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双氢青蒿素干扰前列腺癌PC-3细胞体外生长的研究
目的:研究双氢青蒿素(DHA)对前列腺癌PC-3细胞的增殖、细胞周期和凋亡的影响,探讨DHA干扰前列腺癌PC-3细胞生长的可能机制.方法:应用四甲基偶氮唑盐(MTT)、流式细胞术(FCM)、扫描电镜(SEM)等方法检测不同浓度DHA作用不同时间对前列腺癌PC-3细胞的生长影响.结果:DHA对前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制率与DHA浓度和作用时间相关,细胞被阻滞于G_2/M期,诱导细胞凋亡发生.结论:DHA能有效抑制前列腺PC-3细胞增殖并诱导PC-3细胞凋亡.
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双氢青蒿素逆转乳腺癌细胞MCF-7上皮-间质转化的分子机制
目的:探讨上皮-间质转化(EMT)参与乳腺癌细胞侵袭和转移的过程;双氢青蒿素(DHA)在逆转乳腺癌细胞上皮-间质转化(EMT)过程中的作用,并探讨NF-κB信号分子可能参与逆转EMT过程.方法:利用DHA处理脂多糖(LPS)诱导的乳腺癌细胞株MCF-7,观察细胞形态变化;Western Blot实验及RT-PCR检测DHA干预前后钙黏蛋白(E-cad以及波形蛋白Vimentin)表达水平的变化;Transwell实验检测DHA干预前后乳腺癌细胞侵袭能力的变化;通过WesternBlot免疫印迹检测DHA干预前后核转录因子Snail以及P65蛋白的表达变化.结果:DHA可逆转LPS诱导的乳腺癌细胞MCF-7 EMT发生,使LPS诱导的EMT相关蛋白E-cad表达上调、Vimentin表达下调;并下调Snail蛋白及NF-κB P65的表达.DHA可抑制发生EMT的乳腺癌细胞运动及侵袭.结论:①LPS可诱导乳腺癌细胞系发生EMT,并增强细胞侵袭能力;②DHA逆转乳腺癌细胞EMT,抑制NF-κB信号通路进而下调核转录因子Snail的表达.
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双氢青蒿素下调Notch1蛋白表达对人卵巢癌Skov3细胞抑制作用的研究
目的：研究双氢青蒿素（dihydroartemisinin ，DHA）对人卵巢癌Skov3细胞增殖及对Notch1 mRNA、蛋白表达的影响。方法体外培养人卵巢癌Skov3细胞，加入不同浓度的DHA（分别为0、5、10、20、40、80μmol/L），采用MTT比色法检测不同浓度DHA对人卵巢癌Skov3细胞增殖的影响；采用RT-PCR法和Western blot法检测不同浓度DHA处理24 h的人卵巢癌Skov3细胞内Notch1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果不同浓度的DHA处理不同时间（24、48、72 h）后，卵巢癌Skov3细胞的生长明显受到抑制（P＜0.05）；随着DHA浓度的增加，人卵巢癌Skov3细胞内Notch1 mRNA和蛋白的表达逐渐下降（均 P＜0.05）。结论 DHA可能通过下调 Notch1的表达抑制人卵巢癌Skov3细胞的增殖。
关键词： 双氢青蒿素 卵巢癌SKOV3细胞 Notch1 生长抑制 -
甲硝唑及双氢青蒿素对阴道毛滴虫抗虫效果观察
目的:测定阴道毛滴虫十堰分离株对甲硝唑的敏感性,并观察双氢青蒿素对甲硝唑低敏感株的抗虫效果.方法:自2009年至2011年,从湖北医药学院附属太和医院妇科门诊收集25株阴道毛滴虫临床分离株,体外纯化培养传代,测定292.1、182.6、146.1、91.3、45.6、22.8、11.4、5.7 μmol/L甲硝唑浓度下4、8、12、24 h时间点滴虫死亡率,获取各虫株24h低致死量(Minimum lethal concentration,MLC).对24 h MLC大于22.8 μmol/L的虫株进行抗虫实验,测定5.3、3.5和1.8 mmol/L双氢青蒿素浓度下4、8、12、24h时间点滴虫死亡率,获取24 h MLC.结果:25株滴虫中,24株对甲硝唑较敏感,24 h MLC为11.4 ～ 22.8 μmol/L,1株滴虫为22.8 ～ 45.6 μmol/L.在22.8和45.6 μmol/L浓度作用下,该株滴虫24h死亡率无差异(P＞0.05);该株滴虫在3.5和5.3 mmol/L双氢青蒿素浓度作用下,4、8、12 h死亡率有统计学意义(P＜0.05),24 h MLC约为3.5 ～5.3 mmol/L.结论:阴道毛滴虫十堰分离株对甲硝唑总体较敏感,但存在个别虫株敏感性下降,双氢青蒿素对甲硝唑低敏感株抗虫效果较好,体外有效杀虫浓度为3.5 ～5.3 mmol/L.
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双氢青蒿素对人结直肠癌细胞的体外作用
目的 通过体外实验,对双氢青蒿素作用于人类结直肠癌癌细胞后的效果进行观察,从而探讨双氢青蒿素对肿瘤细胞生长效果的影响.方法 运用MTT 法观察双氢青蒿素以及5- 氟尿嘧啶对人类结直肠癌细胞的体外影响.结果 不同浓度的双氢青蒿素对癌细胞的抑制作用随浓度的增加而增强,呈明显的剂量依赖性,组间比较差异有统计学意义(P<0.05).同时其抑制效果与5- 氟尿嘧啶相当.结论 双氢青蒿素对人结直肠癌细胞具有体外抑制作用,其治疗效果与5- 氟尿嘧啶相当.
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青蒿琥酯片在健康人体中的生物等效性研究
目的 评价2种剂型的青蒿琥脂片在健康人体的生物等效性.方法 采用单中心、随机、双周期、自身交叉的试验设计.36例健康男性志愿者单次口服试验制剂(青蒿琥脂片,每片含青蒿琥酯100mg)或参比制剂(青蒿琥酯片,每片含青蒿琥酯50 mg),血浆样品采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定,计算两者的主要药物动力学参数,进行生物等效性评价.结果 青蒿琥酯和双氢青蒿素的线性范围均为2～1000 ng·mL-,低定量浓度为2 ng·mL-1,批内及批间精密度RSD＜15％;服用试验制剂和参比制剂后血浆中青蒿琥酯的Cmax分别为(321.36±148.23)、(321.3±182.34)μg·L1;tmax分别为(0.59±0.69)、 (0.77±0.65)h;t1/2分别为(0.72±1.57)、 (0.35±0.24)h;AUC0～∞分别为(226.2±99.57)、(214.63±93.1)μg·h·L-1;AUC0～t分别(207.88±79.17)、(206.12±91.67)μg·h·L-1;试验制剂的相对生物利用度F～t、F0～∞分别为(108.11±54.6)、(96.01±45.97)％;双氢青蒿素的Cmax分别为(1068.17±424)、(1118.75±545.02) μg·L-1;tmax分别为(0.9±0.43)、(1.09±0.62)h;t1/2分别为(1.47±0.48)、 (1.38±0.42)h;AUC0～∞分别为(2187.26±683.78)、(2110.23±509.82) μg·h·L-1;AUC0～t分别(2179.14±683.03)、(2100.42±509.72) μg·h·L-1;试验制剂的相对生物利用度F0～t、R～∞分别为(101.9±29.85)、(101.96±29.71)％.结论 试验制剂和参比制剂具有生物等效性.
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双氢青蒿素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞中mTOR表达和分布的影响
目的 探讨双氢青篙素时雄激素非依赖性前列腺癌C4-2B细胞的增殖和凋亡以及mTOR表达水平和分布定位的影响.方法 体外培养C4-2B细胞给予不同浓度的双氢青蒿素处理,以MTT法检测细胞增殖率；以RT-PCR检测细胞mTOR mRNA表达的情况；流式细胞术检测细胞凋亡率；透射电镜观察细胞超微结构的变化；激光共聚焦显微镜免疫荧光分析法评价mTOR蛋白的表达水平和亚细胞定位分布.结果 双氢青蒿素抑制C4-2B细胞的增殖呈时间和剂量依赖性(P＜0.01)；RT-PCR和免疫荧光细胞化学实验的结果表明,C4-2B细胞有mTOR mRNA和蛋白的表达,且随双氢青蒿素浓度的升高而增高(P＜0.05)；FCM显示C4-2B细胞的凋亡率随双氢青蒿素浓度的升高而增加(P＜0.01)；电镜观察到典型凋亡的形态学变化；激光共聚焦检测结果显示,mTOR不仅有胞膜和胞质的定位,胞核也有少量表达,随双氢青蒿素浓度的升高,胞核内的表达增加.结论 双氢青蒿素抑制C4-2B细胞增殖并诱导其凋亡,呈时间和剂量依赖性.C4-2B细胞对双氢青蒿素的反应性可能与mTOR的表达和核易住激活有关.
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自制双氢青蒿素和青蒿琥酯涂药板有效期的考察
目的 考察双氢青蒿素和青蒿琥酯涂药板对恶性疟原虫药敏作用的有效期.方法 采用世界卫生组织推荐的Rieckmann体外微量法,用体外连续培养的FCC-1/HN株恶性疟原虫,定期对涂药板进行检测.结果 双氢青蒿素和青蒿琥酯涂药板在存放0个月、6个月、1年和2年的半数抑制浓度(IC50)分别为6.89、7.23、5.82、7.49 nmol/L和5.35、7.15、6.34、4.85 nmol/L;完全抑制裂殖体形成的平均浓度(CIMC)分别为20.00、20.00、16.67、30.00 nmol/L和20.00、20.00、16.67、15.00 nmol/L.结论 自制涂药板存放在4℃冰箱2年药效是基本稳定的,且使用方便,适合于现场应用,可作为恶性疟原虫对双氢青蒿索和青蒿琥酯敏感性的检测工具.
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双氢青蒿素联合吉西他滨治疗胆管癌实验研究
目的:探讨双氢青蒿素(DHA)联合吉西他滨(GEM)对裸鼠胆管癌细胞株(QBC939)皮下移植瘤生长的抑制作用及可能机制.方法:建立人胆管癌裸鼠皮下移植瘤模型,模型建立后28只裸鼠随机分成4组,对照组、DHA组、GEM组、DHA+GEM联合干预组,每组7只.检测各组裸鼠皮下移植瘤体积的变化,21d后处死裸鼠,检测各组转移瘤重量并计算抑瘤率,免疫组化法检测瘤组织血管内皮生成因子(VEGF)表达水平,CD31标记血管内皮细胞测定肿瘤的微血管密度(MVD).结果:DHA组、GEM组、联合用药组的移植瘤体积和重量小于对照组,联合用药组的移植瘤体积和重量明显小于单独用药组;DHA组的VEGF、MVD表达与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);GEM组的VEGF表达较对照组减少但与DHA组无差异,GEM组的MVD表达较对照与DHA组均减少;联合用药组VEGF、MVD表达较对照组、单药组均减少.结论:DHA对肿瘤生长有-定的抑制作用,而GEM具有更明显的抗肿瘤作用,两者联合应用可达到较好的协同作用,抑瘤作用更加明显,DHA有可能对GEM化疗有增敏作用.抑制肿瘤机制可能与抑制肿瘤组织血管生成等有关.
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基于细胞自噬研究双氢青蒿对肝星状细胞活化的影响
目的:基于细胞自噬探讨双氢青蒿素(DHA)对肝星状细胞(HSC)活化的影响.方法:体外培养HSC-T6细胞,分为正常细胞对照组、DHA组、3-MA组、DHA+3-MA组共4组.用免疫组化法检测HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.定量聚合酶链反应(PCR)检测HSC-T6细胞Ⅰ型胶原和转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA表达.结果:正常培养的HSC大量表达α-SMA,经DHA(6.25 μg/mL)或自噬抑制剂3-MA(5.0 mmoL/L)干预后,α-SMA表达明显减少,而经DHA和3-MA联合处理,α-SMA表达进一步减少.DHA和3-MA均能下调HSC表达Ⅰ型胶原和TGF-β 1mRNA,与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).而DHA和3-MA联合干预,Ⅰ型胶原和TGF-β1 mRNA表达均进一步下降,与DHA组或3-MA组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:DHA可抑制HSC活化和增殖,从而在体外发挥抗肝纤维化作用,而细胞自噬能促进这一进程.
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双氢青蒿素滴眼液对血管化大鼠角膜磷酸化p38以及VEGFA mRNA表达的影响
目的:研究双氢青蒿素滴眼液对血管化大鼠角膜磷酸化p38 (p-p38)以及血管内皮生长因子A(VEGFA) mRNA表达的影响,探讨其抑制角膜新生血管的可能机制.方法:角膜缝线法建立24只大鼠右眼角膜新生血管模型,随机分为双氢青篙素滴眼液组和生理盐水组各12只.术后第7天,测量角膜新生血管长度,并计算新生血管面积;2组各随机选取6只大鼠并摘取角膜检测角膜p-p38的表达及VEGFA mRNA的表达.结果:双氢青蒿素滴眼液组大鼠角膜新生血管面积显著低于生理盐水组(P＜ 0.01);双氢青蒿素滴眼液组大鼠角膜p-p38表达量低于生理盐水组;双氢青蒿素滴眼液组大鼠角膜VEGFA mRNA表达量显著低于生理盐水组(P＜0.05).结论:20mg/L双氢青蒿素滴眼液可能通过抑制p-p38的表达以及VEGFA mRNA的转录,从而抑制大鼠角膜新生血管生长;p38信号转导通路可能参与调控大鼠角膜新生血管生长.
关键词： 双氢青蒿素 角膜 新生血管 血管内皮生长因子A mRNA 动物实验 -
Notch－1下调对双氢青蒿素抗人骨肉瘤细胞株U－2 OS 存活率的影响
目的：探讨Notch－1下调对双氢青蒿素抗人骨肉瘤细胞株U－2OS细胞存活率的影响及其作用机制。方法：双氢青蒿素（5、10、15和20μmol／L）孵育U－2OS细胞后，采用免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应检测骨肉瘤细胞中Notch－1、基质金属蛋白酶（ MMP）－2、MMP－9和Notch－1通路下游基因Hes－1的蛋白和mRNA的表达水平。下调Notch－1表达后，采用MTT法、免疫印迹法和细胞迁移实验检测在双氢青蒿素作用下U－2OS细胞的存活率，MMP－2、MMP－9和Hes－1的蛋白表达以及U－2OS细胞的迁移能力。结果：免疫印迹法与逆转录聚合酶链反应结果显示双氢青蒿素呈剂量依赖性降低U－2OS细胞中Notch－1、MMP－2、MMP－9和Hes－1的蛋白和mRNA的表达水平（P＜0．05）；下调Notch－1表达后，增强了双氢青蒿素抑制U－2OS细胞生长的作用，MMP－2、MMP－9和Hes－1的蛋白表达及细胞迁移能力进一步降低，显著低于加药组（ P＜0．05）。结论：双氢青蒿素可抑制U－2OS细胞中Notch－1通路的活性；下调Notch－1的表达可增强双氢青蒿素抗骨肉瘤的作用。
关键词： NOTCH-1 双氢青蒿素 人骨肉瘤细胞株U-2OS 细胞存活率 -
双氢青蒿素对人胶质瘤U87细胞迁移和侵袭的影响
目的：探讨双氢青蒿素（Dihydroartemisinin，DHA）对胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力的影响。方法采用CCK8法检测胶质瘤U87细胞生存率；划痕实验和transwell侵袭试验检测DHA对胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力的影响；Western blotting分析DHA对细胞基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）蛋白表达的改变。结果 CCK8显示DHA对胶质瘤U87细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性（P＜0.05）；与对照组比较，经DHA处理后胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力明显降低，相对应的MMP-2、MMP-9蛋白表达下降（P＜0.05）。结论 DHA可有效抑制胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力，其机制可能与DHA降低细胞MMP-2、MMP-9的蛋白表达相关。
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双氢青蒿素促胃癌细胞凋亡的作用
目的 研究双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人胃癌细胞(SGC-7901、HGC-27)生长抑制和促凋亡的作用.方法 用WST-1方法检测DHA处理后的胃癌细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力.结果 不同浓度的DHA可以抑制胃癌细胞(SGC-7901、HGC-27)的增殖,且呈现浓度依赖性增长趋势.DHA作用48 h后,胃癌细胞的周期阻滞在S期,同时有诱导胃癌细胞凋亡的作用;DHA作用24 h和48 h后,对胃癌细胞的迁移能力有抑制作用.结论 DHA可有效地抑制胃癌细胞的增殖,并促进其凋亡.
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10-O-己二酸-[2'-甲氧基-4'-(3″-酮-1″-丁烯基)-苯酯]-双氢青蒿素酯的制备
目的 合成10-O-己二酸基-[2'-甲氧基-4'-(3″-酮-1″-丁烯基)-苯酯]-双氢青蒿素酯.方法 以香草醛为起始原料,在碱性条件下,与丙酮缩合生成脱氢姜酮,再与己二酸在N,N'-二环己基-碳二亚胺(DCC)、对二甲氨基吡啶(DMAP)作用下,进行酯化反应,再与双氢青蒿素通过DCC法缩合制得终产物.结果 与结论 合成产物总产率为26.9%,熔点为57 ℃,其结构经1H-NMR、MS确证.
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双氢青蒿素逆转人结肠癌耐药细胞耐药性的研究
【目的】评价双氢青蒿素逆转人结肠癌细胞HCT8/ADR耐药性的能力，研究其逆转耐药的机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法、流式细胞术分别进行细胞毒性、细胞凋亡实验评价双氢青蒿素和阿霉素联合用药的药效，采用Western blot法研究逆转耐药的机制。【结果】双氢青蒿素和阿霉素联用后对人结肠癌耐药细胞有较高的毒性，能诱导耐药细胞凋亡，增强耐药细胞的自噬。【结论】双氢青蒿素能逆转耐药性，恢复耐药细胞对化疗药物的敏感性。
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双氢青蒿素人对急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用
目的 探讨双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的作用和机制.方法 用二甲氧唑黄细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测双氢青蒿素对HL-60细胞生长的抑制作用,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位变化,分光光度法检测细胞Caspase-3活性变化.结果 双氢青蒿素对HL-60细胞生长有抑制作用,呈剂量依赖性,并能诱导HL-60细胞凋亡,使线粒体膜去极化,增强Caspase-3活性.结论 双氢青蒿素能抑制人急性髓系白血病HL-60细胞生长,并诱导细胞凋亡,可能与线粒体凋亡通路有关.
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双氢青蒿素诱导前列腺癌DU145细胞凋亡的实验研究
目的:观察双氢青蒿素(dihydroarteannuin,DHA)对前列腺癌DU145细胞作用并对其抗癌机制进行初步探讨.方法:进行前列腺癌DU145细胞培养,MTT法测定不同浓度和时间DHA对DU145细胞的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测DU145细胞凋亡率:Western blot检测不同浓度DHA作用48 h凋亡蛋白caspase-3、survivin的表达情况.结果:MTT法显示与对照组比较,各实验组DHA可显著抑制DUl45细胞增殖(P＜0.01);FCM检测表明DU145细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组(P＜0.01),且呈时间剂量依赖性;Westem blot显示与对照组相比,各实验组DHA可显著下调DU145细胞survivin的表达(P＜0.01),而caspase-3的表达增加(P＜0.01).结论:DHA可能通过下调survivin的表达,上调caspase-3而诱导DU145细胞凋亡.
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北京地区境外输入性恶性疟疾临床分析——附99例报告
目的:探讨北京地区输入性恶性疟疾的临床特点及其诊断与治疗.方法:时99例输入性恶性疟疾患者的临床资料进行数理分析.结果:99例均有疟疾流行区居住史,临床表现复杂多样,其中发热99例(100%)、畏寒90例(90%)、头痛28例、呕吐25例、肌肉疼痛23例、腹泻21例、烦躁不安17例、贫血13例、肝肿大10例、脾肿大43例(43%)、双下肢水肿8例.21例早期误诊,误诊率为21%(21/99).43例给予氯喹治疗,其中16例经治疗无效,加用蒿甲醚治疗;41例应用双氢青蒿素加蒿甲醚治疗;15例应用蒿甲醚加双氢青蒿素哌喹治疗.99例全部治愈,治愈率为100%.3例出现再燃(3%).结论:恶性疟疾早期临床表现复杂,易误诊,临床上遇见有恶性疟疫区居住史的发热患者,应及时行血涂片或骨髓穿刺检查,以免延误诊治.使用青蒿素衍生物治疗恶性疟疾效果好,可作为首选药物.
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从屠呦呦获得诺贝尔奖说青蒿素
2015年10月,中国中医研究院女药学家屠呦呦因创制新型抗疟药物——青蒿素和双氢青蒿素,与爱尔兰科学家威廉·坎贝尔、日本科学家大村智共享2015年度诺贝尔"生理学或医学奖".这是中国医药学界迄今为止唯一获得这一大奖的药学家.
