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杀伤细胞免疫球蛋白样受体及HLA-Cw基因多态性与强直性脊柱炎遗传易感性研究
目的 探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIRs)2D基因及其配体HLA-Cw等位基因与强直性脊柱炎的遗传易感性是否相关.方法 以PCR-SSP基因分型技术检测105例强直性脊柱炎患者KIR2D基因(KIR2DL1、2DS1、2DL2、2DL3、2DS2)和HLA-Cw01～08等位基因,并将HLA-Cw01～08分成HLA-Cwlys和HLA-Cwan两组,分别计算KIR2D基因、HLA-Cw等位基因及活化性KIR/HLA-Cw组合基因型频率,并与51例骨关节炎患者和120名健康人群比较.结果 强直性脊柱炎组患者HLA-Cwlys基因频率为0.269 7,高于骨关节炎组患者的0.148 2(P=0.024)和健康对照者的0.138 8(P=0.001).强直性脊柱炎组患者KIR2DS1/HLA-Cwlys组合基因型阳性率为26.67%,明显高于骨关节炎组的11.76%(P=0.039)和健康对照组的13.33%(P=0.018).结论 HLA-Cwlys可能与强直性脊柱炎遗传易感性相关;当抑制性受体KIR2DL1的特异性配体HLA-Cwlys存在时,KIR2DS1基因携带者可能是强直性脊柱炎的高危人群.
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自然杀伤T细胞在病毒感染性疾病中的特征及研究进展
自然杀伤T细胞(natural killer T cells,NKT细胞)属于T淋巴细胞,能特异性识别抗原递呈细胞表面主要组织相容性复合体I类样分子CDld递呈的糖脂类抗原.活化的NKT细胞能发挥抗病毒感染和抗肿瘤等作用,参与机体重要的免疫反应.本文对NKT细胞抗病毒作用的相关进展进行综述,同时分析NKT细胞参与肝损伤等慢性病毒感染的发病进程.
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人白细胞抗原G1及G5在重度子痫前期患者胎盘组织中的表达
目的 探讨重度子痫前期(sPE)患者胎盘组织中人白细胞抗原(HLA)G1及G5表达的变化.方法 选取早发型及晚发型sPE患者各10例、早产及正常足月妊娠产妇各10例,通过蛋白印迹法及免疫组化方法检测胎盘组织中HLA-G1及G5蛋白的表达.结果 与早产产妇相比,HLA-G1蛋白在早发型sPE患者的胎盘组织中表达量明显减少,分别为2.9±1.1、2.4±0.6,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；与正常足月妊娠产妇相比,晚发型sPE患者的胎盘组织中HLA-G1蛋白的表 达量明显减少,分别为4.2±2.4、3.5±2.1,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与正常足月妊娠产妇相比,HLA-G5蛋白在晚发型sPE患者的胎盘组织中表达量增加,分别为1.1±0.9、1.8±1.1,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；与早产产妇相比,HLA-G5蛋白在早发型sPE患者胎盘组织中的表达量无明显变化(分别为1.4±0.7、1.6±0.9,P＞0.05).HLA-G1蛋白在早产产妇胎盘组织中的表达量较正常足月妊娠者减少(P＜0.05)；HLA-G5蛋白在早产及正常足月妊娠产妇胎盘组织中的表达量无明显差异(P＞0.05).HLA-G1及G5蛋白主要在胎盘的绒毛外细胞滋养细胞中有表达,在血管周围及胚外中胚层中也有高表达.结论(1)HLA-G1在早发型及晚发型sPE患者胎盘组织中的表达均减少.(2)HLA-G5在早发型及晚发型sPE患者胎盘组织中的表达均增加,这一增加趋势在晚发型sPE患者中更为明显.(3)在妊娠晚期,HLA-G1在早产产妇胎盘组织中的表达较少.(4)胎盘组织中能够检测到HLA-G1及G5的表达,其主要位于胎盘的绒毛外细胞滋养细胞中.
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人类白细胞抗原G蛋白在胎盘组织中的表达及其基因多态性与妊娠肝内胆汁淤积症发病的关系
目的 探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)蛋白在胎盘组织中的表达及其基因多态性与妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)发病的关系.方法 选取2004年4月至10月间,在四川大学华西第二医院产科及四川省妇幼保健院产科行剖宫产分娩的晚孕妇女60例,其中ICP孕妇30例(ICP组),根据妊娠期是否接受过地塞米松治疗又将ICP组分为治疗组(15例)和非治疗组(10例,因未治病例少);正常晚孕妇女30例为对照(根据检测指标不同分为对照1组,15例;对照2组,30例).采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法,检测HLA-G蛋白在对照1组、治疗组及非治疗组孕妇胎盘组织中的表达情况(以平均吸光度值表示);同时采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCRSSP)法,检测HLA-G基因外显子8上14 bp缺失多态性在ICP组及对照2组孕妇外周血及新生儿脐血中的分布.结果 (1)非治疗组胎盘组织中,HLA-G蛋白的平均吸光度值为56±8,明显低于对照1组的70±10及治疗组的66±9,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);治疗组与对照1组胎盘组织中HLA-G蛋白的平均吸光度值比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)HLA-G基因外显子8上14 bp缺失多态性检测结果 显示,对照2组及ICP组母儿的等位基因频率及基因型频率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 ICP患者胎盘组织中HLA-G蛋白表达下调可能是ICP发病机制之一;地塞米松对胎盘组织中HLA-G蛋白的表达具有上调作用;HLA-G基因外显子8上14 bp缺失多态性可能与ICP的发病无关.
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子痫前期孕产妇胎盘组织中过氧化氢对人类白细胞相关抗原G表达的影响
目的 探讨子痫前期孕产妇胎盘组织中氧化应激产物过氧化氢(H2O2)对胎盘滋养细胞中的人类白细胞相关抗原G(HLA-G)表达的影响.方法 选择2008年10月-2009年10月南京医科大学第一附属医院住院的产妇40例,其中子痫前期组20例,健康妊娠组20例.采用比色法检测两组产妇胎盘组织中H2O2水平;采用蛋白印迹法检测两组产妇胎盘组织中HLA-G蛋白的表达水平;并对胎盘组织中H2O2水平与HLA-G蛋白表达水平进行相关性分析.人绒毛膜癌细胞株JEG-3细胞培养24 h后贴壁完全,分为两组,干预组加入浓度为175 μmol/L的H2O2,对照组不加H2O2,两组细胞培养24及48 h后,采用蛋白印迹法和细胞免疫荧光法检测JEG-3细胞中HLA-G蛋白表达水平和强度的变化.结果 (1)子痫前期组产妇胎盘组织中H2O2水平为(105±13)nmol·mg-1·prot-1,健康妊娠组产妇胎盘组织中H2O2水平为(62±18)nmol·mg-1·prot-1,子痫前期组较健康妊娠组明显升高,且差异有统计学意义(P<0.05).(2)子痫前期组产妇胎盘组织中HLA-G蛋白表达水平为0.20±0.08,健康妊娠组为1.67±0.65,子痫前期组比健康妊娠组下降了88%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)两组产妇胎盘组织中H2O2水平与HLA-G蛋白表达水平呈显著负相关(r=-0.895,P=0.000).(4)H2O2干预JEG-3细胞24 h后,JEG-3细胞中HLA-G蛋白表达水平为1.95±0.25,干预48 h后为0.65±0.08;与未干预细胞中的3.21±0.33比较,分别下降了39%和80%,干预24、48 h分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);干预48 h与干预24 h比较,HLA-G蛋白表达水平下降了67%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).H2O2干预JEG-3细胞48 h后荧光显微镜下显示,干预组细胞中HLA-G表达强度明显弱于对照组.结论 子痫前期产妇胎盘滋养细胞中的高水平H2O2能下调胎盘滋养细胞中HLA-G蛋白的表达,从而参与子痫前期的发病.
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人类白细胞抗原G基因14 bp缺失多态性与重度子痫前期发病的关系
目的 探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)基因第8外显子14 bp缺失多态性与重度子痫前期发病的关系.方法 选择2008年10月至2009年2月在郑州大学第三附属医院妇产科住院的42例孕晚期重度子痫前期孕妇及其新生儿为重度子痫前期组.另选择同期正常孕晚期孕妇及其新生儿45例为健康晚孕组,两组孕妇均为汉族居民.采用PCR技术对两组孕妇及其新生儿进行HLA-G基因第8外显子14 bp缺失多态性的等位基因分析,分别比较两组孕妇及其新生儿之间等位基因及基因型的频率分布,通过母、儿基因型配伍,比较两组间基因型配伍频率分布的差异.结果 (1)重度子痫前期组中母、儿均为14 bp缺失纯合子(-14 bp/-14 bp)的基因型配伍的频率为14%(6/42),显著低于健康晚孕组的33%(15/45),两组比较,差异有统计学意义(P=0.038);(2)重度子痫前期组孕妇HIA-G第8外显子14 bp缺失多态性的等位基因频率、基因型频率与健康晚孕组比较,差异均尤统计学意义(P>0.05);(3)重度子痫前期组新生儿HLA-G第8外显子14 bp缺失多态性等位基因+14 bp频率为44%(37/84)、-14 bp为56%(47/84),健康晚孕组新生儿+14 bp为30%(27/90)、-14 bp为70%(63/90),两组比较,差异虽无统计学意义,但存在差异性趋势(P=0.055);重度子痫前期组新生儿(-14 bp/-14 bp)基因型频率为29%(12/42),与健康晚孕组的49%(22/45)相比,存在差异性趋势(P=0.052).结论 中国汉族孕妇中,HIJA-G第8外显子14 bp缺失多态性与重度子痫前期的发病有关;母、儿均为缺失纯合子(-14 bp/-14 bp)基因型配伍者,发生重度子痫前期的风险会降低.
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人类白细胞抗原G的表达与子痫前期发病的关系
目的 通过检测子痫前期孕妇相关组织中人类白细胞抗原G (HLA-G)的表达,探讨其与子痫前期发病的关系.方法 选择2009年3月至12月在陕西省妇幼保健院产科住院分娩的子痫前期孕妇30例,根据病情分为轻度子痫前期组8例,重度子痫前期组22例.选择同期健康孕妇30例为对照组.3组孕妇均以剖宫产方式分娩.采用ELISA法检测孕妇外周血、脐血及羊水中的可溶性HLA-G(sHLA-G)水平；采用蛋白印迹法检测胎盘、胎膜及脐带组织中HLA-G蛋白的表达.结果 (1)各组孕妇外周血、脐血、羊水中sHLA-G水平:轻、重度子痫前期组孕妇外周血sHLA-G水平分别为(50±14)、(30±6) μg/L,新生儿脐血中sHLA-G水平分别为(34±10)、( 26±8)μg/L,均明显低于对照组的(100±16)、(70±9) μg/L,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)；重度子痫前期组与轻度子痫前期组比较,差异也有统计学意义(P＜0.01).重度子痫前期组新生儿脐血中sHLA-G水平虽低于轻度子痫前期组,但差异无统计学意义(P＞0.05).轻、重度子痫前期组孕妇羊水中sHLA-G水平分别为(26±7)、( 25±5) μg/L,均低于对照组的(27±6)μg/L,但分别与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；轻度子痫前期组与重度子痫前期组比较,差异也无统计学意义(P＞0.05).(2)各组孕妇胎盘、胎膜及脐带组织中的HLA-G蛋白表达:对照组胎盘组织中HLA-G蛋白表达水平为1.59±0.36,胎膜组织中表达水平为0.42±0.09,胎盘组织中的HLA-G蛋白表达水平明显高于胎膜组织,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；对照组脐带组织中HLA-G蛋白表达水平为0.24±0.17,分别与胎盘及胎膜组织中的HLA-G蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).轻度子痫前期组胎盘组织中HLA-G蛋白表达水平为0.78±0.21,重度子痫前期组为0.29±0.17,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).轻、重度子痫前期组孕妇胎膜及脐带组织中均未检测出HLA-G蛋白的表达.结论 与健康孕妇相比,HLA-G在子痫前期孕妇外周血、脐血及胎盘组织中呈明显低表达,HLA-G表达水平的异常可能与子痫前期的发病有关.
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胎盘组织中人类主要组织相容性抗原G mRNA的表达变化与特发性胎儿生长受限发病的关系
目的 探讨人类主要组织相容性抗原G(HLA-G) mRNA在特发性胎儿生长受限(IFGR)产妇胎盘组织中的表达及其与IFGR发病的关系.方法 采用原位杂交法,检测20例IFGR产妇(IFGR组)及28例正常产妇(对照组)胎盘组织中HLA-G mRNA的表达水平和表达部位,并对两组产妇的胎盘组织进行病理学观察.结果 (1)IFGR组产妇胎盘出现病理改变的发生率为75%(15/20), 主要为慢性绒毛膜炎、胎盘梗死及绒毛发育迟缓;明显高于对照组的18%(5/28),两组比较,差异有统计学意义(P=0.001).(2)IFGR 组产妇胎盘HLA-G mRNA的阳性表达率为45%(9/20),明显低于对照组的79%(22/28).两组比较,差异有统计学意义(P=0.017).(3)HLA-G mRNA的阳性表达部位主要位于胎盘绒毛外细胞滋养细胞及合体滋养细胞的细胞质内,呈紫蓝色的颗粒状沉淀,轮廓清晰.(4)HLA-G mRNA表达阴性者,出现胎盘病理改变的例数较HLA-G mRNA表达阳性者明显增多(r=-0.638,P＝0.008).结论 IFGR产妇胎盘组织中HLA-G mRNA表达水平明显下降,HLA-G mRNA的异常表达可能参与了IFGR的发病过程.
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子宫内膜异位症患者人类白细胞抗原的研究
目的 探讨子宫内膜异位症（内异症）与人类白细胞抗原（HLA）之间的易感相关性。方法 采用微量淋巴细胞毒试验法，对经手术证实为内异症的40例患者（内异症组）及无内异症的50例正常妇女（对照组）进行HLA-Ⅰ类抗原的A、B位点多态性检测。 内异症组和对照组均为无血缘关系的湖南、江西籍汉族妇女。结果 在HLA-Ⅰ类抗原A位点上，两组抗原频率差异无显著性（P>0.05）。在HLA-Ⅰ类抗原B位点上，内异症组的HLA-Ⅰ B46抗原频率为33%，对照组为16%，相对危险率（RR）为2.527 8，两组比较，差异有显著性（P<0.05）；内异症组的HLA-Ⅰ B48抗原频率为3%，对照组为16%，RR为0.134 6，两组比较，差异亦有显著性（P<0.05）。结论 内异症的发生与HLA-Ⅰ B46抗原存在关联，HLA-Ⅰ B48抗原可能对内异症的发生有拮抗作用。
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小分子干扰RNA对绒毛膜癌细胞人类白细胞抗原G 基因表达的影响
目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)对绒毛膜癌(绒癌)细胞中人类白细胞抗原G(HLA-G) 基因表达的影响,了解HLA-G基因在绒癌发生、发展中的作用.方法设计并合成HLA-G siRNA,分为两组.实验组以不同浓度(分别为1.0、 2.5、 5.0 μg/L,下同)的HLA-G siRNA转染HLA-G基因高表达的绒癌细胞系JEG-3细胞,对照组以等量阴性对照siRNA转染JEG-3细胞.实时荧光定量RT-PCR技术检测转染后JEG-3细胞中HLA-G mRNA的表达,HLA-G mRNA的表达以PCR循环数阈值(Ct值)表示;蛋白印迹法测定JEG-3细胞中HLA-G蛋白的表达;显微镜观察并计数转染后存活的JEG-3细胞数.结果 HLA-G siRNA转染JEG-3细胞后,明显下调JEG-3细胞中HLA-G mRNA及蛋白的表达水平.实验组不同浓度的HLA-G siRNA转染后,JEG-3细胞的Ct值[分别为(20.67±0.02)、(21.37±0.03)、(21.43±0.02)个循环数],分别与对照组[分别为(20.33±0.01)、(20.37±0.02)、(20.40±0.03)个循环数]比较,差异有统计学意义(P<0.05).上述浓度转染后,实验组JEG-3细胞的HLA-G蛋白表达水平[分别为0.42±0.03、0.37±0.02、0.12±0.04],分别与对照组[分别为1.69±0.23、1.62±0.31、1.36±0.22]比较,差异有统计学意义(P<0.01).实验组JEG-3细胞生长较对照组明显受到抑制(P<0.05).结论 HLA-G siRNA可以下调HLA-G mRNA及蛋白的表达水平,抑制细胞生长,表明HLA-G基因在绒癌的发生、发展中具有重要作用.
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卵裂期胚胎可溶性人类白细胞抗原G的表达及其与胚胎发育的关系
目的观察卵裂期胚胎可溶性人类白细胞抗原G (soluble human leukocyte antigen G, sHLA-G)的表达,并探讨sHLA-G的表达与胚胎发育的关系.方法采用免疫组化标记法,检测177个卵裂期胚胎sHLA-G的表达情况.结果 177个卵裂期胚胎中,101个卵裂期胚胎有sHLA-G蛋白表达,sHLA-G的总表达率为57.1%(101/177).其中双原核受精卵发育形成的卵裂期胚胎sHLA-G的表达率为66.2 %(90/136),三原核受精卵发育形成的卵裂期胚胎sHLA-G的表达率为26.8 %(11/41),两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).双原核受精卵发育形成的1级卵裂期胚胎sHLA-G 的表达阳性率为64.3%(18/28),2级卵裂期胚胎为91.7%(66/72),3级卵裂期胚胎为16.7%(6/36).3者比较,差异有统计学意义(P<0.01).三原核受精卵发育形成的Ⅰ级卵裂期胚胎sHLA-G的阳性率为88.9%(32/36),与双原核受精卵发育形成的Ⅰ级卵裂期胚胎比较,差异有统计学意义(P<0.01).双原核受精卵发育形成的≤4个细胞的胚胎sHLA-G的表达率为56.7%(34/60), 5个细胞及6个细胞的胚胎为67.9%(36/53),7个细胞及8个细胞的胚胎为87.0%(20/23),3者比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论卵裂期胚胎有sHLA-G蛋白表达;且sHLA-G表达与胚胎发育有关.
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早期胚胎组织中滋养细胞可溶性人类白细胞抗原G的表达
目的通过观察可溶性人类白细胞抗原G(sHLA-G)在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)后自然流产胚胎组织和绒毛膜癌组织中的表达,以探讨sHLA-G在滋养细胞中的表达及其与胚胎发育的关系.方法应用免疫组织化学标记法,检测14例IVF-ET(IVF-ET组)后自然流产绒毛组织和6例绒毛膜癌(绒毛膜癌组)组织中的sHLA-G表达情况,按染色深浅分为阴性、阳性及强阳性;并与10例正常绒毛(正常绒毛组)组织进行对照.结果 (1)IVF-ET组仅1例sHLA-G表达阳性(1/14),其余均为阴性或弱阳性; 绒毛膜癌组sHLA-G表达全部强阳性;正常绒毛组sHLA-G表达全部为阳性.(2)3组患者的sHLA-G表达部位主要位于绒毛的细胞滋养细胞.结论 sHLA-G在正常绒毛和绒毛膜癌的滋养细胞中呈高表达,在IVF-ET后自然流产的绒毛组织中表达明显下降,表明sHLA-G在滋养细胞的表达可能与胚胎的早期发育有关.
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人类白细胞抗原G基因表达对滋养细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响
目的 探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)基因表达变化对滋养细胞侵袭力、滋养细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达的影响.方法 对滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞进行体外培养并分组,将细胞分为实验组[转染HLA-G小分子干扰RNA(siRNA)]、阴性对照组(转染阴性对照siRNA)和空白对照组(仅转染脂质体2000).分别用逆转录(RT)PCR技术测定转染后细胞中HLA-G mRNA的表达;蛋白印迹法测定HLA-G蛋白的表达来验证核糖核酸干扰(RNAi)敲减效率;穿膜小室侵袭实验检测细胞的侵袭力;蛋白印迹法检测p-p38MAPK积分吸光度(IA)与p38MAPK IA的比值;检测加入抑制剂SB203580后穿膜小室的侵袭细 胞数.结果 (1)HLA-G mRNA表达:实验组为0.26±0.08,阴性对照组为0.71±0.11,空白对照组为0.79±0.07.实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);实验组HLA-G mRNA表达抑制率为(69.8±6.3)%,阴性对照组HLA-G mRNA表达抑制率为(14.9±2.2)%,空白对照组为0.(2)HLA-G蛋白表达:实验组为0.20±0.15,阴性对照组为0.75±0.12,空白对照组为0.76±0.21.实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);实验组HLA-G蛋白表达抑制率为(81.1±14.4)%,阴性对照组HLA-G蛋白表达抑制率为(18.0±7.7)%,空白对照组为0,实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)穿膜小室下室的侵袭细胞数:实验组为(57±38)个,阴性对照组为(364±79)个,空白对照组为(260±84)个.实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(4)p-p38MAPK与p38MAPK蛋白比值:实验组为0.74±0.04,阴性对照组为0.47±0.09,空白对照组为0.36±0.21.实验组比值明显高于其他两组,差异有统计学意义(P＜0.01).(5)加入抑制剂前、后p-p38MAPK与p38MAPK蛋白比值:实验组分别为0.89±0.09、0.16±0.04,阴性对照组分别为0.76±0.08、0.14±0.03,空白对照组分别为0.51±0.05、0.03±0.01,各组加入抑制剂SB203580前、后p-p38MAPK与p38MAPK比值分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(6)加入抑制剂前、后穿膜小室下室的滋养细胞侵袭力:实验组分别为(51±13)和(90±21)个,前后比较,差异有统计学意义(P＜0.01);阴性对照组分别为(290±52)和(298±33)个,前后比较,差异无统计学意义(P＞0.05);空白对照组分别为(290±73)和(264±64)个,前后比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HLA-G基因可能通过p38MAPK信号通路调节滋养细胞的侵袭力.提示滋养细胞HLA-G低表达可导致病理妊娠的发生.
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人类白细胞抗原-E在正常妊娠、妊娠期高血压及子(疒间)前期绒毛或蜕膜组织中的表达
目的 探讨人类白细胞抗原-E(human leukocyte antigen-E,HLA-E)在正常妊娠、妊娠期高血压和子(疒间)前期绒毛或蜕膜组织中的表达与意义. 方法 选择早、晚期正常妊娠及妊娠期高血压、轻度子(疒间)前期、重度子(疒间)前期患者各6例,应用免疫组化法分别检测HLA-E在绒毛及蜕膜的表达. 结果HLA-E在早、晚期正常妊娠细胞滋养细胞和合体滋养细胞中的表达均较弱分别为0.246±0.031和0.252±0.045,t=2.85,P>0.05);而在侵入蜕膜的绒毛外滋养细胞和腺上皮细胞中强表达,且在妊娠晚期的表达较早期增强(0.308±0.057和0.270±0.035,t=3.79,P<0.05).在正常足月妊娠、妊娠期高血压、轻度子(疒间)前期及重度子痢前期绒毛的平均吸光度分别为0.252±0.045、0.227±0.032、0.210±0.019和0.214±0.023(F=13.18,P<0.05);而在上述各组蜕膜中表达的平均吸光度分别为0.308±0.057、0.211±0.017、0.196±0.013和0.187±0.014(F=33.91,P<0.05).HLA-E在妊娠期高血压、轻度子(疒间)前期和重度子瘌前期绒毛和蜕膜的表达分别与正常足月妊娠比较,均显著减少(P均<0.05). 结论 HLA-E的表达在正常妊娠早期可能与胚胎植入有关,在晚期参与妊娠的维持,而在妊娠期高血压及子(疒间)前期中的低表达可能与该疾病的发生有关.
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人白细胞抗原-G mRNA各亚型在重度子(癎)前期胎盘组织中的表达
目的 探讨人白细胞抗原-G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)各亚型在早发型、晚发型重度子(癎)前期患者以及正常妊娠产妇胎盘组织中表达的差异. 方法 使用巢式RT-PCR方法检测11例早发型重度子(癎)前期患者、14例晚发型重度子(癎)前期患者以及8例正常分娩产妇胎盘组织中HLA-G各亚型mRNA表达的差异情况. 结果 与正常对照组相比,HLA-G1亚型在早发型和晚发型重度子(癎)前期患者的胎盘组织中表达明显减少(中位数:早发型组1.37,P<0.05;晚发型组24.90,P<0.05;正常对照组46.67,P<0.05).HLA-G2亚型在晚发型重度子(癎)前期患者的胎盘组织中表达水平较高(中位数:早发型组0;晚发型组21.59,P<0.05;正常对照组5.39).HLA-G5亚型在早发型以及晚发型重度子(癎)前期患者的胎盘组织中表达水平增高(中位数:早发型组19.23;晚发型组3.65;正常对照组1.33). 结论 HLA-G膜结合型亚型mRNA在胎盘组织中表达减少以及HLA-G可溶性亚型mRNA在胎盘组织中表达的增高,可能在子(癎)前期的发病机制中起到一定的作用.
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肿瘤细胞HLAⅠ类分子表达对NK抗性的影响及IFN-γ的调节作用
目的探讨肿瘤细胞表面HLA Ⅰ类分子的表达与NK杀伤的关系及IFN-γ的调节作用.方法用间接免疫荧光法检测7种肿瘤细胞表面HLA-ABC分子的表达;用鼠抗人HLA-ABC单抗封闭靶细胞后,观察NK杀伤的变化;用IFN-γ处理靶细胞后,观察瘤细胞表面HLA分子表达的变化及NK杀伤的变化.结果不同肿瘤细胞株表达HLA-ABC分子的比例及荧光强度均不相同,除Karpas外,均表现为不同程度的下降.HLA-ABC表达阴性的K562细胞对NK杀伤敏感,其他细胞的敏感性均有下降.肿瘤细胞表面HLA-ABC分子的表达多有不同程度的下降,用抗HLA单抗封闭相应位点后,可使NK杀伤明显增强.用IFN-γ 500 U/ml处理48 h后,白血病细胞K562、黑色素瘤细胞M21和高转移肺癌细胞PG表面HLA Ⅰ类分子表达明显增加,对NK杀伤的敏感性降低;而人T细胞淋巴瘤Karpas、髓样白血病细胞HL60和结直肠癌细胞HT29经处理后,HLA Ⅰ类分子表达无明显变化,对NK杀伤的敏感性反而明显增强.IFN-γ促进HL60和HT29细胞的凋亡.结论 NK细胞能识别HLA-ABC分子表达下降或缺陷的肿瘤细胞并发挥杀伤作用;IFN-γ能恢复部分肿瘤细胞HLA-ABC分子的丢失,并能促进部分肿瘤细胞的凋亡,提高肿瘤对机体抗瘤机制的敏感性.
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乙型肝炎病毒对干扰素-γ受体表达及其信号通路的影响
目的探索乙型肝炎病毒(HBV)持续存在和复制对干扰素-γ受体(IFN-γR)、IFN-γ/STAT-1信号及MHC-Ⅰ诱导表达的影响.方法采用流式细胞术、Western-blot及半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,检测HepG2 2.15与HepG2肝母细胞瘤细胞株及人正常细胞株LO2的IFN-γR表达;同时检测细胞IFN-γR1对IFN-γ的结合能力.观测不同时间段的IFN-γ/p-STAT1信号活化及IFN-γ/MHC-Ⅰ诱导效应.结果HepG2.2.15细胞膜结合型及全细胞内IFN-γR1表达高于其母源性细胞HepG2及正常肝细胞株LO2细胞;HepG2.2.15细胞IFN-γR1 mRNA量显著高于HepG2及LO2细胞(t=9.35,P＜0.01);HepG2 2.15细胞全细胞IFN-γR2表达低于HepG2及LO2细胞;两株肿瘤细胞存在内源性p-STAT1条带;HepG2.2 15细胞IFN-γ/p-STAT1、IFN-γ/MHC-Ⅰ诱导效应较母源细胞低下.拉米夫定抑制HBV DNA后,可上调HepG2.2 15细胞的IFN-γ/MHC-Ⅰ表达.结论HBV持续存在和复制可降低IFN-γ/STAT1及IFN-γ/MHC-Ⅰ诱导表达的敏感性;并能上调IFN-γR1表达、下调IFN-γR2表达.
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人类白细胞抗原-G及其与妇科肿瘤的关系
免疫逃逸在妇科恶性肿瘤发病中的作用日益受到重视.人类白细胞抗原-G(HLA-G)分子是主要组织相容复合物Ⅰ家族中的主要成员,具有抑制免疫的作用,在妇科肿瘤的免疫逃逸中发挥了重要作用.
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乳腺癌患者肿瘤细胞HLA表达及机体免疫状态的研究
目的:探讨乳腺癌患者免疫状态和癌细胞组织相容性抗原(HLA)Ⅰ类分子、Ⅱ类分子表达在肿瘤发生、发展和转移中的变化.方法:于术前检测乳腺癌和乳腺纤维腺瘤患者外周血T淋巴细胞亚群比例,并应用流式细胞术检测癌组织和纤维腺瘤组织的HLAⅠ类分子、HLAⅡ类分子的表达情况.结果:HLAⅠ类分子、HLAⅡ类分子在乳腺癌组织的表达均显著低于乳腺纤维腺瘤组织;HLAⅠ类分子在淋巴结转移组表达显著低于未转移组,更显著低于乳腺纤维腺瘤组;HLAⅠ类分子表达乳腺癌Ⅰ期显著高于Ⅱ期,Ⅱ期显著高于Ⅲ期;HLAⅡ类分子表达由I期到Ⅲ期呈降低趋势但在各期间差别不显著.乳腺癌患者外周血CD4+/CD8+比值低于正常对照组,差异显著;CD4+/CD8+I期显著高于Ⅲ期;但与Ⅱ期无显著差异;乳腺癌患者外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞所占比例在各组、各期间均无显著差异.结论:HLA分子的低表达与乳腺癌的发展、转移、预后有关;CD4+/CD8+比值、HLAⅡ类分子可作为判断肿瘤预后的参考指标;HLAⅠ类分子表达降低程度和肿瘤恶化程度相一致,可作为反映肿瘤转移的参考指标.
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NLRC5对HepG2.2.15细胞中MHC-Ⅰ类分子的调节作用
目的 探讨NLRC5在Hep G2.2.15细胞中的表达情况及其对主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(M HC-Ⅰ类分子)表达的调节作用.方法 将实验分为Hep G2组、Hep G2+IFN-γ组、Hep G2.2.15组、Hep G2.2.15+IFN-γ组、Hep G2.2.15+pcDNA3.1-NLRC5-GFP组、Hep G2.2.15+pc DNA3.1组,检测NLRC5转录水平及蛋白表达情况,以及过表达NLRC5后MHC-Ⅰ类分子表达情况.结果 与Hep G2细胞相比,Hep G2.2.15细胞中的NLRC5转录水平、蛋白表达水平、MHC-Ⅰ类分子的表达水平降低(P<0.05).Hep G2细胞加入IFN-γ后,NLRC5的转录水平及蛋白表达水平均增加(P<0.05),Hep G2.2.15细胞蛋白水平无明显变化.与未转染组相比,过表达NLRC5蛋白后的Hep G2.2.15细胞表面的MHC-Ⅰ类分子表达上调(P<0.05).结论 HBV感染导致MHC-Ⅰ类分子表达下调,而NLRC5可上调MHC-Ⅰ类分子的表达.
