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基于MTT法的波棱瓜子抗肝纤维化用量初步研究
目的 制定波棱瓜子质量控制标准含量上下限,以此确定波棱瓜子用于肝纤维化治疗的合理用量范围.方法 本文采用中压制备色谱收集不含波棱甲素(herpetrione,PEDX)的阴性样品,加入不同剂量的PEDX,制备不同浓度梯度的PEDX系列样品溶液,建立PEDX系列样品HPLC指纹图谱,四甲基偶氮唑盐(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)比色法观察PEDX系列样品溶液对人肝星状细胞系LX-2细胞增殖的影响,并比较PEDX系列样品溶液与波棱瓜子提取物溶液的抑制率差异.结果 (1)指纹图谱结果显示,不同浓度梯度的PEDX系列样品相似度良好;(2)PEDX系列样品能抑制LX-2细胞增殖,加入样品的剂量M与细胞抑制率I值呈现一定的"量-效"关系,确定了波棱瓜子中药效成分PEDX的小有效用量为0.68 mg,大有效用量为8.2 mg.结论 波棱瓜子用于肝纤维化治疗的合理用量范围为3.27~39.42 mg.
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肝素结合改良医用聚氯乙烯材料的细胞毒性评价
目的评价肝素结合改良聚氯乙烯材料的细胞毒性及临床应用安全性.方法对肝素结合改良聚氯乙烯、改良聚氯乙烯等材料进行体外细胞培养,通过四甲基偶氮唑盐比色(MTT)实验观察细胞的活性和相对增殖率.结果改良聚氯乙烯及肝素结合的改良聚氯乙烯在吸光度及细胞的相对增殖率方面,结果优于传统聚氯乙烯材料;MTT实验表明肝素结合方法未改变材料的相对增殖率.结论改良聚氯乙烯及肝素结合的改良聚氯乙烯较传统材料相比,具有更优的细胞相容性,毒性轻微,可安全应用于临床.
关键词： 聚乙烯亚胺 聚氯乙烯 细胞毒性 四甲基偶氮唑盐比色法 -
三七总皂苷对体外培养的大鼠海马神经干细胞增殖分化的作用
目的 探讨不同剂量三七总皂苷( PNS)对体外培养的新生大鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响.方法 无血清原代培养新生SD大鼠海马NSCs,利用巢蛋白(Nestin), 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU) 和神经元、星形胶质细胞的特异性标记物β-Ⅲ型微管蛋白(Tuj-1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 对培养的NSCs 进行鉴定.将培养的细胞分为对照组、PBS组和PNS组,PNS组包括0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 g/L组,观察各组细胞克隆形成率、细胞增殖曲线和细胞分化比例.将培养的细胞分为对照组和0.4 g/L PNS组,利用流式细胞仪检测PNS对海马神经干细胞分化的影响.结果 海马神经干细胞呈神经球聚集生长,BrdU 染色阳性.加入血清后神经球周围有细胞呈放射状向四周生长,并带有突起.染色呈Tuj-1和GFAP阳性.与对照组相比,中低剂量组(0.1、0.2、0.4 g/L)对大鼠海马NSCs增殖能力无显著影响,而高剂量的三七总皂苷(0.8 g/L及1.0 g/L)干预组则明显抑制了NSCs的增殖,差异有统计学意义(P < 0. 05).在分化条件下,三七总皂苷0.4 g/L干预组显著提高NSCs向神经元分化的比例,差异有统计学意义( P < 0.05).结论三七总皂苷能够调节体外培养的大鼠海马 NSCs的增殖和分化水平,在合适的剂量下明显提高了神经元的分化比例.
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实时电阻抗传感技术检测NCI－H460细胞体外药物作用研究
目的：建立一种利用细胞电阻抗传感技术（ ECIS）进行体外药物筛选与评价的方法。方法利用MTT法测定NCI－H460细胞对紫杉醇注射液、多西他赛注射液、长春瑞滨注射液、注射用培美曲塞二钠及顺铂注射液的敏感性，再分别采用ECIS和MTT法测定紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨和培美曲塞二钠4种抗肿瘤药对NCI－H460细胞生长的影响。借助配对t检验、组内相关系数以及Bland－Altman法等对两种方法所测得抑制率进行一致性综合评价，结合电子显微镜下细胞的形态学观察，评估所建立的方法。结果通过MTT法测得NCI－H460细胞对紫杉醇及多西他赛注射液敏感，对长春瑞滨注射液及注射用培美曲塞二钠呈中度敏感，顺铂对NCI－H460细胞株的抑制率无明显变化。紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨、培美曲塞二钠4种不同药物对NCI－H460细胞作用的动态过程可通过ECIS动态监测法进行定性定量表征，同时还可反映出不同药物作用的特征性差异。另外，通过分析抑制率数据结果，显示出两种方法一致性较好，结合电子显微镜观察不同时期NCI－H460细胞形态更进一步说明此法的可行性。结论所建立的基于细胞电阻抗分析方法可用于体外药物筛选与评价，可有效地表征药物体外抗肿瘤活性，在肿瘤耐药性及个体化给药研究方面具有广阔的临床应用前景。
关键词： 非小细胞肺癌 细胞电阻抗传感技术 四甲基偶氮唑盐比色法 -
吗啡对体外培养人体子宫平滑肌细胞的影响
目的:观察吗啡对体外培养正常人体子宫平滑肌细胞增殖的影响.方法:制备不同浓度的吗啡及其拮抗剂纳络酮,作用于培养的子宫平滑肌细胞上,通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测吗啡对其的影响.结果:不同浓度的吗啡组与对照组测定的490nm吸光值(OD490值)相比,P<0.05;1×10-7%、1×10-6%、1×105%和1×10<-4>%吗啡组的细胞增殖速度依次降低;而吗啡(1×10-5%)+纳络酮(1×10-5%)组与对照组OD490值相比差异不明显.结论:外源性阿片类药物吗啡可直接抑制人体子宫平滑肌细胞的增殖.
关键词： 四甲基偶氮唑盐比色法 吗啡 子宫平滑肌细胞 抑制 增殖 -
中药注射液体外肾细胞毒性评价的方法学探讨
目的：研究柴胡注射液和丹参注射液在犬肾近端小管上皮细胞(MDCK细胞)和人胚肾细胞(HEK-293细胞)模型的毒性作用，并探讨中药注射液体外肾细胞毒性检测的实验方法。方法选用马兜铃酸A作为阳性对照，将不同厂家和批次的丹参注射液、柴胡注射液的原液及稀释液，与MDCK细胞或HEK-293细胞共同孵育，通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)量化细胞毒性，计算相对增殖率，进行中药注射液体外肾细胞毒性评价。结果在MDCK细胞模型中，两批丹参注射4个液稀释浓度下毒性分级显示为0级，一批稀释9、27、81倍后显示为0级，柴胡注射液稀释27、81倍后显示为0级；在HEK-293细胞模型中，一批丹参注射液4个稀释浓度下毒性分级显示为1级，一批稀释9、27、81倍后显示为1级，一批稀释27、81倍后显示为1级；柴胡注射液稀释27、81倍后显示为2级。结论利用肾脏细胞来源的细胞，可尝试建立中药注射液体外肾细胞毒性检测的实验方法。
关键词： 中药注射液 肾 细胞毒性 四甲基偶氮唑盐比色法 -
消化性溃疡穿孔的诊断和治疗的进展
消化性溃疡(Peptic ulcer,PU)是临床常见病和多发病,全球有1/10的人口在一生中某一时间患过 PU.有研究表明,40～60岁之间人群PU检出率高,男性患者高于女性患者,吸烟者明显高于非吸烟者, O型血患者明显高于其他血型患者.这些因素之间是否存在一定的关系,比如男女性别差异是否与吸烟有关,还有待于进一步研究.Borody[1]随访根除H pylori的DU患者3年,无论患者吸烟与否,均未发现DU复发.而在不存在 H pylori感染的情况下吸烟似乎并不足以成为一个独立致PU的危险因素.但 Konturek[2]的研究显示H pylori感染、年龄、吸烟均在PU的发病中起重要作用.O型血患者 PU发病率高可能与其容易感染H pylori有关.
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四甲基偶氮唑盐比色法细胞株细胞数量的选择
四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法由于具有快速简便、无同位素污染等优点而被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性试验[1].但不同细胞其生物学性状不同,所用细胞数量也应不同.我们以PC12和CHO细胞株为模型,于2003年8-9月对MTT比色法的条件及影响因素进行了探讨,寻求佳条件.
关键词： 四甲基偶氮唑盐比色法 细胞密度 吸光度 -
无血清培养基对体外激活的A-NK细胞的支持作用
目的多方面比较无血清培养基AIMV与完全培养基对体外细胞因子激活的NK细胞的支持作用.方法分别用AIMV及完全培养基培养粘附NK细胞(A-NK)和非粘附NK细胞(NA-NK),比较细胞的增殖能力、杀伤肿瘤细胞的能力、表达粘附分子CD11c的能力.结果与完全培养基培养细胞相比,AIMV培养细胞增殖能力、杀伤肿瘤细胞的能力、表达CD11c的能力与之相当;在同一培养条件下A-NK细胞的增殖能力、杀伤活性高于NA-NK细胞.结论无血清培养基可替代完全培养基用于A-NK细胞的培养;A-NK细胞用于治疗肿瘤的过继免疫疗法要优于NA-NK细胞.
关键词： 粘附NK细胞 无血清培养基 细胞培养 四甲基偶氮唑盐比色法 -
过敏原对支气管哮喘患者外周血淋巴细胞增殖功能的影响
目的 探讨支气管哮喘患者外周血淋巴细胞接触特异性过敏原后的增殖情况.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测了12例对粉尘螨过敏的支气管哮喘患者淋巴细胞经自制粉尘螨抗原刺激后的增殖情况.结果 粉尘螨浓度在1～10 μg/mL范围内,淋巴细胞刺激指数(SI)随粉尘螨浓度的增高而增高,当浓度＞10 μg/mL时淋巴细胞SI下降.在粉尘螨浓度1～10 μg/mL范围内,培养48 h时SI达峰值.结论 在不同培养时间、不同粉尘螨浓度时,淋巴细胞的增殖效力不同.以粉尘螨刺激培养48 h、浓度为10μg/mL时,哮喘患者淋巴细胞SI高.
关键词： 过敏原 细胞增殖 支气管哮喘 四甲基偶氮唑盐比色法 -
蜂毒素体外抑瘤作用的实验研究
目的:研究蜂毒素对建系肿瘤细胞体外生长的抑制作用.方法:通过凝胶色谱法从蜜蜂毒中纯化得高纯度蜂毒素,分别选取SMMC-7721、BEL-7402和Hep-3B三种肿瘤细胞系,以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察蜂毒素对3种肿瘤细胞系的生长抑制作用,以丝裂霉素、长春新碱、华蟾素为对照;并考察了蜂毒素对SMMC-77 21细胞系的生长抑制作用的时效关系.结果:蜂毒素的抑瘤作用与剂量呈正相关,抑制率优于对照组药物,蜂毒素对SMMC-7721细胞系各时间点的抑瘤率无显著性差异.结论:蜂毒素的体外抑瘤作用明显,而且作用发生迅速.
关键词： 蜂毒素 肿瘤 药物疗法 四甲基偶氮唑盐比色法 -
阻断血管内皮生长因子与表皮生长因子受体协同信号影响HepG2肝癌细胞生长的实验研究
目的 探讨阻断血管内皮生长因子(VEGF)与表皮生长因子受体(EGFR)协同信号对HepG2肝癌细胞生长的影响.方法 体外培养HepG2肝癌细胞株,分别将含不同浓度(10-2、10-3、10-4、10-5μg/μL)抗VEGF抗体与抗EGFR抗体的培养液与HepG2肝癌细胞共同培养12、24、48 h,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)比色法计算细胞生长抑制率.以抗体的不同浓度对HepG2肝癌细胞抑制率作图,得到剂量反应曲线.结果 抗VEGF抗体和抗EGFR抗体对HepG2肝癌细胞生长的抑制均呈浓度依赖性,并且有一定的量效关系.结论 阻断VEGF与EGFR协同信号可抑制HepG2抗体肝癌细胞的增殖,具有剂量依赖性,可诱导细胞凋亡.
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HSS体外生物学活性测定的MTT比色法优化及改进
筛选测定HSS体外生物学活性的MTT比色法的佳实验条件.分析比较不同条件下MTT显色反应的特点,确定适用于人肝癌细胞株SMMC7721的佳实验条件,并采用优化条件检测不同剂量下HSS的体外生物学活性.结果表明SMMC7721细胞数量与MTT比色法的吸光度成正相关,线性良好.正交实验优化条件为:5×104cells/ml细胞密度,6h后加入HSS,适浓度为100μg/ml,作用36h后加入MTT溶液.MTT用量50μg,孵育时间6h,DMSO溶解反应产物Formazan,于570nm处测定吸光值.在优化条件下测定HSS体外生物学活性,灵敏度明显高于已发表的方法.一定剂量范围内,活性随剂量增加而增大,超过一定剂量后活性反而下降.应用优化的MTT比色法,以SMMC7221细胞株,检测HSS体外生物学活性是一种灵敏而稳定的方法.
关键词： 肝刺激物质 四甲基偶氮唑盐比色法 生物学活性 -
牛和羊胎盘肽的制备及其生物活性的研究
目的 探索一种新型的免疫调节剂,充分利用动物胎盘.方法 利用超滤法从牛和羊胎盘中提取胎盘肽,采用改良的加脲Tricine-SDS-PAGE法测定其相对分子质量;利用紫外光扫描其大吸收峰;并通过建立体外抑制兔淋巴细胞模型,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定所提取胎盘肽的免疫调节作用.结果 从牛和羊胎盘中成功提取出了胎盘肽,其相对分子质量分别为4 785和4 386;其大吸收峰分别为210.5和225.4 nm;牛和羊胎盘肽均可使顺铂抑制的兔外周血T淋巴细胞的转化率显著提高,其中牛胎盘肽以1∶1×103、1∶1×104 2组吸收度明显高于抑制组(P＜0.05);羊胎盘肽以1∶1×102、1∶1×103和1∶1×104 3组效果为明显(P＜0.01).结论 牛和羊胎盘中含有的胎盘肽可成功提取出来,其可明显提高淋巴细胞的转化率,是一种较为理想的免疫调节剂.
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凋亡相关蛋白BCL-2与白血病化疗药物敏感性的研究
目的:研究急性白血病(AL)细胞BCL-2表达及其与体外化疗药物敏感性的关系.方法:采用Western blotting技术和四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法),分别检测HL-60、U937细胞株和6例急性髓性细胞白血病(AML)细胞BCL-2表达水平及体外对柔红霉素(DNR)的敏感性.结果:(1)BCL-2表达水平HL-60细胞高于U937细胞,而6例AML细胞BCL-2表达水平不同;(2)MTT检测结果显示,DNR对HL-60抑制率低于U937;BCL-2高表达的AML细胞,DNR抑制率低.结论:细胞系和白血病原代细胞的BCL-2高表达伴低药敏与AML疗效有关.
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几种医用材料的细胞生物相容性评价的实验研究
目的:通过2种体外细胞毒性试验研究,评价几种生物材料的细胞生物相容性.方法:依据ISO 10993-1.1997及GB/T 16886.1-1997,应用琼脂覆盖法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法对聚丙烯酰胺水凝胶、壳聚糖和类金刚石等5种生物材料的细胞毒性进行评价.通过建立MTT比色法的L929细胞生长代谢标准曲线,确定了96孔板适宜的细胞接种数.结果:5种生物材料MTT试验中毒性级均为0级,琼脂覆盖法中材料周围及脱色区内细胞溶解评价(Z/L值)均为0/0.结论:5种生物材料具有良好的细胞生物相容性.
关键词： 医用生物材料 细胞生物相容性 琼脂覆盖法 四甲基偶氮唑盐比色法 -
MTT比色法的改良及其在LAK细胞活性检测中的应用
目的:改良四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,并用来检测淋巴因子激化的杀伤细胞(LAK细胞)活性.方法:在MTT代谢产物甲瓒DMSO溶解后的佳吸光度测定及效靶细胞不同孵育时间的比较等方面进行研究.结果:MTT代谢产物甲瓒DMSO溶解后的佳吸光度为510 nm,效靶细胞佳孵育时间为4 h.结论:改良的MTT比色法优于常规的MTT比色法.
关键词： 改良 四甲基偶氮唑盐比色法 淋巴因子激化的杀伤细胞 细胞活性测定 -
壳寡糖对施万细胞增殖能力影响的研究
目的:研究壳寡糖(chitooligosaccharides,COS)对大鼠施万细胞活力和增殖能力的影响,探讨其促神经再生的机制.方法:体外培养并纯化大鼠施万细胞,S100β免疫荧光细胞化学染色和流式细胞仪对细胞纯度进行鉴定.四甲基偶氮唑盐比色法(methyl-thiazol-tetrazolium,MTT)观察不同质量浓度COS(0.25、0.5、1.0 mg/mL)作用24 h和48 h对施万细胞活力的影响.Hochest33342标记细胞,采用细胞计数法,绘制壳寡糖作用的施万细胞生长曲线.5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)标记观察COS作用48 h对施万细胞增殖的影响.结果:免疫荧光细胞化学染色和流式细胞仪结果显示施万细胞纯度可达95%以上.MTT结果显示培养48 h后,中、高剂量的COS组(0.5、1.0 mg/mL)可使施万细胞活力增加.生长曲线显示,与对照组相比,COS可促进施万细胞增殖.BrdU标记结果显示,COS可显著增加BrdU阳性细胞数.结论:COS可促进施万细胞的活力和增殖能力.
关键词： 壳寡糖 施万细胞 四甲基偶氮唑盐比色法 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 增殖 大鼠 -
三氧化二砷对肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2抑制作用的研究
目的:研究三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株的抑制作用.方法:用不同浓度的As2O3处理人肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2及正常人肝细胞株L-02,应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察As2O3对细胞生长的影响,并与3种常用抗癌药羟基喜树碱(HCPT)、顺铂(DDP)及5-氟脲嘧啶(5-Fu)的抑制率进行比较.结果:低浓度的As2O3、HCPT、DDP及5-Fu对SMMC-7721、HepG2两种肝癌细胞株的抑制率分别是86.3%,43.2%;4.2%,42.1%和76.7%,45.6%;19.8%,18.6%,As2O3的抑瘤作用强(P<0.05),而对正常人肝细胞株的抑制较弱.浓度≥2.0μmol/L的As2O3对SMMC-7721和HepG2的抑制作用差异均无显著性(P＞0.05).结论:As2O3体外试验能有效抑制肝癌细胞株的生长,且在一定浓度范围内,抑制率具有一定的浓度和时间依赖性.
关键词： 原发性肝细胞癌 三氧化二砷 四甲基偶氮唑盐比色法 -
华蟾素配伍丝裂霉素体外抑瘤作用
目的:从体外药敏实验的角度观察华蟾素注射液配伍丝裂霉素对不同肝癌细胞抑瘤效果和对正常肝细胞的毒性反应.方法:通过四甲基偶氮唑盐比色法观察低浓度华蟾素注射液、丝裂霉素及两者配伍使用时对人肝癌细胞系SMMC-7721、BEL-7402细胞及正常肝细胞系L-02细胞的生长抑制作用.结果:对人肝癌细胞的生长抑制作用,华蟾素及丝裂霉素两者配伍使用较两者单独使用显著增强;丝裂霉素对正常肝细胞具有一定生长抑制作用,而华蟾素注射液则无此作用,与单独使用丝裂霉素比较,两者的配伍使用对正常肝细胞的生长抑制作用未见明显增加.结论:华蟾素和丝裂霉素配伍使用可显著提高对人肝癌细胞的杀伤作用,同时未增加对正常肝细胞的生长抑制作用,提示华蟾素和丝裂霉素配伍使用在肝癌治疗中具有很好的临床应用前景.
关键词： 肝癌 华蟾素注射液 丝裂霉素 肝癌细胞系 四甲基偶氮唑盐比色法
