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SHP-1基因表达检测在慢性粒细胞白血病中的意义
目的:观察SHP-1在不同期慢性粒细胞白血病(CML)中表达水平,探讨其与白血病发生、发展之间的关系.方法:选取CML及非恶性血液病患者41例,检测SHP-1蛋白及mRNA表达情况,比较各组差异.结果:各组SHP-1蛋白和mRNA表达比较:对照组高于CML组,CML-CP组高于CML-AP组.结论:SHP-1可能与CML的发生和进展有关.
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甲基化抑制剂与白血病的治疗
越来越多的研究发现,肿瘤的发生与抑癌基因及癌基因的异常表达直接相关.如果抑癌基因突变或缺失失去活性,细胞就会在无控制状态下反复复制,终形成肿瘤并发生转移.例如,抑癌基因SHP-1酪氨酸磷酸酶在造血细胞信号传导中发挥负调节作用,SHP-1表达的减少和缺失对肿瘤的发生起关键性作用.如果癌基因在白血病患者中失去了抑癌基因的负调控作用,多数就会表现为异常高表达,如癌基因c-kit,在多种白血病细胞中表达活跃.研究表明,启动子区的高甲基化导致了抑癌基因失活及癌基因表达活跃,因此恢复启动子区的正常甲基化有助于恢复基因的正常表达,从而达到基因治疗白血病的目的.本文就甲基化,甲基化异常与白血病,甲基化抑制剂与白血病治疗作了简明的综述.
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5-杂氮脱氧胞苷去甲基化作用对白血病细胞株HL-60中SHP-1和C-kit基因表达的影响
本研究旨在探讨SHP-1及C-kit基因在急性白血病HL-60细胞中的表达情况及5-杂氮脱氧胞苷(5-aza-CdR)去甲基化作用对SHP-1及C-kit表达的影响.用RT-PCR方法检测药物处理组HL-60细胞与对照组SHP-1、C-kit基因的mRNA的表达水平.用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测HL-60细胞中SHP-1、C-kit基因的甲基化状态改变.结果表明,在原本不表达SHP-1 mRNA的HL-60细胞中,经过5-aza-CdR的去甲基化作用后,SHP-1可以重新表达,而使原来高表达的C-kit mRNA水平下降.当0.5、1、2μmol/L 5-aza-CdR分别作用于白血病细胞株时,去甲基化作用增强,SHP-1 mRNA的表达水平呈上升趋势,C-kit mRNA的表达水平呈下降趋势,两两比较表明差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HL-60细胞株中SHP-1 mRNA表达缺如,经去甲基化作用后表达恢复,说明SHP-1基因高度甲基化与白血病发生有关;白血病形成中可能存在C-kit mRNA表达的异常增高.5-aza-CdR对SHP-1与C-kit的表达水平的影响呈剂量依赖性,浓度越高,SHP-1平均表达水平越高,C-kit mRNA表达水平越低,在特定的一个浓度下,呈现时间依赖性.SHP-I mRNA与C-kit mRNA表达呈负相关,提示白血病细胞中SHP-1表达的降低或缺如消弱了对C-kit信号通路的负调控而在白血病形成中发挥作用.
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三氧化二砷联合5-杂氮脱氧胞苷对K562细胞SHP-1、JAK3、TYK2基因表达的影响
本研究旨在探讨甲基化抑制剂三氧化二砷(As2O3)及5-杂氮脱氧胞苷(5-aza-CdR)对JAK-STAT信号转导通路中JAK家族成员JAK3、TYK2和造血细胞磷酸酶SHP-1在慢性髓系白血病细胞株K562中表达的影响及它们在白血病发病中的作用.K562细胞分为单药组、联合用药组及不加药物组(空白对照).5-aza-CdR单用浓度为0.5、1、2μmol/L,As2O3单用浓度为1、2.5、5μmol/L,As2O3 1 μmol/L +5-aza-CdR 0.5 μmol/L、As2O3 2.5 μmol/L+ 5-aza-CdR 1 μmol/L.As2O3联合用药浓度为5μmol/L+ 5-aza-CdR 2 μmol/L.对细胞分别处理24、48、72 h后提取细胞总RNA,应用荧光实时定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RQ-PCR)检测JAK3、TYK2及SHP-1的表达.结果表明,As2O3和5-aza-CdR单独作用及两药合用时,SHP-1 mRNA在K562细胞中的表达呈剂量及时间依赖性升高,JAK3 mRNA的表达呈剂量及时间依赖性降低,TYK2 mRNA的表达呈剂量及时间依赖性降低,SHP-1与JAK3、TYK2呈负相关,JAK3所受影响较TYK2更为显著.结论:As2O3和5-aza-CdR单独及联合应用时,随着浓度增高和作用时间延长,SHP-1表达上调,JAK3和TYK2表达下调,且两药有协同去甲基化作用;SHP-1基因可能通过抑制JAK/STAT通路发挥作用,JAK3所受影响较TYK2更为显著.在JAK/STAT通路中,JAK3可能发挥更为重要的作用.
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三氧化二砷去甲基化作用对白血病细胞株HL-60中SHP-1和c-kit基因表达的影响
本研究旨在探讨SHP-1及C-kit基因在急性白血病细胞中的表达水平及三氧化二砷(As2O3)去甲基化作用对SHP-1及C-kit表达的影响.用RT-PCR方法检测药物处理的HL-60细胞组与对照组SHP-1、C-kit基因的mRNA的表达水平.用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测HL-60细胞中SHP-1基因的甲基化状态的变化.结果表明,在原本不表达SHP-1 mRNA的HL-60细胞中,经过As2O3的去甲基化作用后,SHP-1得到表达,而使原来高表达的C-kit mRNA的表达水平随之下降.当1.0 μmol/L、2.5 μmol/L、5.0 μmol/L As2O3分别作用于白血病细胞株时,去甲基化作用增强,SHP-1 mRNA的表达水平呈上升趋势,C-kit mRNA的表达水平呈下降趋势,经两两比较,二者间有统计学意义(P＜0.05).结论:HL-60细胞株中SHP-1 mRNA表达缺如,经去甲基化作用后表达恢复,说明SHP-1基因高度甲基化与白血病发生有关；在白血病形成中可能存在C-kit mRNA表达的异常增高.As2O3对SHP-1与C-kit的表达水平的影响呈剂量依赖性,浓度越高,SHP-1平均表达水平越高,C-kit mRNA表达水平越低,在特定的浓度下,呈现时间依赖性；SHP-1 mRNA与C-kit mRNA表达呈负相关,提示白血病细胞中SHP-1表达降低或缺如削弱了对C-kit信号通路的负调控而在白血病形成中发挥作用.
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K562细胞中DNMT1与SHP-1启动子2甲基化关系的研究
目的:探讨慢性髓系白血病(CML)急变细胞系K562细胞中DNA甲基转移酶1(DNMT1)与造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因表达及其启动子2的甲基化状态的关系.方法:分析NCBI数据库中SHP-1基因启动子2启动子区序列.将携带DNMT1 shRNA的psiHIV-mU6-shDNMT1和樱桃色荧光蛋白(mcherryFP) psiHIV-mU6-control 的慢病毒干扰载体感染K562细胞系.应用甲基化特异的聚合酶链反应(MSP)和亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)检测K562细胞中SHP-1基因启动子2的甲基化状态,Western blot检测SHP-1、DNMT1蛋白的表达水平,SYBRGreen荧光定量PCR检测SHP-1 mRNA的表达.结果:SHP-1基因启动子2在-353 bp-+182 bp区有22个CpG岛,K562细胞中SHP-1基因启动子2异常高甲基化且SHP-1蛋白表达缺失.K562细胞转染psiHIV-mU6-shDN-MT1后DNMT1表达水平为0.48±0.06,较转染psiHIV-mU6-control组明显降低(1.33±0.19) (t=4.18,P=0.014).K562细胞中SHP-1蛋白表达缺失,转染psiHIV-mU6-shDNMT1后K562细胞SHP-1蛋白恢复表达,转染psiHIV-mU6-shDNMT1的K562细胞中SHP-1 mRNA相对表达水平(14.23±3.83)较转染psiHIV-mU6-control组(1.031±0.156)高(P=0.004).DNMT1基因沉默后SHP-1基因启动子2中CpG岛去甲基化.结论:K562细胞中DNMT1与SHP-1启动子2的异常甲基化及沉默相关.
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过表达SHP-1增强K562细胞对伊马替尼的敏感性
目的:探讨SHP-1对K562细胞(人慢性髓系白血病急变细胞系)对伊马替尼(IM)敏感性的影响及其相关机制.方法:将携带SHP-1基因和绿色荧光蛋白(EGFP)空载体的慢病毒表达载体感染K562细胞系.0.2 μmol/LIM处理K562细胞72 h后,Western blot检测SHP-1表达的变化.0.08μmol/L的IM处理转染后的K562EGFP和K562SHP-1细胞72 h后,应用CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;经不同浓度IM作用72 h后,采用CCK-8法测定细胞增殖活性,计算半数抑制浓度(IC50).流式细胞术检测pCrkL水平;Western blot检测各转染组SHP-1、磷酸化MAPK、AKT、STAT5、JAK2及MAPK、AKT、JAK2水平.结果:0.2 μmol/L的IM作用于K562细胞72 h,不影响SHP-1的表达.0.08 μmol/L的IM处理K562EGFP和K562SHP-1细胞72 h,K562sHP-1细胞的增殖抑制率明显高于K562EGFP细胞(P＜0.05),提示过表达SHP-1可明显增强IM对K562细胞的增殖抑制作用.不同浓度IM作用于K562EGFP和K562 SHP-1细胞,K562SHP-1组的IC50值较K562EGF组明显降低(P＜0.05),在0.02-0.16 μmol/L的IM浓度范围内,SHP-1和IM的协同作用强.SHP-1与IM均可抑制BCR-ABL1及MAPK、AKT、STAT5、JAK2信号通路分子活性,并具有协同作用.结论:SHP-1抑制K562细胞中BCR-ABL1及MAPK、AKT、STAT5和JAK2信号通路,过表达SHP-1能增强K562细胞对IM的敏感性.
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急性白血病患者SHP-1与c-kit基因表达及其临床意义
为了探讨造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因和原癌基因c-kit在急性白血病(AL)患者中的表达及其与AL的发生及预后的关系,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测60例急性白血病患者及33名正常对照者单个核细胞的SHP-1、c-kit mRNA的表达.结果显示:SHP-1在AML细胞中表达阳性率由高至低依次为缓解组、初治组、复发组,c-kit表达阳性率则相反,各组与正常对照组相比有显著性差异(P＜0.05),SHP-1在AML细胞中表达阳性率比ALL细胞高,有显著性差异(P＜0.05),c-kit在AML细胞中表达阳性率比ALL细胞中高,有显著性差异(P＜0.05);SHP-1与c-kit表达成负相关(r=-0.502,P＜0.05);30例初治AML患者SHP-1+与SHP-1-的完全缓解率均有显著性差异(P＜0.05),c-kit+与c-kit-的完全缓解率均有显著性差异(P＜0.05).结论:SHP-1可能是一个潜在的抑癌基因,它负性调节c-kit基因而抑制肿瘤的发生,同时监测二者的表达可作为判断AL治疗转归的预测指标.
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蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1高表达对食管鳞状细胞癌细胞侵袭性和化疗敏感性的影响
目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1高表达对食管鳞状细胞癌肿瘤细胞侵袭性和化疗敏感性的影响.方法 食管鳞状细胞癌EC9706细胞共分为3组,空白组未经任何处理;实验组采用SHP-1 mimic瞬时载体转染细胞24h,使用10 μmol/L顺铂再处理细胞12h;对照组采用10 μmol/L顺铂处理细胞12h.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞侵袭性,实时荧光定量聚合酶链反应检测SHP-1 mRNA相对表达量,蛋白质印迹法检测SHP-1蛋白的表达水平.结果 实验组SHP-1 mRNA相对表达量(3.42±0.14)高于对照组与空白组(1.09±0.13、0.42±0.24,F=9.143,P＜ 0.05).实验组与对照组、空白组相比,细胞生长抑制率提高、细胞凋亡指数增加(均P＜0.05),组间两两相比差异均有统计学意义(均P＜0.05).实验组、对照组与空白组的细胞侵袭率分别为(6.5±1.3)％、(18.5±2.5)％和(45.2±7.2)％,差异有统计学意义(F=11.853,P＜0.05).结论 SHP-1高表达能抑制食管鳞状细胞癌肿瘤细胞的侵袭性,提高化疗敏感性,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,可为提高食管鳞状细胞癌化疗疗效奠定一定的理论基础.
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SHP-1和EGFR在乳腺癌及癌旁组织中的表达
目的:探讨SHP-1和EGFR在乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织中的表达.方法:免疫组织化学SP法检测100例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织中SHP-1和EGFR的表达情况.结果:SHP-1在癌组织的表达率明显低于癌旁组织(P＜0.001),EGFR在乳腺癌组织阳性表达率均明显高于癌旁组织(P＜0.001).结论:SHP-1的表达降低及EGFR的过度表达与乳腺癌的发生关系密切.
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奥曲肽对TGF-β1诱导大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响
目的:探讨奥曲肽对转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖及凋亡的作用,并了解上述作用是否通过含有SH2结构域的蛋白质酪氨酸磷酸酶1(SHP-1)介导.方法:体外培养大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs),以TGF-β1、奥曲肽、SHP-1抑制剂NSC87877作为工具药.将ASMCs分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1+奥曲肽组、TGF-β1+奥曲肽+NSC87877组,四甲基偶氮唑蓝(MTr)比色法测定ASMCs增殖,Western blot检测磷酸化SHP-1的水平.另将ASMCs分为对照组、0.01 nmoL/ml奥曲肽组、0.1 nmol/ml奥曲肽组,Annexin V/P Ⅰ双标记流式细胞仪分析方法检测细胞凋亡.结果:①TGF-β1组ASMCs的增殖反应高于对照组(P＜0.01),TGF-β1+奥曲肽组ASMCs增殖反应显著低于TGF-β1组(P＜0.05),TGF-β1+奥曲肽+NSC87877组的增殖反应显著低于TGF-β1+奥曲肽组(P＜0.01);②0.01 nmol/ml奥曲肽组凋亡率显著高于对照组(P＜0.01),0.1 nmol/ml奥曲肽组与对照组比较凋亡率无显著差异;③TGF-β1组较对照组p-SHP-1水平显著降低(P＜0.05),TGF-β1+奥曲肽组较rGF-β1组p-SHP-1水平稍升高,但差异无统计学意义,TGF-β1+奥曲肽+NSC87877组p-SHP-1水平较其余3组显著降低(P＜0.01).结论:奥曲肽可抑制TGF-β1诱导的ASMCs增生;低剂量奥曲肽促进ASMCs凋亡,较高剂量奥曲肽对ASMCs凋亡无明显影响;奥曲肽抑制ASMCs增生与SHP-1激活无关,可能通过介导生长抑素受体2(SSTR2)作用的其他机制或通过其他生长抑素受体(SSTRs)抑制ASMCs生长.
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SHP-1基因在慢性髓性白血病疾病进展中的作用及机制研究
目的 探讨SHP-1基因表达与启动子甲基化状态在慢性髓性白血病(CML)疾病进展中的作用及其机制.方法 SYBR Green荧光定量PCR及Western blot方法检测94例CML患者骨髓或外周血单个核细胞中SHP-1基因的表达;甲基化特异性PCR(MSP)方法检测SHP-1基因启动子区CpG岛的甲基化状态;慢病毒表达载体感染K562细胞使SHP-1基因过表达,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞的凋亡率及细胞周期分布;荧光探针定量PCR检测BCR-ABL mRNA水平,Western blot方法检测蛋白及磷酸化蛋白的水平.结果 疾病进展期CML(包括加速期和急变期)患者SHP-1 mRNA的相对表达水平为0.79±0.37,较慢性期CML(CP-CML)的1.18±0.64明显降低(P=0.009),疾病进展期CML患者SHP-1蛋白相对表达水平(0.57±0.02)较CP-CML患者降低(1.02±0.04)(P=0.039).CP-CML患者SHP-1基因启动子的甲基化阳性率(10/42,23.8％)明显低于疾病进展期CML患者(52/52,100.0％) (P＜0.01).过表达SHP-1基因的K562-SHP-1细胞与转染空载体的K562-EGFP细胞相比,增殖受抑,凋亡率增加,并出现G0/G1期的细胞阻滞.过表达SHP-1基因降低K562细胞中BCR-ABL蛋白的水平,但不影响BCR-ABL mRNA的转录;过表达SHP-1基因能降低K562细胞MYC蛋白及磷酸化Akt、MAPK、JAK2、STAT5蛋白的表达水平,而对K562细胞中Akt、MAPK、JAK2蛋白总表达水平无影响.结论 SHP-1基因启动子CpG岛甲基化及其基因沉默导致BCR-ABL、Akt、MAPK、JAK2、STAT5、MYC信号通路的异常激活与表达可能与CML疾病进展有关.
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骨髓增生异常综合征患者SHP-1基因启动子甲基化状态及相关机制的探讨
目的 探讨SHP-1基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征(MDS)发生、发展中的作用和相关机制.方法 将63例MDS患者根据IPSS积分系统分为较低危和较高危组.采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)对MDS细胞系SKK-1细胞和MDS患者骨髓细胞进行SHP-1基因启动子甲基化状态的检测;用Western blot方法检测正常对照者和患者骨髓单个核细胞和SKK-1细胞磷酸化信号传导和转录激活因子3( p-STAT3)蛋白的表达.结果 SKK-1细胞存在SHP-1基因启动子部分甲基化,正常对照者骨髓细胞均为非甲基化,较高危组MDS患者SHP-1启动子甲基化率显著高于较低危组(63.3％对24.2％)(P＜0.05);按WHO分型中染色体核型和骨髓原始细胞比例分组,SHP-1启动子甲基化率在RAEB-Ⅱ、核型差组和骨髓原始细胞占0.11 ～0.19组显著增高(P＜ 0.05);SKK-1细胞中存在p-STAT3蛋白的表达,较高危组MDS患者p-STAT3蛋白的表达显著高于较低危组(66.7％对18.2％);相关分析显示SHP-1启动子甲基化的出现与p-STAT3蛋白的表达有相关性.结论 SHP-1基因启动子的异常甲基化在MDS的发病和疾病进展中发挥作用,其机制可能涉及STAT3信号通路的激活,检测MDS患者SHP-1启动子甲基化状态有助于对疾病预后的判断.
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Flt3、c-kit和SHP-1基因在急性白血病中的作用
目的 探讨Fit3、造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因与原癌基因c-kit在髓系白血病患者中的表达以及其与白血病发生和预后的关系.方法 用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测52例髓系白血病患者(实验组)及33例正常对照组Flt3、SHP-1与c-kit mRNA表达.结果 急性髓系白血病(AML)患者的Flt3及c-kit平均表达水平高于对照组,SHP-1平均表达水平均低于对照组(P＜0.05);34例初治AML患者中,Flt3及c-kil+的完全缓解率低于Flt3-及c-kit-者.而SHP-1则相反.结论 Flt3、c-kit对于白血病的转归、预测白血病的复发、监测微小残留病变有重要的意义,SHP-1可能作为潜在的抑癌基因与Flt3、c-kit基因参与白血病的发生.
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SHP-1与c-kit基因在慢性髓系白血病中表达水平的研究
目的：探讨造血细胞磷酸酶（SHP-1）基因、c-kit基因在慢性髓系白血病患者中的表达及其与白血病转化和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测SHP-1 mRNA、c-kit mRNA分别在慢性髓系白血病慢性期、急变期及正常对照组中的表达。结果慢性期和急变期SHP-1 mRNA的表达均低于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05），慢性期和急变期比较差异无统计学意义（P>0.05）。慢性期和急变期c-kit mRNA的表达均高于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05），急变期c-kit mRNA的表达均高于慢性期，差异有统计学意义（P<0.05）。结论SHP-1基因与c-kit基因可作为判断慢性髓系白血病患者转归及预后的指标。
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SHP-1和JAK3基因在成人急性髓系白血病患者中的表达
目的:分析SHP-1基因和JAK家族基因在成人急性髓系白血病(AML)患者中的表达及相关性,以探讨两者在AML发病机制中的作用.方法:选取初发急性髓系白血病患者93例及健康志愿者或完全缓解(CR)患者20例为研究对象,分别应用荧光定量聚合酶链(FQ-PCR)和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测骨髓单个核细胞中SHP-1和JAK3基因的mRNA表达情况,并分析两者的相关性及其与预后的关系.结果:SHP-1在AML患者中的表达水平明显低于完全缓解组和健康对照组(P＜0.01),而JAK3表达水平明显高于完全缓解组和健康对照组(P＜0.05);SHP-1和JAK3在mRNA水平方面呈现负相关(P＜0.05).结论:SHP-1可能是白血病的抑癌基因,AML细胞中SHP-1与JAK3的mRNA表达呈负相关,这种负调控作用的机制有待进一步研究.
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SHP-1在甲状腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨甲状腺癌组织中的SHP-1蛋白表达及其意义.方法 取一定量的甲状腺癌组织、癌旁组织、结节性甲状腺肿组织、正常甲状腺组织,运用PicTureTM二步法免疫组织化学染色技术检测组织中SHP-1的表达情况.结果 甲状腺癌组织中的SHP-1表达阳性率为100%,明显高于其他组织(P＜0.05),4种病理类型的甲状腺癌组织全部表达SHP-1蛋白,且与结节性甲状腺肿组织相比较,SHP-1阳性表达的敏感度为100%,特异度为27.78%.4种甲状腺组织中,甲状腺癌SHP-1强阳性表达率为68.97%,显著高于其他各组织(P＜0.01).结论 SHP-1在甲状腺癌组织中呈异常高表达,特异性差,提示SHP-1蛋白的表达增高与甲状腺癌的发生关系密切,但尚不能作为甲状腺癌的标志分子,其强阳性表达可为甲状腺癌的诊断提供参考.
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丁香对胰岛素信号通路的影响及2型糖尿病降糖机制的研究
目的 研究丁香治疗2型糖尿病的降血糖机理.方法 通过Western Blot检测丁香对胰岛素信号通路中蛋白的磷酸化水平.体外酶反应动力学实验检测丁香对酪氨酸磷酸酶的抑制效果.结果 丁香显著提高胰岛素信号通路关键蛋白磷酸化水平(P ＜0.001),并对SHP-1有明显的抑制效果.结论 推测丁香的降血糖机制是通过抑制胰岛素信号通路负调节酶SHP-1的活性,进而增强胰岛素受体敏感性.
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覆盆子酮对HepG2细胞胰岛素信号转导通路中SHP-1和IRS-1表达的影响
目的 观察覆盆子酮对HepG2细胞糖消耗的影响及胰岛素信号转导通路中SHP-1和人胰岛素受体底物(IRS-1)表达的影响.方法 体外培养人肝癌HepG2细胞,采用MTT法检测细胞活力;葡萄糖氧化酶法检测细胞糖消耗;RT-PCR法检测蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1的基因表达;Western-blot法检测IRS-1的表达量.结果 覆盆子酮可明显促进HepG2细胞对葡萄糖的消耗,明显降低HepG2细胞SHP-1 mRNA基因表达量,并能促进IRS-1蛋白表达量.结论 覆盆子酮可能通过影响胰岛素信号转导通路中IRS-1和SHP-1的表达发挥降糖作用.
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抗小鼠SHP-1、SHP-2和SHIP三种蛋白酪氨酸磷酸酶单克隆抗体的制备及鉴定
为了制备抗小鼠蛋白酪氨酸磷酸酶的单克隆抗体(mAb),分别以SHP-1、SHP-2和SHIP重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗相应磷酸酶的mAb.用Western blot检测mAb对重组蛋白和细胞中天然磷酸酶的反应性.共获得12株可稳定分泌抗磷酸酶mAb的杂交瘤细胞株.其中6株可分泌抗SHP-1 mAb(LX-SHP1.1～LX-SHP1.6),3株可分泌抗SHP-2 mAb(LX-SHP2.1～LX-SHP2.3),3株分泌抗SHIP mAb(LX-SHIP1～LX-SHIP3).LX-SHP1.2～LX-SHP1.6,LX-SHP2.1和LX-SHP2.3,以及LX-SHIP2和LX-SHIP3可应用于相应重组蛋白的Westernblot检测.LX-SHP1.5,LX-SHP2.3,以及LX-SHIP2在EL-4细胞及原代T细胞相应天然磷酸酶分子的Western blot检测中有较好的实验效果.
