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抗肿瘤药物高通量体内筛选模型--中空纤维测定法
抗肿瘤药物药效学筛选通常经过体外细胞实验、动物体内实验和人体临床研究3个步骤.其中,动物实验的目的在于验证供试药物在动物体内的有效性,是药物筛选的关键步骤.目前一般通过建立一种或多种肿瘤动物模型来完成.但此实验对实验动物和待测药品的需求及时间和人力的投入都较大,难以作为大规模的筛选方法而常规开展.一种新型的抗肿瘤药物体内药效筛选模型--中空纤维法的出现,使得较大规模的动物体内药效学筛选成为现实.
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血管紧张素Ⅱ的损害效应及其AT1受体拮抗剂肾脏保护功能
肾素-血管紧张素系统(RAS)是体内重要的一种神经激素调节系统,对于血压和水盐代谢平衡的调节起重要的作用.然而RAS的过度激活会对靶器官造成损伤.许多临床和动物实验研究都证实血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在肾小球肾炎、糖尿病肾病(DN)、肾小球硬化等多种肾脏疾病的发生和发展过程中起重要作用,体外细胞实验也发现AngⅡ有促进细胞增殖、肥大、分泌多种细胞因子和合成细胞外基质(ECM)成分的作用.血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(AT1RA)能有效阻断这些效应,发挥对作用靶器官的保护功能.
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徐长卿水提物抗肝癌作用初探
目的:通过体外实验探讨徐长卿水提物抗肝癌的作用.方法:以徐长卿水提物作用于体外培养的Bel-7407细胞株,观察其对Bel-7407细胞生长曲线的影响及评价其抗肝癌作用.结果:徐长卿水提物浓度为80 g/L和40 g/L时,能使Bel-7407细胞的生长受到抑制,20 g/L和10 g/L时对细胞增殖没有明显的抑制作用.结论:徐长卿水提物浓度为80 g/L和40 g/L时,在体外细胞培养中对Bel-7407细胞增殖有较好的抑制作用.
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转铁蛋白修饰的阿霉素隐形脂质体的制备及体外细胞试验
目的:用转铁蛋白(Tf)修饰盐酸阿霉素隐形脂质体(SL),以增加药物在肿瘤部位的积蓄,从而增加药物向肿瘤细胞内的转运.方法:采用薄膜超声法制备空白脂质体,硫酸铵梯度法装载盐酸阿霉素(DOX);通过膜材DSPE-PEG2000-COOH上的活性羧基末端与Tf上的氨基连接制备Tf修饰的隐形脂质体(Tf-SL);采用凝胶柱-UV法测定脂质体中DOX的包封率.双辛丁酸试剂盒测定蛋白结合效率;通过流式细胞试验和激光共聚焦显微试验考察肝癌细胞HepG2对SL包封的DOX(DOX-SL)及Tf-SL包封的DOX(Tf-DOX-SL)的结合或摄取情况,并观察两种脂质体对HepG2细胞的体外杀伤作用.结果:Tf-DOX-SL的平均粒径为(62±17)nm,药物平均包封率为96.4%,蛋白结合效率为100.28 μg Tf/μmol磷脂.与DOX-SL相比,Tf-DOX-SL与肝癌细胞HepG2的结合及摄取均增加.48 h细胞毒试验表明Tf-DOX-SL对HepG2细胞的杀伤作用(IC50=20.4 μmol/L)明显优于DOX-SL(IC50=166.2 μmol/L)(P<0.01).结论:Tf修饰的隐形脂质体可作为肿瘤靶向的载体通过受体介导的方式促进DOX向肿瘤细胞内的传递.
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不同浓度骨碎补总黄酮复合可注射骨修复材料对MC3T3-E1成骨细胞作用的实验研究
目的 本实验旨在观察中药骨碎补提取物骨碎补总黄酮(AFDR)复合海藻酸基可注射骨修复材料对成骨细胞MC3T3-E1体外培养的影响.方法 将成骨细胞株MC3T3-E1随机分为空白对照组、单纯使用海藻酸基可注射骨修复材料组、AFDR0.04mg/L、0.16mg/L、0.64mg/L、1.28mg/L、5.12mg/L7组,体外复合海藻酸基可注射骨修复材料,以24h和48h为观察时间点,倒置显微镜观察MC3T3-E1细胞形态,台盼蓝拒染法检测MC3T3-E1存活率,MTT法观察细胞增殖效应,碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素定量检测分别观察不同浓度骨碎补总黄酮促进MC3T3-E1分化作用,采用Von kossa钙化染色法观察其促MC3T3-E1细胞钙化作用.结果 ①倒置显微镜下观察复合海藻酸基可注射骨修复材料的MC3T3-E1细胞形态,细胞形态呈三角形、多边形、长梭形等,呈集落样生长,无接触抑制,有伪足伸出,胞液透亮,核圆形.AFDR各组不同程度促进成骨细胞的增殖、分化:7组能不同程度的促进成骨细胞的增殖、分化,与空白对照组比较,以0.16mg/L和0.64mg/L剂量组的成骨细胞增殖数量多,1.28mg/L,5.12mg/L的AFDR对细胞增殖作用不明显;②MC3T3-E1平均存活率≥90%;③骨碎补总黄酮(AFDR) 0.16 mg/L和0.64mg/L剂量组在培养24小时和48小时,其OD值与空白对照组及组间均有显著性差异,可促进MC3T3-E1细胞增殖(P< 0.05和P<0.01);④AFDR 0.16 mg/L和0.64mg/L剂量组能使MC3T3-E1的ALP活性升高(P<0.05);⑤AFDR 0.64mg/L剂量组能促进MC3T3-E1骨钙素合成(P<0.05);⑥AFDR 0.16 mg/L和0.64mg/L剂量组均可促进细胞钙化(P<0.05).结论 AFDR可显著促进在海藻酸基可注射骨修复材料上MC3T3-E1的增殖、分化和钙化,其作用具有时间依赖和剂量依赖关系.
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LY294002靶向抑制P13K/Akt信号通路干预胃癌细胞生长的研究
我们通过体外细胞实验,探讨LY294002特异性靶向抑制胃癌细胞PI3K活性,抑制增殖、诱导凋亡的作用及可能机制.
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毛壳素诱导SIRT1表达及其在低氧性肺动脉高压形成中的作用及机制研究
目的:探索低氧性肺动脉高压( HPH)的发生机制,明确毛壳素( Chaetocin)在HPH发生发展中的作用及机制。方法:将小鼠分为常氧组、低氧组、低氧sham组和低氧毛壳素组,运用低压氧舱模拟5000 m海拔低氧28 d复制小鼠HPH模型。导管法检测小鼠右心室压力,并分离计算右心室肥厚指数,肺组织切片染色观察肺血管结构。体外培养平滑肌细胞,给予毛壳素及低氧(1%O2)处理,运用报告基因、PCR、Western blot、流式细胞等方法检测去乙酰化酶SIRT1及凋亡相关指标。结果:毛壳素可改善低氧诱导的小鼠右心室肥厚及肺血管重构,并显著降低小鼠右心室压力,同时逆转低氧诱导的肺组织中SIRT1以及caspase-3、8的表达下调。体外细胞实验也发现毛壳素可显著激活平滑肌细胞中SIRT1的转录和表达,上调caspase-3、8的表达,并诱导平滑肌细胞凋亡。结论:毛壳素可显著改善低氧诱导的小鼠肺血管重构,防止右心室肥厚,并降低右心室压力。其机制与上调SIRT1及凋亡相关分子的表达,诱导平滑肌细胞凋亡有关。
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固醇调节元件结合蛋白1c参与调节肝细胞脂性自噬
目的:研究固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)是否参与调节脂性自噬。方法:高脂饲喂SD大鼠22周建立大鼠NASH模型,HE染色观察脂变程度;Western blot观察自噬及SREBP-1c蛋白水平。同时利用油酸( oleic acid, OA)刺激H4ⅡE细胞,建立细胞脂肪变模型;Nile Red 染色观察细胞脂变程度;Western blot检测细胞自噬及SREBP-1c的蛋白水平变化;透射电镜观察自噬形态学改变;通过下调及过表达SREBP-1c,观察SREBP-1c对自噬的影响。结果:与正常对照组比较,高脂模型组大鼠肝组织弥漫性脂肪变,自噬水平升高(P<0.05),SREBP-1c蛋白水平升高(P<0.01)。体外细胞实验结果表明,OA可引起细胞自噬水平升高(P<0.05),细胞内出现大量双层膜结构的自噬小体;SREBP-1c蛋白表达水平下降(P<0.05);抑制SREBP-1c可提高细胞的自噬水平(P<0.01);反之,过表达SREBP-1c可使自噬水平下降(P<0.05)。结论:固醇调节元件结合蛋白1c可抑制肝细胞脂性自噬。
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TIR/BB环拟似物AS-1对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝脏的保护作用及其调控机制
目的:观察AS-1是否可通过调控肝组织慢性炎症和IR改善NASH,并阐明其调控机制。方法:在体实验,db/db小鼠MCD饮食4周复制NASH模型;体外实验,给予枯否细胞FFA与LPS共刺激,原代肝细胞IL-1β刺激。结果:与MCS对照饮食组相比,AS-1可明显降低MCD饮食组小鼠血浆中ALT水平,减少肝组织炎症细胞的浸润,抑制IRS1的丝氨酸磷酸化以及糖异生基因的mRNA水平增加。 AS-1可降低NADPH氧化酶mRNA水平和MDA含量。体外细胞实验发现,AS-1不仅可抑制FFA与LPS共刺激诱导枯否细胞pro-caspase-1裂解、caspase-1酶活化及IL-1β分泌。而且能够改善IL-1β诱导的肝细胞IR,抑制IL-1R与MyD88的结合及ERK/JNK/p38的磷酸化。结论:AS-1能够通过抑制肝组织炎症和改善IR,从而对NASH肝脏发挥保护作用,其机制与AS-1抑制IL-1R对MyD88的招募并影响MAPKs信号通路的激活,调控NADPH 氧化酶,抑制NALP3炎性小体活化以及IL-1β的分泌和功能的发挥有关。
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砷中毒对体外实验细胞损伤的分子生物学机制研究进展
砷是确认的人类致癌物,但由于无机砷的致癌动物模型较难复制,使体外细胞实验成为砷致癌机制研究的必要手段.随着分子生物学技术的快速发展,体外细胞实验在揭示砷致细胞损伤的分子生物学作用、增强人们对砷致癌机制的认识上提供了有价值、可信的成果,对砷致癌机制研究的深入开展有重要的推动作用.然而,由于体外细胞实验自身的特点,以及砷在生物体内的甲基化代谢模式,使体外细胞实验在砷致癌机制的研究上也存在一定的局限性.