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青蒿琥酯敏感与抗性株恶性疟原虫对本芴醇、蒿甲醚、双氢青蒿素的体外敏感性
为了解抗青蒿琥酯恶性疟原虫对本芴醇、蒿甲醚、双氢青蒿素是否存在交叉抗性,本芴醇与青蒿琥酯伍用是否有增效作用,运用Rieckmann体外微量法测定.结果上述3种药物对青蒿琥酯敏感株恶性疟原虫的ID50分别为72.3、14.6及13.4 nmol/L;对抗性株的ID50依次为66.8、80.5及72.6 nmol/L.蒿甲醚、双氢青蒿琥酯对抗性株的ID50分别较敏感株高出4.5及4.4倍,本芴醇对敏感株的ID50与抗性株相似.在本芴醇与青蒿琥酯伍用中,两者对抗性株的ID50分别为44.8及39.6 nmol/L,为单用组的1/1.54(44.7/66.8)和1/2.2(39.6/85.1).结果提示抗青蒿琥酯恶性疟原虫对本芴醇无交叉抗性,青蒿琥酯与本芴醇伍用在体外测定中具有一定增效作用;抗青蒿琥酯恶性疟原虫对蒿甲醚、双氢青蒿素有明显的交叉抗性.
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双氢青蒿素对阴道毛滴虫微丝作用的观察
目的探讨双氢青蒿素对阴道毛滴虫的杀伤效果及作用机制. 方法用含双氢青蒿素的肝浸汤培养基培养阴道毛滴虫,观察药物对滴虫的杀灭效果;用激光共聚焦显微镜观察双氢青蒿素作用前后滴虫微丝的变化. 结果随药物作用时间延长和药物浓度增加,阴道毛滴虫死亡率增高.同一时间随着药物浓度的增高,虫体死亡率升高(P< 0.01).作用6 h,双氢青蒿素0.6 mg/ml虫体死亡率是20%,而1.0 mg/ml时高达85%;同一药物浓度随着作用时间延长,滴虫死亡率也升高(P<0.05),药物0.8 mg/ml时,6 h、8 h、10 h、12 h和14 h死亡率分别是43%、68%、86%、97%和100%.药物作用后滴虫微丝排列疏松,有空隙生成.排列杂乱无序. 结论双氢青蒿素可作用于滴虫微丝结构,破坏微丝,具有较强的杀滴虫作用.
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青蒿素衍生物体外抗卡氏肺孢子虫作用的扫描电镜观察
目的观察体外培养的卡氏肺孢子虫(Pc) 经双氢青蒿素、青蒿琥酯作用后不同时相虫体表面结构变化. 方法将Pc接种入含HepG-2细胞的培养皿内并分别加入双氢青蒿素50 μmol/L、青蒿琥酯100 μmol/L、喷他脒15 μmol/L、0.3%乙醇与空白对照.双氢青蒿素组于用药后1、2、4、8、12、16 h作扫描电镜观察,后4组于用药后 12 h取样作扫描电镜观察. 结果双氢青蒿素作用2 h后,Pc表面开始出现损伤,初为表面绒毛脱落,残存绒毛肿胀呈球状,虫体体积增大.随着时间延长,虫体表面损伤明显,8 h后表膜出现大小不等孔洞.青蒿琥酯组改变相同,但较轻微. 结论青蒿素衍生物可引起Pc虫体表膜损伤,通透性增加,功能障碍.
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云南省抗氯喹恶性疟原虫双氢青蒿素抗性株体外培育与单克隆品系的建立
目的 建立云南省恶性疟原虫抗双氢青蒿素的单克隆品系,为开展恶性疟原虫对青蒿素类的抗药性研究奠定基础. 方法 体外长期连续培养恶性疟原虫,采用体外间断双氢青蒿素药物刺激法对恶性疟原虫株进行抗药性培育,待达到一定抗药性后采用有限稀释法对虫株进行克隆,采用体外微量法测定克隆虫株对双氢青蒿素、青蒿素、氯喹的敏感性,并对其生物学特性进行鉴定. 结果 获得2个云南氯喹抗性恶性疟原虫对双氢青蒿素抗性的单克隆品系C10和H6,IC50值分别为39.01 nmol/L和26.91 nmol/L. 结论 经过8次体外间断药物刺激和筛选,获得2株恶性疟双氢青蒿素抗性单克隆品系,其药物耐受性水平与现场抗性株接近.
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双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Centrin基因mRNA表达水平的影响
目的 分析双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对体外C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)中心体蛋白(Centrin)基因mRNA表达水平的影响,探讨其对蓝氏贾第鞭毛虫的抑制作用. 方法 采用改良型TYI-S-33培养基培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫,培养基内分别加入浓度为100 μg/ml、200 μg/ml的双氢青蒿素,以不含药物组作为阴性对照,分别培养2、4、8、12h后,收集各组虫体并提取总RNA,以此为模板,反转录合成cDNA,采用实时荧光定量RT-PCR检测药物作用后Centrin基因mRNA表达水平的相对变化量. 结果 实时荧光定量RT-PCR检测显示,经双氢青蒿素作用虫体后Centrin基因mRNA表达水平显著降低,培养2、4、8、12 h后100 μg/ml药物组Centrin基因mRNA相对表达量分别为0.46、0.43、0.35和0.27,200 μg/ml药物组分别为0.42、0.38、0.29和0.25. 结论 双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Centrin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,且抑制作用随着药物浓度的增高和作用时间的延长而增强,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫具有明显的损伤作用,可供蓝氏贾第鞭毛虫病防治参考.
关键词： C2株蓝氏贾第鞭毛虫 实时荧光定量RT-PCR 双氢青蒿素 中心体蛋白 -
磷酸咯萘啶及其合并双氢青蒿素治疗疟疾效果观察
目的观察国产抗疟药磷酸咯萘啶单方和磷酸咯萘啶合并双氢青蒿素在厄利特里亚治疗疟疾的近期疗效.方法以显微镜血检疟原虫阳性者为观察对象,服药后逐日血检疟原虫,观察治疗效果.结果单方治疗间日疟与恶性疟的原虫平均转阴时间分别为32.00 h和50.18 h;联合治疗间日疟与恶性疟的原虫平均转阴时间分别为24.00 h和27.69 h;联合治疗抗氯喹恶性疟平均转阴时间为24.00h.两组药物治疗的病人均于治疗结束前体温恢复正常.未见明显副反应.首次治疗后7 d,单方组有55.56%的恶性疟病例携带配子体,高于联合用药的18.18%.结论联合用药优于单用,但两组药物对当地疟疾均100%临床治愈,有良好的近期疗效.
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双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠NO水平的影响
目的研究双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清和肺泡巨噬细胞上清液NO水平的影响. 方法以醋酸可的松皮下注射Wistar大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型,用60 mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠,杀鼠取肺,用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞,用LPS刺激培养72 h,同时设有感染组和正常对照.用NO试剂盒分别检测大鼠血清和肺泡巨噬细胞上清液NO活性. 结果感染组大鼠血清、肺泡巨噬细胞上清液原液以及经LPS刺激后肺泡巨噬细胞上清液NO浓度分别为(167.3±23.1)、(141.6±18.0)和(129.5±28.4) μmol/L,治疗组分别为(111.8±40.6)、(136.3±35.1)和(129.9±14.2) μmol/L,正常对照组分别为(87.2±32.1)、(109.8±18.0)和(136.2±30.5) μmol/L,可见感染组和治疗组大鼠NO水平均高于相应的正常对照,治疗组NO水平低于相应的感染组. 结论卡氏肺孢子虫感染可能引起大鼠肺泡巨噬细胞分泌高水平NO,经双氢青蒿素治疗后,PCP大鼠肺泡巨噬细胞分泌NO水平降低.
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双氢青蒿素、青蒿琥酯和蒿甲醚连续给药及伍用治疗小鼠血吸虫 效果观察
目的 观察双氢青蒿素、青蒿琥酯和蒿甲醚连续给药或伍用治疗小鼠血吸虫病的效果,为日本血吸虫病病原学治疗提供药物配伍实验依据.方法 采用腹部贴片感染法,每鼠感染日本血吸虫尾蚴40±1条,分别于感染后6～8 d(童虫期)和34～36 d(成虫期),以300 mg/kg双氢青蒿素、青蒿琥酯和蒿甲醚连续给药及3种药物等剂量配伍给药,在感染后50 d解剖小鼠,收集成虫,计算减虫率和减雌率.结果 在感染后6～8 d,双氢青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚连续3d单独给药和3种药物等剂量配伍给药,小鼠减虫率为79.5％～86.0％；减雌率为79.4％～86.7％,差异均无统计学意义(P均＞0.05)；在感染后34～36 d给药,减虫率为73.8％～75.8％,减雌率为88.7％～93.1％,差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 双氢青蒿素、青蒿琥酯和蒿甲醚连续给药及伍用治疗小鼠血吸虫病效果无显著差异.
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磷酸咯萘啶与双氢青蒿素联合治疗非洲重症恶性疟的疗效观察
几内亚比绍共和国(简称几比)位于西非,是全球疟疾高发国家之一.因战乱、贫穷和缺医少药,疟疾已排位于该国常见病、多发病的前列,重症恶性疟更是病势凶险,成为当地的三大死因之首[1].我国对几比的经济援助项目较多,有大批中国专家和技术人员等在此工作,期间有不少染患疟疾.为扩大国产抗疟新药的影响,缩短疟疾病程,提高治疗效果,2002年8 月～2003年8月,在几比首都采用静滴磷酸咯萘啶和口服双氢青蒿素片治疗援外期间感染重症恶性疟的中国患者,取得明显临床疗效,现报道如下.
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双氢青蒿素与甲氟喹联用治疗恶性疟的疗效观察
双氢青蒿素作为青蒿素的又一衍生物，继青蒿琥酯、蒿甲醚应用于临床后，对各种类型疟疾的治疗都显示了良好的疗效。国外学者报道［1］，青蒿琥酯或蒿甲醚与甲氟喹联用具有协同抗疟作用，并可有效地控制复燃。作者在援助赤道几内亚的医疗工作中，以双氢青蒿素片联用甲氟喹，治疗51例恶性疟患者，亦取得满意的疗效。对象与方法1 一般资料 51例恶性疟患者均系1998年8月～1999年2月赤道几内亚巴塔地区医院的住院患者，其中赤几人35例，西班牙人7例，俄罗斯人4例，中国人3例，黎巴嫩人2例。男29例，女22例，年龄5～42岁，平均25岁。全部患者均有疟疾发作的症状与体征，并经末梢血涂片检查找到恶性疟原虫大小环状体或裂殖体而确诊。无肝、肾病疾患史，此次治疗前未接受过其他抗疟药治疗（引用该院病例，已事先征得其同意）。
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双氢青蒿素诱导肝癌细胞Huh-7凋亡并抑制其迁移的机制研究
目的 探讨双氢青蒿素(DHA)能否影响具有突变型p53的人肝癌细胞株Huh-7增殖、凋亡及迁移等生物学行为及其作用机制.方法 DHA处理Huh-7细胞后MTT法检测增殖抑制率,免疫荧光分析DNA双链损伤情况,WB法测γH2AX蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡.细胞划痕法检测DHA对细胞迁移能力的影响.WB法测细胞中STAT3蛋白的活性及表达水平.结果 DHA能抑制Huh-7细胞的增殖活性,抑制作用呈浓度依赖性.20 μ,mol/L DHA处理48 h能升高γH2AX表达水平,损伤Huh-7细胞DNA双链.DHA处理48 h细胞的凋亡百分率为(3.15±0.39)％.DHA降低Huh-7细胞迁移能力,p-STAT3(Y705)表达水平下降.结论 DHA能造成Huh-7细胞DNA双链损伤,诱导细胞凋亡,但此过程与p53活性无关.可能的机制是通过降低STAT3磷酸化水平抑制突变型p53的Huh-7细胞增殖,诱导Huh-7细胞凋亡和抑制细胞迁移.
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双氢青蒿素对γδT细胞杀伤SW1990细胞的增强作用
目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人外周血γδT细胞体外增殖及抗肿瘤活性的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和IL-2的RPMI 1640完全培养基中诱导培养γδT细胞.不同浓度的DHA作用于γδT细胞4δ h后,MTT法检测各药物浓度组γδT细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测各组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达,用CCK-8试剂盒检测各组γδT细胞对SW1990细胞的体外杀伤效应.结果 培养8d时各组γδT细胞纯度达到了75.46％ ±5.32％.浓度为50～100μmol/ml的DHA能显著促进γδT细胞的增殖.DHA处理后γδT细胞杀伤胰腺癌SW1990细胞能力及其穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达均显著高于对照组.结论 DHA可增强γδT细胞抗肿瘤活性,其机制可能与其促进γδT细胞穿孔素和颗粒酶B的表达上调有关.
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双氢青蒿素作用于乳腺癌细胞抑制EMT和转移的作用及机制
目的 探讨双氢青蒿素对乳腺癌细胞上皮细胞间充质化(EMT)和转移的抑制作用及机制.方法 用0 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L的双氢青蒿素作用于乳腺癌细胞,培养48 h后,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞中钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)水平.结果 10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L的双氢青蒿素作用后的乳腺癌细胞存活率、迁移率与0 μmol/L双氢青蒿素作用组相比明显降低(P<0.05),80 μmol/L双氢青蒿素作用组细胞存活率和迁移率低,后续选用80μmol/L双氢青蒿素继续研究.80 μmol/L双氢青蒿素作用组细胞中的Vimentin、p-Akt、MMP-2蛋白表达水平与0 μmol/L双氢青蒿素作用组相比也明显降低,而细胞中E-cadherin水平升高(P<0.05).结论 双氢青蒿素能够抑制乳腺癌细胞EMT和转移,作用机制可能与Akt信号通路有关.
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用双氢青蒿素防治卡氏肺孢子虫肺炎的实验研究
目的观察双氢青蒿素防治大鼠卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)的效果.方法经皮下注射醋酸可的松诱导大鼠发生PCP.将受试大鼠随机分为实验组和对照组,双氢青蒿素防治方案分为小剂量长程预防、小剂量长程治疗及大剂量短程治疗三种.用肺重/体重、肺虫荷量及肺泡卡氏肺孢子虫(Pc)感染率3项指标考核防治效果.结果抽样检查证实大鼠已成功诱导PCP,均为重度感染.方差分析及卡方检验显示,用双氢青蒿素防治的三组大鼠的三项指标均明显低于两个未防治对照组(P＜0.05或0.01),与甲氧磺胺嘧啶-磺胺甲基异恶唑(TMP-SMZ)标准剂量治疗对照(G)组无显著性差异(P＞0.05).结论双氢青蒿素能有效防治大鼠的PCP,效果与标准剂量TMP-SMZ接近.
关键词： 肺炎 卡氏肺孢子虫 大鼠模型 双氢青蒿素 甲氧磺胺嘧啶-磺胺甲基异恶唑 -
蒿甲醚和双氢青蒿素治疗维和部队疟疾93例分析
目的 为了保证维和部队的任务完成及官兵的身体健康,防治维和部队的疟疾患者并总结疟疾的防治经验.方法 对所属维和部队官兵参与进行抗疟药物分组治疗效果观察.结果 双氢青蒿素(科泰新)防治效果肯定,用于进人高疟区的易感人群疟疾防治效果显著.结论 蒿甲醚对疟疾的疗效肯定;双氢青蒿素作为一种新的选择更适应未来的战争需要.
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双氢青蒿素对体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞骨架的损伤作用
目的:观测双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞骨架的损伤作用.方法:将用含双氢青蒿素的改良TYI-S-33培养基培养后的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,用专一性结合f-肌动蛋白(f-actin)的荧光染料罗丹明-鬼笔环肽(rhodanmine phalloidin,RDP)标记微丝,结合微管的紫杉醇(Paclitaxel,Oregen Green 488,P22310)标记微管,用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测、分析,用激光共聚焦显微镜(confocal microscopy,CFM)观察滋养体微丝和微管的变化.结果:经双氢青蒿素0.002 mg/L(LC50)作用12 h,RDP标记后,流式细胞仪检测结果显示,滋养体的微丝结构有明显的损伤,其FCM激发光荧光强度值(16.18±11.02)明显低于对照组(81.7±6.43),二者有显著性差异(P＜0.01);激光共聚焦显微镜观察显示,虫体形态及轮廓不完整.经P22310标记后,共聚焦显微镜下显示,虫体的吸盘和鞭毛轮廓不清,荧光强度降低或消失,实验组吸盘面积的荧光强度值与对照组比较有显著性差异(χ2=3.154,P＜0.01).结论:双氢青蒿素对体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的细胞骨架有明显的损伤作用.
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迷走神经介导性心脏停搏10.52秒一例
1临床资料受试者男性,26岁,于2005-08-01入住我院参加注射用双氢青蒿素单次给药药代动力学临床试验.入院后三大常规、电解质、肝肾功能、心肌酶谱及胸透、心电图等检查均未见异常.2005-08-02 8:30～9:00进行药物静脉滴注,给药过程顺利,给药前后生命体征平稳,无不适主诉.根据试验方案于用药后16小时在上肢前臂静脉穿刺采血.采血前受试者神清,精神稍紧张,对答合理,诉采血处较为疼痛.采血结束时受试者突发面色苍白,双目上视,意识丧失,肢体软瘫,继而四肢抽搐3次.
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青蒿素衍生物抗卡氏肺孢子虫体外作用的研究
目的研究不同浓度青蒿素衍生物双氢青蒿素、青蒿琥酯对体外培养卡氏肺孢子虫的作用。方法接种卡氏肺孢子虫（Pc）于人肝癌细胞系（HepG-2）。4 h后加入试验药物和对照试剂。双氢青蒿素药物浓度分别为：100、50、10、5、0.5 μmol/L；青蒿琥酯药物浓度分别为：100、50、10、5 μmol/L；对照药喷他脒：15 μmol/L。以后每隔1 d取培养液观察，分别作六亚甲基四胺银(GMS)和Diff-Quik （DQ）染色计数Pc包囊和滋养体数目。结果 Pc滋养体和包囊在体外培养细胞上的生长高峰出现于第5 d，双氢青蒿素浓度为50 μmol/L和100 μmol/L时对Pc滋养体的抑制率分别为88.0%与90.1%，与喷他脒15 μmol/L的抑制率90.0%相当；而青蒿琥酯浓度为100 μmol/L时方可达到Pc滋养体抑制率83.4%。Pc包囊抑制率，双氢青蒿素和青蒿琥酯浓度为100 μmol/L时分别为67.5%和67.3%，与喷他脒的抑制率75.0%之间无统计学差异。结论双氢青蒿素和青蒿琥酯在一定浓度时对Pc的抑制作用与喷他脒相当；而双氢青蒿素的抑制作用略高于青蒿琥酯。两者对Pc滋养体的抑制率均高于对Pc包囊。
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复方蒿甲醚与双氢青蒿素对小儿恶性疟治疗观察
马里共和国地处西非,属热带气候.恶性疟是当地主要严重危害人体健康的传染病.恶性疟终年流行,尤其是雨季(6-8月,其余为旱季),蚊媒大量滋生繁殖,为恶性疟流行高峰.以往多用氯喹治疗,故抗氯喹虫株不断增多.2001年8月-2003年7月,在马里Markala医院工作期间,采用复方蒿甲醚治疗小儿恶性疟40例,并以双氢青蒿素作对照试验以比较观察疗效和毒副作用.
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双氢青蒿素对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用
目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑瘤效应及其作用机制.方法:C57BL/6J小鼠皮下接种3LL细胞(2×106)50只,随机分为5组,分别为生理盐水组、阳性对照顺铂(DDP)组和DHA高、中、低剂量组,检测各组小鼠的体质量变化和抑瘤率,应用流式细胞术进行瘤细胞的DNA倍体分析.结果:生理盐水组小鼠体质量比DHA高、中剂量增加明显,DHA低剂量抑瘤率为7.01%,较生理盐水组差异无统计学意义(t=0.872,P=0.395),中高剂量组抑瘤率分别为53.50%及59.24%,与生理盐水组比较差异有统计学意义(t=8.541,P=0..000;t=13.566,P=0.000),但抑瘤率均低于DDP组的92.36%,差异有统计学意义(t=-6.871,P=0.000;t=-9.667,P=0.000).流式细胞术检测DHA能诱导肿瘤细胞凋亡,并能影响肿瘤的细胞周期,G0/G1期及G2/M期细胞数大量减少,细胞被阻滞在S1期,与生理盐水组比较,差异均有统计学意义,P值均为0.000.结论:在一定剂量范围内,口服DHA对Lewis小鼠肺癌有明显的抑制作用,可促进肿瘤细胞凋亡.
