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脑缺血预处理对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用与Nrf2/NQO1信号通路有关
目的 探讨脑缺血预处理(cerebral ischemic preconditioning,CIPC)对脑缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)大鼠的保护作用和对核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor2,Nrf2)/醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,NQO1)通路的影响.方法 共198只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、I/R组和CIPC组,再按照I/R时间点分为模型制作后6h、12 h、24 h、48 h和72 h共5个亚组,分别在各时间点进行神经功能评分,应用HE染色对脑组织进行形态学分析,氯化三苯基四氮唑法测定脑梗死体积,免疫组化染色观察缺血侧皮质Nrf2核转移情况,实时逆转录聚合酶链反应检测缺血侧皮质Nrf2和NQO1 mRNA表达.结果 I/R组和CIPC组大鼠出现不同程度偏瘫,CIPC组24 h和48 h时神经功能评分均显著低于I/R组(P均＜0.01).假手术组神经细胞无缺血性改变,CIPC组神经细胞缺血性改变较Ⅰ/R组减轻.假手术组无梗死灶,CIPC组梗死体积百分比显著低于I/R组[(33.20±7.48)％对(21.40 ±4.48)％;=11.043,P=0.001].I/R组和CIPC组6h时缺血皮质Nrf2核阳性细胞数较假手术组增多,24 h达高峰,48 h、72 h逐渐下降.6h、12 h和24 h时,CIPC组核阳性细胞数显著多于I/R组(P均＜0.01).I/R组和CIPC组6h时缺血侧皮质Nrf2和NQO1 mRNA表达水平显著高于假手术组(P均＜0.01),24 h达高峰,并持续到48 h,72 h有所下降.CIPC组各时间点Nrf2和NQO1 mRNA表达水平均显著高于I/R组(P均＜0.01),以24 h时为明显.结论 CIPC对缺血再灌注大鼠具有神经保护作用,其机制与促进Nrf2核转移以及Nrf2/NQO1信号通路上调有关.
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紫檀芪对中波紫外线照射的HaCaT细胞抗氧化物酶表达及活性的影响
目的 探讨紫檀芪对HaCaT细胞急性中波紫外线(UVB)损伤的防御作用及相关机制.方法 MTS法和流式细胞仪检测不同浓度紫檀芪作用后HaCaT细胞增殖活性及凋亡与坏死率,筛选无毒性紫檀芪浓度.HaCaT细胞随机分为对照组(不做任何处理)、UVB组和2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪组及2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪+UVB组.Western印迹法检测紫檀芪和UVB处理前后HaCaT细胞内Nrf2核转位情况,定量PCR检测过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达,ELISA检测CAT和SOD活性.结果 MTS法和流式细胞仪检测结果显示,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪对HaCaT细胞无毒性作用.对照组Nrf2胞质蛋白1.03±0.08、胞核蛋白1.04±0.11;与对照组比较,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪组Nrf2胞质蛋白和胞核蛋白均无明显变化,UVB组Nrf2胞质蛋白无明显变化,但Nrf2胞核蛋白显著增加(1.77±0.08,q=17.24,P＜0.01).与对照组及UVB组比较,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪+UVB组Nrf2胞质蛋白浓度均显著下降(0.86±0.10、0.87±0.11、0.46±0.11,均P＜0.05),胞核蛋白浓度则显著升高(2.38±0.11、2.57±0.11、2.07±0.13,均P＜ 0.01).qPCR显示,与对照组相比,UVB照射对CAT mRNA表达有明显的抑制作用(P＜0.05),对SOD mRNA表达则无明显影响(P＞0.05),2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪组CAT和SOD的表达亦均无明显变化(P＞ 0.05).然而,2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪可减轻UVB对CAT表达的抑制(P＜0.05),并上调SOD的表达(P＜0.05).ELISA显示,UVB照射可显著降低HaCaT细胞内CAT和SOD活性(均P＜ 0.001),2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪可减轻UVB对CAT和SOD活性的抑制作用(P＜0.05),但其活性仍明显低于对照组(P＜0.05).结论 紫檀芪可通过激活Nrf2通路,上调其下游抗氧化物酶CAT、SOD表达,防御HaCaT细胞急性UVB损伤.
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外源性胆绿素对中波紫外线诱导的HaCaT细胞光损伤的保护作用
目的 探讨外源性胆绿素对中波紫外线(UVB)照射的HaCaT细胞的保护作用及其机制.方法 将培养的HaCaT细胞分为对照组(不加胆绿素,不照射UVB)、UVB组(30 mJ/cm2 UVB照射)和100 nmol/L、1μmol/L、10 μmol/L胆绿素+UVB组(分别于30 mJ/cm2 UVB照射前1h加入相应浓度胆绿素),处理完成后继续培养24 h,观察HaCaT细胞形态变化,CCK8法检测各实验组细胞生存率.Western印迹检测抗氧化信号分子Nrf-2蛋白及光损伤信号分子基质金属蛋白酶1(MMP-1)和MMP-3蛋白表达.结果 CCK8法结果显示,UVB组HaCaT细胞活力低于对照组(P＜0.05),在加入100 nmol/L、1μmol/L、10 μmol/L胆绿素预处理后,细胞生存率逐渐升高,与UVB组比较,差异有统计学意义(均P＜ 0.05).Western印迹显示,UVB组MMP-1(1.150±0.187)、MMP-3(0.979±0.054)蛋白表达较对照组(0.116±0.018、0.636±0.035)升高(均P＜0.01),而100 nmol/L、1μmol/L、10μmol/L胆绿素+ UVB组MMP-1(0.825±0.139、0.313±0.047和0.286±0.036)、MMP-3(0.888±0.017、0.672±0.042和0.569±0.037)蛋白表达较UVB组降低(均P＜0.05).UVB组Nrf-2蛋白(0.906±0.034)较对照组(1.242±0.141)表达降低(P＜0.05),100 nmol/L、1μmol/L、10 μmol/L胆绿素+UVB组Nrf-2蛋白表达(1.556±0.112、1.897±0.234和2.035±0.274)较UVB组升高(均P＜0.01).结论 外源性胆绿素对UVB诱导的HaCaT细胞损伤起保护作用,该作用可能与Nrf-2抗氧化信号通路有关.
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茶多酚对人皮肤成纤维细胞Nrf2/Bach1mRNA及核蛋白的影响
目的 探讨茶多酚对人皮肤成纤维细胞(HSF) Nrf2/Bach1 mRNA及Nrf2/Bach1核蛋白表达分布的影响.方法 不同浓度茶多酚(0、2.5、5、10、20、40 mg/L)孵育HSF 24 h,MTT法检测细胞增殖活性,筛选出适宜浓度茶多酚,并用该浓度药物孵育HSF 24 h,RT-qPCR法检测Nrf2和Bach1mRNA表达,Western印迹法检测Nrf2、Bach1核蛋白表达,免疫荧光法检测Nrf2、Bach1蛋白核分布情况.结果 MTT法检测显示,当茶多酚浓度为5 mg/L时,对HSF增殖无明显影响,故后续实验采用5 mg/L茶多酚,对照组浓度为0.HSF加入茶多酚孵育后,Bach1 mRNA相对表达量(0.629±0.077)低于对照组(0.940±0.033,t=6.397,P＜0.05),Nrf2 mRNA(1.467±0.076)高于对照组(0.977±0.091,t=7.133,P＜0.05);Nrf2核蛋白表达(6.929±0.121)高于对照组(3.537±0.126,t=33.636,P＜0.05),而Bach1核蛋白(1.424±0.171)低于对照组(16.966±1.702,t=15.730,P＜0.05).免疫荧光结果显示,Nrf2蛋白在细胞核内的聚集增多,Bach1蛋白在细胞核内聚集减少.结论 茶多酚可促进Nrf2mRNA、Nrf2核蛋白的表达及核分布,抑制Bach1 mRNA、Bach1核蛋白的表达和核分布,从而发挥抗氧化作用.
关键词： 成纤维细胞 NF-E2相关因子2 茶多酚 Bach1 -
过表达NF-E2相关因子2对白癜风黑素细胞PIG3V线粒体生物合成和功能的影响
目的 探讨过表达NF-E2相关因子2(Nrf2)对黑素细胞线粒体合成和功能的影响.方法 构建含有人Nrf2基因全长的过表达质粒Nrf2-pEX-1,用该质粒瞬时转染白癜风患者表皮黑素细胞系(PIG3V).实验分为空白组(不含质粒)、对照组(转染pEX-1空质粒)、过表达组(转染pEX-1-Nrf2过表达质粒).过表达Nrf2后,RT-PCR和Western印迹法检测PIG3V线粒体生物合成相关的Nrf2、核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子A(TFAM)mRNA和蛋白水平的变化;RT-PCR检测线粒体DNA(mtDNA)拷贝数.流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP);荧光素酶报告系统检测细胞ATP含量.采用两样本t检验进行统计学分析.结果 Nrf2过表达质粒转染PIG3V细胞后24 h,Nrf2 mRNA、NRF1 mRNA水平较对照组明显升高,差异有统计学意义(均P＜0.001),而TFAM mRNA水平与对照组比较差异无统计学意义;48 h后Nrf2 mRNA、TFAM mRNA水平较对照组升高,差异均有统计学意义(P＜0.05),而NRF1 mRNA水平与对照组差异无统计学意义.Western印迹法显示,转染后24 h,过表达组Nrf2、NRF1、TFAM蛋白表达与对照组比较差异均无统计学意义,48 h后过表达组Nrf2、NRF1、TFAM蛋白表达升高(P＜0.05).过表达组MMP在转染24 h后较对照组升高2.313％(t=5.546,P=0.005),48 h后升高14.872％(t=8.537,P=0.001).线粒体合成指标相对mtDNA拷贝数,在转染24 h后两组间差异无统计学意义(P＞0.05),48 h后过表达组明显高于对照组(t=5.760,P=0.005);细胞ATP含量在转染后24 h两组间差异无统计学意义(P＞0.05),48 h后过表达组ATP含量较对照组明显升高(t=22.040,P=0.008).结论 过表达Nrf2可以促进黑素细胞线粒体生物合成相关基因和蛋白的表达,进而促进线粒体生物合成,上调线粒体功能相关的指标.
关键词： 白癜风 黑素细胞 线粒体 NF-E2相关因子2 腺苷三磷酸 -
低剂量中波紫外线照射Nrf2基因缺陷小鼠后诱导晒伤反应的实验研究
[目的]观察Nrf2-Keap1通路在保护皮肤免受中波紫外线(UVB)影响中的作用.[方法]8周龄雌性野生型(即Nrf2+/+组)和Nrf2-/-小鼠,每组8只,分别用200 mJ/cm2 UVB(FL120SE灯)照射小鼠耳朵背侧,用刻度计分别测量UVB照射前和照射后1、2、4、7、9、11、14 d小鼠耳朵厚度,记录照射前后两组鼠耳皮肤镜下形态,36 h取各组鼠耳标本进行HE染色及TUNEL实验,记录结果并进行统计学分析.[结果]Nrf2-/-组小鼠耳平均厚度为(0.49±0.22) cm,Nrf2+/+组为(0.25±0.03) cm,经秩和检验,差异有统计学意义(P＜0.01).UVB照射小鼠后36 h组织学检查,Nrf2-/-组真皮水肿和表皮坏死,淋巴细胞浸润和真皮血管扩张更显著；表皮晒伤细胞数[(17.0±3.9)/视野]也较Nrf2+/+组[(5.0±1.7)/视野]明显,两组差异有统计学意义(P＜ 0.01)；Nrf2-/-组TUNEL阳性细胞数约是Nrf2+/+组的5倍.单一UVB照射Nrf2-/-小鼠较Nrf2+/+小鼠发生更强烈而持久的晒伤反应.[结论]Nrf2-Keap1通路可保护皮肤免受UVB的影响,包括由于UVB照射引起的细胞凋亡和氧化损伤.
关键词： 紫外线 晒伤 NF-E2相关因子2 活性氧 Keap1 -
白癜风患者皮损NF-E2相关因子2的表达
目的 分析白癜风患者皮损处Nrf2表达水平.方法 采用AEC免疫组化法检测4例表皮移植的寻常型白癜风患者皮损处Nrf 2的表达,蛋白印迹分析表皮移植的8例寻常型白癜风患者皮损组织和其正常供皮处组织细胞核和细胞质中Nrf 2的表达水平,并进行统计学差异分析.结果 与白癜风患者正常供皮处组织相比,皮损处Nrf 2的表达多数集中在角质形成细胞的胞质中,细胞核中表达量非常低.蛋白印迹结果表明,白癜风患者皮损处核蛋白中Nrf 2表达水平(0.10 ±0.03)显著低于正常部位(0.26 ±0.03,P＜0.01),胞质蛋白中皮损处Nrf 2表达水平(0.61±0.03)与正常部位(0.60 ±0.02)差异无统计学意义(P＞0.05).结论 白癜风患者皮损处存在Nrf 2核转位异常.
关键词： 白癜风 氧化性应激 NF-E2相关因子2 -
芹菜素对肺癌细胞的抗增殖作用和抗肿瘤药物的增敏作用
目的:研究芹菜素(apigenin)对肺癌细胞的抗肿瘤作用以及增敏作用.方法:通过细胞台盼蓝染色计数和MTS法分别检测芹菜素在肺癌细胞中的抗增殖作用以及增敏作用,研究芹菜素在肺癌细胞中与其他抗癌药物联用的效果.结果:芹菜素可以显著抑制4种肺癌细胞的增殖( A549:P =0.041,H460:P=0.050,LTEP-a2:P=0.039,H292:P =0.016)；MTS实验结果表明,芹菜素的过夜预处理可以大大提高抗癌药物奥沙利铂( oxaliplatin)和博来霉素(bleomycin)在4种肺癌细胞中的IC50值,并且与抗癌药物存在协同作用(芹菜素与抗癌药在每个浓度处的联合作用指数CI值绝大多数＜1).结论:芹菜素可以抑制多种肺癌细胞的增殖以及增强肺癌细胞对抗癌药物奥沙利铂和博来霉素的敏感性.
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大黄素对肺纤维化大鼠的保护作用及部分机制研究
目的：观察大黄素对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的影响,并探讨其保护机制。方法将60只♂ SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、大黄素低剂量干预组、大黄素高剂量干预组和泼尼松组,每组10只,后4组经气管内注入博莱霉素建立大鼠肺纤维化模型,从d2开始,低、高剂量干预组大鼠分别予20、80 mg · kg-1大黄素2 mL灌胃,泼尼松组以5 mg·kg-1醋酸泼尼松2 mL灌胃,其余2组予2 mL生理盐水灌胃,d 28处死所有大鼠,取出肺组织行HE染色和Masson 染色,测定肺组织羟脯氨酸( HYP )、丙二醛( MDA)、超氧化物歧化酶( SOD )、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)含量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6、IL-17浓度,通过Western blot分析肺组织中Kelch样ECH联合蛋白1( Keap 1)、NF-E2相关因子2( Nrf2)、核因子-κB ( NF-κB) p65表达。结果低、高剂量干预组及泼尼松组肺泡炎症和肺纤维化程度明显轻于模型组( P <0．05或 P <0．01)。与正常对照组或假手术组比较,模型组肺组织HYP、MDA 含量、胞核 Nrf2、NF-κB p65表达水平及血清TNF-α、IL-6、IL-17浓度增加( P <0．01),而肺组织 SOD、GSH-Px、CAT含量及胞质Keap 1表达水平降低( P<0．01)。经低、高剂量大黄素或泼尼松处理后,肺组织HYP、MDA含量、胞质Keap 1表达水平、胞核NF-κB p65表达水平及血清TNF-α、IL-6、IL-17浓度减少,肺组织SOD、GSH-Px、CAT含量及胞核Nrf2表达水平升高,与模型组比较,差异均有显著性(P<0．01)。高剂量干预组、泼尼松组上述指标改善程度优于低剂量干预组(P<0．05),但高剂量干预组与泼尼松组比较,差异无显著性(P>0．05)。结论大黄素可能通过增强抗氧化能力及抑制炎症反应对肺纤维化大鼠产生保护作用。
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左卡尼汀对肾脏缺血再灌注损伤中Nrf2和γ-GCS表达影响
目的 研究左卡尼汀对大鼠肾脏缺血再灌注损伤中核因子相关因子2(Nrf2)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响.方法 将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组及治疗组.缺血再灌注组及治疗组建立肾脏缺血再灌注损伤模型,治疗组在缺血再灌注损伤模型建立前后尾静脉注射左卡尼汀2 mL.假手术组不行缺血再灌注处理.再灌注6h后处死大鼠,取血检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及胱抑素C(Cys C)的水平,并测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.应用RT-PCR及Western-blot方法检测肾组织中Nrf2和γ-GCS的表达水平.结果 治疗组Cr、BUN、Cys C及MDA水平显著低于缺血再灌注组,SOD活性显著高于缺血再灌注组(F=8.58～57.42,q=4.06～11.26,P＜0.05);与假手术组相比,缺血再灌注组肾组织中Nrf2、γ-GCS mRNA及蛋白表达水平显著升高,而治疗组肾组织中上述指标较缺血再灌注组显著增高(F=143.53～241.64,q=3.76～13.51,P＜0.05).结论 左卡尼汀可减轻肾脏缺血再灌注损伤,其机制可能为通过激活Nrf2-ARE通路进而诱导γ-GCS的表达而实现的.
关键词： 再灌注损伤 左卡尼汀 NF-E2相关因子2 谷氨酸-半胱氨酸连接酶 -
七氟醚预处理对心脏瓣膜置换术患者血清 cTnI、外周血单核细胞 N rf2 表达的影响
目的 观察七氟醚预处理对心肺转流术( CPB)下心脏瓣膜置换术患者血清中cTnI和外周血单核细胞( PBMC)核蛋白Nrf2表达的影响,探讨其对心肌的保护作用和机体氧化应激的影响.方法 选择择期CPB下行心脏瓣膜置换术患者30例,随机分为未吸入七氟醚对照组( C组)和七氟醚预处理组( S组) ,每组15例. S组切皮至主动脉阻断前吸入1.0%七氟醚20 min,随后予以10 min洗脱期,如此重复2次. 于麻醉诱导前( T1 )、主动脉开放后2 h( T2 )、24 h( T3 )和48 h( T4 )采集动脉血,检测血清cTnI水平、MDA水平和SOD活性;于T1 和T3 用Western blotting检测外周血PBMC核蛋白Nrf2表达水平;MDA水平、SOD活性与Nrf2蛋白表达水平进行直线相关性分析.结果 与术前比较,T2~4时两组血清中cTnI浓度均明显升高(P均<0.05),但S组明显低于C组(P均<0.05).与术前比较,T3 时两组PBMC核蛋白Nrf2表达均显著升高(P均<0.05),但S组明显高于C组(P均<0.05). 与C组比较,T2~4时血清MDA水平降低,SOD活性升高( P<0.05). MDA水平、SOD活性均与Nrf2蛋白表达具有相关性(r分别为-0.694、0.739,P均<0.05). 结论 七氟醚预处理可以减轻CPB下心脏瓣膜置换术患者心肌损伤,减弱体内氧化应激反应,以上作用可能与增强Nrf2蛋白的表达有关.
关键词： 七氟醚 心肺转流术 NF-E2相关因子2 心肌钙蛋白I 氧化应激 -
核转录因子 Nrf2对心血管的保护作用研究进展
氧化应激是多种心血管疾病的重要发病机制之一，降低机体内的氧化应激水平，对心血管疾病的防治具有重要意义。核转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）属于CNC 亮氨酸拉链转录激活因子家族，与家族中其他成员共有一高度保守的碱性亮氨酸拉链（bZIP）结构，含有7个高度保守的环氧氯丙烷（ECH）相关蛋白同源结构域［1］。其活性主要由抑制蛋白Keap1负性调节［2］，是内源性抗氧化途径的中枢转录因子，能调节抗氧化因子的表达，可作为心血管疾病潜在的治疗靶点之一。近年来，有关Nrf2对心血管保护作用的研究比较多，现作一综述。
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miR-153靶向Nrf2对胶质母细胞瘤细胞株U251凋亡的影响
目的 探讨miR-153对胶质母细胞瘤细胞株U251凋亡的影响,研究miR-153通诱导U251凋亡的具体机制.方法 用qRT-PCR检测正常人脑组织、WHO Ⅳ级神经胶质母细胞瘤中miR-153的表达情况.用qRT-PCR检测转染miR-153 mimics 48 h后U251中miR-153的表达量,流式细胞仪检测转染miR-153 mimics 48 h后U251细胞凋亡情况.荧光素酶报告基因系统验证NF-E2相关因子2(Nrf2)是否是miR-153的靶基因,免疫印迹检测转染miR-153 mimics 48 h后U251中Nrf2的表达水平.结果 与正常脑组织组相比,miR-153在胶质母细胞瘤组表达显著降低(P<0.05).U251细胞转染miR-153 mimics 48 h后,miR-153表达水平较对照组明显增高(P<0.05),显著促进了U251的凋亡(P<0.05).荧光素酶报告基因实验表明,miR-153能特异性靶向Nrf2基因.Western blotting 试验证实miR-153过表达抑制Nrf2蛋白的表达.结论 miR-153在神经胶质母瘤细胞中通过靶向Nrf2基因起到抑癌基因的作用,为未来在治疗神经胶质母细胞瘤方面提供了新的靶向治疗观念.
关键词： 微小RNA 胶质瘤 miR-153 NF-E2相关因子2 -
左卡尼汀减轻大鼠肾缺血再灌注损伤及其机制的研究
目的 研究左卡尼汀对大鼠肾缺血再灌注损伤(IRI)的影响及其机制.方法 将Wistar大鼠分为3组:L组大鼠制成IRI模型,于夹闭肾动静脉前5 min及松开动脉夹后30 min,分2次经尾静脉注射左卡尼汀,各500mg/kg;I组大鼠制成IRI模型,仅注射生理盐水；C组仅分离双侧肾动、静脉,注射生理盐水.分别于再灌注后3、6和24 h处死各组大鼠.处死前经下腔静脉取血,检测血清肌酐(Cr)、尿素氮( BUN)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量.获取肾组织样本,进行病理学观察；应用逆转录聚合酶链反应检测肾组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的mRNA水平；蛋白质印迹法检测细胞核中Nrf2含量；免疫组织化学法检测肾组织中Nrf2的表达及定位.结果 再灌注后3h时,L组与I组血清Cr和BUN均高于C组(P＜0.01)；再灌注后6h时,L组血清Cr和BUN高于C组(P＜0.01),而低于I组(P＜0.01)；再灌注后24 h时,L组血清Cr和BUN仍低于I组(P＜0.05).再灌注后6和24 h时,L组与I组SOD水平低于C组(P＜0.05),MDA水平高于C组(P＜0.05).再灌注后各时间点,L组SOD水平均高于I组(P＜0.05),MDA水平均低于I组(P＜0.05).再灌注后24 h时,L组肾组织病理改变较I组轻.再灌注后6h时,I组Nrf2、HO-1、γ-GCS的mRNA相对含量均高于C组(P＜0.05),而L组各基因mRNA的相对含量高于I组(P＜0.05).L组细胞核内Nrf2的相对含量高于I组(P＜0.05).结论 左卡尼汀可减轻大鼠肾脏IRI,其机制可能与激活Nrf2-ARE通路,进而增强下游抗氧化基因的表达有关.
关键词： 左卡尼汀 肾 缺血再灌注损伤 NF-E2相关因子2 -
人参皂苷Rb1对肠缺血再灌注致肾损伤的影响及其机制
目的 观察人参皂苷Rb1对肠缺血再灌注致肾损伤的影响及机制.方法 将48只成年雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组(n=12):假手术组(S组)、肠缺血再灌注组(ⅡR组)、Rb1低剂量组(Rb1-30组)、Rb1高剂量组(Rb1-60组).采用小鼠肠缺血再灌注模型.Rb1-30组和Rb1-60组分别于再灌注前腹腔给予30、60 mg/kg的Rb1.再灌注2h时心脏采血检测血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL),观察肾脏病理学改变,检测肾组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及Western blot检测血红素氧合酶-1(HO-1)、NF-E2相关因子(Nrf2)蛋白表达.结果 ⅢR组(HO-1:4.03±0.60,Nrf2:3.42 ±0.47)高于S组(HO-1:1.50±0.16,Nrf2:0.61 ±0.14)(P＜0.01),而Rh1-30组(HO-1:8.78±1.12,Nrf2:6.02±0.55)和Rb1-60组(HO-1:15.76±1.33,Nrf2:8.29±0.66)较ⅢR组进一步增高(P＜0.05).与S组(16.70 ±4.06)比较,ⅡR组(198.60±9.71)中肾损伤程度增高(P＜0.01),血清BUN(21.55±1.50)、Cr(20.65±1.53)和NGAL(155.93±8.07)水平、肾组织MDA(5.00±1.53)含量升高而SOD(9.49±1.39)活性降低(P＜0.01).与ⅡR组比较,Rb1-60组(94.60±9.24)中肾损伤程度减轻(P＜0.05),BUN(Rb1-30:15.52±1.23;Rb1-60:12.91±1.41)、Cr(Rb1-30: 16.00±1.50;Rb1-60: 13.14±1.22)和NGAL(Rb1-30:124.44±6.52;Rb1-60:101.76±12.20)水平、肾组织MDA(Rb1-30:4.12±0.47;Rb1-60:3.22±0.54)含量降低而SOD(Rb1-30:14.77±1.87;Rb1-60:18.91±1.56)活性升高(P＜0.01).结论 肠缺血再灌注可致肾损伤,人参皂苷Rb1通过激活Nrf2/ARE通路,诱导HO-1表达,从而减轻肠缺血再灌注所致肾损伤.
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突发性聋患者糖皮质激素治疗前后外周血单个核细胞Nrf2表达分析
目的 探讨突发性聋(sudden sensorineural hearing loss,SSNHL)患者体内转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid2 related factor,Nrf2)的变化及其与糖皮质激素(glucocorticoid,GC)抵抗的关系.方法 分离30例SSNHL患者治疗前后外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,QRT-PCR)方法检测其PBMCs中Nrf2 mRNA的表达量.根据就诊时间及用药情况将这30例SSNHL患者分为初发组(7例)和难治组(23例);难治组又根据听力恢复是否≥15 dB分为GC有效组(10例)及抵抗组(13例);选择10例听力正常的志愿者为对照组;比较各组SSNHL患者治疗前后Nrf2 mRNA表达量及与GC抵抗的关系.结果 ①30例患者中,治疗前难治组、初发组Nrf2 mR-NA表达量分别为0.520±0.049、0.514±0.052,两组间差异无统计学意义(F=0.052,P=0.911),但均低于对照组(0.607±0.106)(F=6.483,P=0.004);②治疗前难治组中GC有效组、抵抗组患耳0.25～8 kHz平均听阈(pure tone average,PTA)分别为81.75±13.28和91.80±13.79 dB HL,治疗后分别为54.67±15.65和89.87±13.98 dB HL.治疗后GC有效组Nrf2 mRNA表达量(0.560±0.051)较治疗前(0.510±0.028)有所上调(t=3.007,P=0.015),而GC抵抗组Nrf2 mRNA表达量(0.519±0.054)较治疗前(0.526±0.060)无明显变化(t=0.485,P=0.636).结论 Nrf2表达上调或下降可能参与SSNHL的发生发展;难治性SSNHL患者GC抵抗的机制可能与Nrf2低表达相关,上调Nrf2可能改善难治性SSNHL患者对GC的敏感性和预后.
关键词： 突发性聋 糖皮质激素 NF-E2相关因子2 外周血单个核细胞 -
siRNA干扰NF－E2相关因子2对喉鳞状细胞癌化疗敏感性的影响
目的：探讨小片段干扰 RNA（siRNA）干扰 NF － E2相关因子2（NF － E2－ related factor 2，Nrf2）对人喉癌 Hep2细胞化疗敏感性的影响及凋亡的差异。方法体外培养人喉癌细胞系 Hep2，设立实验组和对照组，实验组（Hep2／siRNA 组）采用脂质体转染法，转染 siRNA 至 Hep2细胞系，对照组（Hep2／siRNA － control 组）转染空质粒 siRNA － control 。经 Western Blot 验证其转染效果后，采用 CCK －8法检测计算 Hep2／siRNA 与 Hep2／siRNA － control 经不同浓度梯度顺铂（分别为1、2、4、8、16μg／ml）处理后的细胞增殖抑制率及 IC50值。通过凋亡试剂盒分别染色 Hep2／siRNA 与 Hep2／siRNA － control 细胞系，采用流式细胞仪检测两组细胞的凋亡率。结果实验组的 Nrf2蛋白表达比对照组发生下调，经不同浓度梯度顺铂处理24 h 后，Hep2／siRNA 细胞系增殖抑制率相对 Hep2／siRNA － control 逐渐升高，顺铂浓度为4μg／ml 时，对照组细胞增殖率为35．55％±6．14％，而实验组细胞增殖率为46．07％±5．21％，IC50值下调，细胞凋亡率由17．1％（对照组）升高至26．6％（实验组）。结论 siR‐NA 干扰 Nrf2基因可增强 Hep2细胞系对顺铂的敏感性。
关键词： 喉癌 NF-E2相关因子2 小片段干扰RNA 化疗敏感性 顺铂 -
Nrf2－ARE通路在子痫前期胎盘氧化应激中的作用
目的：观察转录因子NF－E2相关因子2（ Nrf2）－抗氧化反应序列元件（ ARE）通路在子痫前期产妇胎盘组织表达，探讨Nrf2在子痫前期疾病中的作用。方法随机选择60例择期行子宫下段剖宫产术的子痫前期产妇， ASAⅠ－Ⅱ级，根据病情分为轻度子痫前期组（P1组，n＝30）及重度子痫前期组（P2组，n＝30），另外随机选择正常行剖宫产患者为空白对照组（ C组，n＝30）。胎儿取出后断脐前取脐静脉血检测瘤坏死因子－α（ TNF－α）、丙二醛（ MDA）、超氧化物歧化酶（ SOD）活性；断脐后取胎盘组织用Western blot法检测Nrf2表达，免疫组化法检测血红素加氧酶－1（ HO－1）的表达。结果与C组比较， P1、P2组患者脐静脉血TNF－α、MDA活性显著升高， SOD活性显著降低（ P＜0．05）；与C组比较，P1、P2组患者胎盘组织的Nrf2与HO－1表达显著降低（ P＜0．05）；与P1组比较，P2组患者TNF－α、MDA活性显著升高， SOD活性显著降低（ P＜0.05）；与P1组比较， P2组患者胎盘组织的Nrf2与HO－1表达显著降低（ P＜0.05） 。结论子痫前期患者胎盘组织抗氧化能力显著降低，其机制可能与核因子E2相关因子2表达下调有关。
关键词： NF-E2相关因子2 子痫前期 胎盘 血红素加氧酶-1 -
新型硫化氢供体8L通过上调NF-E2相关因子2的表达拮抗H2O2损伤H9c2心肌细胞
目的 探讨新型硫化氢供体8L对氧化应激诱导心肌细胞损伤的保护作用及NF-E2相关因子2(Nrf2)有关的分子机制.方法 用活性氧供体过氧化氢(H2 O2)处理培养的大鼠H9c2心肌细胞,建立心肌细胞损伤的体外模型以模拟急性缺血再灌注诱导的心肌损伤;在H2 O2处理前给予8L预处理观察其对心肌细胞的保护作用.为了明确Nrf2的作用,在H2O2处理或8L预处理前给予其选择性抑制剂鸦胆苦醇预处理.细胞计数试剂盒8比色法检测细胞存活率,试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放,罗丹明123染色结合荧光照相术检测线粒体膜电位(MMP),Western Blot法检测核内Nrf2的表达.结果 H9c2心肌细胞经0～600 μmoL/L H2O2处理6h可浓度依赖性地降低细胞存活率,且半数有效浓度约为400μmol/L.400 μmol/L H2O2处理H9c2心肌细胞6h可使LDH释放增加,MMP降低,并增加细胞核内Nrf2的表达(P均＜0.01).在用400 μmol/L H2O2处理前,先用50、100和200μmol/L 8L预处理1h,可将细胞存活率从(52.6±4.3)％分别提高至(72.5±6.3)％、(83.1±5.2)％和(85.7±4.9)％.200 μmol/L 8L预处理1h还可明显抑制H2O2诱导的LDH释放(P＜0.01)及MMP受损(P＜0.05),但可易化H2 O2诱导的Nrf2表达上调(P＜0.01).另外,10μmol/L鸦胆苦醇预处理1h不但可加重H2 O2诱导的心肌细胞损伤(P＜0.01),还可拮抗8L的心肌细胞保护作用(P＜0.01).结论 硫化氢供体8L可减轻氧化应激诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与上调Nrf2有关.
关键词： 硫化氢供体 心肌保护 NF-E2相关因子2 氧化应激 -
支原体巨噬细胞活化脂肽-2经PI3K/Nrf2诱导单核细胞表达HO-1和NQO1
目的 观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2(MALP-2)对THP-1单核细胞血红素氧合酶-1(HO-1)和NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQO1)表达的影响,以明确机体抵抗支原体感染所致炎性损伤的自我防御机制.方法 体外培养THP-1细胞并分为对照组和实验组.其中对照组加入等体积培养基,实验组根据不同的实验目的 加入不同浓度的MALP-2作用5～120 min或12 h,Western blot 检测HO-1和NQO1表达以及Akt磷酸化水平.同时,采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞,以证实PI3K参与HO-1表达.提取细胞核蛋白,凝胶迁移率实验和免疫荧光观察NF-E2相关因子2(Nrf2)的DNA结合活性和核转位情况,并采用特异性siRNA沉默Nrf2后,Western blot观察其对HO-1和NQO1表达的影响.结果 Western blot结果显示,MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1和NQO1蛋白,且呈一定的剂量依赖性.此外,MALP-2能激活PI3K,且PI3K抑制剂能抑制HO-1和NQO1的表达;凝胶迁移率实验和激光共聚焦结果显示,MALP-2能增强Nrf2的DNA结合活性及核转位,而PI3K抑制剂处理后,Nrf2的DNA结合活性以及核转位水平进一步降低.RNA干扰Nrf2后,HO-1和NQO1表达显著降低.结论 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1和NQO1,其机制可能受PI3K/Nrf2调控.
