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溶血磷脂酸刺激兔血管平滑肌细胞增殖的信号转导途径
目的:探讨溶血磷脂酸(LPA)刺激兔血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的信号转导途径.方法:在培养的家兔血管平滑肌细胞上,测定3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)参入和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性.结果:LPA呈浓度依赖地刺激3H-TdR参入,并平行地激活MAPK,二者间呈显著正相关.乙二醇-双(氨基乙酯)-四乙酸(EGTA)、尼卡地平、ryanodine、thapsigargin、herbimycin A不影响LPA促VSMC增殖作用.PQ098059、 H7、佛波酯(PMA)及百日咳毒素(PTX)均可抑制LPA的促增殖和激活MAPK作用.结论:LPA浓度依赖地促进VSMC增殖,其细胞内信号转导与PTX敏感的G蛋白介导的蛋白激酶C(PKC)和MAPK途径有关.
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幽门螺杆菌对人和大鼠胃上皮细胞细胞外信号调节激酶活性的影响
目的:研究幽门螺杆菌提取物对人胃上皮细胞株BGC-823和大鼠胃上皮细胞株RGM1的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)活性的影响.方法:采用蛋白质免疫印迹法测定ERK酶蛋白含量和活性.结果:在各观察时间点,两种细胞ERK酶蛋白含量无明显差异.在无血清存在情况下,幽门螺杆菌提取物使BGC-823 细胞ERK活性持续增加而对RGM1细胞ERK活性几乎没有影响;在有血清存在情况下,Hp提取物使BGC-823细胞ERK活性持续增加而使RGM1细胞ERK活性一过性增加.结论:幽门螺杆菌提取物对胃上皮细胞株BGC-823和RGM1的ERK活性的影响不同.
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心血管疾病发病机制研究:细胞外信号调节激酶在缓激肽引起血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用
目的:从细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated mito-gen-activated protein kinase,ERKs)的角度,研究丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径在缓激肽介导的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)促增殖等反应中的作用及其可能的调控机制.方法:实验选SD清洁级大鼠2只,分离颈动脉平滑肌组织培养VSMC.通过3H-胸苷掺入率与VSMC3H-亮氨酸掺入率分别反映VSMC的DNA代谢与蛋白质合成代谢速率;并通过给予缓激肽抑制剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)及ERKS抑制剂UO126预处理,观察它们对细胞蛋白合成和DNA代谢及细胞增殖的影响.结果:缓激肽(10～8 mmol/L)处理30 minVSMC3H-胸苷掺入率和3H-亮氨酸掺入率均明显增高(增加412.1%和137.9%,P＜0.01).缓激肽增高3H-胸苷掺入的作用可部分被NAC所抑制及UO126所抑制(增加抑制率为27.70%和28.60%,P＜0.05),明显被NAC+UO126所抑制(增加抑制率65.50%,P＜0.01).缓激肽增高3H-亮氨酸掺入的作用可部分被NAC和UO126所抑制(增加抑制率为28.70%和20.80%,P＜0.05),完全被NAC+UO126所抑制(增加抑制率116.70%,P＜0.01).结论:ERKs激活在缓激肽导致VSMC增殖反应中具有重要作用,并可通过ERKs信号途径的特异性抑制剂的抑制效应,影响血管平滑肌细胞的增殖效应,从而影响心血管疾病的发生.
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睡眠剥夺引起大鼠海马神经元凋亡与丝裂素活化蛋白激酶表达的变化
背景:丝裂素活化蛋白激酶是一组与神经元的存活凋亡有关的蛋白激酶,睡眠剥夺可以引起神经元凋亡.目的:观察睡眠剥夺大鼠丝裂素活化蛋白激酶表达的变化并分析其可能的意义.设计:完全随机分组的前瞻性研究.单位:郑州大学生理学教研室神经研究室.材料:实验于2000-06/2002-10在郑州大学完成.选取成年健康SD大鼠24只.方法:24只大鼠随机分为快眼动睡眠剥夺组、快眼动睡眠剥夺对照组和正常对照组3组,每组8只.睡眠剥夺组从早晨8点始,连续剥夺睡眠72 h.正常对照组则置饲养笼中饲养,维持正常的睡眠-觉醒周期.观察其形态学变化.另取24只大鼠分组同上用于丝裂素活化蛋白激酶的检测.采用TUNEL染色法观察睡眠剥夺大鼠的海马神经元形态学变化,观察细胞外信号调节激酶活性的变化和c-Jun氨基末端激酶蛋白表达量的变化.主要观察指标:①观察睡眠剥夺大鼠海马神经元的形态学变化.②观察海马神经元细胞外信号调节激酶和c-Jun氨基末端激酶表达的变化.结果:①海马神经元形态学变化:快眼动睡眠剥夺组大鼠CA1和CA3区可见较多的凋亡阳性细胞,主要分布在海马的锥体细胞层.CA2区仅见极少量凋亡细胞,CA4区偶见凋亡细胞.正常对照组和快眼动睡眠剥夺对照组海马组织切片中未见明显阳性细胞.②细胞外信号调节激酶活性的变化:快眼动睡眠剥夺组明显低于快眼动睡眠剥夺对照组和对照组(1 764.00±941.56,6 139.67±2 863.62,566.700±2 763.41,t=3.211 1,0.986 3,P＜0.05).③c-Jun氨基末端激酶的阳性表达:快眼动睡眠剥夺组明显高于快眼动睡眠剥夺对照组和对照组(87.5%,25%,75%,t=3.412 1,P＜0.05).结论:睡眠剥夺可引起大鼠海马神经元丝裂素活化蛋白激酶活性的变化,可能与神经元的凋亡有关.
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p38MAPK抑制剂SB203580抑制人绒癌JAR细胞的体外侵袭作用
目的研究p38MAPK通路在人绒癌JAR细胞体外侵袭中的作用.方法用细胞ELISA法测定JAR细胞中p38MAPK的活性变化;用Transwell细胞侵入系统检测细胞的侵袭作用.结果 PMA呈浓度依赖性地激活JAR细胞中p38MAPK.PMA能促进人绒癌JAR细胞的体外侵袭作用,而p38特异性抑制剂SB203580抑制了JAR细胞的侵袭能力.结论 p38MAPK通路在人滋养细胞的侵袭行为以及人绒癌的形成中具有重要作用.p38抑制剂可能会为人绒癌的防治提供新的途径.
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膀胱癌中CHK1和RAD51的表达及临床意义
目的 探讨细胞周期检测点激酶1 (cell cycle checkpoint kinase 1,CHK1)及DNA双链断裂修复蛋白RAD51在膀胱癌中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学法检测104例膀胱癌组织和40例癌旁正常膀胱黏膜组织中CHK1及RAD51蛋白表达,并分析其与膀胱癌临床病理特征的关系.结果 膀胱癌组织中CHK1及RAD51蛋白表达均高于癌旁正常膀胱黏膜组织(均P ＜0.05).CHK1蛋白表达在膀胱癌的病理组织学分级、病理分期方面差异均有统计学意义(均P＜0.05),而在性别、年龄、肿瘤直径、单发/多发以及初发/复发方面差异均无统计学意义(均P＞0.05).RAD51蛋白表达在膀胱癌的病理组织学分级方面差异有统计学意义(P＜0.05),在病理分期、性别、年龄、肿瘤直径、单发/多发以及初发/复发方面差异均无统计学意义(均P＞0.05).膀胱癌组织中CHK1和RAD51蛋白表达呈正相关(r=0.223,P＜0.05).CHK1蛋白阴性表达组预后好于阳性表达组(P＜0.05),而RAD51蛋白表达阴性组和阳性组预后比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CHK1和RAD51蛋白在膀胱癌组织中呈高表达,二者在膀胱癌发生、发展中起重要作用,并与膀胱癌的病理组织学分级及预后密切相关.
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PI3 K、Akt 及 E－cadherin 在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义
目的：探讨磷脂酰肌醇－3－激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）及E－钙黏素（E－cadherin）在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学EnVison法检测62例甲状腺乳头状癌、30例结节性甲状腺肿、30例正常甲状腺组织中PI3K、Akt及E－cadherin的表达，并对性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移等因素进行分析。结果62例甲状腺乳头状癌中PI3K、Akt及E－cadherin蛋白的阳性表达率分别为74．2％（46／62）、66．1％（41／62）、16．1％（10／62） ，与结节性甲状腺肿、正常甲状腺组织相比，差异均有统计学意义（ P ＜0．05）。甲状腺乳头状癌Ⅰ～Ⅱ期中PI3K及Akt蛋白的阳性表达率均低于Ⅲ～Ⅳ期（χ2＝4．976， P ＝0．026；χ2＝6．233， P ＝0．013）；淋巴结转移组中PI3K及Akt蛋白的阳性表达率均高于淋巴结无转移组（χ2＝6．675， P ＝0．010；χ2＝7．511， P ＝0．006）。而E－cadherin蛋白在Ⅰ～Ⅱ期的阳性表达率明显高于Ⅲ～Ⅳ期（χ2＝6．558， P＝0．010）；E－cadherin蛋白在淋巴结无转移组的阳性表达率明显高于伴有淋巴结转移组（χ2＝5．678， P ＝0．017），经Spearman等级相关性分析表明，PI3K与Akt蛋白的阳性表达呈正相关（ r ＝0．423， P＜0．05），PI3K与E－cadherin蛋白的阳性表达呈负相关（ r ＝－0．527， P ＜0．05），Akt与E－cadherin的阳性表达也呈负相关（ r ＝－0．417， P ＜0．05）。结论 PI3K／Akt信号通路参与了甲状腺乳头状癌的发展、侵袭及转移。
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蛋白激酶CK2α在人甲状腺鳞癌细胞SW579中的表达和活性
目的 研究蛋白激酶CK2α在人甲状腺鳞癌细胞SW579中的表达和活性,探讨其与甲状腺癌细胞之间的关系.方法 体外培养SW579和Hacat细胞,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting技术分别检测蛋白激酶CK2α mRNA和蛋白在SW579细胞和Hacat细胞中的表达；应用放射自显影法检测细胞内蛋白激酶CK2的活性.结果 蛋白激酶CK2α mRNA和蛋白在SW579细胞中高表达,在Hacat细胞中低表达(mRNA:0.92±0.01 vs 0.52±0.02,t=19.24,P＜0.01；蛋白:0.98±0.01 vs 0.37±0.02,t=24.14,P＜0.01)；SW579细胞中CK2的活性高于Hacat细胞(4911±151.30 vs 1999±87.90,t=16.64,P＜0.01).结论 蛋白激酶CK2α过表达可能与甲状腺癌的发生和发展有关.
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脂联素对骨肉瘤MG-63细胞增殖和AMPK磷酸化的影响
目的 研究脂联素对MG-63细胞单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)磷酸化和细胞增殖的影响.方法 将骨肉瘤细胞株MG-63接种于6 cm板上,接种密度l×105/ml,待细胞生长至约80％时,每板加入5 ml含脂联素的培养基(浓度1μg/ml),作用时间分别为0、15、30、60、120 min;Western Blot检测AMPK蛋白磷酸化水平,选择佳的脂联素处理时间.分别设对照组和脂联素组(0、0.001、0.01、0.1、1μg/ml),根据脂联素佳处理时间处理后,Western Blot检测AMPK磷酸化水平,确定脂联素佳作用浓度.依据佳作用时间及佳浓度,将PBS作为对照,相应浓度脂联素作处理组,Western Blot检测AMPK磷酸化水平,明确脂联素对骨肉瘤MG-63细胞AMPK磷酸化的影响.CCK-8法检测脂联素对MG-63细胞增殖的影响,将MG-63细胞接种于96孔板,每孔细胞数为5000个,培养过夜.实验分为空白对照组和5个质量浓度梯度(0.001、0.01、0.1、1、10 μg/ml)脂联素重组体组,每组做5个平行孔,作用时间24 h,培养结束前4h,每孔加入10μl的CCK-8试剂,继续培养2.5h.490 nm测定光密度值(OD490).结果 脂联素浓度≥0.01 μg/ml时,MG-63细胞AMPK磷酸化水平显著升高(t=5.894,P=0.007);短时间内脂联素对MG-63细胞增殖无明显抑制作用(F=6.335,P=0.072).结论 脂联素可以增强AMPK的磷酸化,短时间刺激脂联素对MG-63细胞增殖无明显抑制作用.
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腹腔注射外源性胰岛素对小鼠不同器官的影响
目的 分析腹腔注射胰岛素在时间与剂量上对小鼠不同器官影响的差异.方法 12只C57/Bl6小鼠被随机分到2组,一组为时间曲线组,一组为剂量曲线组.时间曲线组小鼠分别在腹腔注射人胰岛素5 u后第0分钟,第1分钟、第3分钟、第5分钟、第7分钟和第10分钟处死,迅速取出胰腺和肌肉组织,封存在液氮罐,低温(0～4℃)下匀浆,提取蛋白,用Western blot检测胰腺及肌肉组织中AKT以及Erk信号蛋白的磷酸化程度.在剂量曲线组中,小鼠腹腔注射的人胰岛素剂量依次递增,分别为0 u/kg体重、1 u/kg体重、3 u/kg体重、5 u/kg体重、10 u/kg体重、50 u/kg体重.胰岛素注射5 min后小鼠被处死,迅速取出胰腺和肌肉并封存在液氮罐中,低温(0～4℃)下匀浆,提取蛋白,用Western blot检测胰腺及肌肉组织中AKT以及Erk信号蛋白的磷酸化程度.结果 时间曲线组不同时间点中,肌肉细胞中Erk磷酸化水平高出现在第3分钟时,AKT磷酸化水平高出现在第5分钟时;胰腺细胞Erk磷酸化水平高出现在第3分钟时,AKT磷酸化水平高亦出现在第3分钟时.剂量曲线组中,3 u/kg体重人胰岛素刺激对于肌肉和胰腺的Erk以及AKT的磷酸化水平有大程度的上调,但下调时间不完全一致.结论 腹腔注射外源性胰岛素(人胰岛素)对于小鼠不同器官(肌肉及胰腺)Erk和AKT磷酸化水平在时间上和不同胰岛素剂量时有一定的差异.
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TGF-β1/SGK1信号通路在糖尿病肾病中的作用
目的 通过观测相关因子在糖尿病大鼠模型中的表达,探讨转化生长因子-β1/血清-糖皮质激素诱导型蛋白激酶1 (TGF-β1/SGK1)信号通路在糖尿病肾小管间质病变发生中的作用.方法 将60只清洁级健康雄性SD大鼠分为正常对照组(n=20)和糖尿病组(n=40),糖尿病组大鼠通过一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,45 mg/kg)诱导糖尿病,饲养至4周和8周每组各处死一半大鼠;检测空腹血糖、尿蛋白等指标,观察肾脏普通病理变化,免疫组化检测SGK1表达,用Real-time-PCR检测SGK1的mRNA水平;Western blotting检测TGF-β1和SGK1等蛋白表达.结果 与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血糖明显升高,肾脏肥大指数、血尿素氮、血肌酐、24 h尿量及24 h尿蛋白均明显升高(P＜0.05);糖尿病组大鼠肾皮质组织中SGK1的转录水平以及TGF-β1和SGK1等因子的蛋白表达均明显高于正常对照组(P＜0.05).结论 TGF-β1/SGK1信号传导通路与糖尿病肾小管间质纤维化病变有密切关系.
关键词： 转化生长因子β/代谢 蛋白激酶类/代谢 糖尿病肾病/代谢
