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二甲基亚砜（DMSO）对人肝癌 HepG2细胞的诱导分化作用的实验研究
目的：探讨二甲基亚砜（DMSO）对人肝癌 HepG2细胞的诱导分化作用。方法：体外培养人肝癌HepG2细胞，用 DMSO 干预细胞，MTT 法检测药物对细胞增殖活力的影响；倒置相差显微镜和瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学的变化；放射免疫法检测细胞甲胎蛋白（AFP）和清蛋白（ALB）的分泌量；酶促反应试剂盒检测细胞中γ-谷胺酰转肽酶（γ- GT）、碱性磷酸酶（ALP）的活性。结果：用 DMSO 处理 HepG2细胞72h后，能显著抑制细胞的增殖（P ﹤0.05）；细胞的形态向成熟细胞分化；细胞 AFP 的分泌量和γ- GT 酶的活性明显降低，ALP 活性和 ALB 含量则显著升高（P ﹤0.05）。结论：DMSO 具有诱导人肝癌 HepG2向正常细胞分化的作用并抑制细胞增殖。
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右归丸诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经样细胞的研究
目的:探讨右归丸体外诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经样细胞.方法:密度梯度离心法结合贴壁培养法培养骨髓基质细胞,并利用右归丸诱导骨髓基质细胞分化为神经样细胞,设为空白对照组,右归丸组.结果:诱导7d后,与空白对照组相比较,右归丸组细胞显示为典型的神经细胞样形态,细胞NSE、Nestin和GFAP阳性率明显增高(P＜0.05).结论:右归丸可以体外诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经样细胞.
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黄芪注射液对人羊膜上皮细胞向神经细胞分化作用及存活的影响
目的:探讨黄芪注射液体外定向诱导人羊膜上皮细胞分化的作用和黄芪注射液对分化细胞活力影响.方法:将人羊膜上皮细胞分为三组,即黄芪诱导组(设立四个浓度亚组)、全反式维甲酸组和对照组.分别采用化学诱导剂和黄芪注射液诱导hAECs分化为神经细胞,在诱导前后,应用免疫细胞化学方法染色鉴定神经元特异性烯醇化酶、神经干细胞巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白.逆转录-聚合酶链反应进一步鉴定细胞多能基因Oct4、神经干细胞标记物Nestin基因和神经元标记物NSE,四甲基偶氮唑盐比色法观察细胞活力.结果:倒置显微镜下见,RA诱导12 h后,黄芪诱导24 h后,由胞体伸出较长的轴突样和树突样突起,且有分支,48h时100 μl/ml黄芪诱导组,NSE阳性率低于RA诱导组(P＜0.05),细胞活力较RA组高(P＜0.05),两诱导组结果均高于对照组,而GFAP阳性率高于RA组(P＜0.05),同时RT-PCR检测到诱导后多能基因Oct4表达减少,而Nestin、NSE表达增多.结论:黄芪和RA都可诱导人羊膜上皮细胞在体外分化为神经元样细胞,且黄芪于100 μl/ml浓度时效果较好,黄芪诱导后对细胞毒性较小.
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灌服中药补阳还五汤的大鼠血清促进胚胎神经上皮细胞存活与分化的研究
为了观察灌服中药补阳还五汤的大鼠血清对胚胎神经上皮细胞生长分化的影响,在给Wistar大鼠灌服中药后,麻醉后取血并分离血清;取孕11 d大鼠胚胎神经管上皮细胞,分别接种于含有补阳还五汤药物血清和对照鼠血清的培养基内,于培养后不同时间观察细胞的生长状况,测量细胞突起长度,并用免疫组化技术检测胚胎神经上皮细胞的分化状况.结果显示:药物血清组神经上皮细胞的生长明显优于对照组,细胞突起长度也大于对照组;免疫组化反应显示,药物血清组神经元及神经胶质细胞数量均多于对照组.结论:灌服补阳还五汤的鼠血清既可促进胚胎神经上皮细胞的生长也可诱导其分化.
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两种诱导骨髓间充质干细胞向GABA能神经元分化的比较
目的 比较两种体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向γ-氨基丁酸(GABA)能神经元分化的效果.方法 从SD大鼠股骨骨髓中分离出BMSCs,进行培养、鉴定.用两种不同的方法进行诱导,方法一设为对照组:碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、全反式维甲酸(ATRA)诱导；方法二设为实验组:ATRA、N5,O2'-二丁酰腺苷3'∶5'-环磷酸(Bt2环磷腺苷)(Bt2CAMP)诱导.对分化细胞进行形态学观察和免疫荧光染色.结果 两组细胞均出现类似神经细胞的形态变化,实验组细胞变化更明显.两组细胞均能表达nestin和GABA 能神经元标记GAD-67,对照组与实验组表达GAD-67的阳性率分别为33.13％±5.12％和41.06％±6.32％,两组相比较具有统计学意义(P＜0.05).结论 实验组定向分化为GABA能神经元的效率高于对照组.
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脂肪干细胞诱导神经干细胞分化的体外实验研究
目的 研究脂肪干细胞(ADSCs)体外诱导神经干细胞(NSCs)分化的作用.方法 从新生BALB/c小鼠中分别分离获得ADSCs及NSCs,进行体外培养和传代.构建ADSCs与NSCs共培养体系,以单纯NSCs组为对照,进行ADSCs诱导分化研究.共培养4、8、12 d后行神经元特异性神经丝200免疫组化鉴定,统计NSCs分化为神经元的百分率.结果 共培养后8～12 d,可见大量成熟神经元,大多为多极神经元,少部分为双极神经元或假单极神经元,带有较长的轴突.共培养组NSCs分化为神经元的百分率大约为21%,而单纯NSCs培养组约为4%.共培养组神经元的转化率与单纯NSCs培养组神经元的转化率之间有显著性差异(P＜0.05).结论 ADSCs在体外能够促进NSCs向神经元转化.
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兔骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经样细胞的实验研究
目的动态观察体外神经营养剂联合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)定向诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞的效果.方法将BMSCs分离体外扩增培养后,分别加入神经营养剂金路捷、三磷酸腺苷(ATP)、神经节苷脂(GM1)+bFGF诱导其分化.分别于6、24、48、72、96h后光镜下观察细胞形态变化并通过免疫组织化学测定特异性神经元稀醇化酶(NSE)、神经巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况.结果神经营养剂联合bFGF诱导6 h后出现胞体收缩,Nestin表达阳性,24 h后伸出突起,有不同程度NSE、GFAP表达,3 d后达高峰.结论神经营养剂联合bFGF能提高诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的诱导率.
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BMSC向神经干细胞诱导分化研究进展
骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)是指存在于骨髓间质中具有自我复制能力,不仅可分化为造血细胞,在特定条件下还可分化为非造血组织细胞.BMSC具有多向分化潜能和强大的增殖能力,遗传背景稳定,体内植入反应弱,易于分离扩增纯化,是一种较理想的组织工程种子细胞.近年来,国内外学者广泛开展了BMSC向神经干细胞诱导分化的研究,本文就BMSC向神经干细胞及神经细胞诱导分化的研究进展分述如下.
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异甘草素联合替莫唑胺对SHG44人脑胶质瘤干细胞增殖的影响
目的 探讨异甘草素联合替莫唑胺对SHG44人脑胶质瘤干细胞增殖的影响.方法 采用含无血清达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(DMEM/F12)(含表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、B27)的悬浮细胞培养板培养、纯化胶质瘤干细胞,并通过CD133联合Nestin标记进行免疫荧光鉴定;实验分为对照组[含二甲基亚砜(DMSO)]、异甘草素(5～160 μmol/L)组、替莫唑胺(12.5～200 μmol/L)组、异甘草素+替莫唑胺组(160 μmol/L+ 12.5～200 μmol/L),通过细胞增殖-毒性检测(CCK-8)法、流式细胞术、免疫荧光染色法分别检测细胞抑制率、细胞周期及干细胞表面相关分化蛋白表达情况.结果 异甘草素随着浓度增加细胞抑制作用越强,且160 μmol/L时抑制率达32％,替莫唑胺随着浓度增加抑制作用越强,且200μmol/L时抑制率达40％;异甘草素联合替莫唑胺组随着浓度增加抑制作用越强,且160 μmol/L +200 μmol/L时抑制率达72％;随着异甘草素浓度增加G0/G1期细胞比例增加,细胞周期阻滞于G0/G1期;随着异甘草素浓度增加干细胞分化越多,且分化细胞的死亡越多.结论 异甘草素能诱导SHG44人脑胶质瘤干细胞向星形胶质细胞和神经元细胞分化,且能抑制增殖,同时增强替莫唑胺化疗敏感性.
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脂肪干细胞在眼科的应用及研究进展
脂肪干细胞（ adipose-derived stem cells ， ADSCs ）是存在于脂肪组织的间充质干细胞，具有多向分化潜能，在特定的条件下可以分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞等中胚层细胞，甚至可以跨胚层分化为神经细胞等外胚层细胞及肝细胞等内胚层细胞。ADSCs还有易于获取、对取材区损伤小等众多优势，使其成为组织修复等领域的热点之一。本文对ADSCs的生物学特性及其在眼科领域的研究进行了分类总结，以期为 ADSCs在眼科的应用研究给予有益的提示。
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双室共培养中人羊膜上皮细胞诱导分化为腺泡细胞样细胞研究
目的:研究人羊膜上皮细胞(hAECs)体外诱导分化为唾液腺腺泡细胞样细胞的可能性.方法:分离hAECs并体外培养、鉴定.与8d龄SD大鼠下颌下腺细胞(SMGCs)在双室共培养系统中共培养.免疫细胞化学、实时荧光定量RT PCR等方法检测α-淀粉酶及其mRNA的表达.结果:双室共培养1、2周,hAECs中α-淀粉酶mRNA的表达量分别为共培养前的3.38倍及6.6倍.结论:hAECs具有向唾液腺腺泡细胞样细胞分化的能力.
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人牙周炎症组织中干(祖)细胞的分离培养及初步鉴定
目的:体外分离纯化人牙周炎症组织来源的干(祖)细胞,研究其生物学特性、表面标记物及多向分化能力.方法:用组织块消化法对人牙周炎症组织进行原代培养,经有限稀释法纯化细胞并连续培养,测定其生长曲线和克隆形成率,用免疫荧光化学染色检测细胞表面波形丝蛋白、STRO-1和CD146的表达,并对其进行成骨和成脂诱导,观察其分化能力.结果:从人牙周炎症组织中可提取出干(祖)细胞,该细胞具有较高克隆形成能力,波形丝蛋白、STRO-1、CD146表达阳性,具有成骨、成脂多向分化能力.结论:人牙周炎症组织中存在干(祖)细胞,为牙周组织工程种子细胞提供了新的可能来源.
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人牙周膜干细胞矿化诱导分化的实验研究
目的:体外分离纯化人牙周膜干细胞,研究其体外矿化能力,为牙周组织工程提供可靠的种子细胞来源. 方法:采用有限稀释法克隆分离纯化人牙周膜干细胞,将获得的第5代细胞用矿化液连续培养,观察矿化情况,进行矿化结节Von kossa染色;通过免疫组织化学染色技术检测诱导后细胞骨黏连素(ON)、骨桥蛋白(BSP)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)、Ⅲ型胶原(COLⅢ)的表达. 结果:人牙周膜细胞在体外可以叠层生长,形成肉眼可见的灰白色结节,Von kossa染色显示结节内有钙盐沉积,该细胞诱导21 d后有矿化相关蛋白COLⅠ、COLⅢ,BSP、ON的阳性表达.结论:人牙周膜干细胞在体外矿化液作用下出现向成骨细胞的分化.
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Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞向成骨细胞诱导分化的体外研究
目的:探讨矿化液体外诱导外胚间充质细胞向成骨细胞分化的过程.方法:取妊娠12.5 d胎鼠第三代下颌突外胚间充质细胞,培养于含10 mmol/L β-甘油磷酸钠、100μg/mL维生素C、10 nmol/L地塞米松、150 mL/L胎牛血清的DMEM中.相差显微镜下观察细胞的形态变化,免疫组化鉴定细胞性质,碱性磷酸酶染色及活性检测,矿化结节Von Kossa染色.结果:培养14 d,细胞形态发生明显变化,呈多边形、立方形,抗Ⅰ型胶原染色阳性.碱性磷酸酶活性增高,碱性磷酸酶染色阳性,矿化结节形成.结论:矿化液可诱导外胚间充质细胞向成骨细胞分化.
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Forskolin体外诱导Balb/c小鼠下颌外胚间充质细胞向神经胶质细胞分化
目的:探讨forskolin诱导小鼠下颌外胚间充质细胞向神经胶质细胞的分化过程.方法:取妊娠12.5 d胎鼠第3代下颌外胚间充质细胞,分别在含5、25、50 μmol/L forskolin的DMEM/F12培养基中培养.相差显微镜下观察细胞的形态变化,免疫组化鉴定细胞性质.结果:培养2 d,细胞形态及排列发生明显变化,呈两突的长梭形;胞体中有空泡样改变,随时间的增加而明显.变化以25 μmol/L组较明显.免疫组化鉴定:抗神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及S-100染色阳性;NSE及NF染色阴性.结论:forskolin可诱导外胚间充质细胞向神经胶质细胞分化.
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TGF-β、rhBMP-2体外诱导下颌突外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化
目的:探讨TGFβ、rhBMP-2体外诱导外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化的能力.方法:取妊娠12.5 d胎鼠第三代下颌突外胚间充质细胞,分别在含60、100 mmol/L的TGF-β和1.6、3.2 mmol/L的rhBMP-2的DMEM/F12中培养.相差显微镜下观察细胞的形态变化,免疫组化鉴定细胞性质. 结果:培养2 d,60 pmol/L 的TGF-β组细胞形态发生明显变化,细胞变得大而扁平,培养4 d,免疫组化鉴定约70%的细胞分化为平滑肌细胞.rhBMP-2组细胞形态未见明显改变,1.6 nmol/L组免疫组化鉴定约5%的细胞分化为平滑肌细胞,未能诱导分化出神经元细胞.未加LIF的对照组细胞出现向平滑肌细胞的自然分化.结论:TGFβ、rhBMP-2可诱导外胚间充质细胞向平滑肌细胞分化.
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砷剂治疗恶性肿瘤的临床探讨
继化学药物治疗恶性血液病和肿瘤50年以后,近年来出现了诱导分化及诱导凋亡疗法,有专家报告,砷剂药理作用主要是选择性原浆毒作用.其主要成分三氧化二砷(砒霜,As2O3)可诱导CML细胞株(K562)、MM细胞株(KM3)呈凋亡特征[1].我国学者将砷剂制成注射剂静脉滴注治疗急性早幼粒细胞白血病(APL),获得了较高的安全缓解率,且副作用小,与常用全反式维甲酸无交叉耐药性.
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阶段性胚胎抗原-1,OCT-4,颗粒酶B在脂肪成体干细胞中的表达
目的:探索脂肪成体干细胞中是否表达胚胎时期标志蛋白SSEA-1,OCT-4,GRB.方法:先将C57小鼠脂肪用Ⅰ型胶原酶消化,然后采用直接贴壁法,培养获得的细胞.取第3代生长状态稳定、形态均一的细胞进行成脂、成骨诱导分化,同时观察所培养的第3代细胞表达胚胎时期标志蛋白SSEA-1,OCT-4,GRB的情况.结果:通过该培养方法,可以获得稳定的细胞群体,并能成功进行成骨、成脂诱导分化;免疫荧光化学检测显示三种胚胎时期出现的特殊蛋白均有不同程度的表达.结论:脂肪来源的成体干细胞中表达胚胎时期的产物,这种特性可能与干细胞的多向分化特性有关系.
关键词： 脂肪成体干细胞 诱导分化 阶段性胚胎抗原-1 胚胎干细胞关键蛋白-4 颗粒酶B -
血管紧张素Ⅱ对成人脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化的影响
目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对成人脂肪间充质干细胞(ADMSCs)向心肌细胞方向分化的诱导作用,并与5-氮杂胞苷(5-aza)作比较.方法:自成人脂肪组织中分离培养ADMSCs,分别用Ang Ⅱ(Ⅰ组)和5-aza(Ⅱ组)诱导ADM-SCs,同时设立对照组(Ⅲ组),光镜下观察细胞的生长情况及形态学变化,电镜下观察细胞的超微结构,免疫细胞化学方法检测心肌特异性肌钙蛋白-Ⅰ(cTn-Ⅰ),MTT法检测细胞活性,流式细胞术分析细胞周期及凋亡.结果:Ⅰ,Ⅱ组ADM-SCs诱导后呈现类似心肌细胞的形态学特征,第28日Ⅰ,Ⅱ组均表达cTn-Ⅰ,两组间诱导转化率无差别,其中Ⅰ组ADM-SCs增殖迅速,较少凋亡细胞.结论:AngⅡ在促进ADMSCs增殖的同时诱导其向心肌细胞分化,优于传统的化学诱导剂5-aza.
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骨髓间充质干细胞体外诱导分化与标记
目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)在体外的诱导分化及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记MSCs的可行性. 方法:利用密度为1.073 kg/L的percoll分离骨髓的单个核细胞,体外培养与扩增MSCs;取生长良好的第3代细胞,用成骨细胞分化培养液培养21 d,Ⅰ型胶原免疫组化染色和碱性磷酸酶(AKP)组化染色;分别以浓度为5,10和15 μmol/L的Brdu溶液标记MSCs,孵育12,24,48,72和96 h后免疫组化检测Brdu,确定佳标记量和佳标记时间. 结果:诱导分化第21日, AKP染色呈强阳色,Ⅰ型胶原免疫染色呈阳性. 10 μmol/L Brdu标记MSCs的效果好,随着孵育时间的延长,Brdu标记率逐渐增高,标记72 h后标记率在90%以上. 结论:MSCs在体外一定条件下可定向诱导分化为成骨细胞,用Brdu标记MSCs的佳浓度为10 μmol/L,佳时间是72 h.
关键词： 骨髓间充质干细胞 诱导分化 成骨细胞 5-溴脱氧尿嘧啶核苷
