首页 > 文献资料
-
Nrf2/ARE信号通路及其在卵巢中的作用研究进展
核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-derived factor 2-related factor 2，Nrf2）是细胞自身抗氧化的关键因子，当发生氧化应激刺激时，Nrf2转移入核内，与抗氧化反应原件（antioxidant response element，ARE）结合，并调节下游多种抗氧化蛋白和解毒酶的表达，起到细胞内源性保护作用。Nrf2/ARE信号通路参与了多种疾病的病理生理过程，如炎症反应、呼吸系统疾病、心血管系统疾病和肿瘤等，但该通路在女性生殖系统尤其是卵巢组织中的研究较少。综述该通路的基本组成及调节，以及该通路在卵巢疾病，尤其是在卵巢衰老中的研究进展。
关键词： NF-E2相关因子2 Nrf2/ARE信号通路 反应元件 氧化性应激 卵巢 -
Nrf2-ARE信号通路功能的研究进展
核因子E2相关因子2（nuclear factor E2 related factor 2，Nrf2）是机体抗氧化应激的中枢调节者。在正常情况下，其在胞质中被降解，不发挥生理作用。当其在体内被有毒有害物质激活后转位进入细胞核能与抗氧化反应元件（antioxidant response element，ARE）结合形成Nrf2-ARE信号通路，从而使下游一系列具有机体保护性的Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶基因及蛋白得以表达，主要包括过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、醌氧化还原酶1（NQO1）以及血红素加氧酶1（HO-1）。这些被激活的保护性酶类能够参与体内的广泛调节作用，对人体进行多方面的保护，研究发现该通路与机体炎症、肿瘤、衰老、凋亡、神经损伤、生育、妇产科疾病等多方面均有密切联系。综述Nrf2-ARE信号通路功能的研究进展，旨在全面客观地认识其生理功能。
关键词： 转录因子 NF-E2相关因子2 抗氧化反应元件 信号通路 -
不同剂量丁苯酞对UUO小鼠肾组织Nrf-2表达的影响
目的：探讨不同剂量丁苯酞（NBP）对单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠肾间质纤维化的作用，并探讨核转录因子-E2相关因子2（Nrf-2）表达水平与肾间质纤维化的关联性。方法清洁级CD-1雄性小鼠72只随机均分为低剂量丁苯酞（NBPL）组、高剂量丁苯酞（NBPH）组、假手术（Sham）组和模型（UUO）组。除Sham组外，均制作UUO模型， NBPL、NBPH组自术后第1天始分别给予NBP 150 mg/（kg·d）、220 mg/（kg·d）灌胃。Sham及UUO组亦自术后第1天始均给予等量生理盐水灌胃，每天每公斤体质量入量恒定，直至处死。各组分别于术后第3、7、14天处死6只小鼠，取梗阻侧肾组织做免疫组化染色检测Ⅰ型胶原蛋白的表达，Western Blot检测7 d和14 d时Nrf-2、Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果免疫组化结果显示，UUO组Ⅰ型胶原蛋白的IOD值随时间延长呈增高趋势，Sham组、NBPL组和NBPH组呈降低趋势（P<0.05）。UUO组、NBPL组和NBPH组各时点IOD值均较Sham组增高，NBPL、NBPH组较UUO组降低，且NBPH组低于NBPL组（P<0.05）。Western Blot结果显示，7 d和14 d时，UUO组、NBPL组和NBPH组Nrf-2、Ⅰ型胶原蛋白IOD值均较Sham组增高；NBPL、NBPH组Nrf-2蛋白IOD值较UUO组升高，而Ⅰ型胶原蛋白降低；NBPL组Nrf-2的IOD值低于NBPH组，而Ⅰ型胶原蛋白高于NBPH组（均P<0.05）。结论 NBP对UUO小鼠肾间质纤维化有一定的改善作用，作用机制可能与上调肾组织Nrf-2的表达，下调Ⅰ型胶原蛋白的表达有关。
-
缺血后处理激活大鼠心肌缺血再灌注时Nrf2-ARE信号通路的机制:与ROS的关系
目的 探讨缺血后处理激活大鼠心肌缺血再灌注时NF-E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)信号通路的机制与活性氧(ROS)的关系.方法 健康雄性SD大鼠,体重250～300g,16～20周龄,采用Langendorff灌注装置建立大鼠离体心脏灌注模型.取模型制备成功的心脏32个,采用随机数字表法分为4组(n=8):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(IPO组)和ROS清除剂N-(2-巯基丙酰)-甘氨酸+缺血后处理组(M+IPO组).平衡灌注20 min后,C组继续灌注100 min;I/R组灌注4℃St.Thomas停跳液停跳,并在32℃下缺血40 min,再灌注60 min;IPO组于再灌注即刻行缺血后处理,再灌注10 s,缺血10 s,共6个循环,然后恢复灌注58 min;M+IPO组于再灌注即刻灌注含N-(2-巯基丙酰)-甘氨酸2 mmol/L的K-H液3 min,然后行缺血后处理2min,再灌注55 min.分别于平衡灌注末及再灌注末记录HR、左心室发展压(LVDP)、左心室舒张末压(LVEDP)和左心室压力大上升速度(+dp/dtmax).分别于再灌注5 min和再灌注末时,取左心室心肌组织,采用ELISA法测定ROS含量.于再灌注末,取左心室心肌组织,观察心肌细胞超微结构,并进行线粒体损伤评分,分别采用Western blot法和RT-PCR法检测心肌组织Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、超氧化物歧化酶1(SOD1)及其mRNA的表达水平.结果 与C组比较,再灌注末I/R组和M+IPO组HR、+dp/dtmax和LVDP降低,LVEDP升高,IPO组HR、LVDP降低,LVEDP升高(P＜0.05),HR和+dp/dtmax差异无统计学意义(P＞0.05),I/R组、IPO组和M+IPO组线粒体损伤评分升高,再灌注末I/R组、IPO组和M+IPO组ROS含量升高,心肌组织Nrf2、HO-1、NQO1和SOD1及其mRNA表达下调(P＜0.05).与I/R组比较,IPO组和M+IPO组再灌注末HR、+dp/dtmax和LVDP升高,LVEDP和心肌组织ROS含量降低,心肌组织Nrf2、HO-1、NQO1和SOD1及其mRNA表达上调,IPO组线粒体损伤评分降低(P＜0.05),M+IPO组线粒体损伤评分差异无统计学意义(P＞0.05).与IPO组比较,M+IPO组再灌注末HR、+dp/dtmax和LVDP降低,LVEDP和心肌组织ROS含量升高,线粒体损伤评分升高,心肌组织Nrf2、HO-1、NQO1和SOD1及其mRNA表达下调(P＜0.05).结论 缺血后处理可调节ROS的水平,激活Nrf2-ARE信号通路,减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.
关键词： 缺血后处理 心肌再灌注损伤 活性氧 NF-E2相关因子2 反应元件 -
缺血后处理对小鼠肠缺血再灌注致肾损伤时Nrf2蛋白表达的影响
目的 评价缺血后处理对小鼠肠缺血再灌注致肾损伤时核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达的影响.方法 健康雄性C57BL/6J小鼠36只,9～12周,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理+缺血再灌注组(IPO组).采用夹闭肠系膜上动脉根部45 min恢复灌注的方法制备小鼠肠缺血再灌注损伤模型,IPO组于缺血45 min时再灌注30s,缺血30s,重复3次后恢复灌注.于再灌注2h时采集颈动脉血样,然后处死小鼠,取肾组织,测定血清BUN、Cr和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平,检测肾组织Nrf2和HO-1蛋白表达、MDA含量、SOD活性、TNF-α、IL-6和IL-10的含量.显微镜下观察肾组织病理学结果,并行病理学损伤评分.结果 与S组比较,I/R组血清BUN、Cr和NAGL浓度升高,肾脏组织Nrf2及HO-1蛋白表达上调,MDA含量升高,SOD活性降低,肾脏组织病理学损伤评分升高(P＜0.05)；与I/R组比较,IPO组血清BUN、Cr和NAGL浓度降低,肾脏组织Nrf2及HO-1蛋白表达上调,MDA含量降低,SOD活性升高,肾脏组织病理学损伤评分降低(P＜0.05).各组肾脏组织TNF-α、IL-6和IL-10含量比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 缺血后处理可减轻小鼠肠缺血再灌注致肾损伤,其机制可能与促进Nrf2蛋白表达,从而上调HO-1蛋白表达有关.
关键词： 再灌注损伤 肠系膜上动脉 肾功能试验 NF-E2相关因子2 缺血后处理 -
Nrf2-ARE信号通路在乳化异氟醚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用
目的 评价转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)信号通路在乳化异氟醚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 原代培养16 ～ 20周龄SD大鼠心肌细胞,以104/cm2的细胞密度平铺于层粘连蛋白预处理过的6孔板中孵育20 h.采用随机数字表法,将其分为3组(n=12):对照组(C组)常规培养110 min;缺氧复氧组(A/R组)心肌细胞缺氧45 min,复氧60 min;乳化异氟醚后处理组(EI组)心肌细胞缺氧45 min时以1.68 mmol/L乳化异氟醚孵育5 min,随后复氧60 min.于复氧末电镜下观察心肌细胞超微结构,并进行线粒体功能评分.采用Real-TimePCR和Western blot法检测心肌细胞Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、醌氧化还原酶1(NQO1) mRNA及其蛋白表达水平.采用荧光共聚焦显微镜观察Nrf2的核转位情况,记录心肌细胞核内Nrf2活性.结果 与C组比较,A/R组和EI组心肌细胞线粒体损伤评分升高,心肌细胞Nrf2、HO-1、SOD1和NQO1 mRNA及其蛋白表达下调,心肌细胞核内Nrf2活性增强(P＜0.05);与A/R组比较,EI组心肌细胞线粒体损伤程度评分降低,心肌细胞Nrf2、HO-1、SOD1和NQO1 mRNA及其蛋白表达上调,心肌细胞核内Nrf2活性增强(P＜0.05).结论 乳化异氟醚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的机制可能与诱导Nrf2核转位从而激活Nrf2-ARE信号通路有关.
关键词： NF-E2相关因子2 心肌再灌注损伤 异氟醚 脂肪乳剂 静脉注射用 -
Nrf2/ARE信号通路在异丙酚减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用
目的 评价核因子E2相关因子-2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路在异丙酚减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性成年SD大鼠60只,体重200～ 240 g,采用随机数字表,将其分为5组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、异丙酚组(P组)、异丙酚+Nrf2空白质粒组(PNV组)和异丙酚+Nrf2-siRNA质粒组(PNS组).吸入2％异氟醚麻醉后,气管插管行机械通气.采用结扎冠状动脉左前降支5 min,再灌注60 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.P组、PNV组和PNS组气管插管成功后停止吸入异氟醚,尾静脉输注异丙酚6 mg·kg-1·h至再灌注30min;输注异丙酚30 min时PNV组心肌内注射Nrf2空质粒液10μg (100 μl),PNS组心肌内注射Nrf2-siRNA质粒混悬液10 μg(100μl),然后制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.再灌注60 min时处死大鼠,取心肌组织,测定心肌细胞凋亡指数、心肌梗死体积、Nrf2和血红素氧合酶-1(HO-1)的表达.结果 与S组比较,I/R组和P组心肌梗死体积和心肌细胞凋亡指数升高,心肌组织Nrf2和HO-1的表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,P组心肌梗死体积和心肌细胞凋亡指数降低,心肌组织Nrf2和HO-1的表达上调(P＜0.05);与P组比较,PNV组心肌梗死体积、心肌细胞凋亡指数、心肌组织Nrf2和HO-1的表达差异无统计学意义(P＞0.05),PNS组心肌梗死体积和心肌细胞凋亡指数升高,心肌组织Nrf2和HO-1的表达下调(P＜0.05).结论 Nrf2/ARE信号通路参与了异丙酚减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.
关键词： 二异丙酚 心肌再灌注损伤 NF-E2相关因子2 反应元件 -
氢气对脓毒症小鼠肺组织Nrf2/ARE通路的影响
目的 评价氢气对脓毒症小鼠肺组织核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应原件(ARE)通路的影响.方法 雄性ICR小鼠72只,体重20～ 25 g,6周龄,采用随机数字表法,将其分为4组(n=18):假手术组(SH组)、氢气组(H2组)、脓毒症组(S组)和脓毒症+氢气组(S+H2组).采用盲肠结扎穿孔 (CLP)法制备脓毒症模型.于CLP术后1和6h时H2组和S+H2组吸入2％氢气1h.分别于CL术后7、12和24 h时各处死6只小鼠,取肺组织,采用Western blot法测定Nrf2和血红素氧合酶-1(HO-1)的蛋白表达,采用RT-PCR法检测Nrf2 mRNA的表达;于CLP术后24 h时测定肺组织病理学损伤评分和湿重/干重比值(W/D比值),采用Western blot法测定肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达.结果 与SH组比较,S组和S+H2组肺组织病理学损伤评分和W/D比值升高,Nrf2蛋白及其mRNA、HO-1和HMGB1的表达上调(P＜0.05),H2组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与S组比较,S+H2组肺组织病理学损伤评分和W/D比值降低,Nrf2蛋白及其mRNA、HO-1的表达上调,HMGB1表达下调(P＜0.05).结论 氢气减轻脓毒症小鼠急性肺损伤的机制与激活Nrf2/ARE通路有关.
关键词： 氢 脓毒症 NF-E2相关因子2 反应元件 -
Nrf2在氢减轻脓毒症小鼠肠损伤中的作用
目的 评价核因子E2相关因子2(Nrf2)在氢减轻脓毒症小鼠肠损伤中的作用.方法 清洁级雄性野生型及Nrf2基因敲除ICR小鼠各18只,6～8周龄,体重20～ 25 g,采用随机数字表法将2种小鼠各分为3组(n=6):假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)和氢气组(H2组).采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症模型.H2组小鼠于术后1和6h时各吸入2％氢气1h.术后24 h时处死小鼠取小肠组织,采用ELISA法测定TNF-α、IL-1β和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的含量;采用分光光度计测定SOD和过氧化氢酶(CAT)的活性及MDA含量;采用Multiskan酶标仪测定人8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)的含量;采用Western blot法及RT-PCR法分别检测血红素氧合酶1(HO-1)、HMGB1及其mRNA的表达.结果 野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠:与Sham组比较,Sep组TNF-α、IL-1β、HMGB1、MDA及8-iso-PGF2α的含量增加,HO-1和HMGB1及其mRNA表达上调,CAT和SOD活性降低(P＜0.05).野生型小鼠:与Sep组比较,H2组TNF-α、IL-1β、HMGB1及其mRNA、MDA及8-iso-PGF2α水平降低,HO-1及其mRNA水平升高,CAT和SOD活性增强(P＜0.05).Nrf2基因敲除小鼠:与Sep组比较,H2组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与野生型小鼠H2组比较,Nrf2基因敲除小鼠H2组TNF-α、IL-1β、HMGB1及其mRNA、MDA及8-iso-PGF2α水平升高,HO-1及其mRNA表达下调,CAT与SOD活性降低(P＜0.05).结论 氢减轻脓毒症小鼠肠损伤的机制与Nrf2有关.
-
Nrf2/HO-1信号通路在远端缺血预处理减轻小鼠内毒素性急性肺损伤中的作用
目的 评价核转录因子NF-E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路在远端缺血预处理减轻小鼠内毒素性急性肺损伤中的作用.方法 健康雄性C57BL/6小鼠68只,6～8周龄,体重22～ 26 g,采取随机数字表法分为4组(n=17):对照组(C组)、急性肺损伤组(ALI组)、远端缺血预处理组(RIPC组)、鸦胆子苦醇+远端缺血预处理组(B+RIPC组).C组气管内注入生理盐水100μl;ALI组气管内注入LPS 5 mg/kg制备急性肺损伤模型;RIPC组于制备急性肺损伤模型前1h,施行远端缺血预处理:将止血带置于小鼠右后肢,充气5 min后放气5 min,共6个循环;B组于制备急性肺损伤模型前10 d开始,隔天腹腔注射Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇2 mg/kg(溶于1％二甲基亚砜100μl中);B+RIPC组于制备急性肺损伤模型前10d,隔天腹腔注射鸦胆子苦醇2 mg/kg,模型制备前1h时行远端缺血预处理.模型制备后24 h时,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定蛋白浓度,并行中性粒细胞计数;然后处死小鼠,取肺组织,计算含水率,光镜下观察病理学结果,采用比色法测定MPO活性,采用ELISA法检测IL-1β和TNF-α的含量,采用Western blot法测定Nrf2、HO-1和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平.结果 与C组比较,ALI组肺组织含水率、MPO活性、IL-1β和TNF-α含量、BALF中性粒细胞计数和蛋白浓度升高,肺组织Nrf2、HO-1和HMGB1表达上调(P＜0.05);与ALI组比较,RIPC组肺组织含水率、MPO活性、IL-1β和TNF-α含量、BALF中性粒细胞计数和蛋白浓度降低,肺组织Nrf2和HO-1表达上调,HMGB1表达下调(P＜0.05),病理学损伤减轻;与RIPC组比较,B+RIPC组组肺组织含水率、MPO活性、IL-1β和TNF-α含量、BALF中性粒细胞计数和蛋白浓度升高,肺组织Nrf2和HO-1表达下调,HMGB1表达上调(P＜0.05),病理学损伤加重.结论Nrf2/HO-1信号通路的激活参与了远端缺血预处理减轻大鼠内毒素性急性肺损伤.
-
乳化异氟醚后处理对大鼠心肌缺血再灌注时Nrf2-ARE信号通路的影响：离体实验
目的：评价乳化异氟醚后处理对大鼠缺血再灌注时核转录因子 NF?E2相关因子2（ Nrf2）?抗氧化反应元件（ ARE）信号通路的影响。方法健康雄性SD大鼠，体重250～300 g，4～5月龄，采用Langendorff灌注装置建立大鼠离体心脏灌注模型。取模型制备成功的心脏32个，采用随机数字表法分为4组（ n＝8）：对照组（ C组）、缺血再灌注组（ I∕R组）、乳化异氟醚后处理组（ EIP组）和脂肪乳组（ F组）。平衡灌注20 min后，C组继续灌注100 min；I∕R组32℃下缺血40 min，恢复灌注60 min；EIP组32℃下缺血40 min，于再灌注前即刻灌注含乳化异氟醚1．68 mmol∕L的K?H液2 min，继续灌注37℃含氧的K?H液58 min；F组32℃下缺血40 min，于再灌注前即刻灌注含脂肪乳712 mg∕L 的K?H液2 min，继续灌注37℃含氧K?H液58 min。分别于平衡灌注末及再灌注末记录HR、左室发展压（LVDP）、左室舒张末压（LVEDP）和左心室压力大上升速度（＋dp∕dtmax）。于再灌注末，取左心室心肌组织，观察心肌细胞超微结构，分别采用RT?PCR法和Western blot法检测心肌组织Nrf2、血红素加氧酶?l （HO?1）、醌氧化还原酶1（NQO1）、超氧化物歧化酶1（SOD1）及其mRNA的表达水平。结果与C组比较，再灌注末I∕R组和F组HR、＋dp∕dtmax和LVDP 降低，LVEDP 升高，EIP组LVDP降低，LVEDP升高（ P＜0．05），HR和＋dp∕dtmax差异无统计学意义（ P＞0．05）， I∕R组、EIP组和F组心肌组织Nrf2、HO?1、NQO1和SOD1及其mRNA的表达下调（ P＜0．05）；与I∕R组比较，EIP组和F组再灌注末HR、＋dp∕dtmax和LVDP 升高，LVEDP 降低，EIP 组心肌组织Nrf2、HO?1、NQO1和SOD1及其mRNA的表达上调， F组心肌组织Nrf2、HO?1、NQO1和SOD1的mRNA表达上调，Nrf2和HO?1的表达上调（ P＜0．05），NQO1和SOD1的表达差异无统计学意义（ P＞0．05）；与EIP组比较，F组再灌注末HR、＋dp∕dtmax和LVDP降低，LVEDP升高，心肌组织Nrf2、HO?1、NQO1和SOD1及其mRNA的表达下调（ P＜0．05）。结论乳化异氟醚后处理可能通过激活Nrf2?ARE信号通路，减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。
-
PI3K/Akt/Nrf2信号通路在兔内毒素休克诱发急性肺损伤中的作用
目的 评价磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路在兔内毒素休克诱发急性肺损伤中的作用.方法 健康雄性新西兰大白兔30只,2月龄,体重1.5～2.0 kg,采用随机数字表法分为3组(n=10):对照组(C组)、急性肺损伤组(ALI组)和渥曼青霉素组(W组).W组耳缘静脉注射渥曼青霉素0.6 mg/kg(溶于0.08 ml/kg二甲基亚砜中),C组和ALI组耳缘静脉注射等容量生理盐水.30 min后,ALI组和W组耳缘静脉注射脂多糖5 mg/kg(溶于2 ml生理盐水中)制备急性肺损伤模型,C组耳缘静脉注射等容量生理盐水.注射脂多糖或生理盐水后6h时处死动物,取肺组织,光镜下观察病理学结果,并进行肺损伤评分,测定肺组织湿重/干重比值(W/D比值),采用Western blot法测定肺组织磷酸化Akt(p-Akt)、Nrf2和血红素氧合酶-1(HO-1)的表达,采用实时荧光定量PCR法测定肺组织Nrf2 mRNA和HO-1 mRNA的表达.结果 与C组比较,ALI组和W组肺损伤评分和肺组织W/D比值升高,p-Akt、Nrf2及其mRNA和HO-1及其mRNA表达上调(P＜0.05);与ALI组比较,W组肺损伤评分和肺组织W/D比值升高,p-Akt、Nrf2及其mRNA和HO-1及其mRNA表达上调(P＜0.05).结论 PI3K/Akt/Nrf2信号通路激活是兔内毒素休克诱发急性肺损伤时机体的适应性调节机制.
-
电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤的机制:与Nrf2/ARE通路的关系
目的 探讨电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤的机制与核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)通路的关系.方法 健康雄性新西兰大白兔40只,2月龄,体重1.5～2.0kg,采取随机数字表法,将其分为4组(n=10):假手术组(S组)、内毒素休克组(ES组)、电针刺激穴位+内毒素休克组(EA组)、电针刺激非穴位+内毒素休克组(NA-EA组).ES组、EA组及NA-EA组静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg制备内毒素休克模型.S组给予等容量的生理盐水.EA组于模型制备前1～4d及模型制备过程中电针刺激双侧足三里、内关和肺俞穴(疏密波,频率2/15 Hz,刺激电流1～2 mA,波宽0.2 ～ 0.6 ms,刺激强度以兔肢体出现轻微颤动为宜),1次/d,30 min/次;NA-EA组电针刺激足三里、内关和肺俞穴旁开0.5 cm非经非穴处,针刺参数同EA组.静脉注射LPS或生理盐水后6h时,处死动物,取肺组织,进行病理学观察及肺损伤评分,计算肺组织湿重/干重(W/D)比值,测定肺组织MDA含量及SOD活性,检测Nrf2 mRNA、核蛋白和总蛋白Nrf2的表达水平,计算核蛋白与总蛋白Nrf2表达水平的比值(N/T比值).结果 与S组比较,ES组、EA组和NA-EA组肺组织W/D比值、MDA含量和肺组织损伤评分升高,SOD活性降低,肺组织Nrf2 mRNA、总蛋白及核蛋白Nrf2表达上调,N/T比值升高(P＜0.05);与ES组比较,EA组肺组织W/D比值、MDA含量和肺组织损伤评分降低,SOD活性升高,肺组织Nrf2 mRNA、总蛋白及核蛋白Nr2表达上调,N/T比值升高(P＜0.05),NA-EA组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤的机制可能与激活Nrf2/ARE通路,增强抗氧化能力有关.
-
Nrf2∕ARE信号通路在氢抑制LPS致巨噬细胞炎症因子释放中的作用
目的：评价NF?E2相关因子2（ Nrf2）∕抗氧化反应序列原件（ ARE）信号通路在氢抑制LPS致巨噬细胞炎症因子释放中的作用。方法小鼠巨噬细胞株RAW264．7接种于6孔培养板（2×106个∕孔），采用随机数字表法将其分为4组（ n＝24）：对照组（ C组）、LPS组、富氢液＋LPS组（ LPS＋H2组）和Nrf2小干扰RNA（ siRNA）＋ LPS＋富氢液组（ siRNA＋LPS＋H2组）。 LPS组加入LPS 1μg∕ml；LPS＋H2组加入LPS 1μg∕ml，培养基更换为0．6 mmol∕L的富氢液培养基；siRNA＋LPS＋H2组将Nrf2?siRN成功转染至细胞后，继续培养24 h，加入LPS 1μg∕ml，培养基更换为0．6 mmol∕L的富氢液培养基。于孵育24 h时，收集上清液，采用比色法测定LDH活性，采用ELISA法检测TNF?α、IL?1β、高迁移率族蛋白B1（ HMGB1）和IL?6的浓度；收集细胞，采用MTT法测定细胞增殖水平，采用Western blot法检测Nrf2和血红素氧合酶?1（ HO?1）的表达水平。结果与C组比较，LPS组和siRNA＋ LPS＋H2组上清液 LDH活性、TNF?α、IL?1β、IL?6和HMGB1的浓度升高，细胞增殖水平降低，HO?1表达上调， LPS组和LPS＋H2组细胞Nrf2表达上调（P＜0．05）；与LPS组比较，LPS＋H2组上清液LDH活性、TNF?α、IL?1β、IL?6和HMGB1的浓度降低，细胞增殖水平升高，Nrf2和HO?1的表达上调，siRNA＋LPS＋H2组细胞Nrf2和HO?1的表达下调（P＜0．05）；与LPS＋H2比较，LPS＋H2＋siRNA组上清液LDH活性、TNF?α、IL?1β、IL?6和HMGB1的浓度升高，细胞增殖水平降低，Nrf2和HO?1的表达下调（ P＜0．05）。结论氢抑制LPS致巨噬细胞炎症因子释放的机制与激活Nrf2∕ARE信号通路有关。
-
Nrf2/ARE信号通路在硫酸锌预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用
目的 评价转录因子相关因子2 (Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路在硫酸锌预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 SPF级健康雄性SD大鼠,体重250~280 g,16~20周龄,采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏灌注模型.取模型制备成功的心脏40个,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、硫酸锌预处理组(Zn组)和硫酸锌预处理+Nrf2/ARE信号通路阻断剂毛地黄酮组(Zn+Lut组).平衡灌注20 min时,C组继续灌注100 min;I/R组缺血前灌注4 ℃的St.Thomas停跳液,32 ℃下全心缺血40 min,恢复灌注60 min制备缺血再灌注模型;Zn组腹腔注射200 μmol/L硫酸锌1.5 ml/kg,24 h后制备模型;Zn+Lut组于缺血前即刻灌注含毛地黄酮50 μmol/L的K-H液3 min,其余处理同Zn组.分别于平衡灌注末和再灌注末时,记录HR、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室发展压(LVDP)和左心室压力大上升速率(+dp/dtmax);于再灌注末取灌注流出液,采用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)水平;采用Western blot法检测心肌组织血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、超氧化物歧化酶1(SOD1)和Nrf2的表达水平.结果 与C组比较,I/R组和Zn+Lut组再灌注末HR、+dp/dtmax和LVDP降低,LVEDP升高,灌注流出液LDH和MDA水平升高,I/R组、Zn组和Zn+Lut组心肌NQO1、HO-1、Nrf2及SOD1表达上调(P<0.05);与I/R组比较,Zn组再灌注末HR、+dp/dtmax和LVDP升高,LVEDP降低,灌注流出液LDH和MDA水平降低,心肌NQO1、HO-1、Nrf2及SOD1表达上调(P<0.05);与Zn组比较,Zn+Lut组再灌注末HR、+dp/dtmax和LVDP降低,LVEDP升高,灌注流出液LDH和MDA水平升高,心肌NQO1、HO-1和SOD1表达下调(P<0.05),Nrf2表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 硫酸锌预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制与激活Nrf2/ARE信号通路有关.
关键词： NF-E2相关因子2 硫酸锌 缺血预处理 心肌再灌注损伤 -
Nrf2-ARE通路在缺血后处理和吡那地尔后处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用
目的 探讨核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)通路在缺血后处理和吡那地尔后处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,体重200～250 g,4～5月龄,采用Langendorff灌注装置建立离体心脏灌注模型,取模型制备成功的心脏56个,采用随机数字表法,将其随机分为7组(n=8):正常对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(IP组)和不同浓度的吡那地尔后处理组(PP1组、PP2组、PP3组、PP4组).平衡灌注20min后,C组继续灌注100 min；I/R组停止灌注40 min,复灌60min；IP组停止灌注40 min,于再灌注开始给予6次间隔灌注10 s停止灌注10 s,复灌58 min；PP1组、PP2组、PP3组、PP4组停止灌注40 min,于再灌注开始时灌注含5、10、30、50 μmol/L吡那地尔的K-H液5min,继续灌注55 min.于平衡灌注末及复灌结束时测定左室发展压(LVDP)和左室舒张期末压(LVEDP);于复灌结束时取左心室心肌,分别采用RT-PCR法和Western blot法检测心肌Nrf2、醌氧化还原酶1(NQO1)、超氧化物歧化酶1(SOD1)及血红素加氧酶1(HO-1)的mRNA及蛋白表达水平.结果 与C组比较,其余各组Nrf2、NQO1、SOD1及HO-1的mRNA和蛋白表达均上调,I/R组、PP1组和PP2组复灌结束时LVDP降低,LVEDP升高(P＜0.05).与I/R组比较,IP组、PP3组和PP4组Nrf2、NQO1、SODI及HO-1的mRNA和蛋白表达均上调,IP组、PP1组、PP2组、PP3组和PP4组复灌结束时LVDP升高,LVEDP降低(P＜0.05).结论 缺血后处理和吡那地尔后处理可通过激活Nrf2-ARE通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.
-
姜黄素预先给药对兔呼吸机相关性肺损伤时Nrf2蛋白表达的影响
目的 评价姜黄素预先给药对兔呼吸机相关性肺损伤核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达的影响.方法 健康成年雄性新西兰大白兔24只,3～6月龄,体重2.5 ～ 3.0 kg,采用随机数字表法分为3组(n=8):双肺通气组(TLV组)、单肺通气组(OLV组)和姜黄素预先给药组(Cur组).于通气前7d开始灌胃给药,Cur组给予姜黄素40 mg/kg(溶于2ml 1％羟甲基纤维素钠),TLV组和OLV组给予等量羟甲基纤维素钠,每天早晚各1次.行气管切开术,TLV组采用单腔气管导管置入气管行双肺通气,OLV组和Cur组采用单腔气管导管置入右主支气管行单肺通气.3组均采用容量通气模式,调整通气参数,维持SpO2＞90％.于通气开始即刻(T0)、通气1、2和3 h(T1-3)时采集右股动脉血样行血气分析,测定PaO2,计算氧合指数.通气3h时处死兔,取右肺称湿重,然后取下叶肺组织,采用化学比色法测定肺组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;光镜下观察肺组织病理学结果并行肺组织病理学损伤评分,Western blot法检测Nrf2和HO-1蛋白表达,将右肺烘烤后称干重,计算右肺湿/干重比值(W/D比值).结果 与TLV组比较,OLV组和Cur组W/D比值、肺损伤评分、MDA含量、Nrf2和HO-1蛋白表达水平升高,SOD活性和T23时氧合指数降低(P＜0.05);与OLV组比较,Cur组W/D比值、肺损伤评分、MDA含量下降,SOD活性、T3时氧合指数、Nrf2和HO-1蛋白表达水平升高(P＜ 0.05).结论 姜黄素预先给药通过促进肺组织Nrf2蛋白表达减轻兔呼吸机相关性肺损伤.
-
ROS在乳化异氟醚后处理激活大鼠心肌细胞Nrf2/ARE信号通路中的作用
目的 评价活性氧(ROS)在乳化异氟醚后处理激活大鼠心肌细胞转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路中的作用.方法 原代培养大鼠心肌细胞,采用随机数字表法分为4组(n=20):对照组(C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、乳化异氟醚后处理组(EIP组)、乳化异氟醚后处理+ROS清除剂N-2-巯基丙酰-甘氨酸(MPG)组(EIP+MPG组).采用混合气体培养法制备心肌细胞缺氧/复氧损伤模型.EIP组缺氧45 min时加入乳化异氟醚(终浓度1.68mmol/L),孵育5 min,随后复氧60 min;EIP+MPG组于乳化异氟醚孵育5 min时加入MPG(终浓度2mmol/L),孵育10 min,其余步骤同EIP组.于复氧末观察心肌细胞超微结构,行线粒体损伤评分;测定细胞内游离Ca2+水平及Nrf2活性;采用RT-PCR法及Western blot法分别检测Nrf2及血红素加氧酶-1(HO-1)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、醌氧化还原酶(NQ01)的mRNA及蛋白表达水平.结果 与C组比较,其余3组线粒体损伤评分和细胞内游离Ca2+水平升高,Nrf2活性增强,Nrf2、HO-1、SOD1及NQ01及其mRNA表达下调(P＜0.05);与H/R组比较,EIP组与EIP+MPG组线粒体损伤评分和细胞内游离Ca2+水平降低,Nrf2活性增强,Nrf2、HO-1、SOD1及NQ01及其mRNA表达上调(P＜0.05),心肌细胞病理学损伤减轻;与EIP组比较,EIP+MPG组线粒体损伤评分和细胞内游离Ca2+水平升高,Nrf2活性减弱,Nrf2、HO-1、SOD1及NQ01及其mRNA表达下调(P＜0.05),心肌细胞病理学损伤加重.结论 乳化异氟醚后处理激活大鼠心肌细胞Nrf2/ARE信号通路的机制可能与ROS有关.
-
P KCα-Nrf2-HO-1信号通路在内毒素休克诱发兔急性肺损伤中的作用
目的：评价蛋白激酶 Cα（PKCα）?核因子 E2相关因子2（Nrf2）?血红素氧合酶1（ HO?1）信号通路在内毒素休克诱发兔急性肺损伤中的作用。方法健康清洁级雄性新西兰大白兔30只，2月龄，体重2．0～2．5 kg，采用随机数字表法分为3组（ n＝10）：对照组（ C组）、急性肺损伤组（ ALI组）和PKC抑制剂白屈菜赤碱组（ CHE组）。 CHE组腹腔注射白屈菜赤碱8 mg∕kg（溶于0．5 ml二甲基亚砜），30 min后，ALI组和CHE组耳缘静脉注射LPS 5 mg∕kg（溶于2 ml生理盐水）制备内毒素休克诱发急性肺损伤模型。静脉注射LPS或生理盐水6 h时，处死大鼠，取肺组织，光镜下观察病理学结果，并行肺损伤评分，测定肺组织湿重∕干重（ W∕D）比值，采用荧光定量 PCR 法测定 Nrf2 mRNA和HO?1 mRNA的表达水平，采用Western blot方法测定Nrf2和HO?1的表达水平。结果与C组比较，ALI组和CHE组肺损伤评分和W∕D比值升高，肺组织Nrf2、HO?1及其mRNA的表达上调（ P＜0．05）；与ALI组比较，CHE组肺损伤评分和W∕D比值升高，肺组织Nrf2、HO?1及其mRNA的表达下调（ P＜0．05）。结论 PKCα?Nrf2?HO?1信号通路是内毒素休克诱发兔急性肺损伤时机体的内源性保护机制之一。
-
p38MAPK信号通路在电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤中的作用:与Nrf2的关系
目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤中的作用及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)的关系.方法 健康雄性新西兰大白兔70只,2月龄,体重1.5 ～ 2.5 kg,采用随机数字表法分为7组(n=10):对照组(C组)、内毒素休克诱发急性肺损伤模型组(A组)、p38MAPK抑制剂组(SB组)、模型+p38MAPK抑制剂组(A-SB组)、模型+电针组(A-EA组)、模型+电针非穴位组(A-NEA组)和模型+电针穴位+p38MAPK抑制剂组(A-EA-SB组).模型制备前1～4d及模型制备过程中,A-EA组和A-EA-SB组电针刺激穴位,采用疏密波2/100 Hz,强度以出现轻微肌颤为宜,30 min/次,1次/d,A-NEA组采用同样的频率以及强度电针刺激穴位旁开0.5 cm处,A组、A-SB组、A-EA组、A-NEA组和A-EA-SB组静脉注射内毒素5 mg/kg,C组和SB组给予等容量生理盐水.模型制备成功后SB组、A-SB组和A-EA-SB组静脉注射p38MAPK抑制剂5μmol/kg,C组给予等容量生理盐水,其余各组给予等容量无水乙醇.静脉注射内毒素或生理盐水后6h,取颈动脉血样行血气分析后放血处死动物,取肺组织行病理学观察并进行肺损伤评分,计算肺湿重/干重(W/D)比值,测定肺组织MDA含量及SOD活性,检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)及Nrf2表达水平.结果 与C组比较,A组、A-SB组、A-EA组、A-NEA组和A-EA-SB组肺损伤评分、W/D比值、肺组织MDA含量、p-p38MAPK及Nrf2表达水平升高,SOD活性降低(P＜0.05);与A组比较,A-EA组和A-EA-SB组肺损伤评分、W/D比值、肺组织MDA含量降低,SOD活性、p-p38MAPK及Nrf2表达水平升高(P＜0.05);与A-EA组比较,A-EA-SB组肺损伤评分、W/D比值、肺组织MDA含量升高,SOD活性、p-p38MAPK及Nrf2表达水平降低(P＜0.05).结论 p38MAPK信号通路介导了电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤,其机制与其上调Nrf2表达有关.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 电刺激疗法 休克 脓毒性 呼吸窘迫综合征 成人 NF-E2相关因子2
