NOD小鼠胰岛β细胞凋亡及完全弗氏佐剂的预防效应

目的探讨NOD小鼠胰岛β细胞凋亡的规律及完全弗氏佐剂(CFA)在预防胰岛炎和糖尿病中的作用.方法计数12天龄、6周龄、12周龄未处理的NOD雌鼠胰岛β细胞的凋亡.将3周龄NOD雌鼠随机分入CFA组、PBS对照组,分别给予后足板一次性注射CFA 50 μl、PBS 50 μl,于6周龄、12周龄、30周龄时,观察胰岛β细胞凋亡率,胰岛炎程度和糖尿病发病率.结果未处理组12天龄胰岛β细胞凋亡率分别高于6周龄、12周龄(P＜0.01).6周、12周时CFA组胰岛炎积分,β细胞凋亡率均明显低于同期PBS组(P＜0.05,P＜0.01),6周龄、12周龄胰岛炎积分与β细胞凋亡率存在正相关(r=0.59,P＜0.01).到30周龄时,CFA组糖尿病发病率(9.1%)较PBS组(81.8%)明显降低(P=0.001).结论早期给予NOD鼠CFA可明显减轻胰岛炎和预防糖尿病的发生,其机制与抑制β细胞凋亡有关.

谷氨酸脱羧酶预防NOD小鼠胰岛炎的机制

谷氨酸脱羧酶(GAD)预防NOD小鼠胰岛炎和糖尿病(DM)[1,2]的机制尚未阐明.本研究探讨GAD在预防NOD鼠胰岛炎过程中,对胰岛β细胞凋亡和Fas及其配体FasL及bcl-x表达的影响.

口服表达霍乱毒素B亚基/胰岛素原融合蛋白的转基因莴苣和烟草阻止非肥胖糖尿病小鼠胰岛炎的发展

牛初乳短链IGF-Ⅰ抑制NOD小鼠胰岛炎的初步观察

　　人类胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)是由70个氨基酸组成的单链多肽。其结构的45%与胰岛素相似。牛初乳短链IGF-Ⅰ(Bc-tIGF-Ⅰ)的结构与人IGF-Ⅰ略有不同，即N端少3个氨基酸：甘氨酸、脯氨酸和谷氨酸，但其生物活性比IGF-Ⅰ大十多倍〔1〕。目前Bc-tIGF-Ⅰ主要用于改善糖尿病(DM)物质代谢及慢性并发症如心、肾、周围神经病变的防治研究〔2，3〕。国外研究发现IGF-Ⅰ有促进淋巴组织增生、调节T细胞的生长与分化等免疫调节作用〔4，5〕，且将其用于非肥胖糖尿病(NOD)小鼠，显示重组人IGF-Ⅰ(rhIGF-Ⅰ)可预防其胰岛炎和糖尿病的发生〔6，7〕。国内外尚未有人探讨过Bc-tIGF-Ⅰ对免疫系统的影响。本研究应用Bc-tIGF-Ⅰ早期治疗NOD雌性小鼠，了解其对NOD小鼠的胰岛炎及1型DM是否有预防作用，并探讨其免疫调节机制。　　一、材料与方法　　1.动物NOD/Lt种小鼠。种鼠购自北京中科院实验动物研究所。在标准环境条件下饲养，繁殖出第一代，取雌性小鼠用于实验。　　2.主要试剂Bc-tIGF-Ⅰ由中科院生理研究所提供，纯度75.83%〔8〕。生理盐水(NS)为医用0.9%氯化钠溶液，苦味酸、多聚甲醛、丙酮、乙醇等均为AR规格。

GAD对NOD小鼠β细胞淋巴细胞性炎症的防护作用

目的了解GAD对NOD小鼠的1型糖尿病是否具有预防作用并探讨其免疫作用机制。方法用猪脑GAD 50μg和不完全弗氏佐剂(FIA)50μl混合后给4周龄雌性NOD小鼠腹腔注射(ip)(n=32)，同时单独注射等量FIA作为对照组(n=19)。8周龄时环磷酰胺(CY)250 mg/kg ip以加速糖尿病。每周测定体重、血糖，20周龄处死小鼠后测定血清C-肽、观察胰腺病理和超微结构变化。结果 20周龄时，FIA对照组的糖尿病总发病率为73.58％，而GAD组仅有6.25％小鼠发生糖尿病(P＜0.01)，发病时间也明显延缓；GAD组的胰岛炎症分数较FIA组明显降低，且炎症程度减轻(P＜0.05)；GAD组的C-p水平也明显高于对照组(P＜0.05)；FIA组残存胰岛的β细胞数目稀少，有核膜和内浆网扩张、核糖体脱颗粒、分泌颗粒空泡样变等超微结构异常，而GAD组胰岛β细胞数显著多于对照组(P＜0.05)，且无上述超微异常。结论猪脑GAD可预防NOD小鼠胰岛炎发生，且有保护其胰岛β细胞超微结构的作用。

霉酚酸酯对非肥胖性糖尿病小鼠胰岛炎和胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的:探讨霉酚酸酯(mycopbenolate mofetil,MMF)对非肥胖性糖尿病小鼠non-obese diabetic mice,NOD)胰岛炎和胰岛β细胞凋亡的保护作用.方法:8周龄NOD雌性小鼠22只分为两组,每组11只,干预组给予霉酚酸酯30 mg/kg灌胃,对照组给予等量的生理盐水.两组小鼠饲养期间定期监测其血糖水平.30天实验结束时,每组取5只小鼠处死,行HE染色观察胰岛炎程度,TUNEL法检测胰岛β细胞凋亡率.余下小鼠观察到发生精尿病或20周处死.结果:干预前两组小鼠血糖均在正常水平.干预期间和干预期满后,MMF干预组小鼠血糖与生理盐水对照组之间无差异(P>0.05);MMF组胰岛炎严重程度及胰岛β细胞凋亡率较生理盐水对照组明显减轻(P<0.01).结论:MMF可以在早期抑制NOD小鼠的胰岛炎和胰岛β细胞凋亡,从而减轻胰腺损伤.如果在糖尿病发病前给予MMF可能延缓或防止糖尿病的发生.

胰岛素早期强化治疗对发病NOD小鼠胰岛炎及bax、 bcl-2表达的影响

目的 探讨胰岛素早期强化治疗对发病非肥胖糖尿病(NOD)小鼠胰岛炎及对胰岛细胞凋亡与再生的影响.方法 选取近期发病NOD小鼠12只,随机平均分为A、B两组,A组给予胰岛素早期强化治疗,B组为发病未治疗组.同时选取同周龄未发病小鼠6只为C组.B和C组分别于分组当日即开始予PBS缓冲液对照治疗.B组于20 d处死,A和C组于60 d处死.HE染色观察各组小鼠胰岛炎性积分,免疫组化观察小鼠胰岛bax、bcl-2蛋白的表达.结果 A组小鼠糖尿病症状得到明显控制,其胰岛炎性积分显著低于B组(P＜0.05),与C组相比差异无统计学意义(P＞0.05).A组bax表达低于B组,但差异无统计学意义(P＞0.05),与C组相比差异有统计学意义(P＜0.05).A组bcl-2表达显著高于B组和C组(P＜0.05).结论 胰岛素早期强化治疗能够减轻胰岛炎症,减少细胞凋亡,促进胰岛细胞再生.

情绪应激对NOD小鼠血糖、胰岛炎及胰岛内细胞凋亡的影响

目的探讨情绪应激在NOD鼠1型糖尿病发生中的作用及可能机制.方法采用饮水焦虑冲突应激及限制应激合用,对2月龄NOD小鼠进行急性应激作用,研究应激1d,2d及3d后,小鼠的情绪性、血糖、胰岛炎及胰岛内细胞凋亡水平与对照组之间的差异和时间趋势.结果应激1d后小鼠情绪唤醒和血糖水平即升高,从开始的(2.00±1.41)mmol/L和(3.27±0.70)mmol/L上升至(4.67±1.37)mmol/L和(8.68±4.63)mmol/L,并随着应激时间的延长有逐步下降的趋势.而胰岛炎和胰岛细胞凋亡水平则随着应激时间的延长逐步升高,平均每胰岛的胰岛炎积分从0.16逐渐上升到应激3d后的0.75,平均每胰岛凋亡细胞个数则从对照组的0.82±0.93上升为3.93±1.05(应激1d)、5.72±3.90(应激2d)、5.77±2.75(应激3d).结论 1、2、3d的饮水焦虑冲突应激及限制应激可增加NOD鼠胰岛炎和胰岛细胞凋亡水平,从而可能促进1型糖尿病的发生.

长期心理应激对链脲佐菌素诱导鼠胰岛形态功能的影响及其机理

目的研究实验性长期心理应激对链脲佐菌素(STZ)诱导鼠(STZ鼠)血糖、胰岛内分泌功能和组织形态学的影响，探讨其与氧自由基代谢的关系。方法20只正常昆明小鼠按性别匹配随机分入A组(正常鼠无应激组，10只)和B组(正常鼠应激组，10只)，40只STZ鼠(血糖＜13.9mmol/L)按性别、血糖匹配后随机分入C组(STZ鼠无应激组，20只)和D组(STZ鼠应激组，20只)，B、D组给予6周旋转、限制、拥挤应激刺激，A、C组则否。测血糖(BG)并测定胰岛组织胰岛素(PI)、胰高糖素(PG)、脂质过氧化物(LPO)、总超氧化物歧化酶(总SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和一氧化氮(NO)，光镜和电镜观察胰岛组织形态。结果应激后D组血糖(10.3±6.2mmol/L)较其他3组显著增高，PI含量显著下降，总SOD和GSH-Px活性显著降低，LPO、NO含量和胰岛炎评分显著增高(P均＜0.05)；STZ药物与应激刺激对于升高BG、胰腺组织LPO和NO含量以及胰岛炎评分、降低PI和总SOD以及GSH-Px活性有协同作用(P均＜0.05)，电镜下显示D组胰岛β细胞超微结构损伤明显，而α细胞损伤相对轻微；胰岛炎评分与胰腺组织LPO、NO含量呈中度正相关(P均＜0.01)。结论实验性长期心理应激可损伤STZ鼠胰岛分泌胰岛素功能，并加重胰岛炎；局部氧自由基代谢障碍和NO产生过多可能是其机理之一。

长期实验性应激对老龄、青龄糖尿病倾向鼠血糖影响的比较及其机制

目的:比较长期实验性应激源对老龄、青龄糖尿病倾向鼠血糖和胰岛素分泌的不同影响并探讨其机制.方法:取1.5月龄(青龄)和15月龄(老龄)昆明小鼠各40只,用链脲佐菌素诱导糖尿病倾向后(STZ鼠),各分为应激组与对照组.两组应激STZ鼠均给予6周实验性应激源刺激(限制、旋转、拥挤),检测其空腹血糖(FBG)、空腹血浆胰岛素(FINS)、胰腺组织脂质过氧化物(LPO)和一氧化氮代谢产物(NO-2,NO-3)水平,观察胰腺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化,并对STZ鼠胰岛炎的严重程度进行评分.结果:经长期实验性应激的老龄STZ鼠FBG水平增高较青龄者显著,且FINS水平明显下降;胰岛炎恶化较青龄STZ鼠严重;胰腺组织LPO和NO-2,NO-3含量增高及SOD活性降低均较青龄STZ鼠明显;上述各指标间存在相关性.结论:长期实验性应激促使老龄STZ鼠血糖增高、胰岛炎加重和胰岛素分泌机能耗竭的效应较青龄STZ鼠明显;胰腺NO过量及过氧化损伤可能参与这一差异的产生机制.

脂质体与完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎探讨

目的:探讨完全弗氏佐剂(CFA)、不完全弗氏佐剂(IFA)、大复层脂质体(LML)、小单层阳离子脂质体(DOTAP)对NOD鼠胰岛炎和糖尿病发病的影响.方法:①将3周龄的NOD雌鼠随机分为3组,分别给予CFA后脚板注射(n=16),IFA和PBS乳化后腹腔注射(n=16),单独PBS后脚板注射(n=16).观察12周龄胰岛病理及30周龄糖尿病发病情况.②将3周龄的NOD雌鼠随机分为3组,分别给予大复层脂质体(LML)(n=13),小单层阳离子脂质体(DOTAP)(n=13),单独PBS腹腔注射(n=13),同上观察胰岛病理及糖尿病发病情况.结果:①CFA后脚板注射能明显降低胰岛炎计分,减少糖尿病的发生.30周龄时,CFA组的发病率明显低于PBS后脚板注射对照组(分别为9.2%和81.8%,P=0.001).12周龄时,CFA组胰岛炎计分明显低于对照组[分别为(0.05±0.02)和(0.54±0.11),P<0.001].②LML腹腔注射能明显降低胰岛炎计分.12周龄时,LML组胰岛炎计分明显低于PBS腹腔注射对照组[分别为(0.16±0.02)和(0.58±0.06),P<0.001].30周龄时,LML组糖尿病发生率为60%,对照组为90%,两组间无统计学差异.③在预防胰岛炎的作用上,CFA优于LML.结论:CFA后脚板注射可预防NOD鼠发生糖尿病并减轻胰岛炎的严重程度,其作用优于LML腹腔注射.LML能降低胰岛炎的严重程度,有可能成为一种预防NOD鼠糖尿病的新措施.

完全弗氏佐剂抑制NOD鼠胰岛β细胞凋亡及其机制

目的:探讨完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)对非肥胖糖尿病(nonobese diabetic,NOD)鼠胰岛β细胞凋亡及凋亡相关基因Fas,FasL和Bcl-x表达的影响.方法:将4周龄NOD雌鼠随机分为CFA组(n=5)和生理盐水(NS)对照组(n=5),给CFA组鼠后脚板注射50 μLCFA,对照者鼠后脚板注射等量NS.监测血糖,若血糖连续2 d≥11.1 mmol/L即诊断为糖尿病.当NOD鼠发生糖尿病或至30周龄时,处死动物,取胰腺组织制成薄切片,HE染色观察胰岛炎,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记(TUNEL)及ABC免疫组织化学双标记染色观察并计数凋亡的胰岛β细胞,ABC免疫组织化学法染色观察并记数Fas,FasL和Bcl-x表达阳性细胞.结果:至NOD鼠30周龄时,CFA处理组鼠无1只发生糖尿病,对照组鼠有3只发生糖尿病;CFA处理组的胰岛炎积分低于NS对照组(1.820±0.962 vs.3.020±1.040,P＜0.05);CFA处理组胰岛β细胞凋亡率、Fas阳性细胞率、FasL阳性细胞率均低于NS对照组[(10.2±2.8)%vs.(15.9±6.5)%,(54.9±14.5)%vs.(75.7±12.9)%,(20.3±10.4)%vs.(27.9±12.0)%,P＜0.05],Bcl-x阳性细胞率高于NS对照组[(74.9±10.7)%vs.(66.0±18.3)%,P＜0.05].结论:CFA能够减轻NOD鼠胰岛β细胞凋亡,其机制与减少促凋亡基因Fas和FasL表达及增加抑制凋亡基因Bcl-x表达有关.

单核细胞趋化蛋白-1在非肥胖糖尿病小鼠胰腺中的表达

目的通过观察单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1)在1型糖尿病动物模型NOD小鼠胰腺中的表达,探讨其在1型糖尿病胰岛炎发病机制中的作用.方法应用免疫组化SABC法和免疫电镜评价MCP-1在NOD小鼠和BALB/C小鼠胰腺中的表达,应用H&E染色光镜下评价胰岛免疫细胞浸润.结果免疫组化结果表明:NOD小鼠胰腺中MCP-1呈阳性表达,而对照组无MCP-1表达.免疫电镜进一步显示:MCP-1由胰岛β细胞产生并存在于细胞质中.结论MCP-1主要由胰岛β细胞产生.MCP-1通过招募单核/巨噬细胞浸润胰岛而在1型糖尿病发病机制中起重要作用.

暗香浮动,风雨欲来--中药防治糖尿病研究进展

广东佛山市中医院内分泌科魏爱生胰岛β细胞保护作用粉防己碱(汉防己甲素,Tetrandrine,Tet)被证实为一种钙通道阻滞剂和钙调蛋白拮抗剂,具有良好的抗高血压、心律失常、心肌缺血和炎症等作用,并具有一定的胰腺β细胞保护和降糖作用.国外学者用Tet 20mg/(kg@d)给糖尿病大鼠可明显降低糖尿病的累计发病率,胰岛炎的发生率也明显降低.

促炎性细胞因子在2型糖尿病胰岛β细胞功能缺陷中的作用

“胰岛炎”是1型糖尿病患者重要的组织病理学改变.然而,在2型糖尿病患者,胰岛也出现巨噬细胞浸润和产生促炎性细胞因子(pro-inflammatory cytokine),提示2型糖尿病患者也存在“胰岛炎”,这是可导致胰岛β细胞功能缺陷的原因.慢性高糖、游离脂肪酸(FFA)、瘦素和人胰岛淀粉样多肽(hIAPP)都可诱导胰岛促炎性细胞因子的产生;促炎性细胞因子来源于胰岛β细胞和/或巨噬细胞.促炎性细胞因子可通过内质网应激、氧化应激和线粒体功能失调引起胰岛β细胞功能缺陷和细胞凋亡.抗炎治疗可改善2型糖尿病患者和2型糖尿病动物模型胰岛β细胞功能和血糖控制.

西格列汀对NOD小鼠胰岛炎及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨西格列汀对NOD小鼠胰岛炎的改善作用与其作用机制.方法 将22只3月龄雌性NOD小鼠随机分为西格列汀组与对照组(n=11),西格列汀组每日给予磷酸西格列汀灌胃(30 mg/kg),对照组给予等体积生理盐水,连续处理12周,每周测量小鼠体质量、摄食量、饮水量和血糖值,第13周行腹腔糖耐量试验(IPGTT),ELISA检测血清胰岛素水平,HE染色观察胰岛形态及炎症细胞浸润情况,免疫印迹法(Western Blot)检测TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达水平.结果 西格列汀组小鼠血清胰岛素水平较对照组高(P<0.05),胰岛炎症细胞浸润状况显著改善(P<0.05),TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05).结论 西格列汀显著减轻NOD鼠胰岛炎症浸润情况、增加血清胰岛素水平,这可能与其抑制TLR4/NF-κB信号通路相关.

白介素-1β在2型糖尿病胰岛炎症中的研究进展

近年来,糖尿病的发病率逐年增高,目前我国糖尿病患病率达到9.6%,糖尿病患病总人数已经超过7千万,成为世界上糖尿病人口多的国家,其中2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)患者占全部糖尿病患者的95%.虽然目前对T2DM的发病机制的研究已比较深入,同时也取得了较多的进展,但在T2DM病理生理学的研究中,关于胰岛炎症反应的相关报道还比较少.胰岛炎(insulitis)的概念是在1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus, TlDM)的研究中首先被提出来.但随着研究的深入,越来越多的证据表明T2DM患者的胰岛也存着在炎性因子的表达.

过氧化物酶体增殖活化受体γ在吡格列酮预防非肥胖糖尿病小鼠胰岛炎中作用机制的探讨

目的 探讨吡格列酮预防非肥胖糖尿病(NOD)小鼠胰岛炎的机制及过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)的作用.方法 (1)4周龄NOD雌鼠随机分为吡格列(酮)组及对照组,分别摄食含0.02％吡格列酮的混合饲料和普通营养饲料.(2)各组取12周龄未发病NOD鼠胰腺组织HE染色观察胰岛炎情况; RT-PCR半定量检测脾脏IL-4、IFN-γ和核因子PPARγ mRNA表达水平；ELISA法测定脾脏核因子PPARγ活性.结果 (1)12周龄时胰岛炎积分吡格列酮组低于对照组(1.79±0.75 VS 2.38±0.66,P=0.043).(2)吡格列酮组脾脏IFN-γ mRNA相对吸光度值显著低于对照组(0.16±0.07 VS 0.53±0.26,P=0.017)；而PPARγ mRNA表述水平则高于对照组(0.91VS 0.25,P=0.016).(3)12用龄NOD鼠脾细胞吡格列(酮)组PPARγ活性高于对照组(0.05±0.01VS 0.02±0.01,P=0.006).结论 吡格列酮可通过活化PPARγ,下调IFN-γ mRNA的表达,使Th细胞向Th1方向分化减少,减轻NOD鼠胰岛炎.

Fas、FasL与胰岛素依赖型糖尿病

胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)是在一定遗传基础上,在多种环境因子(如病毒、细菌、药物等)触发下由T淋巴细胞介导的器官特异性的自身免疫性疾病.其特点表现为CD4+和CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞和树突状细胞浸润性胰岛炎,胰岛β细胞选择性损伤,致胰岛素分泌减少或缺乏,进而引起代谢失调.

LIGHT在自发I型糖尿病小鼠中表达的分析

目的：建立 I 型糖尿病 NOD 小鼠模型,探讨 LIGHT 在 I 型糖尿病模型 NOD 小鼠中的表达及意义。方法监测雌性NOD小鼠血糖、胰岛素水平；NOD小鼠分为4组,即未发病5周龄及11周龄组、发病1 w和2 w组。采用qRT-PCR、Western blot、免疫组化技术分析NOD小鼠胰腺组织LIGHT的mRNA、蛋白表达变化；ELISA法检测血清胰岛素、可溶性LIGHT及Th1细胞因子IFN-γ含量；HE染色检测胰岛炎,对胰岛炎评分,并对血清LIGHT含量与IFN-γ含量及胰岛炎积分进行相关性分析。结果糖尿病发病组NOD小鼠胰腺组织LIGHT基因的mRNA和蛋白表达及血清LIGHT浓度均明显高于未发病的5周龄组(P <0.05),血清中Th1细胞因子IFN-γ分泌显著增加。血清LIGHT含量与IFN-γ水平及胰岛炎积分呈明显正相关(r1=0.52,r2=0.87,P<0.01)。结论 LIGHT在NOD小鼠胰腺组织中的表达上调,可能影响Th1细胞因子IFN-γ的分泌及胰岛炎程度,血清LIGHT能反映I型糖尿病胰岛炎的严重程度。