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穿心莲内酯对小鼠睾丸组织形态及NO、iNOS的影响
目的:观察穿心莲内酯对小鼠睾丸组织形态及NO、iNOS的影响.方法:取体重25±3g昆明种雄性小鼠,随机分为5组:生理盐水组、穿心莲内酯低、中、高3个剂量组(66.7、200、600mg/kg)、雷公藤组(60mg/kg),连续灌胃给药60d.给药结束后,处死小鼠,取睾丸,常规制备组织切片,观察睾丸组织的形态学变化,并计数生精细胞层数和数量.制备10%的组织匀浆,分别用硝酸还原酶法、化学比色法测定睾丸组织中NO浓度及iNOS活力.结果:与生理盐水组相比,光镜下可见穿心莲内酯三剂量组及雷公藤组,小鼠睾丸曲细精管发生不同程度的管壁变薄,生精细胞数量减少,排列疏松,不规则,成熟的精子较少.睾丸组织中iNOS活力降低,NO的含量减少.结论:长期服用穿心莲内酯产生的抗雄性生育作用与抑制iNOS活力,减少NO的生成有关.
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外伤性视神经损伤后大鼠视网膜中细胞因子的变化和来源
目的 利用大鼠视神经夹持损伤模型,观察视网膜中小胶质细胞和星形胶质细胞在不同时间点的激活水平,炎性介质和神经营养因子的时空表达变化情况,探讨这2种胶质细胞在大鼠视神经夹持损伤后在视网膜中可能的免疫调控机制.方法 建立SD大鼠视神经夹持模型,分别在建模后1d、3d、5d和7d处死模型大鼠并取材.Western blot检测分析各时间点视网膜IL-1β和TNF-α及iNOS的表达变化情况;免疫荧光组织染色法标记检测各时间点视网膜小胶质细胞和星形胶质细胞的激活情况并检测相应组织中IL-1β、TNF-α、iNOS以及Nestin的表达及分布情况.结果 夹持组与对照组相比Western blot法检测发现IL-1β蛋白在损伤后3d表达量高,差异与对照组相比有统计学意义(P＜0.05),5d后表达下降,差异与对照组相比无统计学意义(P＞0.05).TNF-α在损伤后各时间点表达均升高(P＜0.05),损伤后3d表达量达到峰值,与对照组相比差异有显著统计学意义(P＜0.01).iNOS水平在损伤后1d显著上升(P＜0.05),且表达量高,在损伤后3d出现下降,差异与对照组相比无统计学意义(P＞0.05).免疫组织荧光化学染色法显示手术组视网膜中小胶质细胞及星形胶质细胞出现了活化.在小胶质细胞中和星形胶质细胞中检测到了IL-1β,iNOS的表达,但在所有时间点都未能观察到星形胶质细胞中TNF-α的表达.在损伤后7d,在星形细胞中观察到了Nestin表达.结论 视神经夹持损伤后,视网膜内活化的星形胶质细胞和小胶质细胞是IL-1β、iNOS的主要来源.星形胶质细胞在该模型中随着时间的推移可能展现出神经保护作用.
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肾缺血-再灌注后大鼠肾组织一氧化氮的代谢研究
目的:探讨肾I-R后大鼠肾组织NO的代谢.方法:建立大鼠肾I-R模型,用硝酸还原酶法测定NO含量,SP试剂盒免疫组织化学法检测肾组织cNOS、iNOS蛋白定位表达,Western blot检测肾组织cNOS、iNOS蛋白半定量表达.结果:(1)肾I-R后大鼠肾脏NO代谢异常,入肾血、出肾血NO2-/NO3-含量增多;同时肾组织NO2-/NO3-含量和尿液NO2-/NO3-排出率也有增高(P＜0.05);(2)肾I-R后大鼠肾组织cNOS表达增多,以I-R1 h明显;iNOS则在I-R5 h表达增多;(3)I-R1 h和I-R5 h大鼠肾小球内cNOS阳性信号均明显增强;而肾小管内cNOS阳性信号I-R1 h显著减弱;I-R1 h可见髓袢升枝和降枝粗段的肾小管有微弱的iNOS表达,而I-R5 h肾小管的iNOS阳性信号明显增强.结论:肾I-R导致了大鼠肾脏cNOS、iNOS蛋白表达改变,从而使NO代谢异常.
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脂多糖体外诱导RAW264.7细胞产生NF-κBp65、iNOS及TNF-α
目的 研究脂多糖诱导RAW264.7细胞产生NF-κBp65、TNF-α及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的剂量、时间关系,为抗炎药物的体外筛选提供实验依据.方法 调整RAW264.7细胞密度为1×109/L,种6孔板,实验设正常对照组、(1、2、5、10) μg/mL脂多糖组,免疫细胞化学方法检测NF-κBp65、iNOS及TNF-α的水平.结果 (1、2、5、10) μg/mL脂多糖可显著诱导产生NF-κBp65 (P ＜0.05),2～10 μg/mL时可显著诱导iNOS的生成(P＜0.01),5～ 10μg/mL时可显著诱导TNF-α的生成(P＜0.05).结论 5～ 10μg/mL脂多糖可同时诱导产生NF-κBp65、iNOS及TNF-α,模型性能稳定,可用于多细胞因子途径的抗炎药物筛选.
关键词： 脂多糖 RAW264.7细胞 NF-κBp65 iNOS TNF-α -
甘氨酸对肾缺血-再灌注损伤的保护作用及对iNOS表达的影响
目的 探讨甘氨酸对急性肾缺血-再灌注损伤的保护作用及作用机制.方法 将24只Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、对照组(B组)、甘氨酸治疗组(C组),通过夹闭大鼠双侧肾蒂30 min,再灌注30 min制成肾缺血-再灌注损伤动物模型,检测尿量、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr),肾组织光镜及电镜检查并使用免疫组化法检测iNOS表达.结果 B组比A组尿量增加,血BUN、Cr升高,肾小管上皮细胞变性坏死明显,iNOS表达明显增强(P＜0.05).C组比B组尿量明显增加,血BUN、Cr明显下降,肾小管上皮细胞变性坏死程度减轻,iNOS表达明显减少(P＜0.05).结论 甘氨酸对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤有明显的保护作用,其机制可能与抑制大鼠缺血-再灌注后肾脏iNOS蛋白表达有关.
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iNOS/COX-2与恶性肿瘤
诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶2(COX-2)均与肿瘤发生、生长、转移及预后有关.在许多恶性肿瘤组织中,两者的表达一致上调,呈正相关,二者的联合表达与肿瘤的生物学行为密切相关.本文综述了iNOS/COX-2与恶性肿瘤的关系,并提出以iNOS/COX-2 为靶点的恶性肿瘤治疗和研究的思路.
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iNOS在不同乳腺病理组织中的表达水平及其与肿瘤临床预后的相关性
目的:检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在正常乳腺组织、不典型增生、原位癌以及浸润性乳腺癌组织中的表达水平,探讨其与浸润性乳腺癌临床相关病理指标及临床预后相关性.方法:收集148例不同乳腺病理组织(28例不典型增生、40例导管内癌及80例浸润性乳腺癌)以及20例正常乳腺组织,使用免疫组化SP法检测各组中iNOS的表达水平.分析浸润性乳腺癌中iNOS表达水平与肿瘤大小、腋窝淋巴结受累情况、TNM分期等临床病理指标,以及与临床预后的相关性.结果:iNOS在乳腺正常组织中未见阳性表达;而在乳腺不典型增生组织、原位癌组织及浸润性乳腺癌组织中阳性率分别为25.0%、52.5%及78.8%,各组间差异有统计学意义(均P<0.05).在浸润性乳腺癌中,随着临床分期越晚及肿瘤直径越大,iNOS染色阳性率逐渐升高.在原位癌中iNOS染色阳性组5年无病生存率(61.9%)低于阴性组(84.2%),差异有统计学意义(P<0.05);而在浸润性乳腺癌中,iNOS染色阳性组5年无病生存率(63.5%)与阴性组(70.6%)无统计学差异(P>0.05).结论:iNOS在乳腺癌发生的早期阶段(不典型增生)即已出现表达升高,其表达水平与临床分期与肿瘤直径相关,并影响原位癌患者预后.因此,i N O S可作为乳腺癌早期诊断及预后评估的潜在指标.
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iNOS、TGFβ1、VEGF在胃癌中的表达及意义
目的研究iNOS、TGFβ1、VEGF在胃癌中的表达,探讨三者与胃癌发生发展之间的关系及意义.方法采用免疫组化法对45例胃癌组织和20例正常胃粘膜组织标本进行检测,观察iNOS、TGFβ1、VEGF的表达情况.结果 iNOS、TGFβ1及VEGF在胃癌组织中均是高表达状态(71.70%、60.00%、75.56%),其阳性表达率明显高于正常胃粘膜组织,差异有显著性(P<0.05).同时,iNOS、TGFβ1、VEGF的表达与胃癌的临床TNM分期、浸润程度和淋巴结转移有关(P<0.05),与组织学分型无关(P>0.05),且iNOS、TGFβ1与VEGF之间存在显著相关性(r1=0.618 P<0.05,r2=0.874 P<0.05).结论 iNOS、TGFβ1及VEGF共同参与肿瘤的形成,且与胃癌的侵袭、转移有一定关系.
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PTEN、iNOS、COX-2在胃癌中的表达及意义
目的检测抑癌基因PTEN编码蛋白、iNOS、COX-2在正常胃粘膜及胃癌组织中的表达情况,探讨PTEN、iNOS及COX-2与胃癌发生发展的关系及作用机理.方法采用免疫组织化学S-P法进行检测.结果10例正常胃粘膜均可见PTEN蛋白的强表达,而40例胃癌组织中28例PTEN蛋白表达明显下降或缺失,差异有显著性(P＜0.01),与胃癌的分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移显著相关(P＜0.05).iNOS在胃癌组织中的表达显著高于正常胃粘膜组(72.5%vs 10%,P＜0.01),与胃癌的浸润深度、淋巴结转移、TNM分期显著相关(P＜0.05).COX-2在胃癌组织中的阳性率为70%,显著高于正常胃粘膜组(P＜0.01),与胃癌的淋巴结转移、TNM分期显著相关(P＜0.05).在PTEN蛋白阴性的胃癌组中,iNOS阳性率为93.8%,显著高于PTEN阳性组(P＜0.05).iNOS与COX-2在胃癌组织中的表达呈显著正相关(P＜0.01).结论抑癌基因PTEN编码蛋白在胃癌及胃癌发展过程中表达逐渐下降或缺失,与iNOS之间可能存在相互作用,协同COX-2共同参与了胃癌的发展、转移及浸润.PTEN蛋白表达可作为判定胃癌生物学行为的临床参考指标.
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NO、iNOS在卵巢癌中的表达及iNOS与卵巢癌生物学行为、ID1表达的相关性
目的:探讨NO、iNOS在卵巢癌组织中的表达及iNOS与卵巢癌生物学行为的关系,并分析ID1、iNOS在卵巢癌中表达的相关性.方法:采用硝酸还原酶法检测正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤、卵巢癌组织中NO浓度;采用免疫组化SP法检测三种组织中iNOS蛋白表达,并对iNOS表达与卵巢癌临床病理参数进行相关性分析;采用SP免疫组化检测卵巢癌组织中ID1表达,并对ID1、iNOS两指标表达进行相关性分析.结果:卵巢癌组织中NO浓度明显高于正常卵巢组织,差异具有统计学意义.iNOS在卵巢癌组中表达高于良性卵巢肿瘤组及正常卵巢组,比较差异具有统计学意义(P＜0.05).iNOS表达与卵巢癌淋巴结转移、临床分期、病理分级明显相关.卵巢癌组织中iNOS与ID1表达之间存在明显相关性(P＜0.05).结论:iNOS和NO过度表达参与了卵巢癌的发生发展过程,并且iNOS与淋巴结转移、TNM分期和病理分级有关;卵巢癌中iNOS和ID1的表达具有正相关性.
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黄芪甲甙对大鼠LPS诱导原代培养多巴胺神经细胞的保护效应
目的:观察黄芪甲甙(AS-Ⅳ)对大鼠脂多糖(LPS)诱导多巴胺能细胞增殖的影响,检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达变化.方法:建立原代多巴胺细胞培养,加入LPS刺激,给予不同浓度AS-Ⅳ预处理.通过MTT方法检测多巴胺能细胞增殖情况,通过RT-PCR检测TNF-α、iNOSmRNA表达变化.结果:LPS刺激后多巴胺能细胞MTT值降低,经AS-Ⅳ预处理后MTT值升高.LPS刺激后TNF-α、iNOS mRNA表达上调；经AS-Ⅳ预处理后,TNF-α、iNOS mRNA表达明显下调(P＜0.05).结论:大鼠用AS-Ⅳ预处理可降低LPS对多巴胺能细胞毒性作用,提示AS-Ⅳ预处理可阻断LPS诱导多巴胺细胞变性和炎症变化,对中脑多巴胺能神经元具有保护性作用.
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新生鼠脑损伤后松果体细胞的一氧化氮合酶与细胞凋亡关系的初步研究
为了探讨新生鼠发生缺氧缺血性脑损伤时松果体细胞的诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达与松果体细胞凋亡及形态学改变的关系,用7日龄新生Wistar大鼠,结扎左侧颈总动脉,术后2 h吸入8%浓度氧2 h,建立新生儿缺氧缺血性脑病模型(HIBD).分别于建模后0 h、24 h、48 h处死动物,剥取松果体,观察松果体细胞的iNOS表达及细胞凋亡,电镜观察松果体形态学改变.结果表明:(1)新生鼠脑损伤后松果体的iNOS在0 h、24 h含量与对照组相比明显升高;(2)脑损伤后松果体凋亡细胞早期明显增多,尤以0 h、24 h为主;(3)电镜观察:脑损伤后松果体的形态学也以0 h、24 h改变为明显,出现线粒体明显肿胀、粗面内质网极度扩张、细胞变性.提示:(1)新生鼠缺氧缺血性脑损伤后0 h、24 h松果体细胞的iNOS表达增加,以后逐渐下降,48 h表达减少.(2)TUNEL法原位检测细胞凋亡与iNOS表达同步改变,iNOS表达对细胞凋亡有促进作用.(3)iNOS表达和细胞凋亡参与了新生鼠缺氧缺血性脑损伤后松果体细胞形态学改变.
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iNOS 和 CD34与复发性翼状胬肉的关联
目的：研究分析诱导型一氧化碳合成酶（ inducible nitric oxide synthase，iNOS）和血管内皮因子CD34与复发性翼状胬肉发病之间的联系。
方法：选取2012－03／2014－10本院收治的复发性翼状胬肉患者15例作为本次研究的实验组，另选取同期15例单纯性胬肉患者作为对照组。通过免疫组化Envision法对两组患者的手术标本中的iNOS与CD34检测，并计算微血管密度（ microvessel density，MVD），比较两组患者的iNOS与CD34阳性表达率和MVD值，分析iNOS和CD34对复发性翼状胬肉的影响作用。
结果：对照组中15例单纯性胬肉患者iNOS阳性表达率为7％（1例），实验组中15例复发性翼状胬肉患者iNOS阳性表达率为87％（13例）；对照组CD34阳性表达率为13％（2例），实验组CD34阳性表达率为80％（12例）。iNos与CD34在复发性翼状胬肉患者中较结膜正常人群中的阳性表达率明显增高，且均存在显著性差异（P＜0.01）。实验组MVD值为46．02±10．88，对照组MVD为23．48±5．68，实验组MVD值明显高于对照组且两组存在统计差异（P＜0．01）。
结论：iNOS与CD34在复发性翼状胬肉患者中阳性显著表达率高，说明iNOS与CD34与复发性翼状胬肉疾病的发生、发展存在一定联系。 -
短暂性MCAO大鼠注射天麻素具有神经保护作用
目的:探讨天麻素对缺血性脑损伤的神经保护作用.方法:通过线栓技术闭塞大脑中动脉(MCAO)2 h诱导建立暂时性局部脑缺血模型,SD大鼠腹腔内连续注射天麻素3 d.采用TUNEL染色测定缺血边缘区细胞凋亡;免疫组织化学染色观测S100β和iNOS蛋白表达.结果:MCAO后3 d,天麻素组大鼠脑梗死边缘区TUNAL+细胞数目明显减少(P＜0.05);S100β和iNOS+细胞数目下降(P＜0.05).结论:天麻素可以抑制脑缺血诱导的细胞凋亡,具有神经保护作用;S100β和iNOS蛋白表达的下调可能涉及到天麻素的抗细胞凋亡作用.
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“嗅三针”对AD小鼠海马iNOS和磷酸化tau蛋白表达的影响
目的 观察嗅三针对阿尔茨海默病(AD)小鼠海马iNOS和磷酸化tau蛋白表达的影响,探讨其治疗AD的作用机制.方法 将40只AD小鼠随机分为模型组、嗅三针组、嗅神经切断嗅三针组和盐酸多奈哌齐组,10只同窝阴性小鼠组成对照组.对照组和模型组于每日同一时段进行同种程度抓取,不干预,嗅三针组采用电针刺激,选取“印堂”和双侧“迎香”三穴为干预穴位,留针20min,盐酸多奈哌齐组采用盐酸多奈哌齐灌胃,每周干预5次,间歇2天,共干预4周.干预结束后,运用Western blot法检测小鼠海马p-tau Thr181蛋白表达,运用免疫组化法检测小鼠海马iNOS蛋白表达.结果 模型组与对照组比较,小鼠海马p-tau Thr181和iNOS蛋白表达显著增加(P＜0.01);与模型组比较,嗅三钟电刺激和盐酸多奈哌齐灌胃能够显著降低小鼠海马p-tau Thr181和iNOS蛋白表达(P＜0.05),嗅神经切断嗅三钟组对其无明显影响(P＞0.05);嗅三钟组与盐酸多奈哌齐组比较,无显著性差异(P＞0.05).结论 嗅三钟可能基于嗅觉通路的完整性,发挥降低AD小鼠海马炎症因子iNOS和磷酸化tau蛋白的表达的作用.
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白藜芦醇对大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织COX-2和iNOS表达的影响
目的 探讨白藜芦醇(resveratrol, RES)改善重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)大鼠胰腺微循环的作用机制.方法 SD大鼠随机分为3组:假手术(sham operation, SO)组、重症急性胰腺炎(SAP)模型组、白藜芦醇治疗(RES)组.以40g/L牛黄胆酸钠0.1mL/100g胆胰管逆行注射建立SAP模型.RES组术后立即经阴茎背静脉注射RES(20mg/kg).分别于术后3、6、12h取材,进行胰腺组织学评分;检测胰腺组织环氧化酶2(cyclcoxygenase-2, COX-2)、诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)的表达和一氧化氮(nitrogen monoxide, NO)含量.结果 RES组胰腺损伤较SAP组明显减轻(P＜0.05).SAP组COX-2、iNOS的表达和NO含量在各时间点均显著高于假手术组(P＜0.05);RES组COX-2的表达在6、12h较SAP组明显下降,iNOS和NO在各时间点均较SAP组明显下降,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 白藜芦醇可能通过下调COX-2和iNOS的表达改善胰腺微循环.
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白术对 S180致肝腹水小鼠外周血中 NO 和iNOS 的影响
目的：考察白术水煎剂对 S180致肝腹水的小鼠外周血中 NO 和 iNOS 的影响，探讨其抗腹水的作用机制。方法：将 SPF 级雄性昆明种小鼠，依体质量随机分为空白组、模型组、腹水用药组（白术水提取物高 G、中Z、低剂量 D3组）、阳性药物组（阳性药：环磷酰胺，CTX 组）共6组，分别按照实验方案给予相应受试药物，S180造模，连续给药7天，分取各组动物静脉血，测定相应指标含量或活性。结果：白术用药组与 CTX 组对 S180致肝腹水的小鼠均有抑制肿瘤的作用；与空白组相比，模型组小鼠外周血中 NO 和 iNOS 的含量明显上升；与模型组相比， CTX 组合白术 G、Z、D 组的 NO 和 iNOS 的含量都有所下降，但各组的 NO 和 INOS 降低率不同。结论：白术水煎剂主要通过调节外周血中 NO 和 iNOS的含量来起到抗 S180致肝腹水的作用。
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缺氧环境下HIF-1α对肠黏膜屏障的影响
低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)是体内应对缺氧环境的一个关键转录激活因子,1992年被Semenza和他的同事在低氧诱导的细胞核提取物中发现,广泛存在于现存的多细胞动物中[1],可随着细胞内氧浓度的变化对下游100多个靶基因的表达进行调控,发挥其生物学效应.肠黏膜屏障作为机体应对各种缺氧应激反应的第一道屏障,其与HIF-1α关系的研究目前已引起医学相关领域的广泛关注.本研究就近年来HIF-1α对机体缺氧条件下肠黏膜屏障的作用及其机制做一简要综述.
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针刺"三阴穴"对慢性非细菌性前列腺炎大鼠局部免疫功能的影响
目的 探讨针刺"三阴穴"改善慢性非细菌性前列腺炎炎症反应的局部免疫机制.方法 将48只雄性大鼠随机分成空白组、模型组、药物组和针刺组,每组12只,采用免疫佐剂法造模后,针刺组、药物组分别给予针刺"三阴穴"及舍尼通灌胃治疗15 d,观察各组大鼠的前列腺重量、系数、病理改变及组织匀浆中IgG、IL-8、iNOS含量的变化.结果 与模型组相比,针刺组的前列腺重量和系数明显降低(P＜0.05或P＜0.01),慢性炎症的病理表现明显好转,针刺组IgG、IL-8、iNOS含量较模型组都有所降低,尤以IL-8显著(P＜0.05).结论 针刺"三阴穴"可以改善局部血液循环、调节局部免疫功能、促进炎症恢复.
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一氧化氮在TRAIL诱导凋亡中对p53和VCP蛋白表达的影响
目的 研究NO在TRAIL诱导凋亡过程中对p53和VCP蛋白表达的影响.方法 利用Western blot蛋白印迹法检测各蛋白表达水平;用MTT方法检测细胞凋亡和caspase-3激酶激活状态.结果 内源性NO表达产生的一氧化氮可提高TRAIL诱导的细胞凋亡率,同时增加caspase-3激酶激活活性.内源性NO对p53蛋白表达水平无影响,但是对VCP蛋白表达的上调有一定促进作用.结论 内源性NO对管家基因p53蛋白无明显影响,但对与内质网压力相关的VCP蛋白有调节作用.
