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淋巴组织良性病变和淋巴瘤中SHP-1蛋白的表达及意义
目的探讨淋巴组织良性病变和淋巴瘤的SHP-1蛋白表达及其意义.方法应用免疫组化SP方法检测111例不同类型淋巴瘤和27例淋巴组织良性病变.结果 (1)SHP-1的正常表达部位在淋巴结和扁桃体生发中心的套区和边缘区及部分的滤泡间区,脾脏主要在边缘区及部分动脉周围淋巴鞘;在淋巴瘤中残留的淋巴组织和反应性成分也可表达;淋巴瘤的SHP-1蛋白表达比良性病变弱.(2)SHP-1在淋巴瘤中的阳性表达率(36.04%,40/111)远低于良性病变的阳性表达率(100%,27/27),包括霍奇金淋巴瘤(62.5%,5/8)、B细胞非霍奇金淋巴瘤(37.68%,26/69)、T细胞非霍奇金淋巴瘤(26.47%,9/34);不同亚型淋巴瘤表达上有差异,其阳性表达率分别是:黏膜相关淋巴瘤(12.5%,2/16),弥漫性大B细胞淋巴瘤50%(11/22),滤泡性淋巴瘤42.11%(8/19),大细胞间变性淋巴瘤中有80%(4/5),NK/T细胞淋巴瘤16.67%(1/6),前驱T淋巴母细胞淋巴瘤14.29%(1/7),外周T细胞淋巴瘤0(0/7).(3)滤泡性淋巴瘤的表达方式有:肿瘤性滤泡有阳性表达;肿瘤性滤泡无表达,滤泡周围也是阴性.结论 (1)SHP-1在淋巴瘤鉴别诊断中有参考意义,尤其适合滤泡反应性增生的良性病变和滤泡性淋巴瘤的鉴别.(2)SHP-1蛋白的缺失与淋巴瘤的发生、发展密切相关,是重要的抑癌基因.
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三氧化二砷联合5-杂氮-2'-脱氧胞苷对U937细胞SHP-1、JAK3、TYK2基因表达的影响
目的 探讨甲基化抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)联合三氧化二砷(As2O3)对白血病细胞株U937中JAK3、TYK2和造血细胞磷酸酶SHP-1表达水平的影响,并探讨它们在白血病发病中的作用.方法 5-aza-CdR、As2O3单用及联合处理U937细胞,5-aza-CdR浓度为0.5、l、2μmol/L,As2O3的浓度为1、2.5、5μmol/L,As2O3 1μmol/L+ 5-aza-CdR 0.5μmol/L、As2O32.5 μmol/L+ 5-aza-CdR l μmol/L、As2O3 35 μmol/L+ 5-aza-CdR 2 μmol/L及不加药物组,分别处理24、48、72 h后提取细胞总RNA,荧光实时定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RQ-PCR)检测JAK3、TYK2及SHP-1的表达.结果 As2O3和5-aza-CdR单独作用及两药合用时,SHP-1 mRNA在U937细胞中的表达呈剂量及时间依赖性,其表达逐渐升高;JAK3 mRNA的表达呈剂量及时间依赖性,其表达逐渐降低;TYK2mRNA的表达呈剂量及时间依赖性,其表达逐渐降低;SHP-1与JAK3、TYK2负相关,JAK3所受影响较TYK2更为显著.结论 (1)甲基化抑制剂5-aza-CdR和As2O3可使SHP-1表达升高,JAK3、TYK2表达降低,与浓度及作用时间有关.(2) SHP-1基因的重新表达与其发生去甲基化有关,对JAK/STAT通路有负调控作用.
关键词： 甲基化抑制剂 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 SHP-1 JAK3 TYK2 -
SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1在不同放射敏感度鼻咽癌细胞中的表达
目的 建立鼻咽癌放射抗拒亚系CNE-2S,研究SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1通路在鼻咽癌细胞系CNE-2和CNE-2S中表达的差异,探讨鼻咽癌放射敏感度变化的分子机制.方法 通过X线大剂量低分割照射技术建立鼻咽癌放射抗拒亚系(子代,CNE-2S1),观察亲代(CNE-2)和子代细胞的形态学和生长动力学差异,检测亲代及子代细胞系放射敏感度相关参数,分析亲代及子代细胞系各自细胞周期分布,同时检测亲代与子代细胞系SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1通路中各因子的蛋白质表达水平.结果 通过X线大剂量低分割照射技术成功建立鼻咽癌放射抗拒亚系CNE-2S1,且CNE 2及CNE-2S1放射敏感度相关参数具有延续性.同时CNE-2S1细胞S期比例较CNE-2细胞明显增高,G1期细胞明显减少,G2-M期细胞比例变化不明显.此外SHP-1、CDK6以及CylinD1在CNE-2S1细胞中的蛋白表达水平明显上调,p21表达水平则明显下调,其与CNE-2细胞之间的差异具有统计学意义.结论 SHP-1/p21/CDK6/Cyclin D1通路可能在调控鼻咽癌放射敏感度和细胞周期分布方面发挥一定作用.
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SHP-1和SHP-2在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨SHP-1和SHP-2在鼻咽癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测53例鼻咽癌组织和21例正常鼻咽组织中SHP-1、SHP-2蛋白的表达,分析他们与各临床病理特征之间的关系.结果 鼻咽癌组SHP-1表达率(64.2％)明显高于对照组(28.6％)(P＜0.01).SHP-1蛋白高表达与淋巴结转移、分期、组织学类型有关,与性别、年龄无关.SHP-2在鼻咽癌及正常鼻咽组织中表达无差异.结论 SHP-1的异常高表达可能参与鼻咽癌的发生、发展,SHP-1可作为鼻咽癌转移的预测指标.
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SHP-1和JAKs基因在成人急性髓系白血病患者中的异常表达及其相关性
目的 研究SHP-1基因和JAK家族基因在成人急性髓系白血病(AML)患者中的表达及相关性,以探讨两者在AML发病机制中的作用.方法 急性髓系白血病患者63例及健康志愿者19名(健康对照)为研究对象,分别应用FQPCR和RT-PCR方法 检测骨髓单个核细胞中SHP-1、JAKs mRNA表达情况;并分析两者的相关性及其与预后的关系.结果 SHP-1在AML患者表达水平明显低于缓解组和健康对照组(P<0.01),JAK2、JAK3和TYK2表达水平明显高于缓解组和健康对照组(P<0.05),JAK1在初治AML中表达也增高但与CR和NC组相比差异无统计学意义(P>0.05);SHP-1和JAK1、JAK3在mRNA水平负相关(P<0.05).结论 SHP-1可能是白血病潜在的抑癌基因,AML细胞中SHP-1与JAKs mRNA表达呈负相关;SHP-1对JAKs基因的负调控作用并非只是通过去除JAKs磷酸化而阻断JAK/STAT路径,还可能在转录水平进行调节.
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紫杉醇增强鼻咽癌细胞放射敏感性的初步机制研究
目的:评价紫杉醇对放射抗拒鼻咽癌细胞的放射增敏及其机制的初步研究.方法:通过X射线大剂量低分割照射技术建立鼻咽癌放射抗拒细胞亚系(子代,CNE 2S1);用紫杉醇单独处理和联合放疗分别处理CNE-2S1,以单纯放疗处理组为对照组.通过细胞克隆形成实验观察紫杉醇对放疗的增敏作用;采用流式细胞仪分析不同处理组CNE-2S1的细胞周期分布及凋亡发生率;免疫印迹分析不同处理组SHP-1表达水平.结果:成功建立鼻咽癌放射抗拒细胞亚系CNE 2S1;细胞克隆实验结果显示紫杉醇对放疗具有明显增敏作用;流式检查结果表明紫杉醇处理后的CNE-2S1处于G2-M期细胞比例明显增高,紫杉醇联合放疗处理组可明显提高CNE-2S1细胞的凋亡比率;免疫印迹结果显示紫杉醇及联合放疗组可降低CNE-2S1细胞中SHP-1的表达水平.结论:紫杉醇可增强放疗对鼻咽癌放射抗拒细胞的作用,SHP-1下调可能参与其中.
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SHP-1基因与白血病/淋巴瘤
SHP-1基因是近年来发现的抑癌基因,通过对下游信号蛋白分子磷酸酪氨酸脱磷酸化而终止、消弱细胞生长信号或激活凋亡信号负调控造血细胞的分化、发育和增殖.启动子甲基化是SHP-1基因沉默的主要机制,SHP-1表达降低及缺如与造血细胞的恶性转化及增殖优势表型有密切的关系,并与白血病/淋巴瘤的形成、侵袭性及预后相关.
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SHP-1和JAK1基因在初治急性白血病患者中的表达
目的:探讨SHP-1和JAK1基因在初治急性白血病(AL)细胞的转录表达及其与初治AL患者化疗效果的关系.方法:采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测60例初治AL患者骨髓单个核细胞及20例健康人外周血单个核细胞中SHP-1和JAK1 mRNA的表达.结果:60例初治AL患者SHP-1和JAK1的mRNA表达阳性率分别为30%,100%;初治AL患者SHP-1 mRNA表达水平明显低于正常对照组(P＜0.001),JAK1 mRNA表达水平较正常对照组略增高,但差异无统计学意义(P=0.180),初治AL患者SHP-1 mRNA阳性组的诱导化疗完全缓解(CR)率为88.9%,阴性患者组CR率为54.8%,差异有统计学意义(P=0.005).SHP-1与JAK1 mRNA表达呈负相关(P=0.046).结论:SHP-1可能是白血病潜在的抑制基因,可望作为判断初治急性白血病患者疗效和预后的指标.
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逆转录病毒介导的SHP-1基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达
目的 构建逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1.获取重组逆转录病毒.并将SHP-1基因转导入乳腺癌MDA-MB-231细胞株.方法 采用RT-PCR方法从高表达SHP-1的人乳腺癌细胞株MCF-7中克隆出SHP-1基因全长cDNA,构建重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1,通过脂质体介导将其转染入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定产病毒的细胞株,将病毒感染人乳腺癌细胞MDA-MB-231.采用Western blotting方法检测SHP-1基因在MDA-MB-231细胞中的表达情况.结果 成功构建重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-SHP-1,转染包装细胞PT67,筛选出对G418具有稳定抗性的克隆PT67/SHP-1,获取重组逆转录病毒上清液,并感染人乳腺癌细胞MDA-MB-231.从蛋白水平证实,感染后的MDA-MB-231有SHP-1基因的表达.结论 将SHP-1基因定向克隆入逆转录病毒载体的方法可成功获取重组逆转录病毒,感染MDA-MB-231细胞得到稳定表达SHP-1基因MDA-MB-231/SHP-1,为进一步研究奠定了基础.
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B细胞淋巴瘤SHP-1基因甲基化状态及其意义
[目的]探讨JAK/STAT信号转导途径负调控子SHP-1基因启动子区域CpG岛异常甲基化在B细胞淋巴瘤中的意义.[方法]收集存档石蜡包埋组织标本61例(52例B细胞非霍奇金淋巴瘤标本,9例良性增生淋巴结标本),健康人外周血单个核细胞DNA标本15例,用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)和非甲基化特异性PCR(unmethylation-specific PCR,un-MSP)检测SHP-1启动子区域CpG岛甲基化状态,MSP、un-MSP和RT-PCR方法分别检测接受或未接受去甲基化处理的Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的甲基化状态及mRNA的表达,MTT法检测接受去甲基化干预后细胞生长受抑情况.[结果]SHP-1基因启动子区域在弥漫性大B细胞淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤甲基化频率分别为94%及97%,对照组9例淋巴结良性增生标本和15例正常人外周血单个核细胞标本中SHP-1基因启动子区域甲基化频率为0.经去甲基化干预后,Raji细胞SHP-1基因启动子区域呈去甲基化状态,基因恢复表达,细胞生长受到抑制.[结论]SHP-1基因启动子区域启动子区域CpG岛在B细胞淋巴瘤中存在高度甲基化,由其所致的SHP-1基因沉默可能是B细胞淋巴瘤发生的一个重要因素,SHP-1基因的甲基化可作为一个良好的分子诊断标记及可能的治疗靶点.
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甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞苷和三氧化二砷对白血病细胞株HL60中SHP-1和c-kit基因表达的影响
目的:探讨甲基化抑制剂As2O3和5-aza-CdR在急性白血病细胞株中对SHP-1及C-kit基因表达的影响.方法:用RT-PCR方法检测HL60细胞株药物组与对照组SHP-1、c-kit基因的表达水平.结果:两种药物联合应用,SHP-1mRNA的表达水平比单独用药时显著升高,c-kit mRNA的表达水平比单独用药时降低,经比较有统计学意义(P＜ 0.05).结论:白血病HL60细胞株中存在SHP-1、c-kit mRNA表达异常；5-aza-CdR和As2O3两种药物联合应用可加强去甲基化作用.
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SHP-1在Ang-(1-7)拮抗AngⅡ致心房肌缝隙连接蛋白43重构中的作用
目的 探讨血管紧张素1-7[angiotensin 1-7,Ang-(1-7)]是否通过SHP-1来抑制血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的c-Src激活,从而改善缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)的表达以及功能.方法 以小鼠心房肌细胞系(HL-1细胞系)作为研究对象,分为Control组、AngⅡ组、AngⅡ+SU6656(c-Src抑制剂)组、AngⅡ+Ang-(1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)+SSG(SHP-1抑制剂)组,Western blot分别检测p-c-Src、Cx43、SHP-1的表达,细胞免疫荧光、划痕标记染料示踪技术观察Cx43空间分布以及缝隙连接功能.结果 与Control组比较,高浓度AngⅡ(10-mol/L)干预后p-c-Src表达增加(P＜0.01),Cx43表达降低(P＜0.05),Cx43传导距离缩短;SU6656和Ang-(1-7)预处理可抑制AngⅡ诱导的c-Src激活,Cx43表达增加(P＜0.05),Cx43传导距离增加;同时Ang-(1-7)预处理明显地促进SHP-1的表达增加(P＜0.05).与AngⅡ+Ang-(1-7)组比较,AngⅡ+Ang-(1-7)+SSG组SHP-1表达降低(P＜0.05),p-c-Src表达增加(P＜0.01),细胞Cx43表达降低(P＜0.05),Cx43传导距离缩短.结论 Ang-(1-7)通过增加SHP-1表达从而抑制c-Src活性,进而发挥对AngⅡ的拮抗作用,使Cx43表达上升并改善缝隙连接功能.
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γ射线诱发的白血病小鼠骨髓细胞SHP-1 mRNA及蛋白表达变化的研究
目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1 mRNA及蛋白表达在γ射线体外诱发的白血病小鼠骨髓细胞中的变化情况.方法实验分为白血病组、辐射未癌变组及对照组,应用荧光定量PCR法及Western blot法分别检测各组骨髓有核细胞中SHP-1 mRNA及蛋白表达的变化情况.结果白血病组SHP-1 mRNA含量为(5.26±2.14),明显高于辐射未癌变组(3.68±1.27)及对照组(2.95±1.09),(P《0.01);白血病组SHP-1蛋白表达量(光密度)为(5.378±2.905),明显高于对照组(1.852±0.711)及辐射未癌变组(1.559±0.506).结论在γ射线诱发的白血病小鼠骨髓细胞中,SHP-1 mRNA含量及蛋白表达量均明显增强.
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细胞因子信号传导JAK/STAT途径的调控
JAK/STAT途径是多数细胞因子的信号传导途径,是阐明细胞因子生物学功能的分子基础.近这条途径的调控机制逐渐被认识并引起人们的广泛关注.,SOCS家族、PIAS家族、SHP-1、STATs天然突变体、去c-末端JAKs、AG-490、CAMP、钙离子载体霉素等多种因素参与了该途径的调控.
关键词： JAK/STAT信号传导途径 负调控 SOCS家族 PIAS家族 SHP-1 -
弥漫大B细胞淋巴瘤SHP-1、p15和SOCS-1基因异常甲基化的研究
目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者SHP-1 、p15和SOCS-1基因异常甲基化在DLBCL的发生、发展中的意义.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)技术研究DLBCL淋巴组织标本中SHP-1、p15和SOCS-1基因启动子区域CpG岛的甲基化状态.结果 50例DLBCL患者中有48例(96％)存在SHP-1基因启动子区甲基化,26例(52％)有p15基因启动子区域甲基化,28例(56％)有SOCS-1基因启动子区的甲基化,而15例对照(淋巴结良性反应性增生)组则无SHP-1、p15和SOCS-1基因的甲基化现象.结论 在DLBCL患者中存在的SHP-1、p15和SOCS-1基因启动子区甲基化现象,初步表明SHP-1、p15和SOCS-1基因甲基化在DLBCL的发生、发展中具有一定作用,并对DLBCL的去甲基化治疗提供了理论依据.
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丙戊酸钠联合三氧化二砷对K562细胞增殖的抑制及表达影响
目的 探讨丙戊酸钠联合三氧化二砷对K562细胞增殖的抑制及表达影响,以及联合丙戊酸钠(VPA)后作用是否增强.方法 细胞传代培养,WST-1检测药物作用对细胞增殖的影响,找出佳作用浓度及时间;RT-PCR法及Western blot法检测SHP-1 mRNA和蛋白的表达.结果 不同浓度As2O3对K562细胞的增殖均有明显抑制作用,并且有时间和剂量依赖性.VPA组蛋白表达弱,As2O3组及As2O3+VPA组作用后蛋白表达明显.结论 As2O3对K562细胞增殖有明显抑制作用,使SHP-1基因表达增强,且As2O3与VPA联合后较同浓度的单药作用明显增强.
