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电针对内毒素性急性肾损伤兔肾组织Nrf2表达的影响:与p38MAPK信号通路的关系
目的 探讨电针对内毒素性急性肾损伤兔肾组织NF-E2相关因子2(Nrf2)表达的影响及其与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的关系.方法 健康雄性新西兰大白兔70只,体重1.5～ 2.0 kg,2月龄,采用随机数字表法分为7组(n=10):正常对照组(C组)、内毒素性急性肾损伤组(AKI组)、电针+内毒素性急性肾损伤组(EA组)、非穴位+内毒素性急性肾损伤组(SA组)、电针+内毒素性急性肾损伤+ p38MAPK特异性阻断剂SB203580组(EAS组)、SB203580组(S组)和无水乙醇组(A组).EA组和EAS组电针双侧足三里穴和肾俞穴15 min(刺激强度以兔下肢微颤为宜,疏密波,频率2/100 Hz,刺激电流1～2 mA,波宽0.2 ～ 0.6 ms),1次/d,连续5 d;SA组以相同电针参数刺激足三里穴及肾俞穴旁开0.5 cm处.后一次电针后24 h,AKI组、EA组、SA组和EAS组静脉注射脂多糖5 mg/kg制备内毒素性急性肾损伤模型,其余各组给予等容量生理盐水.模型制备前30 minEAS组及S组静脉注射SB203580 5μmol/kg(溶于0.5ml无水乙醇),A组静脉注射0.5 ml无水乙醇,其余组给予等容量生理盐水.给予脂多糖或生理盐水后6h时,采集动脉血样,测定血清BUN和Cr浓度,处死兔取肾组织,进行肾组织损伤评分,采用Western blot法测定肾组织Nrf2蛋白表达及p38MAPK磷酸化水平,采用荧光定量PCR法测定Nrf2 mRNA的表达.结果 与C组比较,AKI组、EA组、SA组及EAS组肾组织损伤评分及血清BUN和Cr浓度升高,肾组织Nrf2 mRNA及蛋白表达上调,AKI组、EA组及SA组p38MAPK磷酸化水平升高(P＜0.05),S组及A组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与AKI组比较,EA组及EAS组肾组织损伤评分及血清BUN和Cr浓度降低,肾组织Nrf2 mRNA及蛋白表达上调,EA组p38MAPK磷酸化水平升高,EAS组p38MAPK磷酸化水平降低(P＜0.05),SA组上述各指标差异无统计学意义(P＞ 0.05);与EA组比较,EAS组肾组织损伤评分及血清BUN和Cr浓度升高,肾组织Nrf2 mRNA及蛋白表达下调,p38MAPK磷酸化水平降低(P＜0.05).结论 电针减轻兔内毒素性急性肾损伤的机制可能与激活p38MAPK信号通路从而上调肾组织Nrf2表达的有关.
关键词： 电针 NF-E2相关因子2 p38丝裂原活化蛋白激酶类 内毒素血症 肾 -
蛋白激酶Cα在电针减轻内毒素休克诱发兔急性肾损伤中的作用:与Nrf2/HO-1通路的关系
目的 评价蛋白激酶Cα(PKCα)在电针减轻内毒素休克诱发兔急性肾损伤中的作用及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的关系.方法 健康清洁级雄性新西兰大白兔80只,2月龄,体重1.5 ～ 2.0 kg,采用随机数字表法分为8组(n=10):假手术组(S组)、内毒素休克致急性肾损伤组(AKI组)、PKCα抑制剂-白屈菜赤碱+AKI组(CHA组)、白屈菜赤碱组(Che组)、溶媒-二甲基亚砜组(D组)、电针刺激穴位+AKI组(EA组)、电针刺激非穴位+AKI组(SEA组)和电针刺激穴位+白屈菜赤碱+AKI组(CEA组).EA组和CEA组于模型制备前1-4 d及模型制备过程中电针刺激双侧足三里和肾俞穴,疏密波,频率2/15 Hz,刺激电流1～2 mA,波宽0.2～0.6 ms,刺激强度以兔肢体出现轻微肌颤为宜,1次/d,30 min/次.SEA组以同样方法电针刺激足三里和肾俞穴旁开0.5 cm非经非穴处.AKI组、CHA组、EA组、SEA组和CEA组采用耳缘静脉注射脂多糖5 mg/kg的方法制备内毒素休克致急性肾损伤模型,S组、Che组和D组给予等容量生理盐水.于模型制备前30 min,CHA组和CEA组静脉注射白屈菜赤碱5 mg/kg(溶于0.5 ml 0.1％二甲基亚砜),Che组给予等量白屈菜赤碱,D组给予二甲基亚砜0.5 ml.静脉注射脂多糖或生理盐水后6h时,采集颈内动脉血样,检测血清BUN和Cr浓度,处死大鼠后取肾组织,行病理学观察并进行评分,测定肾组织MDA含量及SOD活性,检测肾组织PKCα、HO-1蛋白、核蛋白及总蛋白中Nrf2的表达水平.结果 与S组比较,AKI组、CHA组、EA组、SEA组和CEA组血清BUN和Cr浓度升高,肾组织MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织病理学评分升高,PKCα、HO-1蛋白、核蛋白及总蛋白Nrf2的表达上调(P＜0.05);与AKI组比较,EA组血清BUN和Cr浓度降低,肾组织MDA含量降低,SOD活性升高,肾组织病理学评分降低,PKCα、HO-1蛋白、核蛋白及总蛋白Nrf2的表达上调,CHA组和CEA组血清BUN和Cr浓度升高,肾组织MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织病理学评分升高,PKCα、HO-1蛋白、核蛋白及总蛋白Nrf2的表达下调(P＜0.05);与EA组比较,CEA组血清BUN和Cr浓度升高,肾组织MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织病理学评分升高,PKCα、HO-1蛋白、核蛋白及总蛋白Nrf2的表达下调(P＜0.05);与CEA组比较,CHA组血清BUN和Cr浓度升高,肾组织MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织病理学评分升高,PKCα、HO-1蛋白、核蛋白及总蛋白Nrf2的表达下调(P＜0.05).结论 PKCα介导电针足三里和肾俞穴减轻内毒素休克诱发兔急性肾损伤的作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路有关.
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Nrf2/ARE信号通路在异丙酚减轻老龄大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用
目的 评价核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路在异丙酚减轻老龄大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用.方法 清洁级健康雄性SD大鼠32只,18～22月龄,体重450～600 g,采用随机数字表法将其分为4组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血再灌注+异丙酚组(I/R+P组)和全反式维甲酸+缺血再灌注+异丙酚组(ARTA+I/R+P组).采用夹闭右肺门60 min,再灌注120 min的方法制备肺缺血再灌注损伤.ARTA+ I/R+P组腹腔注射Nrf2/ARE信号通路阻断剂全反式维甲酸6 mg/kg,1次/d,连续3d;后1次给药后2h时制备肺缺血再灌注损伤模型.I/R+P组和ARTA+I/R+P组在制备肺缺血再灌注损伤模型的同时,尾静脉输注异丙酚30mg·kg-1 ·h-1至再灌注120 min.再灌注120 min时处死大鼠,取肺组织,光镜下观察病理学结果,并进行肺组织病理学损伤评分,测定湿重/干重(W/D)比值,采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,采用硫代巴比妥酸法测定MDA含量,采用Western blot法测定Nrf2和血红素氧合酶-1(HO-1)的表达水平.结果 与S组比较,I/R组和ATRA+I/R+P组肺组织病理学损伤评分、W/D比值和MDA含量升高,SOD活性降低,I/R组、I/R+P组和ATRA+ I/R+P组肺组织Nrf2和HO-1表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,I/R+P组肺组织病理学损伤评分、W/D比值和MDA含量降低,SOD活性升高,Nrf2和HO-1表达上调(P＜0.05),ARTA+I/R+P组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与I/R+P组比较,ARTA+I/R+P组肺组织病理学损伤评分、W/D比值和MDA含量升高,SOD活性降低,Nrf2和HO-1表达下调(P＜0.05).结论 Nrf2/ARE信号通路激活参与了异丙酚减轻老龄大鼠肺缺血再灌注损伤的过程.
关键词： 二异丙酚 肺 再灌注损伤 NF-E2相关因子2 反应元件 -
Nrf2/HO-1信号通路在饱和氢盐水减轻大鼠原位肝移植术后急性肾损伤中的作用
目的 探讨核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路在饱和氢盐水减轻大鼠原位肝移植术后急性肾损伤中的作用.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠32只,体重220～ 250 g,采用随机数字表法分为4组(n=8):假手术组(S组):行单纯开关腹操作,游离相应血管;原位肝移植组(OLT组):建立大鼠自体原位肝移植模型,并于门静脉阻断前5 min经肝下下腔静脉缓慢注射生理盐水6 ml/kg;饱和氢盐水组(HS组):于门静脉阻断前5 min经肝下下腔静脉缓慢注射饱和氢盐水6 ml/kg;全反式维甲酸组(ATRA组)连续2d天腹腔注射Nrf2抑制剂全反式维甲酸7 mg/kg,后一次给药后16h建立自体原位肝移植模型,其他处理同HS组.于肝脏再灌注6h时取血样,测定血清BUN、Cr、IL-10和TNF-α浓度;取血结束后,取肾组织,测定MDA含量和SOD活性,并观察肾组织病理学结果,进行损伤评分;采用RT-PCR法检测肾组织HO-1、Bcl-2和Bax的mR-NA的表达水平,采用Western blot法检测肾组织HO-1的表达水平.结果 与S组比较,OLT组血清BUN、Cr和TNF-α浓度升高,血清IL-10浓度降低,肾组织MDA含量和肾小管损伤评分升高,SOD活性降低,肾组织HO-1及其mRNA、Bcl-2和Bax的mRNA表达上调(P＜0.05);与OLT组比较,HS组血清BUN、Cr和TNF-α浓度降低,血清IL-10浓度升高,肾组织MDA含量和肾小管损伤评分降低,SOD活性升高,HO-1及其mRNA和Bcl-2 mRNA表达上调,Bax mRNA表达下调(P＞0.05);与HS组比较,ATRA组血清BUN、Cr和TNF-α浓度升高,血清IL-10浓度降低,肾组织MDA含量和肾小管损伤评分升高,SOD活性降低,HO-1及其mRNA、Bcl-2 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调(P＜0.05).结论 饱和氢盐水减轻大鼠原位肝移植术后急性肾损伤的机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关.
关键词： 氢 NF-E2相关因子2 血红素加氧酶-1 肝移植 肾损伤 -
盐酸戊乙奎醚预先给药对横纹肌溶解致急性肾损伤大鼠肾组织Nrf 2∕HO-1信号通路的影响
目的探讨盐酸戊乙奎醚预先给药对横纹肌溶解致急性肾损伤大鼠肾组织核因子E2相关因子2∕血红素加氧酶?1（ Nrf2∕HO?1）信号通路的影响。方法清洁级雄性SD大鼠36只，体重200～220 g，采用随机数字表法分为3组（ n＝12）：对照组（ C组）、急性肾损伤组（ AKI组）和盐酸戊乙奎醚预先给药组（ PHC组）。采用双侧后肢肌肉注射50％甘油生理盐水溶液10 ml∕kg的方法制备横纹肌溶解症模型。 PHC组于肌肉注射甘油前30 min时腹腔注射盐酸戊乙奎醚0．2 mg∕kg。于肌肉注射甘油后1和6 h时采集血样，测定血清BUN和Cr浓度；取双肾，行HE染色，观察病理学结果，行肾小管损伤评分；采用底物反应法测定肾组织HO?1活性，采用RT?qPCR法测定Nrf2和HO?1的mRNA表达水平，采用Western blot法测定肾组织核蛋白和总蛋白Nrf2和总蛋白HO?1的表达水平。结果与C组比较，AKI组和PHC组血清BUN和Cr浓度和肾小管损伤评分升高，肾组织核蛋白和总蛋白Nrf2、总蛋白HO?1表达上调，HO?1活性增强，AKI组肾组织HO?1 mRNA表达上调，PHC组肾组织Nrf2 mRNA和HO?1 mRNA 表达上调（P＜0．01或0．05）；与AKI组比较，PHC组血清BUN和Cr浓度和肾小管损伤评分降低，肾组织Nrf2 mRNA和HO?1 mRNA、核蛋白和总蛋白Nrf2、总蛋白HO?1表达上调，HO?1活性增强（ P＜0．01或0．05）。结论盐酸戊乙奎醚预先给药减轻大鼠横纹肌溶解致急性肾损伤的机制可能与激活肾组织Nrf2∕HO?1信号通路有关。
关键词： 胆碱能拮抗剂 横纹肌溶解 肾 NF-E2相关因子2 血红素加氧酶-1 -
ROS在乳化异氟醚后处理促进心肌损伤大鼠Nrf2∕ARE信号通路激活中的作用
目的探讨活性氧（ ROS）在乳化异氟醚后处理促进心肌损伤大鼠转录因子NF?E2相关因子2（ Nrf2）∕抗氧化反应原件（ ARE）信号通路激活中的作用。方法健康雄性SD大鼠，体重250～300 g，16～20周龄，采用Langendorff灌注装置建立大鼠离体心脏灌注模型，取模型制备成功的心脏80个，采用随机数字表法分为5组（ n＝16）：对照组（ C组）、缺血再灌注组（ I∕R组）、乳化异氟醚后处理组（ EIP组）、脂肪乳后处理组（ FEP组）和ROS清除剂N?（2?巯基丙酰）?甘氨酸＋乳化异氟醚后处理组（ N＋EIP组）。除C组外；其它4组缺血40 min再灌注60 min；EIP组和FEP组于再灌注即刻分别灌注含乳化异氟醚1．68 mmol∕L和脂肪乳712 mg∕L的K?H液2 min，再灌注58 min；N＋EIP组灌注含N?（2?巯基丙酰）?甘氨酸2 mmol∕L的K?H液3 min，然后行乳化异氟醚后处理。分别于平衡灌注末及再灌注末时记录HR、左室发展压（ LVDP ）、左室舒张末压（ LVEDP ）和左心室压力大上升速度（＋dp∕dtmax ）。分别于再灌注5 min和再灌注末时取心肌组织，测定ROS含量，于再灌注末时取心肌组织，电镜下观察心肌细胞超微结构，并进行线粒体损伤评分，检测心肌组织Nrf2、血红素加氧酶?1（ HO?1）、醌氧化还原酶1（ NQO1）、超氧化物歧化酶?1（ SOD?1）及其mRNA的表达水平。结果与C组比较，再灌注末时I∕R组HR、＋dp∕dtmax和 LVDP 降低，LVEDP、线粒体损伤评分和心肌组织ROS含量升高，心肌组织Nrf2、HO?1、NQO1和SOD?1及其mRNA的表达下调（ P＜0．05）；与I∕R组比较，再灌注末时EIP组HR、＋dp∕dtmax和LVDP升高，LVEDP、线粒体损伤评分、心肌组织ROS含量降低，心肌组织Nrf2、HO?1、NQO1和SOD?1及其mRNA的表达上调（P＜0．05），N＋EIP组上述指标比较差异无统计学意义（ P＞0．05）；与EIP组比较，N＋EIP组HR、＋dp∕dtmax和LVDP降低，LVEDP和线粒体损伤评分升高，再灌注5 min时心肌组织ROS含量降低，再灌注末时心肌组织ROS含量升高，心肌组织Nrf2、HO?1、NQO1及SOD?1及其mRNA的表达下调（ P＜0．05）。 EIP组心肌损伤程度轻于I∕R组；N＋EIP组心肌损伤程度与I∕R组比较无明显差异。结论乳化异氟醚后处理促进心肌损伤大鼠Nrf2∕ARE信号通路激活的机制全部与ROS有关。
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Nrf2/ARE通路在饱和氢盐水减轻自体肝移植大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用
目的 探讨核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/反应元件(ARE)通路在饱和氢盐水减轻自体肝移植大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用.方法 SPF级成年健康雄性SD大鼠32只,8～10周龄,体重200～ 250 g,采用随机数字表法分为4组(n=8):假手术组(S组)、自体肝移植组(T组)、饱和氢盐水组(H组)和Nrf2抑制剂全反式维甲酸+饱和氢盐水组(A组).A组腹腔注射全反式维甲酸7 mg/kg,1次/d,连续2d,后1次给药后10 h建立自体肝移植模型.H组和A组在建立自体肝移植模型前5 min,肝下下腔静脉注射4℃饱和氢盐水6 ml/kg.门静脉开放后6h(S组术毕后6h)时,取血标本,测定血清ALT、AST、TNF-α和IL-10浓度,随后取肝组织,行肝组织病理学评分,测定肝组织MDA含量、SOD活性和Bcl-2、Bax、Nrf2和血红素氧合酶-1(HO-1)的mRNA表达水平.结果 与S组比较,T组血清ALT和AST浓度、肝组织病理学评分、MDA含量和血清TNF-α浓度升高,SOD活性和血清IL-10浓度降低,肝组织Bax、Nrf2、HO-1的mRNA表达上调,Bcl-2 mRNA表达下调(P＜0.05);与T组比较,H组血清ALT和AST浓度、肝组织病理学评分、MDA含量和血清TNF-α浓度降低,SOD活性和血清IL-10浓度升高,肝组织Bcl-2、Nrf2、HO-1的mRNA表达上调,Bax mRNA表达下调(P＜0.05);与H组比较,A组血清ALT和AST浓度、肝组织病理学评分、MDA含量和血清TNF-α浓度升高,SOD活性和血清IL-10浓度降低,肝组织Bcl-2、HO-1 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调(P＜0.05).结论 饱和氢盐水减轻自体肝移植大鼠肝缺血再灌注损伤的机制与激活Nrf2/ARE通路,上调HO-1表达有关.
关键词： 氢 肝移植 再灌注损伤 NF-E2相关因子2 反应元件 -
Nrf2/ARE信号通路在缺血预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用
目的 评价核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路在缺血预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,体重250～ 300 g,4～6月龄,采用Langendorff灌注装置建立大鼠离体心脏灌注模型.取模型制备成功的心脏40个,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血预处理组(IPC组)和缺血预处理+Nrf2/ARE信号通路阻断剂毛地黄酮组(IPC+L组).平衡灌注20 min时,C组继续灌注100 min;I/R组32℃下缺血40 min,恢复灌注60 min制备心脏缺血再灌注损伤模型;IPC组即刻行缺血预处理,缺血10s,再灌注10s,共6个循环,然后缺血40 min,恢复灌注58 min制备心脏缺血再灌注损伤模型;IPC+L组于缺血前即刻灌注含毛地黄酮50μmol/L的K-H液3 min,其余处理同IPC组.分别于平衡灌注末及再灌注末时,记录左心室发展压(LVDP)、左心室舒张末压(LVEDP) 、HR和左心室压力大上升速率(+dp/dtmax).于再灌注末取左心室心肌组织,透射电镜下观察心肌细胞超微结构;采用RT-PCR法检测心肌组织Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)和超氧化物歧化酶1(SOD1)的mRNA表达水平;采用Western blot法检测心肌组织Nrf2、HO-1、NQO1和SOD1的表达水平.结果 与C组比较,再灌注末I/R组和IPC+L组HR、+dp/dtmax和LVDP降低,LVEDP 升高,I/R组、IPC组和IPC+L组心肌Nrf2、HO-1、NQO1 、SOD1及其mRNA表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,再灌注末IPC组HR、+dp/dtmax和LVDP升高,LVEDP降低,心肌Nrf2、HO-1、NQO1、SOD1及其mRNA表达上调(P＜0.05),病理学损伤减轻,IPC+L组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与IPC组比较,再灌注末IPC+L组HR 、+dp/dtmax和LVDP降低,LVEDP升高,心肌HO-1、NQO1 、SOD1及其mRNA表达下调(P＜0.05),Nrf2及其mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),病理学损伤加重.结论 缺血预处理可通过激活Nrf2/ARE信号通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.
关键词： 缺血预处理 心肌再灌注损伤 NF-E2相关因子2 反应元件 -
Nrf2信号通路在富氢保存液减轻大鼠供肾低温保存期缺血损伤中的作用
目的 评价转录因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路在富氢保存液减轻大鼠供肾低温保存期缺血损伤中的作用.方法 健康成年雄性Wistar大鼠40只,体重200～ 250 g,采用随机数字表法将其分为4组(n=10):正常对照组(C组)、保存液(UW液)组(UW组)、富氢UW液组(HRUW组)、Nrf2抑制剂全反式维甲酸组(ATRA组).ATRA组腹腔注射全反式维甲酸7 mg/kg,1次/d,连续2d,后1次给药后8h时制备肾游离及冷保存期缺血损伤模型,肾脏在4℃富氢UW液中保存48h.UW组和HRUW组腹腔注射等容量生理盐水替代,肾脏分别在4℃UW液和富氢UW液中保存48 h.取肾组织,HE染色观察病理学结果,行肾小管损伤评分;采用ELISA法测定肾组织TNF-α、IL-1β、高迁移率族蛋白1(HMGB1)、IL-10及8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)的含量;采用分光光度法测定SOD和过氧化氢酶(CAT)活性;采用Western blot法测定肾组织Nrf2、血红素氧合酶-1(HO-1)、Bcl-2、Bax和caspase-3的表达.结果 与C组比较,UW组肾小管损伤评分升高,肾组织TNF-α、IL-1β、HMGB1和8-iso-PGF2α含量升高,IL-10含量降低,Nrf2和HO-1表达上调,SOD和CAT活性降低,Bcl-2表达下调,Bax和caspase-3表达上调(P＜0.05或0.01);与UW组比较,HRUW组肾小管损伤评分降低,肾组织TNF-α、IL-1β、HMGB1和8-iso-PGF2α含量降低,IL-10含量升高,Nrf2和HO-1表达上调,SOD和CAT活性升高,Bcl-2表达上调,Bax和caspase-3表达下调,ATRA组肾组织Nrf2和Bcl-2表达上调(P＜0.05),其余指标差异无统计学意义(P＞0.05).与HRUW组比较,ATRA组肾小管损伤评分升高,肾组织TNF-α、IL-1β3、HMGB1和8-iso-PGF2α含量升高,IL-10含量降低,HO-1和Bcl-2表达下调,SOD和CAT活性降低,Bax和easpase-3表达上调(P＜0.05).结论 富氢保存液减轻大鼠供肾低温保存期炎性反应、氧化损伤和细胞凋亡,从而减轻缺血损伤的机制与激活Nrf2信号通路有关.
关键词： 氢 NF-E2相关因子2 肾移植 低温保存 冷缺血 -
乌司他丁对小鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及对 Nrf2／HO-1通路影响的研究
目的：观察乌司他丁对小鼠脑缺血-再灌注后脑损伤的保护作用及对Nrf2／HO-1通路的影响。方法健康成年雄性CD1小鼠120只，随机分成4组（ n＝30）：假手术组、脑缺血-再灌注组、乌司他丁小剂量组和乌司他丁大剂量组，采用改良线栓法制备大脑中动脉缺血-再灌注模型。缺血60min，再灌注24h后，采用Western blot和RT-qPCR来观察脑缺血后梗死侧皮质Nrf2和HO-1蛋白及基因表达变化，比较各组神经功能，脑梗死体积，脑组织含水量，梗死侧皮质丙二醛（ MDA）和超氧化物歧化酶（ SOD）含量。结果乌司他丁能够明显上调缺血脑皮质组织Nrf2、HO-1的表达，增加SOD活性，减少MDA的含量，改善神经功能缺失，减轻脑水肿，减小梗死体积。结论 Nrf2／HO-1通路参与了脑梗死后乌司他丁对缺血脑组织的保护作用。
关键词： 脑缺血 NF-E2相关因子2 血红素氧合酶1 乌司他丁 -
褐藻多糖硫酸酯在小鼠N2a细胞缺血再灌注损伤中的作用
目的 观察褐藻多糖硫酸酯(FPS)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导小鼠N2a细胞缺血再灌注损伤中的作用并探讨其可能的分子机制.方法 在细胞水平上,建立小鼠N2a细胞的OGD 2 h后复灌24 h的缺血再灌注损伤模型.实验分为对照组、OGD/R模型组和FPS处理组(1、2、5、10 μg/ml).3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法和乳酸脱氢酶(LDH)释放率试剂盒分别检测各组细胞存活率和死亡率;Western blot检测Nrf2的核转位及其下游靶蛋白血红素加氧酶1(HO-1)的表达情况.结果 与OGD/R模型组比较,不同浓度的FPS均能提高N2a细胞存活率,降低死亡率,且增加Nrf2的核转位及其下游靶蛋白HO-1的表达(P＜0.05).结论 FPS对OGD/R诱导N2a细胞缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与激活Nrf2通路有关.
关键词： 再灌注损伤 褐藻多糖硫酸酯 氧糖剥夺 NF-E2相关因子2 小鼠 -
核因子E2相关因子2与细胞自噬对肝纤维化的影响
肝纤维化是慢性肝病发展到肝硬化的必经阶段,在全世界范围保持着较高的发病率.肝纤维化的发生机制复杂,其发生发展受到许多细胞因子及信号通路的影响,人们对肝纤维化的认识也越来越深入.简述了核因子E2相关因子2(Nrf2)介导的抗氧化应激系统在对抗各种类型肝纤维化中的作用和细胞自噬对肝纤维化的影响,以及Nrf2和自噬的相互影响在肝纤维化中可能的作用机制.认为将Nrf2和细胞自噬联合研究是未来肝纤维化发生机制的研究方向,为肝纤维化的治疗提供了新思路.
关键词： 肝硬化 NF-E2相关因子2 自噬 综述 -
Nrf2对肝癌及癌前病变的作用研究进展
随着社会的进步,人类的生活方式也发生了改变.在消化系统疾病中,肝癌的发病率呈增高趋势,并严重影响着人类的身体健康.肝癌的发生是多过程、多阶段的分子生物学过程,在肝癌的发生过程中,重要的几个促癌因素有乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黄曲霉毒素及化学致癌物质等,而具体到分子层面主要为原癌基因和抑癌基因的失衡、细胞信号通路的突变等.生物体中的转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)作为抗氧化反应通路的重要元件,可以诱导机体产生抗氧化酶和Ⅱ相代谢酶,进而拮抗组织的氧化损伤并发挥对外源性致癌物质的解毒作用.Nrf2在抵御肝癌及癌前病变的发生过程中发挥着重要的作用,进一步研究Nrf2将有利于更加全面地综合各种致癌因素,更好地明确肝癌的发生机制,有效地针对肝癌实施预防、治疗及延长寿命措施,并且可以为开发和利用作用于细胞信号通路的抗癌药物提供理论依据.现将Nrf2对肝癌及癌前病变的作用新研究进展综述如下.
关键词： NF-E2相关因子2 肝肿瘤 肿瘤预防 -
Keap1/Nrfs-ARE信号通路与砷诱导氧化应激致肿瘤机制关系研究进展
流行病学资料表明,砷是一种明确的人类化学致癌物,长期砷暴露可引起慢性砷中毒,引发多种病症[1].由于砷与机体作用十分复杂,且没有建立致肿瘤动物研究模型,故到目前为止,砷毒性作用机制仍未明确.近年研究表明,砷毒性作用机制主要涉及氧化应激、表观遗传改变和细胞增殖凋亡异常等方面.在众多的砷毒作用机制假说中,砷诱发氧化应激日益成为研究重点,并被认为与砷致肿瘤密切相关[2].近年来,不少学者提出了一些砷化物致肿瘤效应的分子机制假说,如表观遗传修饰[3]、氧化应激、染色体异常、细胞增殖与凋亡异常、细胞周期阻滞、信号通路改变等[4-5],其中氧化应激和表观遗传学改变(尤其DNA甲基化异常)日益成为研究的重点.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠肿瘤生长与转移的作用
目的 观察不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对结肠肿瘤原位生长与转移的作用.方法 将40只BALB/C裸鼠均分为对照组和低、中、高剂量组.除对照组外,其他3组分别给了低、中或高浓度EGCG(分别为5、10和20 mg·kg~(-1)·d~(-1)),观察对结肠原位种植肿瘤的生长和转移的影响.HE染色观察肝、肺组织病理学改变;免疫组化检测结肠肿瘤组织中核因子E2p45相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)基因的蛋白表达水平;RT-PCR检测Nrf2、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(UGT)1A、UGT1A8和UGT1A10基因的mRNA表达水平.结果 低、中、高剂量EGCG组裸鼠肿瘤的平均重量为(152±63)、(76±42)和(18±10)mg,与对照组L(564±130)mg]比较差异有统计学意义(P值均<0.05).3组的肿瘤抑制率分别是73.0%、86.5%和96.8%.EGCG对肿瘤生长的抑制率与EGCG的剂量呈正相关(P值均<0.05).不同剂量EGCG组Nrf2基因的蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05),且有核转录现象.不同剂量EGCG组Nrf2、UGT1A、UGT1A8和UGT1A10基因的mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05).结论 不同浓度的EGCG能预防裸鼠HT-29结肠原位肿瘤的局部生长和远处转移,且有剂依赖效应.这种作用可能通过诱导Nrf2,UGT1A、UGT1A8和UGT1A10基因的表达起作用.
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根皮苷对过氧化氢诱导损伤PC12细胞的保护作用
目的 探讨根皮苷对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用.方法 以H2O2损伤PC12细胞建立氧化损伤模型,随机分为空白对照组、模型组(400μmol·L-1 H2O2)、阳性对照(20μmol·L-1N-乙酰半胱氨酸)组和不同浓度根皮苷(16、32、64 μmol ·L-1)预处理组.采用MTT法检测细胞活力,显微镜观察细胞形态,ELISA检测细胞活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,Western blot检测NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达.结果 模型组细胞活力较空白对照组显著降低,ROS和MDA含量增加,SOD活力下降,Nrf2和HO-1蛋白表达下降(均P＜ 0.05).根皮苷低、中、高浓度(16、32、64μmol· L-1)组较模型组细胞存活率均显著提高,ROS和MDA含量降低,SOD活力升高,Nrf2和HO-1蛋白表达上调(均P＜0.05).结论 根皮苷能够抑制H2O2对PC12细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起的细胞死亡并调控Nrf2信号通路有关.
关键词： 根皮苷 PC12细胞 过氧化氢 NF-E2相关因子2 -
转录因子NF-E2相关因子2-抗氧化反应元件信号路径及其肝脏保护作用进展
背景 随着肝脏外科手术尤其是肝脏移植手术的发展,以转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)与抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)抗氧化应激系统在肝脏损伤中的作用倍受关注. 目的 分析并总结Nrf2-ARE抗氧化系统在肝脏保护各方面的文献资料. 内容 简要介绍Nrf2,ARE的结构及其信号路径；综述了Nrf2基因缺失、Nrf2药物激活、Nrf2基因激活3类模型小鼠与野生小鼠肝脏对氧化应激的耐受性比较的结果. 趋向 Nrf2-ARE信号路径在肝脏中有一定的保护作用,为临床提供了新的思路.
关键词： NF-E2相关因子2 抗氧化反应元件 氧化应激 肝脏保护 -
核因子E2相关因子2在脑缺血再灌注中的作用及其机制
核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2, Nrf2)是一种关键的抗氧化转录因子,参与维持细胞的氧化还原稳态.生理状态下,Nrf2以失活状态定位于胞质;在应对氧化应激时,活化的Nrf2转位至胞核,识别并结合抗氧化反应元件,进而刺激抗氧化酶的转录,对保护脑组织免受脑缺血再灌注诱导的氧化损伤至关重要.
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Keap1-Nrf2-ARE通路与脑缺血
Keap1 -Nrf2-ARE通路在抗肿瘤、抗应激、抗凋亡、抗炎症等方面具有广泛的细胞保护功能.其在神经系统疾病中的神经保护作用已成为目前的研究热点之一.文章综述了Keap1-Nrf2-ARE通路在脑缺血中的神经保护作用.
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丁苯酞通过上调Nrf-2增强抗氧化保护大鼠脑缺血再灌注损伤
目的 探讨丁苯酞对脑缺血再灌注大鼠Nrf2信号通路的影响和神经保护作用.方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、缺血再灌注组以及丁苯酞小剂量组(100 mg/kg)和大剂量组(400mg/kg),在再灌注后24 h进行神经功能缺损评分,采用蛋白质印迹法检测缺血脑组织Nrf2蛋白表达水平以及超氧化物歧化酶和丙二醛含量,TUNEL法检测神经细胞凋亡情况,免疫组化染色法检测cleaved-caspase-3表达情况.结果 与模型组相比,丁苯酞以剂量依赖性方式显著上调Nrf2蛋白表达(P＜0.05),提高超氧化物歧化酶活性(P＜0.05),降低丙二醛含量(P＜0.05),并且减少cleaved-caspase-3阳性细胞和凋亡细胞数量(P＜0.05).结论 丁苯酞可在大鼠脑缺血再灌注损伤中发挥显著的神经保护作用,其作用可能与上调Nrf2信号通路和增强抗氧化有关.
