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丹皮酚抑制帕金森病模型细胞凋亡的作用
目的：观察丹皮酚对帕金森病模型细胞凋亡的影响。方法：采用1－甲基－4－苯基吡啶（ MPP＋）处理具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞建立帕金森病体外模型，并分为正常对照组、空白对照组、1μmol／L丹皮酚组、3μmol／L丹皮酚组和9μmol／L丹皮酚组。以四甲基偶氮唑蓝比色法和乳酸脱氢酶法检测细胞损伤，以赫斯特荧光染剂染色及流式细胞术检测细胞凋亡，以二氯二氢荧光素－乙酰乙酸酯法检测细胞活性氧生成，以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－3（caspase－3）、Bcl－2和Bcl－2相关X蛋白（Bax）的表达水平。结果：与正常对照组比较，空白对照组细胞存活率显著降低，乳酸脱氢酶漏出率升高，凋亡细胞增多，活性氧生成增加，凋亡相关分子caspase－3活性上调、Bax／Bcl－2比值升高，差异均具有统计学意义（均P＜0．01）。与空白对照组比较，各浓度丹皮酚预处理后细胞存活率显著升高，乳酸脱氢酶漏出率降低，凋亡细胞减少，并抑制活性氧生成，降低Bax／Bcl－2的比值及caspase－3蛋白水平，差异均具有统计学意义（ P＜0．05或P＜0．01）。结论：丹皮酚能抑制帕金森病模型PC12细胞凋亡，其发挥保护作用的机制可能与改善氧化应激、降低Bax／Bcl－2比值、抑制caspase－3活化有关。
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大黄素对人宫颈癌裸鼠移植瘤 Bcl-2蛋白及其相关X蛋白表达的影响
目的：观察大黄素对人宫颈癌 siha、Hela 和 C33A 细胞株裸鼠移植瘤 Bcl-2和 Bcl-2相关 X 蛋白（Bax）表达的影响，探讨其对宫颈癌的作用机制。方法建立人宫颈癌 siha、Hela 和 C33A 裸鼠移植瘤模型，随机分为对照组、大黄素低剂量组和大黄素高剂量组，分别经灌胃给予0．1％二甲基亚砜（DMSO）0．2 mL／只、大黄素20 mg／kg 和大黄素40 mg／kg，1次／d，共14 d。给药结束后处死裸鼠并取瘤组织，采用免疫组织化学法检测 Bcl-2和 Bax 蛋白表达。结果与相应对照组相比较，随着大黄素剂量增加 Bcl-2蛋白表达明显下降，Bax 蛋白表达逐渐增高。其中大黄素对 siha、Hela 两种细胞移植瘤 Bcl-2和 Bax 蛋白表达的调控作用优于 C33A 细胞移植瘤。结论大黄素可能通过下调 Bcl-2蛋白表达，上调 Bax 蛋白表达，诱导肿瘤细胞凋亡，从而起到抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的作用。
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17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响
目的 观察17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)对肝癌HepG2细胞增凋亡的影响,并探讨其机制.方法 采用吖啶橙/澳乙锭(AO/EB)荧光染色,通过荧光显微镜观察HepG2细胞凋亡情况;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化;逆转录聚合酶链反应检测17-AAG处理肝癌HepG2细胞前后bax和bcl-2的mRNA蛋白表达.结果 AO/EB荧光染色结果显示对照组呈均匀绿色荧光,实验组随着药物浓度的增加,呈红色荧光凋亡细胞逐渐增多;流式细胞仪结果显示17-AAG促进肝癌HepG2细胞凋亡;RT-PCR结果显示17-AAG能使bax的mRNA蛋白表达水平升高、bcl-2的mRNA蛋白表达水平下降,其作用呈剂量效应关系.结论 17-AAG具有促进肝癌HepG2凋亡作用,其机制可能与其上调bax、下调bcl-2蛋白表达有关.
关键词： 肝肿瘤 Hep G2细胞 细胞凋亡 bcl-2相关X蛋白质 Bcl-X蛋白质 -
丹参酮ⅡA抑制胃癌细胞株BGC823增殖活性研究
目的 探讨丹参酮ⅡA对胃癌细胞株BGC823的抑制增殖活性及其可能的作用机制.方法 应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对BGC823细胞的增殖能力的影响,应用RT-PCR法检测给药后bcl-2,bax以及c-myc基因mRNA表达水平的变化.结果 MTT结果显示:用浓度0、2.5、5、10、20及40 μM丹参酮ⅡA处理24 h后,BGC-823细胞抑制率分别0.00%、12.23%、21.79%、46.35%、77.32%和95.93%.克隆形成实验结果显示,低浓度的丹参酮ⅡA处理后的BGC-823细胞的增殖能力显著受到抑制.另外,PCR研究表明,在给药24 h后,丹参酮ⅡA显著降低bcl-2和c-myc基因表达.结论 丹参酮ⅡA对BGC823细胞具有明显的抑制增殖以及诱导凋亡的作用,其可能的作用机制是通过降低bcl-2/bax的比值以及癌基因c-myc的表达有关.
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鼻咽癌组织中Bcl-2和Bax的表达与放疗敏感性的关系
目的 研究鼻咽癌组织中Bcl-2及Bax的蛋白表达与放疗敏感性的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测52例放疗前鼻咽癌活检组织中Bcl-2和Bax的表达.结果 C组Bcl-2/Bax比值为(1.52±0.20),低于A组(1.71±0.26),两组差异有统计学意义.结论 Bcl-2/Bax比值在一定程度上是反映鼻咽癌放射敏感性和预测鼻咽癌放疗效果的重要指标,而不能单独应用Bcl-2和Bax怍为判断鼻咽癌放疗敏感性的指标.
关键词： 基因 Bcl-2 bcl-2相关X蛋白质 鼻咽肿瘤 -
稽留流产病人survivin、bax及caspase-3的表达
目的 探讨survivin、bax及caspase-3的表达与稽留流产的关系.方法 以35例稽留流产病人为病例组,30例正常妊娠者为对照组.采用免疫组织化学sP法检测绒毛细胞滋养细胞和合体滋养细胞及蜕膜组织蜕膜细胞中survivin、bax和caspase-3的表达.结果 病例组妊娠组织中survivin的表达明显低于对照组,bax及caspase-3的表达明显高于对照组(u<,c>=2.87～5.29,P<0.01).病例组survivin与bax及caspase-3的表达均呈负相关(r=-0.59、-0.71,P<0.05、0.01),bax与caspase-3的表达呈正相关(r=0.79,P<0.01).结论 survivin的低表达、bax及caspase-3的高表达在稽留流产的发生中起重要作用.
关键词： 流产 稽留 survivin bcl-2相关X蛋白质 Caspase-3 -
荷叶黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
.与模型组比较,治疗组Bax及Caspase-3蛋白的表达均明显降低,而Bcl-2蛋白的表达明显升高(F=3.33～4.17,q=3.34～8.03,P<0.05).结论 荷叶黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2、下调Bax和Caspase-3的表达,减少细胞凋亡有关.
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硒对自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺细胞Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达影响
目的 探讨亚硒酸钠对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠甲状腺组织Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达及分布的影响.方法 将Wistar大鼠分为正常对照组、EAT组和EAT加硒干预组.制备EAT大鼠模型,EAT加硒干预组给予亚硒酸钠灌胃进行干预.免疫组化SABC法检测大鼠甲状腺组织Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达及分布,并应用美国Sample PCI图像分析系统进行平均吸光度测定,对免疫组化结果进行定量分析.结果 与EAT组相比,EAT加硒干预组大鼠甲状腺组织滤泡破坏程度明显减轻,淋巴细胞浸润减少,Caspase-3的阳性表达减少(F=45.01,q=7.32,P<0.05),Bcl-2/Bax有上升趋势.Bax阳性表达多位于浸润淋巴细胞附近的滤泡上皮,远离浸润淋巴细胞的滤泡上皮表达较少,而Bc1-2的阳性表达部位相反.EAT组大鼠甲状腺组织Caspase-3的阳性表达与Bax的阳性表达呈正相关(r=0.89,P<0.01),Caspase-3的阳性表达与Bcl-2的阳性表达呈负相关(r=-0.85,P<0.01).结论 亚硒酸钠可能通过影响Bcl-2/Bax比值,下调Caspase-3的表达,抑制甲状腺细胞的凋亡来减轻或抑制自身免疫性甲状腺炎的免疫损伤.
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大气压冷等离子体射流诱导乳癌细胞凋亡研究
目的 研究大气压冷等离子体射流对乳癌细胞系MDA-MB-468细胞的凋亡诱导作用.方法 采用自行研制的大气压冷等离子体射流发生装置,处理MDA-MB-468细胞.大气压冷等离子体射流处理时间分别为10、30、60和90 s,以不处理者为空白对照组,以单纯气流处理90 s者为实验对照组.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率,二脒基苯基吲哚(DAPI)染色检测各组细胞的核形态变化,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)测定各组细胞Bax和Bcl-2 mRNA的表达变化.结果 大气压冷等离子体射流可明显抑制细胞的增殖,且有明显的剂量依赖性(F=22.4、42.3,P＜0.01),而单纯气流对MDA-MB-468细胞无明显影响.经大气压冷等离子体射流处理后细胞出现核固缩及核碎裂.大气压冷等离子体射流作用后细胞Bax的表达上调,Bcl-2的表达下调(F=32.3、12.4,P＜0.05).结论 大气压冷等离子体射流对MDA-MB-468细胞有增殖抑制作用,可能与Bax表达上调及Bcl-2表达下调诱导细胞凋亡有关.
关键词： 大气压冷等离子体射流 乳腺肿瘤 细胞凋亡 基因 Bcl-2 bcl-2相关X蛋白质 -
普罗布考联合山莨菪碱对糖尿病大鼠对比剂肾损伤的影响
目的 探讨普罗布考联合山莨菪碱对糖尿病大鼠对比剂肾病(CIN)的影响.方法 选取130只大鼠制备糖尿病大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为模型组、普罗布考组、山莨菪碱组、联合组各21只.另选10只正常大鼠为正常对照组.糖尿病造模9周后,普罗布考组及联合组给予普罗布考500 mg/kg灌胃,连续6 d;第8天时,于制备CIN模型前,山莨菪碱组及联合组经腹腔注射山莨菪碱100μg/100 g,15 min后,模型组、普罗布考组、山莨菪碱组、联合组经尾静脉注射复方泛影葡胺注射液0.8 mL/100 g制备CIN模型;1 h后,山莨菪碱组、联合组经腹腔注射山莨菪碱100μg/100 g共7次.注射对比剂前及24 h后,采用CBB法测定尿蛋白.内眦静脉取血,测定血清BUN、Scr水平.称重,开腹后采集左右肾脏并称重,计算肾指数.HE染色法观察肾脏组织病理变化.取肾脏组织制成肾组织匀浆,测定氧化应激指标包括一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及总抗氧化能力(T-AOC).荧光定量PCR法检测肾组织Bcl-2相关X蛋白质(Bax)和B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)mRNA表达.结果 ①模型组BUN、Scr、UAE均高于正常对照组(P均<0.05).普罗布考组及联合组BUN、Scr、UAE均低于模型组,联合组BUN、Scr、UAE均低于山莨菪碱组(P均<0.05).②模型组肾指数高于正常对照组,普罗布考组及联合组肾指数低于模型组(P均<0.05).③与模型组比较,普罗布考组、山莨菪碱组肾脏NOS水平升高,MDA水平降低(P均<0.05).联合组肾脏SOD、T-AOC均高于普罗布考组和山莨菪碱组(P均<0.05).④与模型组比较,普罗布考组、联合组肾脏Bax表达水平降低,Bcl-2及Bcl-2/Bax升高(P均<0.05);山莨菪碱组肾脏Bcl-2/Bax升高(P<0.05),联合组肾脏Bcl-2/Bax高于山莨菪碱组(P<0.05).结论 普罗布考、山莨菪碱联用可减轻糖尿病CIN大鼠的肾脏损伤,其机制可能与抑制氧化应激反应、上调Bcl-2/Bax比值有关,且效果优于单药应用.
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茵陈蒿汤对妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘中p53, Bax和Bcl-2表达的影响
[目的]探讨p53,Bax和Bcl-2在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)胎盘组织上的表达及茵陈蒿汤对其调控作用.[方法]选择三组病例,即正常妊娠组30例(对照组)、ICP未用茵陈蒿汤治疗组30例(未服药组)和ICP用茵陈蒿汤治疗组30例(服药组).采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定孕妇血清胆汁酸水平.采用免疫组化EnVision法分别检测三组胎盘组织细胞凋亡调控基因p53,Bax和Bcl-2的表达.[结果]①ICP患者血清胆汁酸水平明显高于正常对照组(P<0.01);ICP服药组治疗前与治疗后血清胆汁酸水平比较有差异(P<0.01).②未服药组p53、bax在胎盘组织的表达高于对照组和高于服药组,差异有统计学意义(P<0.05);③未服药组Bcl-2在胎盘组织的表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).[结论]①ICP患者的胎盘功能减退可能与胎盘组织细胞在外界有害物质作用下对细胞凋亡的敏感性增加有关系;②茵陈蒿汤治疗ICP可能是通过下调细胞凋亡调控基因bax和p53,延缓细胞凋亡,改善胎盘功能而发挥作用.
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非小细胞肺癌组织中VEGF和Bax的表达及意义
目的：观察非小细胞肺癌（NSCLC）中血管内皮生长因子（VEGF）和Bax的表达，并探讨其临床应用价值。方法收集该院NSCLC患者肺组织石蜡标本80例（NSCLC组）及良性病变病灶旁正常肺组织石蜡标本20例（对照组），采用Western blot和免疫组织化学染色（SP）法测定NSCLC组织中VEGF和Bax的表达，并探讨二者与NSCLC病理类型、TNM 分期及淋巴结转移的相关性。结果 NSCLC组中VEGF阳性表达显著高于对照组，Ⅲ～Ⅳ期VEGF阴性表达高于Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴结转移组织中的VEGF阳性表达高于无淋巴结转移组织，差异均有统计学意义（P＜0．05）；VEGF的表达与腺癌、鳞癌无相关性（P＞0．05）。NSCLC组中Bax表达低于对照组，Ⅲ～Ⅳ期Bax阳性表达低于Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴结转移组织中Bax阳性表达低于无淋巴结转移组织，差异均有统计学意义（P＜0．05）；Bax的表达与腺癌、鳞癌无相关性（P＞0．05）。NSCLC中VEGF和Bax的表达呈负相关。结论 VEGF的表达在NSCLC中起着促进作用，并与Bax表达呈负相关，二者的表达可为NSCLC的诊断及预后提供判断依据。
关键词： 癌 非小细胞肺 淋巴转移 血管内皮生长因子A bcl-2相关X蛋白质 -
红景天苷对肝缺血再灌注大鼠肝损伤及Bcl-2、Bax的影响
目的 探讨红景天苷对肝缺血再灌注大鼠肝损伤及Bcl-2、Bax的影响.方法 将56只SD大鼠分为假手术组(C组,n=8)、模型组(IR组,n=24)及红景天苷组(S组,n=24),IR组及S组按再灌注1、3、6 h分为3个亚组.检测血清谷草转氨酶(AST)及谷丙转氨酶(ALT)活性,TUNEL法染色观察肝细胞凋亡情况,免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 与IR组比较,S组肝细胞凋亡降低,Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达降低,血清AST、ALT指标得到改善,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 红景天苷可能通过增加Bcl-2阳性细胞的表达及降低Bax阳性细胞的表达抑制肝细胞凋亡,从而对肝缺血再灌注肝损伤起到一定的保护作用.
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5,6-二氢环戊烯1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮对高糖环境下大鼠视网膜Müller细胞的影响
目的 观察5,6-二氢环戊烯1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮(CPDT)对高糖环境下大鼠视网膜Müller细胞活性及其线粒体活性氧(ROS)生成量的影响,初步探讨CPDT对高糖环境下Müller细胞的保护作用及其机制.方法 Sprague Dawley大鼠Müller细胞分为25 mmol/L对照组(A组)、65 mmol/L高糖(B糖)组、高糖+45 μmol/L CPDT组(C组)、高糖+60 μmol/L CPDT组(D组)、高糖+70 μmol/L CPDT组(E组).培养72 h后,水溶性四唑盐(WST)-8法检测各组Müller细胞的细胞相对增生率;流式细胞仪测定各组Müller细胞ROS生成量及细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Müller细胞中核因子-E2相关因子2(Nrf2)、血红素合晦-1 (HO-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax蛋白)表达的变化.结果 WST-8法检测结果显示,与A组比较,B组Müller细胞活性明显下降,差异有统计学意义(t=39.59,P＜0.05).与B组比较,C组Müller细胞活性无明显提高,差异无统计学意义(t=0.97,P＞0.05);D、E组Müller细胞活性恢复,差异有统计学意义(t=-4.67、-7.52,P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,与A组比较,B组Müller细胞中ROS生成量增加,差异有统计学意义(t=-30.99,P＜0.05);与B组比较,D组Müller细胞中ROS含量明显下降,差异有统计学意义(t=27.68,P＜0.05).Western blot检测结果显示,与A组比较,B组Müller细胞Bax、Nrf2、HO-1蛋白表达显著上调,差异有统计学意义(t=-1 1.03、-63.17、-11.44,P＜0.05);Bcl-2蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(t=7.861,P＜0.05).与B组比较,D组Müller细胞Nrf2、HO-1、Bax蛋白表达均下调,差异有统计学意义(t=15.11、26.59、6.27,均P＜0.05);Bcl-2蛋白表达上调,差异有统计学意义(t=-6.53,P＜0.05). 结论 CPDT降低高糖环境下Müller细胞中ROS含量,下调Nrf2、HO-1、Bax蛋白表达;其机制与激活Nrf2/HO-1氧化应激通路,改变Bcl-2蛋白之间的平衡性,影响线粒体氧自由基量生成,从而抑制细胞凋亡有关.
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雌激素对慢性高眼压兔视网膜损伤的保护作用
目的 探讨雌激素对慢性高眼压兔视网膜损伤的保护作用.方法 18只成年健康新西兰雌性大白兔随机分为去势组和假去势组.去势组切除两侧卵巢,假去势组仅切除卵巢周围部分脂肪组织.利用前房注射复方卡波姆建立兔慢性高眼压模型.采用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)检测视网膜组织中凋亡细胞的表达;免疫组织化学方法检测B细胞淋巴瘤/白血病(bcl)-2、bax蛋白的表达情况;应用计算机图像分析系统对检测结果进行分析.结果 造模后4、6、8周,去势组较假去势组视网膜神经节细胞数目明显减少,视神经纤维层和内核层变薄;TUNEL阳性细胞表达均较假去势组高(t=3.285,4.012,3.624;P值均<0.01);视网膜bcl-2表达均较假去势组低(t=4.256,3.867,3.459;P值均<0.01);bax阳性细胞表达情况均较假去势组高(t=3.211,3.625,3.253;P值均<0.01).bcl-2的表达与TUNEL的表达呈负相关,凋亡细胞随着bcl-2的表达增多而减少,bcl-2抑制了凋亡的发生.bax的表达与TUNEL的表达呈正相关,凋亡细胞随着bax的表达增多而增多,bax诱导了凋亡的发生.结论 雌激素对慢性高眼压兔视网膜损伤有神经保护作用,这一保护作用主要是通过减少视网膜组织中的凋亡细胞而实现的.
关键词： 雌激素类/生理学 视网膜神经节细胞 细胞凋亡 bcl-2相关X蛋白质 动物实验 -
半胱氨酸蛋白酶3、bax和bcl-xl在N-甲基-N亚硝酸脲诱导的大鼠视网膜损伤后的表达
目的 观察N-甲基-N亚硝酸脲(MNU)诱导的大鼠视网膜损伤过程中凋亡相关分子半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、bel-2相关X蛋白(bax)和B细胞淋巴瘤/白血病-xl(bcl-xl)在视网膜中的时空表达,探讨其在MNU诱导的视网膜损伤中的作用. 方法将鼠龄50 d的30只SPF级雌性SD大鼠随机分为MNU模型组(24只大鼠)和正常对照组(6只大鼠).模型组按40 mg/kg的剂量腹腔注射MNU建立MNU模型;正常对照组大鼠腹腔注射生理盐水5ml/kg.模型组大鼠根据MNU注射后不同处死时间再分为1、3、7、10 d组,每小组各6只大鼠.正常对照组大鼠注射后3 d处死.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组视网膜中caspase-3、bax和bel-xl的基因表达情况;免疫荧光技术检测其在视网膜中的表达以及分布的变化,并用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导dUTP缺口末段标记(TUNEL)法检测视网膜细胞凋亡的变化. 结果 经病理学检测确定造模成功.RT-PCR检测结果表明,[与正常对照组相比(caspase-3和bax的相对吸光度(RA)值为62.45±7.65、46.53±4.41],MNU模型1 d组caspase-3(83.23±8.11,P=0.009)和bax(72.73±9.46,P=0.004)的表达均增强,3 d组二者表达水平均高(caspase-3 RA=140.48±18.40,P=0.000;bax RA=102.36±13.97,P=0.001),10 d组caspase-3的表达水平(RA=47.32±5.37,P=0.027)低于对照组,而10 d bax的表达(RA=48.27±4.40,P=0.997)基本恢复至对照组水平,bcl-xl在4个造模组中的表达水平(1 d RA=63.29±4.29,P=0.000;3d RA=79.83±5.58,P=0.000;7dRA=70.19±4.42,P=0.000;10 d RA=66.05±4.97,P=0.000)均高于正常对照组(RA=45.98±3.06),3 d组的表达水平高.MNU诱导后1、3、7 d组的bax/bcl-xl比值(1 d为1.15±0.14,P=0.143,3 d为1.28±0.16,P=0.001;7 d为1.17±0.08,P=0.079)大于对照组(1.01±0.09),其中3 d组的比值大,但10 d组bax/bcl-xl比值(0.73±0.07,P=0.001)小于对照组.免疫荧光检测结果显示,caspase-3、bax和bcl-xl的表达变化分别与其RT-PCR检测结果一致;正常对照组在视网膜各层均未发现凋亡细胞,MNU 1 d组的外核层可检测到大量凋亡细胞核[凋亡率(AI)为34.96±3.44,P=0.000],3 d组的外核层检测的凋亡细胞多(AI=76.97±5.83,P=0.000),10 d组未检测到凋亡细胞. 结论 MNU诱导的视网膜光感受器细胞凋亡可能是通过上调caspase-3及引起bax/bcl-xl表达失衡并明显倾向促进细胞凋亡造成的.
关键词： 半胱氨酸内肽酶类 bcl-2相关X蛋白质 Bcl-X蛋白质 细胞凋亡 动物实验 -
BMP-7对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠NF-κB P65和Bax表达影响
目的 研究骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后NF-κB P65蛋白和Bax蛋白表达活性的影响.方法 成年雄性Wistar大鼠50只,随机分为假手术组15只、对照组15只、BMP-7治疗组15只(去除5只造模失败的大鼠),应用线栓法制备局灶性脑缺血2h模型.再灌注同时,治疗组经尾静脉注射BMP-7(0.1 mg/kg),对照组和假手术组注射等量无菌生理盐水.再灌注24 h后分别对3组大鼠进行神经功能评分,三苯基氯化四氮唑(TTC)染色观察脑梗死体积,免疫组化法观察NF-κB P65和Bax蛋白表达.结果 假手术组无神经功能缺损,无脑梗死发生.与对照组比较,治疗组神经功能评分明显降低,脑梗死体积百分比显著降低,差异有统计学意义(t=5.18、13.43,P＜0.05);缺血侧海马内NFκB P65表达区平均光密度值明显增加,Bax蛋白表达区平均光密度值明显减少,差异有统计学意义(F=74.51、199.65,q=6.65、12.38,P＜0.01).结论 BMP-7能改善神经功能缺损,减轻脑缺血再灌注损伤,此过程可能与抑制细胞凋亡有关.
关键词： 骨形态发生蛋白质类 再灌注损伤 NF-κB bcl-2相关X蛋白质 -
刺参酸性黏多糖对小鼠H22肝癌移植瘤Bcl-2和Bax基因表达影响
目的 探讨刺参酸性黏多糖(SJAMP)对小鼠H22肝癌移植瘤细胞凋亡的作用及其机制.方法 接种H22肝癌细胞于昆明种小鼠右前肢腋部皮下,建立H22肝癌模型.将小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组及SJAMP高、中、低剂量组.无菌条件下取肿瘤组织,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构;Real-time PCR及免疫组织化学方法分别检测肿瘤组织中Bcl-2和Bax mRNA及蛋白的表达水平.结果 SJAMP各剂量组肿瘤质量均小于阴性对照组,差异有统计学意义(F =40.56,q=2.36～10.02,P＜0.05).SJAMP各剂量组肿瘤细胞均出现不同程度的凋亡形态学特征.随着SJAMP剂量增加,Bcl-2表达下调,Bax表达上调,Bcl-2/Bax蛋白比值显著降低,呈现一定的剂量依赖关系(F=184.94～8 775.24,q＝3.77～225.69,P＜0.05).结论 SJAMP可以通过促进细胞凋亡达到抑制肿瘤生长的目的,其作用机制可能与下调Bcl-2的表达,同时上调Bax的表达,使Bcl-2/Bax比值下调有关.
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pIRES-Bax-HGF重组质粒的构建
目的 构建pIRES-Bax-HGF质粒载体.方法 采用RT-PCR方法从卵巢癌标本中克隆Bax的基因序列,从ATCC来源的pBlueseriptⅡ SK+HGF质粒中克隆HGF的基因序列.分步双酶切插入到plRES载体质粒中.结果 酶切鉴定及测序表明,重组pIRES-Bax-HGF质粒构建成功.结论 获取HGF及Bax编码基因并成功构建重组pIRES-Bax-HGF质粒载体,为进一步研究HGF及Bax对血管内皮细胞、平滑肌细胞、纤维细胞等的影响奠定了基础,也向基因水平干预冠状动脉旁路移植术术后再狭窄的形成迈出了重要一步.
关键词： 卵巢肿瘤 肝细胞生长因子 bcl-2相关X蛋白质 质粒 -
NRG -1β对缺血再灌注损伤大鼠视网膜细胞凋亡及Bax表达影响
目的 探讨神经调节蛋白-1β (NRG-1β)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤后的保护作用及对Bax表达的影响.方法 制备大鼠视网膜缺血再灌注模型.将33只Wistar大鼠随机分为正常组(3只)、对照组(15只)、实验组(15只),于缺血再灌注开始时实验组大鼠玻璃体腔注射5 μL的NRG-1β,对照组大鼠玻璃体腔注射平衡盐溶液5 μL.用核苷酸末端转移酶介导的dUTP末端标记法检测视网膜神细胞凋亡的变化,同时利用免疫组化方法检测Bax表达情况的变化.结果 凋亡细胞主要出现在视网膜内核层及神经节细胞层,而外核层几乎无阳性表达.与对照组比较,实验组再灌注各时间点视网膜细胞凋亡数目显著减少(t=2.57～6.25,P＜0.01),实验组再灌注各时间点Bax蛋白的表达显著降低(t=3.84～11.97,P＜0.01).结论 NRG-1β对视网膜缺血再灌注损伤具有明显保护作用,NRG-1β抑制Bax的表达可能是其抑制视网膜缺血再灌注损伤后细胞凋亡的机制之一.
关键词： 再灌注损伤 视网膜 神经调节蛋白类 bcl-2相关X蛋白质
