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HIV临床检测技术进展及应用
HIV感染的实验室检测在AIDS防治中至关重要.为提高HIV相关检测的灵敏度和特异度,陆续出现了可同时检测HIV抗原和抗体的第四代试剂、用于病毒载量检测的实时荧光定量PCR技术、新近感染检测的IgG捕获BED酶联免疫法等方法.这些方法不断接受临床评估及验证.
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免疫PCR检测HIV-1 p24抗原的初步评价
目的 对免疫PCR HIV-1 p24抗原检测体系的检出限、特异性和重复性等指标进行初步评价.方法 用建立的免疫PCR体系检测p24抗原,讨论检测方法的特异性、检出限和重复性指标,将空白对照的非特异性扩增条带用荧光密度值(FI)定量,初步提出特异性扩增下限的判定方法.结果 将非特异性扩增荧光密度值的(+3s)作为特异性扩增信号的判定下限,免疫PCR检测p24抗原的检出限为0.1 ng/L.结论 检测方法的检测限、特异性与重复性能满足HIV-1 p24抗原检测的需要.
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HIV1/2抗体与P24抗原联合检测的意义研究
目的 研究HIV1/2抗体与P24抗原联合检测对临床诊断的影响.方法 自2006年1月-2011年3月分别收集ELISA法检测HIV1/2抗体吸光度(OD值)为临界值及大于等于阳性对照的患者血清33、29份,采用电化学发光法联合检测HIV1/2抗体与P24抗原(HIVCOM).追踪患者免疫印迹HIV确证试验结果,研究HIV1/2抗体与P24抗原联合检测对临床诊断的影响.结果 33例临界值吸光度患者中27例HIV1/2抗体与P24抗原阳性,6例阴性,29例大于等于阳性对照值吸光度的患者中28例阳性,1例阴性,免疫印迹HIV确证试验的检测结果与联合检测HIV1/2抗体及P24抗原结果一致.结论 HIV1/2抗体与P24抗原联合检测较ELISA法能够更早更准确的发现HIV感染,对临床的与早期诊断和治疗具有重要的意义及应用价值.
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3种进口第四代人类免疫缺陷病毒检测试剂检测性能评价
目的：通过对比分析3种进口第四代人类免疫缺陷病毒（H IV ）抗原抗体诊断试剂检测 H IV抗体和P24抗原的特异性及敏感性，评价这3种 H IV 检测试剂在临床实际应用中的意义。方法用 H IV 抗体阴性样品1075份、HIV抗体阳性样品164份、BBI阳转血清盘（PRB92901-07）和7种不同稀释度的P24抗原阳性对照血清等，对3种进口第四代H IV检测试剂的敏感性和特异性进行分析。结果方法1、2、3检测 H IV抗体特异性分别为92．9％、99．4％和99．3％，经统计处理，方法2特异性高于方法1，差异有统计学意义（χ2＝59．7，P＜0．01），方法3特异性高于方法1，差异有统计学意义（χ2＝57．3，P＜0．01），方法2和方法3特异性差异无统计学意义；3种试剂检测 H IV抗体的敏感性一致，皆为100．0％；但其检测P24抗原的敏感性不同，方法3检测P24抗原的敏感性高，可检出高稀释度为1∶32的P24抗原阳性对照血清；而方法1和方法2检测P24抗原敏感性较低，只能检出高稀释度为1∶16的P24抗原阳性对照血清；3种试剂检测BBI阳转血清盘AD第18天的HIV抗体检测结果为阳性，而第三代H IV抗体检测试剂检测血清盘第21天的 H IV抗体检测结果为阳性。结论3种进口第四代抗原抗体检测试剂敏感性均高于第三代检测试剂，能检出 HIV感染窗口期的样品；3种试剂检测 HIV抗体的敏感性一致，但检测P24抗原的敏感性和 H IV抗体的特异性不一致，方法1检测 H IV抗体的特异性较低，而方法3检测P24抗原的敏感性高。
关键词： 人类免疫缺陷病毒抗体 p24抗原 ELISA BBI阳转血清盘 性能评价 -
双抗体夹心ELISA法检测HIV-1 p24抗原的初步建立
目的 建立敏感、特异的艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1) p24抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,为试剂盒的研制奠定基础.方法 用纯化的基因工程p24表达抗原免疫小鼠及兔子,获得单克隆抗体(单抗)及多克隆抗体(多抗),用单抗包被酶标板,辣根过氧化物酶标记多抗,初步建立HIV-1 p24抗原的ELISA检测方法.进一步与美国杜邦公司的HIV-1 p24抗原检测试剂同时检测88份HIV感染者血清和50份健康献血员血清中的p24抗原,确定其特异性;采用倍比稀释法的p24抗原标准品,测定试剂的灵敏度.结果 两种方法检测88份HIV感染者血清和50份献血员血清中的p24抗原.结果 均为阴性(符合率为100%);自建ELISA法检测HIV-1 p24抗原的灵敏度为100pg/ml.结论 初步建立了检测HIV-1 p24抗原的ELISA法,与国外同类试剂比较,本法的特异性和灵敏度均接近国外同类试剂,有较好的特异性和灵敏度,为进一步研制HIV-1 p24抗原ELISA检测试剂盒打下了基础.
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区分HIV-1p24抗原和HIV抗体检测方法的临床应用
目的 了解艾滋病病毒(HIV)-1 p24抗原和抗体联合检测在临床应用的价值.方法 总结从2012-2016年HIV-1 p24抗原和抗体联合检测并且能区分是抗原还是抗体阳性的临床结果,并和不能区分抗原抗体的四代酶联试剂结果比较,对其中HIV-1 p24抗原阳性的样本进行CD4+T淋巴细胞及HIV核糖核酸(RNA)的检测.结果 2012-2016年共检测HIV-1 p24抗原和抗体联合检测样本10 476例,其中HIV抗体阳性777例,HIV-1 p24抗原阳性36例,其中抗原抗体同时阳性8例,单独HIV-1 p24抗原阳性28例.结论 HIV-1 p24抗原和抗体联合检测敏感性高、特异性强,尤其是能将抗原和抗体阳性区分开来,大大缩短了窗口期,提高了HIV急性期感染的检出率.
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关键词：
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人类免疫缺陷病毒新近感染及其检测技术的研究进展
人类免疫缺陷病毒(HIV)感染使全球面临严重问题,而对HIV新近感染的检测是估算HIV新发感染趋势研究的新方向.HIV核心蛋白p24抗原可早期检出因而用于HIV新近感染的检测,但因其敏感性低,对群体发病率的估计存在局限性;HIV核酸检测用于新近感染的判断敏感性和特异性都较高,尤其是集合核酸技术的应用降低了核酸检测技术本身的高成本;BED(指HIV-1特异的B、E和D亚型)捕获酶联免疫法的数据结果则更能反映出新近感染高危因素以及其他方面的变化规律,对评估HIV新发感染动态趋势起到积极作用.
关键词： 人类免疫缺陷病毒 新近感染 p24抗原 HIV核酸 BED捕获酶联免疫法 -
三种HIV抗原／抗体检测方法对HIV早期感染检测的诊断研究
目的：：比较市售的三种HIV抗体试剂盒检测HIV感染的能力，为HIV感染的早期发现提供参考方法。方法：分别采用两种第4代 HIV 试剂盒(英国 Abbott 公司生产的 Murex HIV Ag／Ab 检测试剂：编号为 A；荷兰 Organon 公司Vironostika HIV Uni-FormⅡAg／Ab检测试剂：编号为B）；一种第3代HIV试剂盒(英国Abbott公司生产的Murex HIV-1.2.O试剂：编号为C）及P24抗原( ELISA法）检测盒对3863份血液样本及BBI阳转血清盘进行检测，对两种第4代HIV试剂盒检测的敏感性、特异性进行分析，同时分析三种抗体检测试剂盒对HIV感染窗口期检出的时间是否提前。结果：试剂盒A、B均完全检出54例HIV感染阳性的血液样本，试剂A检出的灵敏度＝100％，特异度＝99.61％，漏诊率＝0，误诊率＝0.39％；试剂B检出的灵敏度＝100％，特异度＝99.37％，漏诊率＝0，误诊率＝0.63％；试剂A和试剂B检出结果进行比较，结果差异不显著( P＞0.05）；A试剂、B试剂分别较C试剂的检测窗口期提前5.5和3.7 d，但与P24抗原试剂盒的检出窗口期比较却滞后4.25至6.05 d。结论：本研究中的两种第四代HIV抗体试剂盒检测HIV感染的能力较强，灵敏度均达到100％，同时能够将HIV感染检出的窗口期提前，有利于保证用血安全。
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急性HIV感染及其检测技术研究进展
艾滋病已成为世界范围内重要的公共卫生问题.既往发现HIV感染者的方法主要是基于对l-IV抗体的检测,然而,在HIV感染至抗体检测阳性这一急性HIV感染(AHI)阶段,患者体内具有一过性的高病毒血症,传染性极强.开展AHI的筛查,及时发现AHI者并给予有效的干预和治疗可以防止HIV的进一步传播.减缓感染者的病程,具有个体临床和群体公共卫生的双重意义.此文综述了AHI的概念、临床表现、流行病学意义以及相应的检测技术进展和费用等.
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鹰嘴豆芽素A抗HIV-1活性及抑制CD4+淋巴细胞早期活化作用
目的 研究鹰嘴豆芽素A(biochanin A,BioA)对HIV-1活性及CD4+淋巴细胞早期活化作用的影响.方法 ①以MT-2和H9/HIV-1ⅢB细胞或HIV-1病毒共培养建立HIV-1感染模型,以不同浓度的BioA干预该过程,观察细胞融合情况和测定培养上清中的p24抗原含量变化,以评价BioA的抗HIV-1活性.②以PHA刺激剂诱导人外周血CD4+淋巴细胞活化,利用流式细胞术检测不同浓度BioA对早期活化标志CD69分子的表达影响.结果 ① BioA在本实验所设浓度下均能减少由HIV-1介导的细胞融合数(EC50=5.1 μmol·L-1,SI=39)及p24抗原的表达量(EC50=38 μmol·L-1,SI=5.2).②终浓度5、10、25、50 μmol·L-1的BioA对CD4+淋巴细胞早期活化抗原CD69表达具有明显抑制作用(P＜0.01),其中50 μmol·L-1达到大抑制率,能使活化率从(60.42±0.52)%降低到(19.70±0.38)%.结论 BioA具有抗HIV-1介导的细胞融合和HIV-1复制的活性及抑制CD4+淋巴细胞早期活化作用.
关键词： biochanin A HIV-1 细胞融合 p24抗原 早期活化 -
抗HIV p24多肽单克隆抗体和抗血清的制备及初步应用
检测p24抗原的诊断试剂在AIDS研究和防治方面具有重要意义.为研制国产HIV p24抗原诊断试剂,根据国内外文献,合成了HIV p24抗原的六个肽段:G-A 12,D-R 16,P-S 18,A-G 23(HIV-2 ROD),P-S 18,N-I 15以及D-C 22.六个肽段中,N-I 15肽和D-C 22肽用于制备McAb,其余4个用于制备山羊抗血清.除D-R 16肽的滴度较低(1∶2000)外,其余三个肽的抗血清滴度都在1∶10000以上.McAb中,N-I 15肽的反应比 D-C 22肽要强,但两者的腹水滴度相同,均为1∶1000.单抗铺板检测病毒p24抗原的非特异性反应比较强.用山羊抗血清铺板,1∶8000的稀释度检测效果好.用我们研制的抗体检测不出裂解HIV-1ⅢB中p24,却能够测出Abbott公司p24抗原诊断试剂盒的阳性对照(HIVAG-1).用北海道大学免疫科学研究所研制的单抗和人阳性血清做的交叉对照实验表明,可能是由于合成肽免疫产生的抗体与裂解病毒p24的亲和力较差引起.
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两种进口第4代HIV检测试剂检测性能评价
目的:评价BioMerieux公司的HIV抗原/抗体联合检测快速法(VIDAS HIV DUO QUICK)和Vironostika HIV Uniform Ⅱ Ag-Ab ELISA法检测HIV抗体和P24抗原的特异性及敏感性.方法:用上述两种试剂分别检测HIV抗体阴性样品1184例、HIV抗体阳性样品128例、BBI阳转血清盘(PRB929 01-07)和7种不同稀释度的P24抗原阳性对照血清等,对其进行敏感性和特异性分析.结果:两种试剂检测HIV抗体均具有较高特异性,但快速法检测特异性较高(为98.6％),而ELISA法检测特异性较低(为96.0％).两种试剂检测HIV抗体和抗原的敏感性一样.另外,从检测BBI阳转血清盘的结果可知,两种4代抗原/抗体联合检测试剂检测BBI阳转血清盘AD第18 d结果即为阳性,而3代HIV抗体检测试剂在第21 d结果为阳性,4代检测试剂敏感性比3代检测试剂高,进一步缩短了HIV感染检测的窗口期,可以检出窗口期的样品.结论:这2种4代检测试剂在增加HIV P24抗原检测的情况下,不影响其检测HIV抗体的特异性和敏感性,并进一步缩短了HIV感染窗口期.建议HIV抗体初筛检测使用第4代HIV抗原/抗体联合检测试剂,可检出更多艾滋 病早期感染者.
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HIV-1 P24抗原国家参考品的研制
收集正常人、HIV感染者和疑似感染者血浆以及HIV-1病毒培养裂解液,对其进行HIV抗体、HIV P24抗原、HCV抗体和HBsAg检测,对HIV P 24抗原阳性者进行HIVRNA检测,并对部分样品进行基因分型.以NIBSCP 24抗原标准品的系列稀释样品作为线性灵敏度参考品.经过实验筛选出20份阴性参考品,10份阳性参考品,10份线性灵敏度参考品,2份精密性参考品,共同组成HIV-1 P24抗原国家参考品,经多家不同的试剂进行标定,制定了相应的标准.稳定性研究结果表明,反复冻融三次对该参考品的稳定性没有影响.由此,初步建立了HIV-1 P24抗原国家参考品,该参考品将对HIV-1 P24抗原、HIV抗体/P 24抗原联合检测试剂的质量控制提供重要依据.
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第四代HIV初筛试剂在血液筛检中的应用评价
目的 对第四代HIV初筛试剂在血液筛检中的应用进行评价. 方法 分别用第三代和第四代HIV初筛试剂对血液中心送检的333份献血者血液标本(S/CO≥0.6)进行检测,对初筛结果阳性或可疑的标本用HIV抗体确证实验(免疫印迹法)进行确认,根据检测结果对第三代和第四代初筛试剂进行比对,评价第四代初筛试剂的应用效果. 结果 利用第四代初筛试剂从333份血液标本中筛检出阳性82例,阳性率为24.6％(82/333),第三代初筛试剂阳性40例,阳性率为12.0％(40/333);利用免疫印迹法从82份第四代HIV试剂筛检阳性标本中检出HIV抗体阳性26例,HIV抗体不确定18例,从40份第三代HIV试剂筛检阳性标本中检出HIV抗体阳性26例,HIV抗体不确定7例,第四代HIV试剂初筛的标本HIV抗体不确定结果多于第三代HIV初筛试剂. 结论 第四代HIV初筛试剂在HIV早期或近期感染中可以在一定程度上缩短“窗口期”,增加HIV的检出率,建议血液中心继续利用第四代HIV初筛试剂对献血者进行血液筛查.
关键词： 第四代HIV初筛试剂 HIV确证 p24抗原 -
深圳地区无偿献血人群HIV感染构成现况分析
目的 了解深圳地区无偿献血人群HIV感染的现状,采取有效措施,控制疾病经血液传播,降低输血传播疾病的风险,为献血者的招募和血液检测方案的建立提供参考依据.方法 应用酶联免疫试剂,检测2007~2011年无偿献血者样本的抗-HIV1、2抗体和p24抗原,有反应性者送到深圳市疾病预防控制中心进行免疫印迹法(WB)确认.结果 2007~2011年共采集并筛查无偿献血者样本302 422例,经确认为HIV阳性的有69例,HIV阳性率呈逐年上升趋势(χ2=25.505,P<0.005);无偿献血HIV感染者中男女差异有统计学意义(χ2=20.471,P<0.005);HIV感染以单纯HIV感染为主,占74%,其次为合并梅毒螺旋体的感染(25%)和HCV的感染(1%).结论 加强献血前的咨询和甄别,缩短检测"窗口期"和提高检测灵敏度,降低输血传播病毒危险,提高血液安全.
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P24在HIV感染者和艾滋病患者检测中的应用
获得性免疫缺陷综合征(Acquired ImmunoDeficiency Syndrome)简称艾滋病(AIDS),是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)感染机体所引起的一种严重的传染性疾病.目前该疾病已从在高危人群传播逐步转化为在一般人群传播,因此艾滋病的预防与控制成为医务和研究工作的重要部分.对HIV感染的检测方法包括抗体检测、P24抗原检测、核酸检测以及CD4+T淋巴细胞水平检测等[1].机体感染HIV后,P24抗原是较早能从血清中检出的病原学标志,感染后约2～3周即可检出,1～2个月左右进入抗原高峰,然后随着机体抗体的逐渐产生,由于抗体的中和作用,形成抗原抗体复合物,而游离性抗原很少,甚至会低于监测水平,机体进入无症状感染期.
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抗HIV-1核心抗原p24单克隆抗体的制备及特性的初步鉴定
目的: 建立分泌抗HIV-1 p24单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株, 并对其特性进行初步鉴定. 方法: 以纯化的基因工程制备的p24抗原免疫BALB/c小鼠, 取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 经HAT、 HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后, 用间接ELISA法及Dot blot对其进行筛选和特性鉴定.结果: 筛选到2株可分泌抗HIV-1 p24 mAb的杂交瘤细胞, 其腹水效价为1×10-5, 亲和力为1.7×104～1.8×104 mol/L, mAb的Ig亚类均为IgG1.两株mAb与HBcAg、 HCV RNA 阳性血清及HIVgp41等均无交叉反应, 只与HIV-1 p24抗原阳性血清产生特异反应. 结论: 成功地建立了2株可分泌抗HIV-1 p24 mAb的杂交瘤细胞, 为进一步研制HIV-1 p24抗原的ELISA检测试剂盒奠定了基础.
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流式细胞术检测CD4+T细胞内p24抗原辅助诊断HIV-1的感染
目的 探讨流式细胞术(FCM)检测CD4+T淋巴细胞内p24抗原对人免疫缺陷病毒1(HIV-1)感染的辅助诊断价值.方法 通过FCM检测HIV-1感染者和正常人(阴性对照)CD4+T淋巴细胞内HIV-1 p24抗原,建立方法.收集HIV-1早期感染者样本,用FCM检测CD4+T淋巴细胞内p24抗原,ELISA检测血浆p24抗原以及nest-PCR检测核酸,比较3种方法的检测结果.结果 感染者p24+ CD4+T淋巴细胞比例明显高于相应阴性对照(P＜0.01)；感染者组p24+ CD4+T淋巴细胞比例95％百分位数为1.92％,确立阴阳界值为2.00％.CD4+T淋巴细胞计数≤350个/μL的感染者p24+ CD4+T淋巴细胞比例明显高于相应CD4+T淋巴细胞计数＞350个/μL的感染者(P＜0.05).FCM检测HIV-1早期感染者CD4+T淋巴细胞内p24抗原结果显示,该方法的检验效能优于ELISA检测血浆p24抗原,和核酸检测相当.结论 FCM检测CD4+T淋巴细胞内p24抗原能及时发现HIV-1早期感染,在HIV-1感染的辅助诊断方面有一定的应用价值.
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四代HIV酶免检测试剂的应用初步评价
目的 评价四代HIV酶免试剂的临床价值.方法 应用第三代和四代HIV酶免检测试剂平行测定3 500例样本,评价试剂性能指标.结果 对CDC确认的HIV阳性样本,2种试剂灵敏度均为100%;第三代和四代HIV试剂特异度分别为99.8%和99.7%,差异无统计学意义(Fisher's确切概率为0.607);2种试剂对丙肝抗体、表面抗原阳性及含自身抗体的样本交叉反应较少;对1例窗口期样本,出现四代试剂检出而三代漏检的情况.结论 四代试剂通过P24抗原和HIV抗体的联合检测,在特异度与三代试剂相当的情况下,灵敏度进一步增加,缩短了HIV检测窗口期.
