古霉素敏感外,对其他抗菌剂均耐药.结论 携带基因TSST-1和PVL的金黄色葡萄球菌耐药性及致病力更强,增加了临床抗感染治疗的难度.
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PVL阴性MRSA的基因多态性研究
目的 对杀白细胞毒素(PVL)阴性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行基因多态性研究,了解我院MRSA流行分布,为医院感染控制提供实验支持.方法 2006年2月至2007年8月我院临床分离的71株金黄色葡萄球菌;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,葡萄球菌盒式染色体mec(SCCmec)分型完成其中16株MRSA的基因多态性分析.结果 PFGE分型:共有7组(A、B、C、D、G、I、J),其中A型1株、B型1株、C型8株,且均为C2亚型;D型、G型、1型、J型分别为3株、1株、1株、1株;SCCmec分型:以SCCmec Ⅱ、SCCmecⅢ为主,各占50.0%(8/16).结论 通过对我院MRSA进行基因多态性分型研究,了解了我院流行的MRSA基因特征,为该菌的感染控制提供分子流行病学依据.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因及其相关因素分析
目的 了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药现状,加强临床MRSA的监控.方法 回顾性分析临床46株MRSA耐药性,并用PCR法对MRSA进行β-内酰胺类耐药相关基因mecA、氨基糖甙类耐药相关基因aac(6')/aph(2")、红霉素类耐药基因emr和耐消毒剂基因qac(A/B)检测.结果 46株MRSA表现多重耐药和高度耐药性,并检测出相关的耐药基因.结论 在临床工作中加强MRSA的监测、合理使用抗生素、严格消毒隔离制度是控制MRSA医院感染的关键.
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重症监护病房患者金黄色葡萄球菌感染及其耐药特征分析
目的 了解重症监护病房患者金黄色葡萄球菌感染及其对16种抗生素的耐药性特征与变迁,为临床治疗提供依据.方法 按NCCLS版纸片扩散法标准,测定并判读金黄色葡萄球菌对抗生素的耐药性,同时用纸片法测定耐甲氧西林金葡菌(MRSA)耐药表型.结果 重症监护病房金黄色葡萄球菌以感染呼吸道为主,占74.4%.从2001～2006年,MRSA检出率已从61.3%上升至97.4%,β-内酰胺酶阳性率达100.0%,未发现耐万古霉素和替考拉林菌株,但对其他各类抗生素均呈高度耐药,对青霉素的耐药率连续3年为100.0%.结论 重症监护病房金黄色葡萄球菌感染以MRSA为主,并对各类抗生素呈多重耐药,临床应重视耐药菌的检测与报告,合理使用抗生素及采取其他有效措施控制MRSA的感染.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a 382～443片段的原核表达及鉴定
目的对编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及青霉素结合蛋白2a(PBP2a) 382～443位氨基酸的mecA基因片段进行克隆、表达及鉴定.方法根据基因文库登录的mecA基因的编码序列,针对编码PBP2a382～443位氨基酸的mecA基因片段,设计合成4条寡核苷酸片段,再将4条片段人工拼接成目的基因片段,然后克隆至PET-His载体,经酶切鉴定、测序正确后,转化E.coli BL21(DE3)plysS,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白以MRSA胶乳凝集试剂盒进行鉴定.结果构建了相应的PET-His克隆,经诱导表达和鉴定,证实成功表达出目的蛋白.结论成功表达出PBP2a382～443片段,为其进一步的纯化和应用奠定了基础.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型的研究
目的：应用多重聚合酶链反应（PCR）对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）的金黄色葡萄球菌染色体 mec 基因盒（Staphylococcal chromosomal cassette mec，SCCmec）基因型及亚型进行分型。方法收集该院2012年1～9月临床分离的30株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，用多重 PCR 检测 MRSA 的 SCCmec 的基因型及亚型。结果检出 SCCmecⅠ型菌株1株（3．3％），SCCmecⅠA 型菌株1株（3．3％），SCCmecⅡ型菌株4株（13．3％），SCC-mecⅢ型菌株23株（76．7％），SCCmecⅣ型菌株1株（3．3％）。结论该院分离的 MRSA 以携带 SCCmecⅢ为主。多重 PCR 可用于临床实验室 MRSA 的 SCCmec 基因分型。
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502株金黄色葡萄球菌的耐药性分析
目的 了解2011年1月至2012年8月该院分离的金黄色葡萄球菌的耐药性以及对万古霉素的敏感性趋势.方法 对该院2011年1月～2012年8月从各类标本分离出的502株金黄色葡萄球菌药物敏感性测定结果进行回顾性统计分析.结果 未见对万古霉素、利奈唑胺、喹努普汀/达福普汀和替加环素耐药的金黄色葡萄球菌,而对青霉素G基本耐药；两年来克林霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、四环素和复方磺胺甲恶唑等多种抗菌药物敏感性有所上升；万古霉素MIC达0.5 μg/mL的金黄色葡萄球菌从2011年的34.7％升至2012年的47.7％,MIC达2μg/mL的菌株则从29.8％下降为16.3％.结论 临床分离金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物敏感性有所上升,这与近年来医疗系统对细菌耐药性的高度重视以及规范使用抗菌药物的落实到位密不可分.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性变迁的趋势分析
目的 调查湖北十堰地区近年耐甲氧西林金黄色葡萄(MRSA)医院感染的流行病学特征和耐药性变迁,为指导临床合理使用抗菌素提供依据.方法 运用WHONTE 5.5软件统计2007~2011年医院感染金黄色葡萄的药敏试验结果,Cox-Staurt 趋势检验分析医院感染MRSA耐药趋势.结果 2007~2011年MRSA的检出株数呈上升趋势,但其检出率未见明显上升趋势.经Cox-Staurt趋势检验分析,MRSA对克林霉素和米诺环素耐药率呈上升趋势,对复方新诺明的耐药率呈下降趋势;对环丙沙星、庆大霉素、青霉素、红霉素和头孢西丁的耐药率均大于75%,且耐药率无明显变化趋势.未检出万古霉素耐药株,仅万古霉素和米诺环素耐药率小于30%.结论 医院感染MRSA分离率高,耐药性强,且对多种药物的耐药率呈上升趋势,应加强细菌耐药性监测和抗菌谱分析,以控制耐药菌株的流行和产生.
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骨外系感染患者金黄色葡萄球菌耐药性分析
目的 了解2010年1月至2012年1月骨外系患者金黄色葡萄球菌(MSSA)的分布特点及耐药情况,为临床合理应用抗菌药物提供依据.方法 对收集的住院骨外系患者的标本采用MicroScan WalkAway-40型全自动微生物鉴定/药敏测试仪进行细菌鉴定,用其配套的试剂进行药敏试验.结果 184株金黄色葡萄球菌主要来源于分泌物、痰液、组织,构成比分别达到37.0％、26.6％、21.2％.共检出MRSA 52株,检出率28.3％.MSSA耐药性较轻,除对头孢唑啉100％耐药,对红霉素59.8％耐药外,对其他13种抗菌药物均较敏感;MRSA耐药性比MSSA严重,对多种抗菌素同时耐药,但对万古霉素、辛内吉、利奈唑胺100％敏感,对复方新诺明的耐药率也很低,为13.4％.结论 监测金黄色葡萄球菌在骨外系病源分布情况,重视金黄色葡萄球菌的分离培养及药敏试验,为临床合理选用抗菌药物和采取有效预防措施提供依据,达到控制医院感染,减少耐药菌株产生的目的.
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肿瘤医院金黄色葡萄球菌的临床分布及耐药性分析
目的 研究肿瘤医院金黄色葡萄球菌感染的临床分布及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供参考依据.方法 回顾性分析2011年10月至2012年9月从临床送检各类标本中分离的182株金黄色葡萄球菌感染状况及耐药性,并用WHONET5.6进行统计分析.结果 182株金黄色葡萄球菌主要从呼吸道标本中得到,其中MRSA72株占39.56％,MSSA110株占60.44％;科室来源主要为ICU病区(15.95％)与胸科病区(8.79％).MRSA对万古霉素、利奈唑胺、奎奴普丁、呋喃妥因100％敏感,对其他类抗菌药物呈现不同程度的耐药.MSSA对多种抗菌药物敏感.结论 金黄色葡萄球菌对抗菌药物具有多药耐药性,MRSA、MSSA对抗菌药物的耐药性存在显著性差异,临床医生应结合细菌耐药特征,合理选择抗菌药物以防止与减少耐药菌株的产生.
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金黄色葡萄球菌红霉素诱导克林霉素耐药性分析
目的 了解金黄色葡萄球菌(SA)菌株红霉素诱导克林霉素耐药率.方法 采用头孢西丁纸片法进行甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)检测,采用纸片扩散法进行红霉素和克林霉素耐药性检测,采用D-试验检测红霉素诱导克林霉素耐药表型.结果 MRSA检出率为53.7％(144/268),D-试验阳性率为20.9％(56/268);D-试验阳性菌株占红霉素耐药、克林霉素敏感菌株的63.6％(56/88).红霉素耐药、克林霉素敏感MRSA和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株D-试验阳性率分别为62.8％(27/43)和64.4％(29/45),组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SA菌株克林霉素诱导型耐药率较高；在进行细菌培养和药敏试验的同时,应采用D-试验进行红霉素对克林霉素的诱导耐药性检测,以指导临床医生合理用药.
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烧伤方剂对金黄色葡萄球菌的体外抑制实验研究
目的 探讨烧伤方剂对金黄色葡萄球菌体外的抑菌作用.方法 采用打孔法和稀释法检测烧伤方剂和万古霉素对金黄色葡萄球菌(SA)的抑菌圈和小抑菌浓度(MIC).结果 烧伤方剂和万古霉素对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为21.0 mm和22.3,MIC分别为28.2 mg/mL和32.0 μg/mL.结论 烧伤方对金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用,具有较高的临床应用价值.
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沧州地区金黄色葡萄球菌红霉素诱导克林霉素耐药分析
目的 了解沧州地区金黄色葡萄球菌(SA)耐药表型,指导临床医生合理用药.方法 常规方法分离、鉴定SA菌株,采用纸片扩散法对254株SA进行红霉素和克林霉素耐药性检测,以D-试验测定红霉素对克林霉素的诱导耐药表型.结果 254株SA临床菌株中,甲氧西林金耐药黄色葡萄球菌(MRSA)检出率为63.4%;红霉素耐药、克林霉素敏感的54株SA中,克林霉素诱导耐药(D-试验阳性)39株,占72.2%;MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)D-试验阳性率分别为83.3%和50.0%.结论 MRSA检出率较高,克林霉素诱导耐药较为严重;在进行常规药敏试验的同时,应通过D-试验检测红霉素对克林霉素的诱导耐药.
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基层医院金黄色葡萄球菌的耐药现状与分析
目的 了解金黄色葡萄球菌(SA)的分离率及耐药现状,为临床提供诊疗依据.方法 采用K-B纸片法进行药敏试验,采用头孢西林纸片法进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)鉴定.结果 本组233株SA在呼吸道标本检出率高,在脓液中第2.MRSA对抗菌药物的耐药率明显高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA).结论 应加强对患者医院感染好发部位的监测与护理,即使在二级医院的临床微生物室也务必常规开展MRSA的检测工作.
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123株金黄色葡萄球菌分布及耐药性分析
目的 了解金黄色葡萄球菌的分布情况及对抗生素的敏感和耐药情况.方法 采用德灵Walk Away40进行细菌鉴定和药敏试验.结果 123株金黄色葡萄球菌来主要源于重症监护室(ICU)和呼吸科的痰标本.检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)79株(64.2%),MRSA对β -内酰胺类、大环内酯类、克林霉素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类耐药率高达85%以上,耐药性明显高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),差异有统计学意义(P<0.01).对万古霉素、利奈唑胺100%敏感.结论 金黄色葡萄球菌在本院的感染以呼吸系统为主,病人多为长时间住院,有过侵入性治疗,大量使用过抗生素,年老免疫力低下的患者.MRSA耐药非常严重,多重耐药十分明显,敏感性较高的药物是万古霉素、利奈唑胺,辛内吉、氯霉素、复方新诺明.
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金黄色葡萄球菌杀白细胞素的研究进展
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant staphy-lococcus aureus ，M RSA ）普遍存在，是导致医院和社区感染的重要病原菌。M RS A 早出现在医院内呼吸道感染中，随着时间的推移，逐渐向院外扩散，社区相关性M RSA （community-associated M RSA ，CA-M RSA ）成为院外感染的重要病原菌。有研究者发现，几乎所有CA-M RSA存在杀白细胞素（ panton-valentine leucocidin ，PVL ）［1-4］。起先，PVL被认为是CA-M R-SA感染中的重要致病因子，后来的研究却出现了分歧。笔者分析已有研究认为，PVL 可能在M RSA定植性、传播性和致病性方面发挥重要作用。
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国内杀白细胞素阳性金黄色葡萄球菌感染的研究现状
金黄色葡萄球菌是临床引起感染性疾病常见的病原菌之一，它的致病性与其携带的多种毒素因子有关。携带毒素因子的金黄色葡萄球菌毒力更强，与感染后疾病的严重程度呈正相关［1］，产毒素菌株所造成的感染重、病程长，加大治疗难度和护理难度，同时增加了患者的痛苦和经济负担。杀白细胞素（PVL）是金黄色葡萄球菌产生的一种重要外毒素，近年来产PVL的金黄色葡萄球菌所致感染患者的病死率有增加的趋势［2］，应引起临床的重视。本文就目前国内金黄色葡萄球菌PVL基因携带状况、临床分布特征及所致感染的特点等问题的研究作一综述。
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携带vanA基因万古霉素耐药金黄色葡萄球菌研究进展
1988年首次报道肠球菌对糖肽类高水平耐药,此后,VRE逐渐在世界范围内播散.1993年,vanA基因在体外和动物模型从VRE成功转移到金黄色葡萄球菌[1-3].迄今,在世界范围内已经检出13株VRSA临床分离株,至少有11株携带含有编码糖肽类耐药性的Tn1546转座子,其中10株分离自美国[4-5],1株分离自印度加尔各答[6].王敬华等[7]报道于2007年从临床检出1株携带vanA基因的万古霉素耐药溶血葡萄球菌(vancomycin resistant staphylococcus hemolyticus,VRSH),对万古霉素和替考拉宁均高水平耐药(万古霉素MIC= 128 μg/mL,替考拉宁MIC=256 μg/mL).
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分子生物学技术检测MRSA的研究进展
耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)是引起医院与社区获得性感染的主要致病菌之一,近年来呈不断蔓延趋势.由该菌引起的感染不仪使患者的住院时间延长,经济负担加重,而且病死率也升高.因此,快速、准确地对MRSA做出榆测鉴定,能预防和控制MRSA的感染,降低患者的医疗费用,降低病死率等均具有重要的意义.近年来,利用分子生物学技术对细菌的耐药基因进行检测,不仅准确率高、且能快速得出结果.本文就分子生物学诊断技术在MRSA中的检测与临床应用评价作一综述.
