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冻融法提取植物血凝素的研究
目的:采用不同缓冲液,确定冻融法提取植物血凝素的可行性.方法:在生理盐水、PBS、Tris、冰醋酸的不同缓冲液中,以吸收值、提取率和血凝效价为指标,比较传统浸提法与冻融法的差异.结果:表明采用PBS缓冲液的冻融法提取效果佳(P＜0.05),提取物的蛋白含量为312.33 mg/g,提取率为7.25%,血凝效价为7.结论:认为冻融法提取PHA法可行,并以PBS缓冲液好.
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薄膜分散联合冻融法制备小菜蛾抗菌肽脂质体研究
目的 制备小菜蛾抗菌肽脂质体,提高小菜蛾抗菌肽的稳定性.方法 采用薄膜分散联合冻融法制备小菜蛾抗菌肽脂质体,终冷冻干燥成粉末.建立小菜蛾抗菌肽的HPLC含量测定方法,以包封率为主要指标,综合考虑冻融过程对包封率和粒径的影响,采用正交实验进行处方优化.并考察形态、粒径、包封率及不同储存温度下的稳定性.结果 通过处方工艺优化制备的小菜蛾脂质体冻干粉呈球形或类球形,平均粒径为(223.1±31.2)nm,包封率为62%.本品在4 ℃下贮存3个月稳定,粒径及包封率无显著性变化.结论 采用薄膜分散联合冻融法制备的小菜蛾抗菌肽脂质体能显著提高其长期贮存稳定性.
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3种疱疹科病毒DNA提取方法的建立
采用HSV1、HSV2和HCMV 3种疱疹科病毒的病毒细胞培养液,用冻融法、煮沸法、蛋白酶K法、NP40(乙基苯基聚乙二醇)法、综合法及改良通用法提取病毒DNA.综合法是将3种病毒细胞培养混合物各2ml,2500r/min离心10min,用2ml冷PBS缓冲液溶解沉淀,1200r/min离心5min,用1ml胰酶(0.25%)溶解沉淀,50℃保温18h,加入等体积的酚/氯仿/异戊醇(25241),3000r/min离心10min,取水相加入1/2体积7.5mol/L的NH4(AC),2倍无水乙醇,-20℃放置30min,10000r/min离心10min,沉淀用70%乙醇洗涤,干燥,溶于50μl TE缓冲液.改良的通用法是在综合法基础上于提取前将病毒细胞液反复冻融3次,3000r/min离心40min纯化病毒;采用蛋白酶K(100μg/ml)38℃消化30min;4℃沉淀DNA时,18000r/ml离心20min;其余步骤同综合法.
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BALB/C小鼠4T1乳腺癌细胞混合肽诱导特异性免疫应答的研究
本研究采用细胞冻融法获取BALB/C小鼠4T1乳腺癌细胞抗原肽,在体外构建热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)抗原肽复合物(HSP70-peptids complex,HSP70-PC)并观察该复合物对BABL/C小鼠脾细胞的激活与增殖作用及增殖后脾细胞对4T1细胞的杀伤作用;并进行体内实验观察HSP70-PC对BALB/C小鼠的免疫保护作用.目的在于为乳腺癌的免疫治疗探索一条新途径.
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不同脱细胞方式下所得胞外基质存在的差异
背景：比起单一或复合的生物活性分子材料，脱细胞胞外基质更接近天然生物体内的细胞外环境，在组织工程中得到越来越多的重视和应用，但脱细胞方法会影响所得胞外基质的结构和成分，目前缺少脱细胞方法对胞外基质影响的研究。目的：分析不同脱细胞方法所得胞外基质的成分和作为修饰表面对细胞生物学效应的影响。方法：取生长良好的第3代SD乳鼠成骨细胞，分别采用冻融法、胰酶法、去污剂法、弱碱法脱去细胞留下基质，形成4组胞外基质，通过酶联免疫吸附实验分析胞外基质的生物成分。分别在4组胞外基质表面接种成骨细胞，以常规培养的细胞为对照，进行MTT比色实验、碱性磷酸酶活性检测，对比5组成骨细胞的生物活动。结果与结论：冻融法组胶原成分与胞体残留成分较多，去污剂法组和弱碱法组次之，胰酶法组少。冻融法组接种第3，5，7天的细胞A值高于对照组(P<0.05)，去污剂法组接种第3，5，7天的细胞A值低于对照组(P <0.05)。胰酶法组接种第5，7天的细胞碱性磷酸酶活性低于对照组(P <0.05)；弱碱法组接种第7天的细胞碱性磷酸酶活性低于对照组(P<0.05)；去污剂法组接种第3，5，7天的细胞碱性磷酸酶活性低于对照组(P <0.05)。表明4种方法中，冻融法脱细胞能够获得更多的胞外基质，所构建基质涂层更有利于细胞的增殖。
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粉尘螨脂质体的制备及稳定性考察
目的 研究冻融法对粉尘螨(Dermatophagoides,farinae,DF)脂质体包封率、形态及稳定性影响.方法 采用逆向蒸发法制备粉尘螨脂质体悬液,冰冻高速离心法分离脂质体,透射电镜观察脂质体形态.-20℃低温冰箱冰冻,室温融化,反复5次,测定冻融前后脂质体包封率及形态变化,并用离心加速实验测定脂质体稳定性变化.结果 经冻融法处理的脂质体包封率明显提高,可达(88.52±0.87)%;在一定范围内包封率随冻融次数的增加而略有增大;经离心加速实验进一步验证了冻融法可使脂质体稳定性提高.结论 冻融法为一有效的脂质体制备方法.
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冻融法制备5-氟尿嘧啶脂质体及其稳定性考察
采用反相蒸发法制备5-氟尿嘧啶脂质体制剂.结合冻融法,可使5-氟尿嘧啶的包封率达(45.31±0.208 5)%.离心加速实验和ζ电位的测定进一步验证了冻融法可使脂质体稳定性提高.
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丹参酮脂质体的制备及其稳定性
采用冻融法制备了丹参酮的脂质体.比较了冻融前后丹参酮脂质体的包封率、粒度分布、形态以及稳定性,并考察了冻融次数及冻融之后的搅拌和超声对脂质体的包封率和粒度分布的影响.结果表明,经冻融处理的丹参酮脂质体的包封率明显提高,稳定性也更好;一定范围内,脂质体的包封率和粒度随冻融次数的增加而略有增大;冻融后搅拌或超声均可使聚集的脂质体解聚,从不影响包封率的角度,搅拌比超声处理更好.
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根癌农杆菌EHA105和LBA4404冻融法转化条件的优化研究
对传统的根癌农杆菌冻融法转化条件进行优化,研究了根癌农杆菌EHA105和LBA4404的菌株生长状态、CaCl2浓度、质粒加入量、二甲基亚砜(DMSO)、聚乙二醇(PEG4000)对质粒pBI121-Ctube转化根癌农杆菌EHA105和LBA4404的影响.结果表明:EHA105比LBA4404更容易接受外源质粒,两株农杆菌在Ca2+浓度为0.06 mol/L时,感受态转化能力佳.OD600分别为0.5和0.4时,EHA105和LBA4404的转化效率较高.10 μg的pBI121-Ctube质粒会降低转化率.低浓度的DMSO和PEG4000均可以提高转化率,浓度过高会抑制农杆菌转化甚至产生毒害作用.在初步优化的感受态细胞中,添加DMSO和PEG4000(4％)的EHA105和LBA4404感受态细胞,转化率比没有DMSO和PEG4000制备的佳农杆菌感受态细胞转化效率增加了28.6和22.3倍(P＜0.01),结果表明该法比传统的优化效果更加有效.
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冻融法控制制药用转基因蓝藻在环境中释放
目的 用转基因生物制备重组药物中的1个关键问题就是防止其环境释放.为控制制备抗对虾白斑综合征病毒用的转vp28基因鱼腥藻7120蓝藻细胞在应用中的生长和繁殖能力,本研究探讨用冻融法在不破坏重组VP28蛋白活性的同时杀灭藻细胞.方法 通过把蓝藻细胞在2种低温环境(-20、-80℃)和室温中处理,选取适温度以多次冻融法破坏藻细胞.用液体和固体培养观察其后续生长,用光学和扫描电镜检测细胞的损伤.结果-20和-80℃与室温处理连用,都可使处理的藻细胞失去生长能力.为操作简便,选用冷冻温度为-20℃、反复冻融3次(24 h/次),使蓝藻细胞100％失去繁殖能力,藻细胞在冻融处理后丝状体断裂,细胞遭破坏,固体培养发现无藻细胞生长,蛋白印迹法检测VP28蛋白无丢失.结论 冻融法可控制转基因鱼腥藻在环境中的释放.该方法成本低廉、操作简单,且无次生污染,既保障该药物在应用中的安全性,也可为其他转基因蓝藻在环境中的安全释放提供借鉴.
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全蝎不同部位抗凝活性的比较研究
目的 采用不同提取方法比较全蝎不同部位的抗凝活性.方法 用凝血酶时间(TT)为指标,测定全蝎不同部位水提醇沉和冻融法提取液的抗凝血活性.结果 水提醇沉法全蝎凝血酶时间长于冻融法,两种提取方法中,各部位的凝血时间比较是蝎尾>蝎全体>蝎身.结论 全蝎抗凝活性成分提取方法中水提醇沉优于冻融法,抗凝活性成分主要集中于蝎尾.
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哈西奈德脂质体制备方法的选择及其含量与包封率的测定
目的 选择制备哈西奈德脂质体的方法并测定其含量与包封率.方法 采用注入法、冻融法、薄膜分散法制备哈西奈德脂质体;用超速离心法分离游离药物;高效液相色谱法测定含量与包封率.结果 冻融法、注入法、薄膜分散制备的脂质体哈西奈德含量分别为99.23%±0.13%,98.37%±0.19%,99.36%±0.16%;包封率分别为83.17%±2.21%,77.19%±1.37%,87.28%±1.49%.在选定的色谱条件下,哈西奈德与辅料能完全分离,在4～40 mg/L范围内,药物浓度与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9),平均回收率为101.02%,RSD为0.64%.结论 薄膜分散法制备的脂质体包封率较高;超速离心-高效液相色谱法操作简便、准确、重复性好,可用于测定哈西奈德脂质体的含量和包封率.
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PCR快速鉴定actinobacteria三种模板制备方法的比较
目的本研究旨在建立准确、简便、快速的放线细菌鉴定技术,为普通和极端环境放线细菌资源的调查和开发利用创造条件.方法从放线细菌固体培养基上挑取少量菌体,用微波炉法快速制备基因组DNA作为PCR模板,与液体培养法得到的菌体以超声波法或冻融法制备的模板进行了PCR扩增效果的比较研究.结果PCR检测结果表明微波炉法制备的模板可进行有效的体外扩增,目的条带特异,而超声波法或冻融法并不对所有菌株有效,并有非特异扩增产物产生.结论组合微波炉法快速制备放线细菌基因组DNA技术和23S rRNA特异插入序列PCR扩增技术建立了准确、简便、快速的actinobacteria鉴别体系.
关键词： Actinobacteria 微波炉法 超声波法 冻融法 基因组DNA提取 -
低浓度胰蛋白酶消化加反复冻融法制备猪脱细胞真皮基质
目的建立一种新的制作脱细胞猪真皮基质的方法.方法采用0.5g/L胰蛋白酶消化断层猪皮,去除表皮和真皮中部分细胞成分,然后反复冻融进一步去除真皮内残留的细胞成分.分别行大体观察、组织学观察及免疫组织化学等检测.结果制备的猪脱细胞真皮基质内细胞成分可被完全去除,表面保留完整的基底膜,胶原结构排列紧密.结论低浓度胰蛋白酶消化加反复冻融,是制备异种脱细胞真皮基质较为简便、有效的方法.
