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慢病毒介导的人Bax基因和人肝细胞生长因子基因在小鼠胚胎成纤维细胞中的共表达
目的 构建绿色荧光蛋白标记的人Bax基因(hBax)和人肝细胞生长因子基因(hHGF)双基因共表达的重组慢病毒.证实已包装成功的慢病毒能感染正常细胞并表达目的 蛋白.方法 通过重叠PCR技术构建attB1-K-hBAX/T2A/eGFP/P2A/hHGF-attB2基因片段,利用gateway technology构建慢病毒载体质粒pLV.EX2d.null-EF1A>hBAX/T2A/eGFP/P2A/hHGF和阴性对照质粒pLV.EX2d.null-EF1A>eGFP并测序,上述两种质粒分别与辅助质粒共转染293FT细胞包装病毒,荧光显微镜检测病毒滴度.实验分为实验组(感染了共表达Bax和HGF的慢病毒)、阴性对照组(仅感染了表达绿色荧光的慢病毒)和空白组(未作任何处理的正常NIH3T3细胞)三组,RT-PCR和Western blot检测染毒后各组细胞Bax和HGF的表达.结果经鉴定慢病毒载体质粒构建正确,荧光显微镜检测hBax和hHGF共表达慢病毒滴度为7.8×107 TU/ml,仅表达绿色荧光蛋白的阴性病毒滴度为9×107 TU/ml.将包装成功的慢病毒感染NIH3T3细胞48 h后,RT-PCR和Western blot结果显示实验组与其他两组相比,Bax和HGF的表达明显上调(P<0.05).结论 标记增强型绿色荧光蛋白的表达hBax和hHGF双基因慢病毒构建成功并获得高滴度的病毒感染液.通过慢病毒感染途径成功将HGF和Bax基因导入NIH3T3细胞并表达蛋白,为进一步研究Bax和HGF双基因共表达的重组慢病毒对血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞的影响奠定了基础.
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凋亡相关因子TNF-α、Bcl-2及Bax 在脓毒症大鼠肺组织的表达
目的 观察脓毒症模型大鼠肺组织中凋亡相关因子的表达情况.方法 30 只雌性SD 大鼠随机分为脓毒症模型组(n =20)及正常对照组(n =10).以经典盲肠结扎穿孔法(CLP)成功制作脓毒症大鼠模型.分别在造模后3 h 及12 h 处死大鼠,石蜡切片HE 染色光镜观察各时间点肺组织的病理变化;取血清ELISA 法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达水平;免疫组织化学染色法检测造模12 h Bcl-2 及Bax 蛋白在大鼠肺组织的表达情况,并计算两种蛋白的累积吸光度值.结果 模型组大鼠在造模后3 h 开始出现脓毒症的相关表现;3 h 及12 h 肺组织石蜡切片HE 染色可见肺组织炎症反应明显,肺血管充血,肺泡萎陷,炎细胞渗出,并随着观察时间延长有加重趋势.对照组与模型组血清(3 h 及12 h)TNF-α平均吸光度值分别为0.2510 ±0.0038、0.7392 ±0.0526 及0.4203 ±0.0256;对照组与模型组2 个观察时间点的TNF-α的平均吸光度值差异均有统计学意义(P =0.000; P =0.000),模型组在2 个观察时间点的TNF-α的平均吸光度值差异有统计学意义(P =0.000).免疫组化结果可见Bcl-2 蛋白及Bax 蛋白在对照组及模型组12 h 均有表达,但Bcl-2 表达在对照组高于模型组(P =0.002),而Bax 表达在对照组低于模型组(P =0.012).结论 细胞凋亡可能在脓毒症肺组织损伤中发挥重要作用.
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电针下调脑梗死大鼠皮质缺血半影区Bax蛋白质表达
目的 观察电针对脑缺血大鼠额叶皮质缺血半影区Bax蛋白质表达的影响,为揭示电针治疗脑缺血的机制提供实验依据.方法 雄性SD大鼠线栓大脑中动脉建立脑缺血动物模型,随机分为非电针组和电针组.用免疫组织化学的方法显示大鼠额叶皮质缺血半影区内Bax阳性细胞,观察形态和分布,并计算阳性细胞数目;用Western-blot方法检测非电针组和电针组大鼠额叶皮质缺血半影区Bax蛋白质表达量.将非电针组和电针组大鼠的同类指标与假手术组和正常对照组的同类指标比较,寻找组间差异.结果 (1)免疫组织化学方法在对照组大鼠额叶皮质未显示出Bax免疫阳性细胞,在假手术组大鼠额叶皮质内也未见Bax免疫阳性细胞;非电针组大鼠额叶皮质缺血半影区于缺血6 h即见圆形、椭圆形和梭形的Bax免疫阳性细胞,免疫阳性产物分布充满细胞质.电针组大鼠额叶皮质缺血半影区内Bax免疫阳性细胞在形态和分布上与非电针组未见明显组间差异.电针组的阳性细胞的数量比非电针组的明显减少,差异有统计学意义(P<0.01).(2)Western-blot方法在对照组和假手术组大鼠额叶皮质内均未检出Bax蛋白质表达.电针组大鼠额叶皮质缺血半影区Bax蛋白质表达比非电针组的明显减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 2 Hz频率电针刺激曲池和足三里穴位,可以下调脑梗死大鼠额叶皮质缺血半影区Bax蛋白质表达,参与脑缺血性神经元凋亡的病理过程.
关键词： 电针 脑梗死 bcl-2相关X蛋白质 大鼠 Sprague-Dawley -
沉默HCCR-2基因对胰腺癌细胞Bcl-2和Bax表达及细胞增殖与凋亡的影响
目的 利用反义寡核苷酸(ASODN)干扰技术探讨人宫颈癌癌基因-2(HCCR-2)对人胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制.方法经脂质体介导将HCCR-2 ASODN转染人胰腺癌细胞株PANC-1,荧光显微镜观察细胞内荧光信号,流式细胞仪检测细胞转染效率及凋亡率;噻唑盐(MTT)比色法检测转染细胞的增殖活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测转染细胞HCCR-2、Bcl-2、Bax mRNA与蛋白表达.结果 HCCR-2 ASODN转染PANC-1细胞的转染效率为85.04%.反义组、无义组和单加培养液组细胞凋亡率分别为(24.04±2.38)%、(2.44±0.13)%、(2.54±0.21)%,反义组较其他组细胞凋亡显著增加(P<0.01);相应的各组细胞增殖活性分别为2.38±1.03、3.78±1.69、3.72±1.54,反义组细胞增殖较其他组显著被抑制(P<0.01).反义组、无义组和单加培养液组细胞HCCR-2 mRNA表达量分别为0.29±0.16、0.55±0.31、0.57±0.33;Bcl-2 mRNA表达量分别为0.31±0.14、0.63±0.28、0.62±0.35;Bax mRNA表达量分别为0.68±0.36、0.24±0.09、0.23±0.12;HCCR-2蛋白表达量分别为0.47±0.28、0.93±0.48、0.95±0.42;Bcl-2蛋白表达量分别为0.35±0.19、0.82±0.51、0.81±0.45;Bax蛋白表达量分别为0.91±0.42、0.42±0.21、0.39±0.20,较其他组,反义组细胞HCCR-2、Bcl-2 mRNA及蛋白表达量显著降低(P<0.01),而Bax mRNA及蛋白表达量显著增加(P<0.01).结论 下调PANC-1细胞HCCR-2表达后,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡增加,其作用机制与Bcl-2表达降低而Bax表达升高有关.
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CD36介导高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡
目的：研究大鼠肾小球系膜细胞是否表达 CD36抗原，并探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的影响及其与系膜细胞凋亡的关系。方法将培养的细胞分为对照组（C组，普通培养基，含5.6 mmol/L葡萄糖），甘露醇组[M组，24.2 mmol/L甘露醇＋普通培养基（含5.6 mmol/L葡萄糖）]，高糖组（H组，30 mmol/L高糖MEM培养基）、CD36受体封闭高糖组（A组，30 mmol/L高糖MEM培养基＋anti-CD36）。用RT-PCR和Western blotting法检测肾小球系膜细胞CD36及凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白的表达。流式AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果大鼠肾小球系膜细胞表达CD36抗原，其中高糖组在24 h CD36mRNA表达水平高；对照组（C）与甘露醇组（M）早晚期凋亡率、CD36抗原、促凋亡基因Bax及抑凋亡基因Bcl-2 mRNA及蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）；高糖组肾小球系膜细胞早晚期凋亡率、CD36抗原和促凋亡基因 Bax mRNA 及蛋白表达显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），而抑凋亡基因Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；CD36受体封闭高糖组CD36 mRNA及蛋白的表达与高糖组相比差异无统计学意义（P＞0.05），肾小球系膜细胞早晚期凋亡率、促凋亡基因Bax mRNA及蛋白表达显著低于高糖组，差异有统计学意义（P＜0.05），抑凋亡基因Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著高于高糖组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论肾小球系膜细胞表达CD36抗原，且高糖可以诱导CD36的表达，CD36抗原参与诱导肾小球系膜细胞的凋亡。
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消旋-3-正丁基苯酞对帕金森病大鼠脑组织Bax、Caspase-8和TH表达的影响
目的：观察消旋-3-正丁基苯酞（丁苯酞）对帕金森病（PD）模型鼠黑质Bax、Caspase-8、TH表达的影响，进一步明确丁苯酞对PD模型鼠脑保护作用及其机制。方法90只SD大鼠随机分为三组，模型PD对照组30只：采用立体定向注入6-羟多巴法造模；消旋-3-正丁基苯酞组30只：立体定向注入6-羟多巴，对模型鼠进行丁苯酞灌胃4周；正常对照组30只：立体定向注入抗坏血酸生理盐水。各组动物处死后行脑组织快速冰冻切片并采用免疫组化法分别检测黑质的Bax、Caspase-8、TH阳性细胞数，用原位杂交法分别检测Bax mRNA、Caspase-8 mRNA、TH mRNA的阳性细胞数。结果 NBP组免疫组化法分别检测黑质的Bax、Caspase-8、TH阳性细胞数分别为35.1±6.4，21.4±5.7，95.8±9.4；原位杂交法分别检测Bax mRNA、Caspase-8 mRNA、TH mRNA的阳性细胞数分别为23.7±6.3，16.9±7.3，48.8±7.5。与PD组相比，消旋-3-正丁基苯酞组免疫组化和原位杂交均显示术侧黑质Bax、Caspase-8阳性神经元数量较PD组均明显降低。而TH阳性神经元数量较PD组明显增多。结论正丁苯酞对PD模型鼠脑有保护作用且可能与降低Bax、Caspase-8的表达，增加TH的表达有关。
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浅蓝菌素对人胰腺癌细胞株BXPC-3的影响及机制
目的：研究脂肪酸合酶（FAS）抑制剂浅蓝菌素（Cer）对胰腺癌BXPC-3细胞体外生长和凋亡的影响，并初步探讨可能的作用机制。方法采用不同浓度（0、2.5、5、10、20、40μg/ml）Cer 处理BXPC-3，细胞增殖与毒性检测法（CCK8）检测OD值，计算对照组和各实验组的抑制率，并计算Cer IC50；取Cer浓度为0、5、10、20μg/ml处理BXPC-3细胞后进行流式细胞术及AnnexinⅤ/PI早期凋亡检测细胞凋亡率和细胞周期的变化；反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测FAS mRNA、Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达水平的变化；免疫印迹法（Western blot）检测细胞凋亡因子Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果（1）Cer可明显抑制BXPC-3细胞的生长，并随着浓度的增加和作用时间的延长而明显增强（P＜0.05）。（2）BXPC-3细胞经Cer作用48 h后，细胞周期S期比例上升，G2期细胞比例下降（P＜0.05）。细胞有明显凋亡，以早期凋亡为主。（3）BXPC-3细胞经Cer作用48 h后，FAS mRNA、Bcl-2 mRNA的表达呈浓度依赖性下降，Bax mRNA呈浓度依赖性上升，各浓度组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。（4）Cer作用于BXPC-3细胞48 h可使细胞中的Bcl-2蛋白表达下降，Bax蛋白表达升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 Cer 以时间、浓度依赖方式抑制胰腺癌 BXPC-3细胞的生长，其机制可能与调控细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关。
关键词： 胰腺肿瘤 变蓝菌素 bcl-2相关X蛋白质 Bcl-2 -
丹参酮Ⅱa 磺酸钠注射液抗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的作用及机制研究
目的：观察丹参酮Ⅱa磺酸钠的抗肝纤维化作用。方法将48只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量给药组、高剂量给药组。通过50% CCl4/花生油溶液（1 ml/kg）灌胃诱导建立肝纤维化模型。低剂量组在建模同时每天腹腔注射丹参Ⅱa 磺酸钠注射液5 ml/kg，高剂量组在建模同时每天腹腔注射丹参Ⅱa磺酸钠注射液15 ml/kg。6周后观察大鼠肝脏大体形态、肝脏重量/体重比；运用HE和Masson染色检测肝纤维化的变化；全自动生化分析仪检测大鼠血清总胆红素（TBIL）、谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）的含量；Western blot检测肝脏组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果与模型组相比，丹参酮Ⅱa磺酸钠能够改善肝纤维化大鼠肝脏病理组织学结构，降低血清中TBIL、ALT、AST表达（P＜0.01）。与模型组相比，丹参酮Ⅱa磺酸钠给药组上调大鼠肝脏组织中Bcl-2蛋白的表达，下调Bax蛋白表达（P＜0.01）。结论丹参酮Ⅱa磺酸钠可能是通过调节Bcl-2和Bax蛋白的表达发挥抗肝纤维化的作用。
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赛来昔布联合热疗治疗胰腺癌的研究
目的 研究选择性环氧合酶-2抑制剂赛来昔布联合热疗对人胰腺癌生长的抑制作用.方法 分别应用热疗、赛来昔布(100 μmol/L)及两者联合处理胰腺癌SW1990细胞,MTF法检测细胞增殖,流式细胞仪法检测细胞凋亡.建立裸鼠胰腺癌移植瘤模型,分别给予热疗、赛来昔布及两者联合应用,观察移植瘤的生长、病理改变,RT-PCR检测bcl-2及bax mRNA的表达.结果 热疗、赛来昔布及联合组SW1990细胞存活率分别为(56.63±5.78)%、(44.55±4.76)%和(21.83±2.33)%;细胞凋亡比例分别为11.78%、17.33%和33.32%;抑瘤率分别为81.3%、93.0%、99.7%,各组间差异均非常显著(P＜0.01).以联合组的治疗效果明显.各组瘤组织bax mRNA表达上调,以联合组上调明显,各组间差异显著(P＜0.05);bcl-2表达无变化.结论 赛来昔布、热疗在体内外实验中均对胰腺癌治疗有效,两者联合应用具有协同效应.其机制可能是通过上调bax的表达而诱导胰腺癌细胞凋亡.
关键词： 胰腺肿瘤 环氧化酶2抑制剂 高温 诱发 bcl-2相关X蛋白质 -
加贝酯预防急性胰腺炎的作用机制研究
目的 通过观察加贝酯对胰腺细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响,探讨加贝酯预防大鼠胰管注射法诱导的急性胰腺炎(AP)的相关机制.方法 16只SD大鼠随机分为假手术组(4只)、AP组和加贝酯治疗组(各6只).以50 mmHg(1 mmHg = 0.133 kPa)的恒压向胰胆管内注入30%泛影葡胺诱导SD大鼠AP模型,制模前15 ～ 20 min加贝酯(4 mg·h-1·kg-1体重)静脉持续滴注60 min进行预防.组织病理检查观察胰腺炎症程度,应用TUNEL染色、免疫组化检测胰腺细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 加贝酯治疗组的胰腺组织病理改变较AP组减轻(P ＜ 0.05).治疗组凋亡指数(AI)、Bax和Bcl-2表达值分别为8.00 ± 1.80,10.12 ± 1.52和1.83 ± 0.39,前两者较AP组显著增高,而Bcl-2蛋白无显著差别.治疗组AI、Bax表达与胰腺的炎症程度呈负相关.结论 加贝酯静脉滴注对大鼠胰管注射法诱导的AP有一定的预防作用.其机制可能与促进细胞凋亡和Bax蛋白表达上调有关.
关键词： 胰腺炎 加贝酯 Bcl-2 bcl-2相关X蛋白质 -
丁基苯酞对血管性痴呆大鼠记忆及海马Bcl-2、Bax的影响
目的 研究丁基苯酞(NBP)对血管性痴呆(VD)大鼠记忆、海马病理变化及抗凋亡蛋白(Bcl-2)和促凋亡蛋白(Bax)蛋白表达的影响.方法 采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制备VD大鼠模型.SD大鼠被随机分成假手术组、VD模型组、NBP治疗组、尼莫地平治疗组.应用Morris水迷宫检测大鼠记忆能力,苏术精-伊红(HE)染色观察海马神经元形态,免疫组化检测海马Bcl-2和Bax的表达.结果 VD模型组与假手术组大鼠比较记忆能力显著下降,逃避潜伏期分别为(78.79±21.93) s与(16.96±7.44) s (P＜0.05),海马神经元病理改变严重,免疫阳性细胞数量显著增加,其中Bax变化更为显著 (43.00±6.72与6.00±1.29,P＜0.05),Bcl-2与Bax的比值较对照组明显降低;NBP治疗组与模型组比较记忆能力显著改善,逃避潜伏期分别为(47.13±21.75) s与(78.79±21.93) s (P＜0.05),海马神经元病理形态明显改善,Bcl-2免疫阳性细胞数显著增多(33.14±8.05与21.81±4.97,P＜0.05),Bax免疫阳性细胞数显著减少(32.93±4.99与43.00±6.72,P＜0.05).NBP治疗组与尼莫地平治疗组之间比较,各项指标均无显著差异 (P＞0.05).结论 NBP能改善VD大鼠记忆能力,抑制海马细胞凋亡,对VD大鼠有一定的治疗作用.
关键词： 痴呆 血管性 海马 bcl-2相关X蛋白质 -
凋亡相关基因Bax和bcl-2在骨关节炎软骨中的作用
目的 探讨原发性骨关节炎与继发性骨关节炎发病机制的异同.方法 收集原发性骨关节炎、继发性骨关节炎的关节软骨各8例,并以9例正常关节软骨作对照,采用RT-PCR和免疫组化方法分别检测Bax和bcl-2的mRNA和蛋白的表达,应用细胞核荧光染色的方法进行软骨细胞凋亡的检测.结果 1.原发性骨关节炎组Bax mRNA表达明显升高,与继发组、对照组差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.01),而继发性骨关节炎组Bax mRNA的表达与对照组之间的差异没有统计学意义(P＞0.05);bcl-2 mRNA在两类骨关节炎中的表达较对照组均升高(P＜0.01,P＜0.05),而两组间差异没有统计学意义(P＞0.05).2.免疫组化发现两类骨关节炎中Bax、bcl-2蛋白表达水平与其mRNA表达相一致.3.原发性骨关节炎组、继发性骨关节炎组和正常对照组细胞凋亡率分别为10%～20%,8%～13%,2%～5%.原发性骨关节炎组细胞凋亡比例高.结论 软骨细胞凋亡是骨关节炎发病的重要原因,受Bax和bcl-2的共同调节;Bax表达水平的升高可能是原发性骨关节炎发病的重要原因.
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白细胞介素11调控大鼠 NEC 肠道增殖与凋亡的分子机制研究
目的：研究白细胞介素11（IL-11）调控大鼠坏死性小肠结肠炎（NEC）肠道增殖与凋亡的分子机制研究。方法实验分为正常对照组、NEC组和IL-11治疗组。1．细胞凋亡（ TUNEL）法检测IL-11对大鼠肠上皮细胞凋亡的影响。2．免疫组织化学法检测IL-11对Bax、Bcl-2和增殖细胞核抗原（ PCNA）表达变化的影响。数据采用SPSS 13．0软件统计分析。细胞凋亡表达变化和病理图像分析MOD值的变化以均数±标准差（ x珋±s）表示，One-Way-ANOVA方差分析， P＜0．01表示差异有统计学意义。结果1．细胞凋亡变化：正常对照组肠上皮细胞核为弱阳性；NEC组绝大部分细胞核呈棕色，为强阳性；IL-11治疗组大部分呈棕色，呈阳性。定量分析表明NEC时肠上皮细胞凋亡显著增加， IL-11能显著减少凋亡。2．免疫组织化学法定量：NEC时肠上皮细胞Bax表达增加，Bcl-2、PCNA表达下降，表明IL-11能显著下调 Bax，上调 PCNA、Bcl-2的表达，差异均有统计学意义（ P ＜0．01）。结论肠上皮细胞凋亡在NEC显著增加，外源性IL-11能显著减轻肠道损伤，促进修复。其机制与IL-11下调Bax，上调Bcl-2、PCNA的表达有关。
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白细胞介素11在 IEC-6细胞损伤时的抗凋亡机制研究
目的：研究白细胞介素11（ IL-11）在正常大鼠空肠上皮细胞（ IEC-6）损伤时的抗凋亡机制。方法通过脂多糖（LPS）作用于IEC-6，建立了坏死性小肠结肠炎体外模型，加入外源性IL-11，建立IL-11治疗模型。采用免疫印迹方法研究IL-11对大鼠肠道上皮细胞磷酸化STAT3、Bax及Bcl-2蛋白含量的表达变化影响。数据以均数±标准差（x珋±s）表示，采取one-Way-ANOVA方差分析，用SPSS 11．0统计软件进行分析，P＜0．01差异有统计学意义。结果定量分析结果表明，LPS致IEC-6细胞损伤时， Bax表达增强，IL-11处理可抑制Bax的表达。 P-STAT3及Bcl--2蛋白含量在LPS致IEC-6细胞损伤时表达显著减少，IL-11处理可上调上述两种蛋白的表达。结论 LPS致IEC-6细胞损伤时，外源性IL-11可能激活Jak／STAT信号通路中关键分子STAT3，继而上调Bcl-2，下调Bax发挥抗凋亡作用。
关键词： 白细胞介素-11 小肠结肠炎 坏死性 STAT3 转录因子 bcl-2相关X蛋白质 基因 bcl-2 -
bcl-2、bax和ER蛋白在子宫腺肌病患者病灶中的表达变化及意义
目的 探讨细胞凋亡抑制因子bcl-2、细胞凋亡促进因子bax、ER蛋白在子宫肌层不同浸润深度的子宫腺肌病(腺肌病)病灶腺上皮细胞中的表达变化及意义.方法 选择2009年9月至2010年9月在北京安贞医院住院手术,并经病理检查证实为腺肌病的患者36例(合并盆腔内异症、卵巢子宫内膜异位囊肿者除外)为腺肌病组,采用免疫组化SP法,检测其子宫浅肌层(肌层浸润深度＜ 1/2)和深肌层(肌层浸润深度≥1/2)异位内膜、在位子宫内膜组织及同期因卵巢浆液性囊腺瘤、卵巢冠囊肿、子宫中隔以及盆腔器官脱垂行手术治疗的30例患者(对照组)的正常子宫内膜组织中bcl-2、bax、ER蛋白的表达情况及其相关性.结果 (1)ER蛋白的表达:腺肌病组浅肌层和深肌层异位内膜中ER蛋白表达水平(5.04±0.24、4.91±0.16)低于在位内膜(6.06±0.36),差异有统计学意义(P＜0.01),但高于对照组子宫内膜的3.70 ±0.58,差异也有统计学意义(P＜0.05)；但腺肌病组深、浅肌层异位内膜中ER蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)bcl-2蛋白的表达:腺肌病组bcl-2蛋白表达水平在浅肌层异位内膜中为5.6±0.4,深肌层异位内膜中为6.0±0.3,均高于在位内膜的3.6±0.4和对照组子宫内膜的1.9±0.4,差异均有统计学意义(P＜0.01).(3)bax蛋白的表达:腺肌病组bax蛋白的表达水平在浅肌层异位内膜中为3.50±0.28,深肌层异位内膜中为4.80±0.29,在位内膜为4.43±0.37,均低于对照组子宫内膜的6.18 ±0.65,差异有统计学意义(P＜0.05),浅肌层异位内膜中bax蛋白的表达水平低于深肌层异位内膜,差异也有统计学意义(P＜0.01).(4)ER与bcl-2、bax蛋白表达的相关性:腺肌病组浅肌层异位内膜中ER蛋白与bcl-2蛋白表达水平呈正相关(r =0.720,P＜0.01),与bax蛋白表达水平无相关性(r=0.008,P＞0.05),但在深肌层异位内膜中ER蛋白与bcl-2、bax蛋白表达水平均无明显相关性(r=0.089、-0.023,P＞0.05).腺肌病组异位内膜bax蛋白表达水平与肌层浸润深度呈正相关(r=0.736,P＜0.01).对照组子宫内膜ER蛋白与bcl-2蛋白表达水平呈正相关(r=0.453,P＜0.05),与bax蛋白表达水平呈负相关(r=-0.514,P=0.05).结论 腺肌病患者随着异位内膜肌层浸润深度的增加,促凋亡因子bax蛋白表达水平增加.
关键词： 子宫内膜异位症 bcl-2相关X蛋白质 受体 雌激素 细胞凋亡 -
西酞普兰对慢性应激大鼠海马CA1和CA3区神经细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2及Bcl相关蛋白表达与凋亡的影响
目的 探讨西酞普兰对慢性应激大鼠海马CA1、CA3神经细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl相关蛋白(Bax)表达和凋亡的影响.方法 40只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、应激组(生理盐水灌胃)、处理1～3组[分别以不同剂量(1 mg·kg-1·d-1、4 nag·kg-1·d-1、8 mg·kg-1·d-1)氢溴酸西酞普兰灌胃],每组8只.采用强迫游泳制造慢性应激模型,用大鼠悬尾实验、力竭实验进行行为学观察,免疫组织化学检测Bel-2、Bax表达水平.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测细胞凋亡.尼康图像分析软件测量分析Bcl-2、Bax阳性表达、凋亡阳性细胞数量及积分吸光度值.结果 应激组静止不动时间[(279±53)s]长于对照组[(182±35)s]及处理1～3组[(200±71)s,(159±59)s,(165±54)s];挣扎次数[(20±3)次]少于对照组[(24±3)次]及处理1～3组[(37±16)次,(32±10)次,(24±4)次];力竭时间[(38.3±5.1)min]长于对照组[(22.9±1.8)min]、短于处理1～3组[(54.4±2.9)min,(69.3±17.6)min,(46.4±4.0)min];差异均有统计学意义(P<0.05或0.01).与对照组比较,应激组CA1、CA3神经细胞Bcl-2表达变弱、Bax表达增强、凋亡细胞增多,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01).与应激组比较,处理1～3组Bcl-2表达增强、Bax表达变弱、凋亡细胞减少,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01).处理组1～3组的部分Bcl-2/Bax表达、凋亡阳性细胞数量与对照组的差异有统计学意义(P<0.05),但IA值的差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 慢性应激可影响大鼠海马CAI、CA3神经细胞Bcl-2、Bax表达水平,促进细胞凋亡;西酞普兰可影响慢性应激大鼠海马CAI、CA3神经细胞Bcl-2、Bax表达水平,拈抗细胞凋亡.
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异黏蛋白、Bcl-2和上皮型钙黏蛋白在鼻黏膜恶性黑色素瘤中的表达及意义
目的 探讨鼻黏膜恶性黑色素瘤中异黏蛋白(metadhein,MTDH)、Bcl-2和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)的表达及其临床意义.方法 免疫组化法检测74例鼻黏膜恶性黑色素瘤组织中MTDH、Bcl-2和E-cadherin的表达情况,并分析其与预后的关系.以SPSS19.0软件进行数据分析.结果 鼻黏膜恶性黑色素瘤组织中MTDH、Bcl-2和E-cadherin的阳性率分别为75.7％(56/74)、24.3％ (18/74)和28.4％ (21/74).MTDH阳性患者的肿瘤转移率(67.9％)高于MTDH阴性患者(33.3％),差异有统计学意义(P=0.009).Bcl-2阴性患者的总生存期较Bcl-2阳性患者短(HR=2.023,P=0.025).E-cadherin的表达与MTDH的表达呈负相关(r=-0.315,P=0.006).结论 鼻黏膜恶性黑色素瘤组织中 MTDH阳性、Bcl-2阴性提示预后差,而E-cadherin对预后判断的价值有待进一步研究.
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小鼠病毒性面神经炎模型中面神经元凋亡的研究
目的 探讨1型单纯疱疹病毒（herpes simplex virus type 1，HSV-1）性面神经炎动物模型中面神经运动神经元（facial motor neurons,FMN）的凋亡情况以及凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。方法 Balb/c小鼠84只，分别进行HSV-1接种和面神经切断处理。在操作后第1、3、7、10、15、20及30天分批处死动物，对面神经核进行HE染色、尼氏染色；采用原位末端转移酶标记（terminaldeoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling，TUNEL）技术检测FMN的凋亡；免疫组化染色检测凋亡相关基因bcl-2和bax在FMN中的表达。结果 面神经切断后，同侧FMN出现凋亡，在第10、15天达高峰，Bcl-2表达降低，Bax表达升高，Bcl-2/Bax比值下降；接种病毒后，同侧FMN没有明显的细胞凋亡，Bcl-2表达增高，在第15天达高峰，Bcl-2/Bax比值上升。结论 小鼠面神经接种HSV-1后FMN没有明显凋亡，可能与神经损伤程度轻以及HSV-1抑制宿主细胞凋亡有关，Bcl-2、Bax可能参与调控FMN的凋亡。
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辛伐他汀对大鼠视网膜缺血再灌注中Bcl-2和Bax表达及细胞凋亡的影响
目的 探讨辛伐他汀对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的保护机制.方法 实验研究.选取健康成年SD雄性大鼠165只,采用随机数字表法随机分为对照组、模型组和药物组,每组55只,每组分4、8、16、24、48 h,总共5个时间点,各时间点11只.模型组、药物组以夹闭右侧颈总动脉的方法造模,对照组暴露右颈总动脉不夹闭.采用免疫组织化学方法检测Bcl-2和Bax的蛋白表达水平,采用TUNEL法检测视网膜各层的细胞凋亡情况,用Real Time RT-PCR方法检测Bcl-2和Bax mRNA的表达水平.对各组大鼠视网膜相应时间点的Bcl-2和Bax的蛋白及mRNA的表达及细胞凋亡情况进行比较采用单因素方差分析和LSD-t检验.结果 模型组Bcl-2于4h开始下降,在24h达到低值,分别为(0.192 ±0.011)、(0.192 ±0.015)、(0.189±0.015)、(0.183 ±0.012)、(0.187 ±0.010).药物组各时间点均高于模型组,分别为(0.208±0.011)、(0.220±0.011)、(0.221 ±0.014)、(0.228 ±0.007)、(0.206 ±0.015).各时间点比较,差异有统计学意义(F4.8,16.24,48=8.079,9.005,9.904,35.563,8.810,P＜0.05).模型组Bax从4h开始上升,24 h达到高峰,分别为(0.255±0.010)、(0.261 ±0.033)、(0.276±0.025)、(0.324±0.037)、(0.234 ±0.018).药物组低于模型组,分别为(0.222 ±0.012)、(0.219 ±0.017)、(0.223 ±0.008)、(0.232±0.021)、(0.214 ±0.008).各时间点比较,差异均有统计学意义(F4,8,16,24,48=16.601,13.525,10.303,25.849,13.805,P＜0.05).模型组细胞凋亡指数从4h开始上升,24 h达到高峰,分别为(11.771 ±0.722)、(13.705 ±0.512)、(15.533 ±0.370)、(21.210±1.221)、(17.660±0.414).药物组低于模型组,分别为(9.061±0.289)、(11.717 ±0.565)、(13.506±0.541)、(16.586±0.488)、(14.428±0.559).各时间点比较,差异均有统计学意义(F4,8,16,24,48=87.096,232.245,575.564,389.205,771.658,P＜0.05).Bcl-2mRNA在模型组均低于对照组,分别为(0.360 ±0.017)、(0.232 ±0.066)、(0.314 ±0.012)、(0.179±0.019)、(0.357±0.084).药物组各组均高于模型组,分别为(1.718 ±0.247)、(1.981 ±0.317)、(1.309±0.031)、(1.289±0.209)、(0.684±0.071).各时间点比较,差异有统计学意义(F4,8,16,24,48=112.934,109.750,3534.800,112.428,128.140,P＜0.05).Bax mRNA在模型组各组均高于对照组,分别为(2.140 ±0.288)、(3.189 ±0.492)、(2.896±0.466)、(2.392 ±0.119)、(1.789±0.169).药物组各组均低于模型组,分别为(0.658 ±0.197)、(1.746 ±0.315)、(0.670±0.221)、(0.952±0.164)、(0.575±0.174).各组相应时间点相比较,差异有统计学意义(F4,8,16,24,48 =74.115,54.504,81.271,243.743,97.163,P＜0.05).结论 辛伐他汀可能通过调节Bcl-2、Bax的表达来抑制细胞凋亡,从而产生对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用.
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眼缺血综合征大鼠视网膜Bcl-2和Bax的表达
目的 比较眼缺血综合征(OIS)大鼠模型组与假手术组视网膜中Bcl-2、Bax表达的差异.方法 实验研究.采用双侧颈总动脉结扎(BCCAO)法建立BN大鼠OIS模型.采用随机分组法分别将大鼠分为模型组(12只)和假手术组(8只).模型组做颈部正中切口,结扎双侧颈总动脉,假手术组仅做颈部正中切口,不结扎血管.观察两组大鼠瞳孔对光反射,对术后1个月的大鼠行FFA检查并用OCT测定两组大鼠的视网膜神经上皮层厚度,观察其视网膜厚度的差异.免疫组织化学法测量并比较两组大鼠视网膜Bcl-2、Bax的表达以及Bcl-2/Bax比值的变化.分类变量采用X2检验,计量资料的比较采用两独立样本的t检验.结果 模型组大鼠双眼直接对光反射消失或迟钝,仅1只大鼠表现为单眼对光反射灵敏.假手术组大鼠双眼对光反射均存在.FFA检查:模型组大鼠视网膜循环时间较假手术组明显延长(动脉期:t=6.19,P＜0.01;动静脉期:t=8.24,P＜0.01;静脉期:t=2.73,P＜0.05),模型组大鼠观察到早期脉络膜的斑片状充盈以及典型的"动脉前锋"现象.OCT检查:模型组视网膜神经上皮层厚度[(195.67±8.84)μm]小于假手术组[(219.31±6.92)μm],差异有统计学意义假手术组(P＜0.05).免疫组织化学检查:与假手术组[(2.34±0.57)μm]相比,模型组Bax表达升高[(5.67±0.84) μm,P＜0.05),Bcl-2表达无明显差异[模型组(5.61±0.98)μm,假手术组(5.63±0.88)μm,P＞0.05)],Bcl-2/Bax比值降低[模型组(1.01 ±0.23) μm,假手术组(2.47±0.47) μm,P＜0.05)].结论 BCCAO法建立的模型组大鼠视网膜功能损伤,视网膜厚度变薄,凋亡相关因子Bax、Bcl-2表达失衡.
