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原花青素对氯氰菊酯致小鼠小脑组织氧化损伤及核转录因子NF-E2相关因子2、血红素氧合酶-1表达的影响
目的 研究原花青素(proanthocyanidin,PC)对氯氰菊酯(cypermethrin,CYP)所致小鼠小脑组织氧化损伤及核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响.方法 将50只雄性昆明小鼠随机分为5组:双蒸水对照组,染毒组(以CYP 10 mg/kg进行灌胃),PC保护组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(分别以50、100和200mg/kg PC预先给小鼠灌胃,再以10 mg/kg CYP染毒).连续3周经口灌胃,之后颈椎脱臼法处死小鼠,检测小脑组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;免疫组化分析Nrf2在小脑组织中的表达;RT-PCR检测Nrf2及HO-1 mRNA的表达.结果 染毒组小鼠小脑组织MDA含量升高,GSH-Px、T-SOD、CAT活性降低;Nrf2胞核阳性细胞比例增加;Nrf2及HO-1 mRNA表达增加,与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).与染毒组相比,PC保护组MDA水平降低,T-SOD、GSH-Px、CAT活性增加;胞核Nrf2阳性细胞逐渐减少;Nrf2及HO-1 mRNA表达下降,与染毒组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 CYP暴露可诱导小鼠小脑组织氧化损伤,使Nrf2由胞质向胞核转位,同时诱导下游靶基因HO-1的表达;抗氧化剂PC能够使活化的Nrf2及HO-1mRNA表达回调至基础水平,从而拮抗CYP所致的氧化损伤.
关键词： 原花青素 氯氰菊酯 NF-E2相关因子2 血红素氧合酶-1 -
溴氰菊酯染毒大鼠的脑组织中GCS亚单位和Nrf2表达的时间进程
目的研究溴氰菊酯(DM)对大鼠大脑皮层和海马组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS)轻亚单位(GCSl)和重亚单位(GCSh)mRNA表达,以及GCSh和转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)基因蛋白表达时间进程的影响.方法DM染毒组(DM 12.50mg/kg bw)和溶剂对照组大鼠染毒1次,分别于大鼠染毒后不同时间点处死大鼠,分离皮层和海马.用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定mRNA表达的相对量.联合用免疫组织化学方法和图像分析系统检测海马和大脑皮层中GCS重亚单位蛋白(GCS-HS)和Nrf2蛋白的水平.结果(1)DM染毒后第5h和第48h大鼠大脑皮层中GCSh mRNA相对水平分别降低至对照组的83.9%、86.0%(P＜0.05),第5h、24h和48h Nrf2 mRNA分别增高至0h对照组的146.4%、145.2%和147.9%(P＜0.05).(2)DM染毒后第5h和24h海马中GCSh mRNA相对水平分别增高至0h对照组的118.4%、118.4%(P＜0.05),第5h海马中GCSl mRNA比0h对照组、24h和48h组均高,增高至对照组的121.4%(P＜0.05).DM染毒后各时间点海马Nrf2 mRNA水平未见明显的变化(P＞0.05).(3)DM染毒后海马不同分区(CA1、CA2、CA3和齿状回)和大脑皮层中的GCS催化亚单位(GCS-HS)和转录因子Nrf2蛋白水平均未见明显改变.结论本实验条件下DM染毒后,大鼠海马GCSh和GCSl mRNA基因表达出现上调,而脑皮层GCSh基因表达出现下调,Nrf2 mRNA水平表达出现上调,但海马和皮层组织中的GCS-HS和Nrf2蛋白水平未见显著变化.
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NF-E2相关因子2对糖尿病模型小鼠视网膜内细胞及血管的保护作用
目的 探讨NF-E2相关因子2(Nrf2)对糖尿病视网膜细胞及血管的保护作用.方法 8周龄雄性Nrf2+/+(野生型)和Nrf2-/-C57BL/6小鼠60只随机分为模型组和对照组,共4组,每组各15只.模型组小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ,45mg/kg),连续注射5d;对照组小鼠注射同体积的枸橼酸缓冲液.模型组和对照组小鼠初次注射后每周测空腹血糖及体重,至第10周取视网膜.采用免疫印迹法检测视网膜内Nrf2激活的下游蛋白血红素加氧酶-1(HO-1)的表达情况;免疫荧光染色检测具有多种剪接形式的RNA结合蛋白(RBPMS)阳性的视网膜节细胞(RGCs)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性的无长突细胞(ACs)并计数;采用过碘酸-希夫和苏木素染色,观察视网膜内无细胞毛细血管并进行定量分析.结果 STZ诱导1周后,野生型和Nrf2-/-模型组小鼠血糖急剧升高,体重开始显著下降,随着周龄的增长体重无明显增加;对照组小鼠血糖值无明显升高,体重呈正常缓慢增长趋势.STZ诱导糖尿病10周后,RBPMS和ChAT染色发现,Nrf2-/-糖尿病小鼠视网膜内RGCs和ACs数量显著降低(P＜0.05);过碘酸-希夫和苏木素染色显示,Nrf2-/-糖尿病小鼠视网膜内出现无细胞毛细血管;免疫印迹法显示,野生型小鼠模型组中Nrf2激活的下游蛋白HO-1表达升高.结论 Nrf2对糖尿病视网膜细胞及血管具有保护作用,其可能是通过诱导HO-1上调发挥作用.
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Nrf2信号通路在各系统肿瘤中的研究进展
活性氧自由基（ROS）可以损伤细胞DNA和蛋白质，具有致癌作用。Nrf2可以激活人体内多种Ⅱ相解毒酶的表达，其活性主要由Keap1负性调节，当机体受到外界药物、射线等刺激时， Nrf2可激活ARE区域，介导氧化应激反应，起到保护细胞的作用，目前已有部分研究表明某些植物与药物通过Nrf2信号通路发挥抗癌作用。近期，大量的细胞及动物实验表明Nrf2同样具有致癌作用，肿瘤细胞通过Nrf2或Keap1突变与基因杂合性丢失，使Nrf2和Keap1不能正常结合，导致Nrf2在胞内积累，激活下游基因，增加肿瘤细胞内的解毒酶，从而增强细胞对放化疗的抵抗性。同时，研究发现Nrf2在人体的大部分消化系统、呼吸系统、生殖系统及神经系统肿瘤中均呈高表达，并与多种致癌基因如Ki67、K-Ras、B-Raf、Myc、BRCA1等基因表达相关，阻断Nrf2信号通路的抗癌药物研究已表明其能够减少肿瘤复发率并增加肿瘤对放化疗药物的敏感性。Nrf2参与着各个系统众多肿瘤的发生与发展，将成为未来肿瘤靶向治疗的重点目标。
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ROX参比荧光在实时荧光定量RT-PCR检测Nrf2mRNA中的应用
目的 建立大鼠Nrf2 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法,评价ROX参比荧光在其分析中的归一化校正作用.方法 采用Taq Man探针法构建大鼠Nrf2 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法;取大鼠混合cDNA的Nrf2 PCR产物,经凝胶电泳和测序鉴定反应特异性;取PCR标准品10个浓度梯度(2.0×109～2.0×100)各1份进行实时荧光定量RT-PCR检测,分析ROX参比荧光校正与否的标准曲线的线性范围的变化;取高、中、低值重组质粒样本各1份进行批内重复20次和批间连续20次实时荧光定量RT-PCR检测,分析ROX参比荧光校正与否的批内、批间重复性差异.结果 成功建立大鼠Nrf2 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法;大鼠混合cDNA的Nrf2 PCR扩增片段与预期122 bp相符,测序结果扩增片段序列正确,PCR特异性好;标准品PCR扩增结果的标准曲线线性范围未经ROX参比荧光校正为2.0×109～2.0×102拷贝/μl(R2＞0.99),校正后为2.0×109～2.0×100拷贝/μl(R2＞0.99),校正后线性范围变宽100倍.高、中、低值样本重复性分析结果显示未经ROX参比荧光校正批内Ct变异系数(CV)为4.1%、2.7%、2.1%,批间CV为4.3%、3.0%、2.4%,校正后批内CV为0.7%、0.5%、0.4%,批间CV为1.0%、0.8%、0.7%,ROX参比荧光校正后样本Ct离散程度均低于未校正组,批内、批间的高值、中值浓度样本(高值组批内和批间t值分别为4.843、2.566,中值组批内和批间t值分别为4.293、4.423,P均＜0.05),但低浓度组的Ct离散度的差异无统计学意义(低值组批内和批间t值分别为0.753、1.279,P均＞0.05).结论 在构建大鼠Nrf2实时荧光定量RT-PCR检测方法中,加入ROX参比荧光,可加宽PCR标准曲线的线性范围,提高检测重复性,为准确分析大鼠模型Nrf2 mRNA表达水平奠定了基础.
关键词： NF-E2相关因子2 逆转录聚合酶链反应 琥珀酰亚胺类 若丹明类 -
脑缺血预处理对大鼠缺血再灌注损伤后抗氧化应激通路的影响
目的 研究脑缺血预处理(CIPC)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用并观察CIPC对核因子E2相关因子2(Nrf2)/γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)信号通路的影响.方法 180只雄性SD大鼠,随机分成3组:假手术组、模型组、CIPC组,每组分别在术后6、12、24、48、72h5个时间点进行神经功能评分后断头处死大鼠,并进行免疫组织化学染色,同时测定大脑皮质Nrf2、γ-GCS mRNA表达和脑组织谷胱甘肽(GSH)含量.结果 模型组和CIPC 组各时间点的行为学评分明显高于假手术组(P＜0.01).CIPC组缺血再灌注24、48和72 h的行为学评分明显低于模型组[(2.00±0.63)分vs (2.83±0.41)分、(2.16±0.41)分vs (2.83±0.41)分和(1.17±0.41)分vs(2.00±0.89)分,P＜0.05,P＜0.01].模型组与CIPC组各时间点Nrf2核转移的阳性细胞、Nrf2及y-GCS mRNA表达明显高于假手术组,GSH含量明显低于假手术组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).CIPC组各时间点Nrf2核转移的阳性细胞、Nrf2及γGCS mRNA的表达、GSH含量明显高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论CIPC通过Nrf2/γ-GCS信号通路,调节下游抗氧化应激产物的表达,保护脑缺血再灌注引起的脑组织损伤.
关键词： 脑缺血 缺血预处理 再灌注损伤 谷氨酸-半胱氨酸连接酶 NF-E2相关因子2 -
Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1和核因子E2相关因子2对大鼠脑缺血再灌注损伤机制
目的 探讨大鼠脑缺血再灌注后Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路介导的氧化应激相关蛋白Keap1、Nrf2和血红素加氧酶1(HO-1)的表达变化.方法 将80只SD大鼠随机分为假手术组和模型组,每组40只,模型组采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型,假手术组以假手术代替缺血再灌注,仅分离右侧颈总动脉而不插入线栓,分别于模型建立后12 h,1d,2d,3d时间点,每组处死10只大鼠.采用化学荧光法测定脑组织活性氧水平,ELISA法检测还原型谷胱甘肽(GSH)活性;分别采用qRT-PCR和Westernblot方法观察Keap1、Nrf2和HO-1 mRNA及其蛋白表达水平.结果 与假手术组比较,模型组各时间点脑组织GSH活力显著降低,活性氧水平,Keap1、Nrf2和HO-1表达水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01).与12 h、3d比较,模型组再灌注1 d Keap1、Nrf2和HO-1 mRNA(2.82±1.10vs2.35±0.96和2.06±0.88,1.62±0.60vs1.36±0.59和1.18±0.56,2.32±1.05 vs 1.83±0.97和1.65±0.70)及其蛋白表达高(1.35±0.14 vs0.73±0.07和0.94±0.11,0.48±0.04 vs 0.42±0.03和0.44±0.03,0.98±0.17 vs0.86±0.15和0.82±0.14,P＜0.05).结论 大鼠脑缺血再灌注损伤后激活了Keap1-Nrf2信号通路,从而发挥抗氧化应激作用.
关键词： 脑缺血 氧化性应激 血红素加氧酶-1 谷胱甘肽 NF-E2相关因子2 -
Nrf2-ARE通路在自噬过程中的变化及其对肝癌细胞周期的影响
肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,在其发生过程中,自噬活性以及Nrf2-ARE通路的改变发挥着重要作用.Nrf2属于CNC家族,是肝癌的重要调节剂,自噬抑制后Nrf2-ARE通路活化有助于研究肝癌的发生发展.本文旨在探讨自噬与Nrf2-ARE通路的相互关系及其对肝癌的影响.
关键词： 肝肿瘤 自噬 NF-E2相关因子2 细胞周期 -
Nrf2-ARE通路对肝癌HepG2细胞周期及其细胞自噬的影响
目的 探索Nrf2-ARE通路对肝癌HepG2细胞增生与细胞自噬的影响.为临床探索有效的肝癌综合治疗方案提供实验依据.方法 培养肝癌HepG2细胞,用MTr比色法和流式细胞仪检测肝癌HepG2细胞增生抑制率及细胞周期各时相的变化.用倒置相差显微镜和荧光显微镜对肝癌细胞自噬进行定性观察.结果 Nrf2抑制剂BML-111组的肝癌HepG2细胞抑制率明显高于对照组(P＜0.05),对照组的肝癌HepG2细胞抑制率明显高于Nrf2诱导剂EGb组(P＜0.05);流式细胞仪示Nrf2抑制剂BML-111组细胞周期中G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多(P ＜0.05);Nrf2诱导剂EGb组细胞周期中G1期细胞减少,S期细胞增多,G2/M期细胞相对减少(P＜0.05).倒置相差显微镜和荧光显微镜检测:Nrf2抑制剂BML-111组肝癌HepG2细胞质中有大小不等的空泡及自噬体形成.结论 Nrf2-ARE通路对肝癌HepG2细胞增生及其自噬有反向抑制作用.抑制Nrf2-ARE通路后肝癌HepG2细胞多停留在细胞周期的G1期.
关键词： 自噬 肝癌细胞 NF-E2相关因子2 细胞周期 -
三氧化二砷抑制结肠肿瘤生长作用的研究
目的:观察三氧化二砷对结肠肿瘤原位生长与转移的作用.方法:将40只BALB//C裸鼠均分为对照组和实验组.实验组给予三氧化二砷,浓度为10mg.kg-1.d-1,观察对结肠原位种植肿瘤的生长和转移的影响.免疫组化检测结肠肿瘤组织中核因子E2p45相关因子(Nrf2)基因的蛋白表达水平.结果:亡实验组声鼠肿瘤的平均重量为131±45mg,比较差异有统计学意义p值<0.05.实验组Nrf2基因的蛋白表达水平明显高于对照组p<0.05.结论:三氧化二砷能预防裸鼠HT-29结肠原位肿瘤的局部生长和远处转移,这种作用可能通过诱导Nrf2基因的表达起作用.
关键词： 结肠肿瘤 三氧化二砷 NF-E2相关因子2 -
左卡尼汀通过激活Nrf2/HO-1途径减轻大鼠肝脏热缺血再灌注损伤
目的 研究左卡尼汀对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤(WIRI)的保护作用,探讨其作用机制.方法 将24只雄性SD大鼠随机分为三组:假手术(S0)组、肝热缺血及再灌注(WIR)组、左卡尼汀预处理(LC)组.LC组腹腔注射左卡尼汀,SO组及WIR组注射等量生理盐水.检测血清ALT和AST水平,测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,观察肝组织病理学改变,检测肝组织转录因子Nrf2和HO-1的mRNA表达.结果 与SO组比较,WIR组血清ALT、AST水平明显升高(P＜0.05);肝组织匀浆SOD活性明显降低,分别为(66.6±12.3)U/mgprot、(25.1±9.0) U/mgprot(P＜0.05);肝组织匀浆MDA含量明显增加,分别为(1.5±0.3) nmol/mgprot、(3.6±0.8) nmol/mgprot(P＜0.05);肝组织Nrf2、HO-1的mRNA相对含量明显增加(P＜0.05).与WIR组比较,LC组血清ALT、AST均明显降低(P＜0.05);肝组织匀浆SOD活性明显升高,分别为(25.1±9.0) U/mgprot、(86.0±11.4) U/mgprot(P＜0.05);肝组织匀浆MDA含量明显减少,分别为(3.6±0.8) nmol/mgprot、(1.4±0.2) nmol/mgprot(P＜0.05);肝组织Nrf2、HO-1的mRNA相对含量明显升高(P＜0.05).结论 左卡尼汀可减轻大鼠肝脏WIRI.这种保护作用可能是通过激活Nrf2/HO-1通路来实现.
关键词： 左卡尼汀 肝热缺血再灌注损伤 NF-E2相关因子2 血红素加氧酶1 氧化应激 -
Nrf2与肝脏缺血-再灌注损伤
缺血-再灌注损伤（IRI）是指组织器官缺血一定时间后恢复血液灌流，不仅没有恢复其功能，反而促使缺血所致的组织器官功能障碍和结构损伤更加严重的病理过程[1]。肝脏 IRI 是肝脏外科手术中常见的病理过程，多见于需要阻断肝脏血流的肝脏外科手术及肝移植术。IRI 发生机制复杂，目前认为是各种因素综合作用的结果。
关键词： NF-E2相关因子2 肝 再灌注损伤 -
脂氧素对滋养细胞氧化损伤的保护作用及其机制
目的研究脂氧素(lipoxinA4,LXA4)在孕妇血清中的表达及其对滋养细胞氧化损伤的保护作用和作用机制.方法 细胞实验分为6组,对照组;脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)组:10 μg/ml LPS作用24 h;干预组:10 μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4作用24 h;LXA4组:100 nmol/L LXA4作用24 h;拮抗组:10 μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4+100 μmol/L N-叔丁氧羰基吡咯烷(N-tert-butoxycarbonyl-2-pyrrolidine,BOC-2)作用24 h;BOC-2组:10μg/ml LPS+100 μmol/L BOC-2 作用24 h.采用酶联免疫吸附试验检测正常孕妇与子痫前期患者血清LXA4含量;以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯为荧光探针检测滋养细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;逆转录-聚合酶链反应检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD) mRNA的表达;Western印迹分析SOD、转录因子NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor,Nrf2)的蛋白表达水平;黄嘌呤氧化酶法测定滋养细胞中SOD活性.结果 (1)子痫前期患者血清LXA4水平为(165.53±18.89) pg/L,与正常孕妇[(545.67±30.91) pg/L]相比明显下降(t=40.64,P<0.01).(2)LPS组与对照组相比,滋养细胞内二氯荧光素(dichlorofluorescein,DCF)密度值明显升高(P<0.01),DCF密度值从53.00±3.08 上升至77.00±5.83( t=8.14,P<0.01);胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA和蛋白表达均显著下降(t分别为34.11、25.61和17.93,P均<0.01);滋养细胞上清中的SOD含量明显下调(t=12.16,P<0.01).(3)干预组与LPS组相比,滋养细胞内DCF密度值明显下降,DCF密度值从77.00±5.83降至62.00±3.39(t=4.97,P<0.01),胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA表达显著上升(t分别为11.74和13.17,P均<0.01),SOD蛋白表达也有所升高(t=4.67,P<0.05),滋养细胞上清中的SOD含量明显增加,酶活力上升至(8.93±0.53) U/ml(t=14.76,P<0.01).(4)拮抗组与干预组相比,滋养细胞上清中SOD含量下降至(6.23±0.41) U/ml(t=9.03,P<0.01),但仍高于LPS组(t=6.10,P<0.01);BOC-2组SOD含量为(4.90±0.32) U/ml,与LPS组相比差异无统计学意义(t=0.79,P>0.05).结论 LXA4可明显减轻LPS引起的胎盘滋养细胞氧化损伤,且LXA4可通过脂氧素受体(lipoxinA4 receptor,ALX-R)激活Nrf2/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路来发挥抗氧化损伤的作用.
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莱菔硫烷拮抗PC12细胞氧化应激损伤的机制
目的 探讨莱菔硫烷对体外1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞氧化损伤模型是否具有保护作用及其机制.方法 以MPP+损伤PC12细胞制备氧化损伤模型.不同浓度的莱菔硫烷加入培养基观察各组细胞生长情况.后续实验分成4组:正常对照组(A)、莱菔硫烷组(B)、MPP+损伤组(C)、莱菔硫烷预处理+MPP+损伤组(D).通过MTT比色法检测细胞活力,观察不同浓度莱菔硫烷预处理PC12细胞活力变化及不同分组PC12细胞活力变化；流式细胞术检测不同分组PC12细胞中细胞凋亡率的变化；免疫印迹法测定不同分组PC12细胞内转录因子相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)及醌还原氧化酶1(NQ01)蛋白的表达变化.结果 A组细胞存活率(98.70％)与MPP+(500μmol/L)组(58.16％)相比差异有统计学意义(F =21.83,P＜0.05),D组细胞存活率明显提高.C组细胞凋亡率升高,D组细胞与C组相比差异有统计学意义,莱菔硫烷预处理后细胞凋亡率明显减低.C组Nrf2、HO-1、NQ01蛋白表达下降,D组Nrf2、HO-1、NQ01蛋白表达升高.结论 莱菔硫烷对MPP+诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,莱菔硫烷对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用可能通过激活Nrf2-抗氧化反应元件通路途径实现.
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表没食子儿茶素没食子酸酯通过激活核因子相关因子2保护MPP+诱导的PC12细胞氧化损伤
目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对MPP+诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用及其与核因子相关因子-2(NRF2)之间的关系.方法 以不同浓度EGCG预处理MPP+诱导的PC12细胞,选用细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂U120作为干预药物,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性；Western blot检测细胞内NRF2表达量及核内外分布；实时荧光定量PCR检测NRF2下游抗氧化酶血红素氧合成酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQ01)在转录水平的变化.结果 MTT法显示MPP+明显降低细胞生存率,具有浓度依赖效应,而EGCG预处理能明显抑制MPP+对细胞的损伤作用；Westem blot结果显示MPP+模型组NRF2表达量为对照组的148％±5％ (t=6.102,P＜0.01),EGCG预处理组NRF2表达量为对照组的188％±6％(t=11.172,P＜0.01),U120则能抑制EGCG诱导NRF2表达增加的效应,为对照组的148％±15％(t=6.118,P＜0.01)；EGCG预处理组NRF2核内蛋白量的增加更加明显,为对照组的258％±2％(t=21.995,P＜0.01),U120+ EGCG+ MPP+组核内NRF2蛋白量较EGCG预处理组明显减低,为对照组的158％±1％(f=8.058,P＜0.01).与NRF2的变化一致,实时荧光定量PCR显示EGCG预处理组抗氧化酶HO-1、NQO1 mRNA水平较其余各组明显增高,U120也可抑制EGCG对HO-1和NQO1 mRNA的诱导效应.结论 EGCG能保护MPP+诱导的PC12细胞氧化损伤,其保护作用可能与通过激活ERK-NRF2途径,诱导下游HO-1、NQO1等抗氧化酶表达有关.
关键词： 帕金森病 儿茶素 NF-E2相关因子2 1-甲基-4-苯基吡啶 PC12细胞 -
毛蕊异黄酮激活蛋白激酶C/NF-E2相关因子2通路减轻链脲佐菌素诱导的氧化应激和β细胞凋亡
目的 探讨毛蕊异黄酮对链脲佐菌素(STZ)诱导的氧化应激和β细胞凋亡的作用以及机制.方法 大鼠胰岛细胞系RIN-m5F细胞分为对照组、STZ组、STZⅠ组、STZⅡ组和STZⅢ组,对照组不作任何处理,STZ组、STZⅠ组、STZⅡ组和STZⅢ组加入STZ至终浓度10 mmol/L,后3组在STZ加入6 h后再分别加入毛蕊异黄酮至终浓度为10、50和100μmol/L.24 h后通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)、乳酸脱氢酶(LDH)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)、Tunel法检测细胞活性和凋亡,通过线粒体膜电位、双氯荧光素(DCFH-DA)以及超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)检测评价细胞内氧化应激水平.将RIN-m5F细胞分为对照组、calycosinⅠ组、calycosinⅡ组和calycosinⅢ组,分别给予0、10、50和100μmol/L毛蕊异黄酮,通过western blot检测NF-E2相关因子2(Nrf2)表达的影响,通过免疫荧光检测毛蕊异黄酮对Nrf2转核的影响.将RIN-m5F细胞分为Ⅲ组和Ⅳ组,Ⅳ组细胞经钙磷酸蛋白C(calphostin C,100 nmol/L)处理后,两组加入STZ至终浓度10 mmol/L,再分别加入100μmol/L毛蕊异黄酮,观察Nrf2转核、氧化应激和细胞凋亡的影响.结果 STZ可诱导RIN-m5F细胞内活性氧类的蓄积和细胞凋亡,而毛蕊异黄酮可减轻STZ诱导的氧化应激和细胞凋亡,并呈剂量依赖性.毛蕊异黄酮对RIN-m5F细胞中Nrf2表达无影响,但可促进Nrf2向核内转移.给予蛋白激酶C抑制剂后毛蕊异黄酮促Nrf2转核的能力下降,并且蛋白激酶C抑制剂可明显减弱毛蕊异黄酮的抗氧化和抗凋亡能力.结论 毛蕊异黄酮可能通过激活蛋白激酶C促进Nrf2转核,从而发挥抗氧化和抗凋亡能力,有望作为新型临床药物用于糖尿病的防治.
关键词： 毛蕊异黄酮 β细胞 NF-E2相关因子2 氧化应激 凋亡 -
盐酸戊乙奎醚对新生大鼠内毒素急性肺损伤Nrf2/ARE信号通路的影响
目的 评价盐酸戊乙奎醚对新生大鼠内毒素急性肺损伤(ALI)时肺组织核因子E2相关因子-2 (Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的影响.方法 清洁级健康雄性Wistar大鼠40只、体质量12～ 18 g,7日龄.采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(NS组)、急性肺损伤组(ALI组)、盐酸戊乙奎醚组(PHC组)和盐酸戊乙奎醚+Nrf2-siRNA质粒组(PNS组).腹腔注射内毒素5.0 mg/kg制备ALI模型.PHC组和PNS组于内毒素注射前1h腹腔注射盐酸戊乙奎醚2.0 mg/kg,NS组和ALI组给予等容量生理盐水.PNS组新生大鼠进行模型制备前3d,吸入采用腺病毒包装的Nrf2-siRNA液3次(1次/d).于注射内毒素4h时处死大鼠取肺组织标本,计算肺组织湿/干重比(W/D),采用免疫印迹法(Western blotting)测定Nrf2和血红素氧合酶-1(HO-1)的表达,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)的含量;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)计数凋亡细胞,计算细胞凋亡指数(AI).结果 NS组、ALI组、PHC组、PNS组W/D分别为(4.2±0.1)、(9.6±0.7)、(6.5±0.6)、(8.3±1.3),AI分别为(3.7±0.5)％、(31.5±3.2)％、(17.6±4.2)％、(28.1±3.5)％,TNF-α分别为(10.3±1.6)、(98.5±8.5)、(68.5±6.7)、(89.9±8.5)pg/ml,IL-10分别为(7.9±0.6)、(102.8±9.3)、(72.5±5.8)、(97.7±9.1) pg/ml,Nrf2分别为(23.2±7.6)、(79.8±13.0)、(155.5±16.7)、(12.0±3.3),HO-1分别为(31.7±8.6)、(90.8±10.3)、(147.6±22.5)、(61.4±9.7),差异均有统计学意义(F=86.013、154.897、328.810、374.198、333.965、125.274,均P＜0.05);与NS组相比较,ALI组和PHC组肺组织W/D、AI和TNF-α、IL-10含量升高,Nrf2和HO-1的表达上调(均P＜0.05);与ALI组相比较,PHC组肺组织W/D、AI和TNF-α、IL-10含量下降,Nrf2和HO-1的表达上调(均P＜0.05);与ALI组相比较,PNS组肺组织W/D、AI和TNF-α、IL-10含量差异均无统计学意义(均P＞0.05),Nrf2和HO-1的表达下调(均P＜0.05);与PHC组相比较,PNS组肺W/D、AI和TNF-α、IL-10含量升高,Nrf2和HO-1表达下调(均P＜0.05).结论 Nff2/ARE信号通路参与了盐酸戊乙奎醚减轻新生大鼠内毒素性ALI.
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急性亚砷酸钠暴露对小鼠主动脉Nrf2通路的影响
目的 研究急性亚砷酸钠暴露对小鼠主动脉NF-E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)通路的影响.方法 选择健康成年清洁级雄性野生型C57BL/6小鼠作为实验动物.将15只小鼠按体重随机分成4组,分别为0(对照,n=3)及2、6、12h亚砷酸钠染毒组(n=4).采用腹腔注射方式给予5 mg/kg亚砷酸钠溶液.将10只小鼠按体重随机分成3组,分别为对照(磷酸盐缓冲溶液,n=3)组和1.25 mg/kg(n=4)、5 mg/kg(n=3)亚砷酸钠染毒组.采用腹腔注射方式染毒6h.检测小鼠主动脉中Nrf2及其下游基因谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位(GCLC)、谷氨酰半胱氨酸连接酶修饰亚单位(GCLM)以及NAD(P)H醌氧化还原酶(NQO1)mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,5 mg/kg亚砷酸钠染毒2h小鼠主动脉GCLC mRNA的表达水平及染毒6h小鼠主动脉GCLM、NQO1 mRNA的表达水平均较高,差异有统计学意义(P＜0.05);而亚砷酸钠染毒不同时间小鼠主动脉Nrf2mRNA的表达水平无明显变化.且随着亚砷酸钠染毒时间的延长,小鼠主动脉Nrf2、GCLC、GCLM及NQO1 mRNA的表达水平均呈先上升后下降的趋势.与对照组相比,5 mg/kg亚砷酸钠染毒6h小鼠主动脉GCLC、GCLM及NQO1 mRNA的表达水平均较高,差异有统计学意义(P＜0.05);而各剂量亚砷酸钠染毒6h小鼠主动脉Nrf2mRNA的表达水平均无明显改变.且随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,小鼠主动脉Nrf2、GCLC、GCLM及NQO1 mRNA的表达水平均呈上升趋势.结论 急性亚砷酸钠处理能激活小鼠主动脉Nrf2通路,提示急性无机砷暴露引起主动脉内发生氧化应激.
关键词： NF-E2相关因子2 亚砷酸钠 主动脉 -
下调Nrf2及TrxR表达对慢性髓性白血病细胞增殖的影响及机制探讨
目的 研究核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)及硫氧还蛋白还原酶(TrxR)基因表达对慢性髓性白血病(CML)细胞增殖的影响并初步探讨其作用机制.方法 根据siRNA序列设计原则,设计并合成四条针对Nrf2的小分子干扰RNA (siRNA)及一条阴性对照siRNA,并构建慢病毒载体,转染CML细胞系K562细胞,以未转染的细胞作为空白对照；应用激光共聚焦显微镜观察转染效果,流式细胞术检测转染效率；实时荧光定量PCR检测siRNA的抑制效应；CCK-8法检测细胞增殖抑制率；膜联蛋白A5(Annexin V-PE)/碘化丙锭(PI)双染法流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡状态.结果 慢病毒转染效率达65％,实时荧光定量PCR检测显示明显抑制Nrf2表达的细胞克隆为K562-C3,其Nrf2相对表达水平(1.003±0.093)高于对照组(0.344±0.032)；TrxR相对表达水平(1.090±0.549)高于对照组(0.395±0.029),差异均有统计学意义(P值均＜0.001);CCK-8法检测显示转染Nrf2特异siRNA 24、48、72 h细胞的K562-C3细胞增殖抑制率分别为(4.74±0.39)％、(6.13±1.78)％和(25.36±3.77)％；转染72 h的K562-C3细胞凋亡率(29.9％)与对照组(7.9％)比较明显提高；激光共聚焦显微镜显示Annexin V-PE标记阳性细胞出现核固缩、核碎裂及凋亡小体形成等凋亡特征.结论 在细胞水平上,Nrf2特异的siRNA转染K562细胞可抑制Nrf2表达并引起下游调控的抗氧化酶如TrxR表达下调,抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡.
关键词： K562细胞 NF-E2相关因子2 硫氧还蛋白还原酶 RNA干扰 细胞凋亡 -
PI3K/Akt/Nrf2信号通路在电针刺减轻兔内毒素休克诱发急性肺损伤中的作用
目的:评价磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路在电针刺减轻兔内毒素休克诱发急性肺损伤中的作用.方法:健康清洁级雄性新西兰大白兔80只,随机分成8组(n=10):对照组(C组)、内毒素休克诱发急性肺损伤模型组(L组)、渥曼青霉素+模型组(WL组)、渥曼青霉素组(W组)、二甲基亚砜组(D组)、模型+电针刺组(EL)、模型+电针刺激非穴位组(SEL)、模型+电针刺+渥曼青霉素组(ELW).EL组、ELW组于模型制备前1~4 d及制备过程中电针刺激兔双侧足三里和肺俞穴,SEL组用同样方法电针刺激足三里和肺俞穴旁开0.5 cm处.L组、WL组、EL组、SEL组和ELW组经耳缘静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg,C组、W组和D组给予等容量生理盐水.WL组、W组和ELW组在模型制备前30 min静注渥曼青霉素0.6 mg/kg,D组静注0.08 mL/kg DMSO, C组、L组静注生理盐水0.08 mL/kg.注射LPS或生理盐水后6 h,采集动脉血,检测TNF-α和IL-10浓度,处死动物后取肺组织,进行病理学损伤评分,测定SOD活性及MDA含量及检测p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白的表达.结果:L组、WL组、EL组、SEL组和ELW组肺损伤评分分别为(6.8±0.9)、(8.3±1.1)、(4.5±0.6)、(6.5±0.7)、(5.9±0.9),血清TNF-α浓度分别为(3.14±0.23) ng/mL、(4.62±0.32) ng/mL、(2.03±0.18) ng/mL、(3.18±0.25) ng/mL、(3.96±0.28) ng/mL,以及肺组织MDA含量分别为(4.34±0.39) nmol/mg、(6.29±0.54) nmol/mg、(3.09±0.26) nmol/mg、(4.31±0.35) nmol/mg、(5.74±0.47) nmol/mg,均较C组升高,IL-10浓度分别为(5.37±0.47) pg/mL、(3.14±0.25) pg/mL、(6.98±0.54) pg/mL、(5.34±0.43) pg/mL、(5.19±0.39) pg/mL,以及SOD含量分别为(67.6±3.8) U/mg、(42.3±2.6) U/mg、(87.5±5.6) U/mg、(62.3±4.1) U/mg、(57.4±3.5) U/mg,较C组降低,肺组织p-Akt蛋白分别为(1.58±0.29)、(1.23±0.21)、(1.93±0.32)、(1.52±0.28)、(1.46±0.24),HO-1蛋白分别为(0.67±0.09)、(0.48±0.07)、(1.05±0.12)、(0.69±0.08)、(0.74±0.09),Nrf2核蛋白分别为(0.84±0.11)、(0.61±0.09)、(1.37±0.18)、(0.89±0.12)、(0.94±0.13),以及总蛋白分别为(2.14±0.43)、(1.82±0.32)、(3.25±0.58)、(2.18±0.45)、(2.46±0.49),表达水平较C组上调(P<0.05),W组、D组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05);与L组比较,EL组肺损伤评分、血清TNF-α浓度及肺组织MDA含量降低,而IL-10浓度及SOD活性升高,肺组织p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白表达水平上调,WL组肺损伤评分、血清TNF-α浓度及肺组织MDA含量升高,而IL-10浓度及SOD活性降低,肺组织p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白表达水平下调(P<0.05),而SEL组上述各指标差异无统计学意(P>0.05);与EL组比较,ELW组肺损伤评分、血清TNF-α浓度及肺组织MDA含量升高,而IL-10浓度及SOD活性降低,肺组织p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白表达水平下调(P<0.05);与ELW组比较,WL组肺损伤评分、血清TNF-α浓度及肺组织MDA含量升高,而IL-10浓度及SOD活性降低,肺组织p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白表达水平下调(P<0.05).结论:PI3K/Akt/Nrf2信号通路介导电针刺激足三里和肺俞穴减轻兔内毒素休克诱发急性肺损伤的作用,机制可能与上调HO-1表达有关.
关键词： 磷脂酰肌醇3-激酶 NF-E2相关因子2 电针 脓毒症 血红素加氧酶-1
