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不同冻融条件对同种异体面神经许旺细胞活性的影响
目的 探索一种可简单准确地调控离体面神经许旺细胞(Sohwann Cells,SC)活性的方法并观察含Ⅰ不同活性SC的面神经在同种异体移植中的效果.方法 (1)将动物分为新鲜神经组(F组)、冻融一次组(FTⅠ组)和冻融五次组(FT Ⅴ组),定量测定冻融法对面神经SC活性的影响,每组3条面神经用钙黄绿素-乙酰羟甲基酯(CaIcein-AM)染色,以共聚焦显微镜测定荧光强度,反映SC活性.(2)每组9只大鼠接受单侧同种异体面神经移植,术后2、4、8周各取3只大鼠的面神经移植物中段行髓鞘锇酸染色,观察轴突再生情况.结果 平均荧光强度:F组为140.93±17.55/μm2,FT Ⅰ组56.99±7.10/μm2,FTⅤ组28.46±4.11/μm2;术后第8周F组、FT Ⅰ组和FT Ⅴ组中段的轴突计数分别为225±41、357±76和303±51;术后第8周.FT Ⅰ组神经新生轴突分布较FT Ⅴ组和F组更为均匀.髓鞘厚度和轴突横截面积更大,髓鞘更为成熟.结论 快速冻融法可以有效和准确地调控面神经SC的活性,冻融一次可以将神经SC活性降低到新鲜面神经的40%,而反复冻融五次可降低到20%;调控SC的数目可能影响同种异体面神经移植的效果.
关键词: 面神经 许旺细胞 活性 钙黄绿素-乙酰羟甲基酯 同种异体神经移植 -
脱细胞同种异体神经移植的研究进展
目前周围神经缺损的病例越来越常见.周围神经损伤后佳治疗是自体神经移植,但其存在二次创伤、供区功能障碍、感觉缺失、瘢痕形成和神经瘤性疼痛等缺点.且供体有限,常无法满足较大神经缺损或较广泛神经损伤修复的需要.
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异体神经缝接神经缺损处置入bFGF复合非降解膜的形态学研究
目的应用含有促进神经再生的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和抑制维生素C的复合非降解膜包裹神经缺损局部,研究同种异体神经移植的神经再生效果.方法应用HE、Mllory染色、锇酸髓鞘染色,光电镜观察及显微图象分析.结果结果表明,bFGF复合物组神经纤维再生数量明显多于对照组,而神经纤维间结缔组织胶原纤维数量则较少,且A组左肢的再生神经纤维数量明显较B组左肢的多.结论①含bFGF和降低维生素C浓度的试剂的复人事非降解膜,有提高神经再生的作用.②经受体血浆浸泡及液氮冷存的异体神经缝接神经缺损处可提高神经再生数量及抑制结缔组织增生.
关键词: 同种异体神经移植 bFGF复合非降解膜 血浆冷冻 神经再生 -
周围神经的损伤与修复
目前临床诊断周围神经损伤的依据是Seddon和Sunderland分类,而治疗周围神经损伤主要是通过各种方法模拟损伤后再生的病理生理过程.如需消除张力,应采用端端吻合修复;自体神经移植仍然是临床治疗长距离损伤的重要手段;当不能采用自体神经移植时,可以应用同种异体神经移植或自体组织移植;可生物降解、人工合成的神经导管在实验中表现出广阔的应用前景.
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同种异体神经移植研究中降低免疫排斥反应的进展
周围神经缺损,无论在平时或战时,都十分常见.缺损后,临床上首选自体神经移植,但自体神经来源有限,并给供区造成一定的功能障碍.目前,解决神经缺损的研究主要集中在两个方面:一方面是研究采用肌桥、静脉管、硅胶管、组织工程等替代物,前三种的结果都不如人意,而后者尚处于实验阶段;另一方面是研究同种异体神经移植,它不但具有其它替代材料所没有的网管状神经内部结构,利于神经的再生,而且来源广泛,可以得到与缺损神经长短相似的移植物,但存在免疫排斥问题.
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同种异体神经移植研究的历史与现状
自体神经移植是目前修复周围神经缺损的基本手术方式,自体神经来自腓肠神经、正中神经皮支等,增加了手术创伤,造成该神经支配区的功能障碍,且供体有限,常无法满足较大神经缺损或较广泛神经损伤修复的需要.硅胶管等各种合成材料和自体骨骼肌、静脉等生物源性材料,可引导神经再生,但其结构与神经基底膜不同,轴突再生欠佳,修复神经缺损的距离有限,临床应用价值不大.同种异体神经移植因免疫排斥反应需使用免疫抑制剂,经济代价高昂且易造成身体伤害,有时也会发生排斥反应而致手术失败.为寻求自体神经移植的替代物,国内外学者进行了不懈的努力和大量的研究工作,已取得良好的进展.
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人参皂甙Rb1冷保存大鼠坐骨神经修复周围神经缺损的实验研究
[目的]探讨人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1,G-Rb1)冷保存大鼠坐骨神经对同种异体移植后受体神经再生的影响.[方法]3个月龄SPF级雄性Wistar大鼠和SD大鼠分别作为供体和受体.切取供体大鼠双侧坐骨神经15 mm长,随机在G-Rb1溶液(O、50、200 mg·L-1)中4℃保存4周(A4、B4、C4组)和6周(A6、B6、C6组),Western-blot检测供体神经Bcl-2表达,Calcein-AM染色LSCM观察冷保存6周供体神经生物活性.用冷保存6周的供体神经(A6、B6、C6组)修复对应的受体(A、B、C组)坐骨神经10 mm缺损,术后分期行大体观察、坐骨神经功能指数检测,第20周行电生理检测、再生神经组织学观察.[结果] Western-blot检测Bcl-2表达,冷保存4周时,B4组高于A4、C4组(P<0.05),冷保存6周时,B6、C6组高于A6组,且B6组高于C6组,差异均有统计学意义(P<0.05).Calcein-AM染色LSCM观察,B6、C6组荧光强度与A6组比较,B6组与C6组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).移植术后各期坐骨神经功能指数,20周电生理检测、再生有髓神经纤维数目、髓鞘厚度,B、C组与A组比较,B组与C组比较,差异有统计学意义(P<0.05);术后20周透射电镜显示,A组再生有髓纤维少、髓鞘薄,结缔组织增生明显,B、C组有髓纤维较多、髓鞘厚,无明显结缔组织增生.[结论]G-Rb1对冷保存大鼠坐骨神经具有保护作用,G-Rb1冷保存的坐骨神经能改善同种异体移植后神经再生效果.
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神经生长因子对超低温冷冻异体神经移植的效果评价
目的 研究神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对超低温冷冻处理后的同种异体神经移植后神经再生的作用.方法 选择Wistar大鼠作为动物模型,于建立动物模型三周前取5只大鼠作为供体,切取双侧坐骨神经,冷藏于-196℃液氮中.另取30只大鼠分为:A组,单纯冷冻异体神经移植组;B组,冷冻异体神经局部应用NGF缓释膜组;C组,自体神经移植组.术后12周进行大体观察、组织学、超微结构等测定.结果 术后12周内,三组大鼠均未发生急性移植排斥反应.组织学、超微结构测定发现B、C组神经生长情况明显优于A组.结论 超低温冷冻异体神经移植局部应用神经生长因子能更有效促进神经再生.
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优化法去细胞神经同种异体及异种移植的比较
目的 分别以优化法去细胞(OA)大鼠坐骨神经及兔臂丛分支移植修复大鼠坐骨神经缺损,观察免疫排斥情况、早期功能恢复及神经再生情况,以比较此优化法处理的同种异体及异种神经移植物修复周围神经缺损的能力. 方法 以新鲜新西兰大白兔臂丛分支、自体坐骨神经、OA处理过的新鲜取材的SD大鼠坐骨神经及新西兰大白兔臂丛分支,移植修复成年SD大鼠坐骨神经1.0 cm缺损,即新鲜异种神经移植组、自体神经移植组、OA异种神经移植和OA异体神经移植组,分别于术后1个月及3个月行功能评价(SFI)、电生理(CV)和组织学检查,观察免疫排斥、功能恢复及神经再生情况. 结果 术后1个月,OA异体和OA异种神经移植组的SFI、CV、轴突密度分别为:61.38±5.59、(32.23±0.91)m/s、(22.26±1.74)m/s和(0.782±0.081)(个/100 μm2),3个月分别为59.00±5.40、(31.80±0.99)m/s、(23.35±2.40)m/s和(0.778±0.046)(个/100μm2);术后1个月,异体和异种神经移植CD8+T细胞和巨噬细胞染色阳性百分比分别为0.17385±0.01805、0.09299±0.01565和0.30223±0.09449、0.19537±0.02010.同种异体神经移植组与异种神经移植组在免疫排斥、功能恢复及神经再生方面差异无统计学意义(P>0.05),且都明显优于未处理新鲜神经移植组(P<0.05).3个月时的神经再生及功能恢复情况优于1个月组(P<0.05). 结论 优化去细胞法处理的同种异体及异种神经移植物在修复周围神经缺损时,均可以达到免疫耐受,移植动物早期功能恢复和神经再生情况良好.
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异体周围神经的主要抗原成分及预处理
周围神经损伤的修复和再生机制十分复杂,受许多因素的影响.自体神经移植被认为是修复周围神经缺损的一种有效方法,但是自体神经移植存在来源受限、供区受损等缺陷.而同种异体神经移植则来源充足,各种类型的神经段均可得到,但主要障碍是免疫排斥反应,一旦排斥反应发生,雪旺细胞被清除,移植神经再生受阻,则疗效欠佳.
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电生理检测在同种异体神经移植处植入bFGF复合降解膜研究中的应用
周围神经损伤造成神经缺损是临床常见的外伤,自体神经移植已成为一种主要的解决方法,但是由于神经再生不全影响功能恢复,特别是移植的自体神经来源有限,供区局部会引起神经疼痛、麻木、瘢痕等并发症.
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同种异体神经移植的研究进展
长期以来,周围神经损伤的修复对于骨科医务工作者都是一个难题.临床上,用于治疗周围神经损伤尤其是长段损伤或缺损的方法中,自体神经移植术仍是可靠的治疗手段,但是供区神经功能损失及可供缝合神经长度及直径有限是不可克服的缺点.硅胶管等各种合成材料和自体骨骼肌、静脉等生物源性材料可引导神经再生,但其结构与神经基底膜不同,轴突再生欠佳,临床应用价值不大,同种异体神经移植可克服上述缺点,但存在排斥反应问题.随着基础科学研究的不断深入,国内外学者对同种异体神经移植进行了努力的研究,已取得一些进展,下面对基础科学研究取得的进展及临床应用前景作一综述.