首页 > 文献资料
-
5-杂氮-2'-脱氧胞苷对人HL-60细胞DAPK基因表达的影响
本研究旨在观察甲基化转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-2dC)对人急性髓系白血病细胞株HL-60凋亡及死亡相关蛋白激酶(death associated protein kinase,DAPK)基因表达的影响,探讨5-aza-2dC治疗AML的作用机制.不同浓度的5-aza-2dC处理HL-60细胞后,采用瑞式染色法观察5-aza-2dC对HL-60细胞形态的影响,流式细胞术检测5-aza-2dC对HL-60细胞凋亡的影响,RT-PCR法检测5-aza-2dC对HL-60细胞DAPK基因表达的影响.结果表明,①5-aza-2dC呈浓度依赖性地促进HL-60细胞凋亡;②经5-aza-2dC处理后,HL-60细胞DAPK基因表达水平较处理前呈剂量依赖性地增加.结论:随着5-aza-2dC作用浓度的增加,HL-60细胞的凋亡率及DAPK基因表达水平均逐渐增加,提示DAPK基因可能是5-aza-2dC诱导HL-60细胞凋亡的调控基因之一.
关键词： HL-60细胞 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 凋亡 DAPK基因 -
5-杂氮-2'-脱氧胞苷诱导裸鼠HepG2种植瘤细胞T-cadherin的表达及其对种植瘤的抑制作用
目的: 探讨去甲基化药物5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)在裸鼠体内诱导HepG2细胞T-cadherin的表达,及其对HepG2种植瘤生长的抑制作用.方法:皮下接种法建立HepG2细胞裸鼠种植瘤模型,随机分为实验组(11只)和对照组(10只).实验组裸鼠给予5-Aza-CdR注射,对照组裸鼠注射等量PBS.4wk后处死裸鼠,观察种植瘤的生长情况,用RT-PCR技术及免疫组织化学技术检测T-cadherin mRNA及蛋白的表达.结果:用药4wk后,实验组肿瘤组织的T-cadherin mRNA的表达水平显著高于对照组(t=6.613, P<0.05);对照组HepG2细胞几乎检测不到T-cadherin蛋白表达,而实验组裸鼠种植瘤细胞膜上可检测到T-cadherin蛋白表达;实验组肿瘤的平均体积明显小于对照组肿瘤平均体积(t=2.337,P=0.025).结论:5-Aza-CdR能诱导裸鼠皮下种植HepG2瘤细胞的T-cadherin表达,抑制HepG2种植瘤的生长,其机制可能为5-Aza-CdR使甲基化的T-cadherin启动子去甲基化,恢复T-cadherin的表达,从而抑制HepG2种植瘤生长.
关键词： HepG2细胞 裸鼠 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 T-cadherin 甲基化 -
5-杂氮-2'-脱氧胞苷诱导肝癌细胞株癌/睾丸抗原基因表达的研究
目的探讨使用5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5DC)诱导肝癌细胞株癌/睾丸抗原(cancer/testis,CT)基因的可行性.方法使用5DC处理前后,用RT-PCR方法检测肝癌细胞株QGY-7703、HepG2215、HepG2、SMMC-7721、HLE、BEL-7402、Huh7、BEL-7404中CT抗原基因MAGE-A1、-A3、-A6和-A10表达;Southern杂交检测细胞株基因组DNA去甲基化状态.结果CT抗原家族中MAGE-A1在QGY7703、SMMC7721、BEL7402、HLE、BEL7404中表达,MAGE-A3在HepG2、HLE中表达,MAGE-A4和MAGE-A10表达均为阴性,而MAGE-A6表达均为阳性;使用5DC后,MAGE-A4在QGY7703、HLE中出现表达,MAGE-A10在HepG2和HLE出现表达.去甲基化后基因组DNA相对去甲基化程度明显升高(f=-4.966,P<0.01).结论尽管5DC使肝癌细胞株基因组去甲基化程度明显升高,但不能有效地诱导CT抗原基因广泛表达.
-
5-杂氮-2'-脱氧胞苷抑制人喉癌细胞生长机制的研究
目的观察5-杂氮-2'-脱氧胞苷对Hep-2人喉癌细胞系生长增殖的影响,探讨其抗肿瘤效应及可能的机制.方法用5-杂氮-2'-脱氧胞苷对Hep-2人喉癌细胞系处理后,甲基化特异性PCR(MSP),T-A克隆测序分析死亡相关蛋白激酶(death-associ-ated protein kinase,DAPK)基因甲基化状态,逆转录聚合酶链反应、免疫细胞化学、流式细胞仪检测用药前后DAPKmRNA和蛋白的表达情况及细胞凋亡和周期的变化.结果未经5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理的Hep-2细胞中DAPK基因CpG岛甲基化,且DAPKmRNA不表达.经5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理后,甲基化的DAPK基因部分去甲基化,大于或等于10-7mol·L-1组的细胞中有DAPK mRNA表达,且表达随浓度增高而增强.免疫细胞化学染色显示,经处理后的肿瘤细胞DAPK蛋白表达呈阳性,而对照组不表达.流式分析结果为处理后凋亡率明显增加,且G1期细胞增加,G2/M期减少.结论5-杂氮-2'-脱氧胞苷能抑制喉癌细胞的生长和增殖,可能的机制是其能使因甲基化而失活的DAPK基因再转录,诱导该基因的重新表达.
-
5-杂氮-2'-脱氧胞苷对肺癌细胞小分子RNA let-7a-2表达的影响
目的:观察去甲基化药物对人肺癌A549和H1299细胞增殖、凋亡以及小分子RNA let-7a-2表达的影响.方法:以不同浓度的5-杂氮-2'-脱氧胞苷(DAC)对肺癌细胞进行处理后,CCK-8检测对细胞增殖的影响,AnnexinV-PI双染法检测对细胞凋亡的影响,qRT-PCR对let-7a-2的表达进行检测.结果:A549和H1299细胞经不同浓度DAC处理后细胞增殖受到明显抑制,以60μM浓度DAC处理后d5抑制率分别为(40.80±6.50)％和(47.24±4.95)％(均P＜0.05),同时细胞呈现显著性早期凋亡,凋亡百分比分别达(64.58±4.21)和(59.61±5.69)(均P＜0.05).20μM、40μM、60μM DAC处理后let-7a-2的表达量在A549中分别为(10.86±0.30)、(5.02±2.83)、(17.79±1.95),比对照组(1.12±0.24)显著上调;在H1299中分别为(55.13±5.69)、(35.67±4.13)、(14.94±2.46),比对照组(1.31±0.56)显著上调.结论:DAC处理可抑制肺癌A549和H1299细胞增殖、促进细胞凋亡,上调let-7a-2的表达,let-7a-2基因调控区域超甲基化可能是其在肺癌细胞中表达异常的机制之一.
关键词： 肺癌 去甲基化药物 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 let-7a-2 -
ATRA对三阴性乳腺癌细胞CDH1表达的影响
目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系MDA-MB-231的CDH1表达的影响及可能机制.方法 实验分空白对照组(control)、5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)组及ATRA组,分别用甲基化特异性PCR(MSP)、逆转录PCR(RT-PCR)方法检测MDA-MB-231细胞CDH1基因启动子区甲基化状态及mRNA表达情况.结果 空白对照组MDA-MB-231细胞CDH1基因启动子区处于甲基化状态,CDH1mRNA无表达,而5-Aza-CdR组与ATRA组CDH1基因启动子区处于非甲基化状态,CDH1 mRNA表达明显上调,且两组之间无明显差别.结论 ATRA能够通过去甲基化机制上调MDA-MB-231细胞CDH1基因的表达.
关键词： 全反式维甲酸 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 CDH1 三阴性乳腺癌 -
5-杂氮-2'-脱氧胞苷抑制人喉癌裸鼠移植瘤的机制探讨
目的:探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷对Hep-2人喉癌裸鼠移植瘤生长的影响,寻找喉癌治疗的新靶点.方法:建立喉癌裸鼠移植瘤模型,用5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理裸鼠,观察移植瘤的生长情况并绘制其生长曲线.用RT-PCR和免疫组织化学技术检测死亡相关蛋白激酶(Death-associated protein kinase DAPK)基因mRNA及蛋白表达的变化.结果:5-杂氮-2'-脱氧胞苷对人喉癌裸鼠移植瘤处理后用药组和对照组之间裸鼠的体重无明显差异(t=0.011,P＞0.05),而移植瘤的体积用药组较对照组明显减小,统计学差异有显著性(t=10.11,P＞0.01).在喉癌移植瘤组织中,对照组DAPK均不表达,而用药组出现表达.结论:5-杂氮-2'-脱氧胞苷在体内能使因甲基化而失活的抑癌基因再转录,诱导其表达,进而抑制喉癌移植瘤的生长.
关键词： Hep-2细胞系 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 裸鼠模型 死亡相关蛋白激酶 -
5-杂氮-2'-脱氧胞苷对鼻咽癌细胞株细胞周期及14-3-3σ基因甲基化的影响
目的 探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、5-8F、6-10B增殖、凋亡和细胞周期分布的影响,并进一步分析5-aza-2dC处理对14-3-3σ基因甲基化状态的影响. 方法 用不同浓度5-aza-2dC处理鼻咽癌细胞,MTT实验观察细胞生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡比例,用甲基化特异性PCR(MSP)分析14-3-3σ基因甲基化状态.结果 5-aza-2dC对4株细胞均有生长抑制作用,CNE1和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F.5-aza-2dC处理使4株细胞凋亡率出现剂量依赖性的增加,CNE1和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F.经5-aza-2dC处理后,CNE1、CNE2、6-10B细胞出现不同程度的G,0/G,1期阻滞,而5-8F表现为G0/G,1期和G,2/M期双期阻滞.不经5-aza-2dC处理情况下4株细胞14-3-3σ基因均存在不同程度的甲基化,5-aza-2dC处理能够使14-3-3σ基因去甲基化. 结论 5-aza-2dC具有抗鼻咽癌作用,抑制作用强弱可能与鼻咽癌分化程度和转移潜能有一定关系,其机制可能与使14-3-3σ等抑瘤基因去甲基化有关.
关键词： 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 鼻咽肿瘤 细胞周期 凋亡 甲基化 -
5-杂氮-2'-脱氧胞苷对宫颈癌细胞生长及其甲基化转移酶和甲基结合蛋白DNA转录的影响
目的:检测5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的宫颈癌HeLa细胞中DNA甲基化转移酶(DNMT)及甲基CpG结合蛋白(MeCP)的DNA转录水平的影响,探索其对肿瘤细胞生长的抑制作用.方法:5-Aza-CdR(终浓度为5.0umol·L-1)与肿瘤细胞共培养72 h后,用PI染色及流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞的细胞周期;利用qRT-PCR鉴定药物组与空白组细胞DNMT及MeCP的mRNA浓度.吖啶橙(AO)细胞荧光染色法鉴定药物组与空白组细胞形态学上的差异及凋亡的程度.结果:FCM检测结果显示两组肿瘤细胞的细胞周期呈现明显差异,并且药物组细胞表现为G0/G1期阻滞,sub-G1峰明显.AO染色表明药物组细胞有明显凋亡迹象且伴随少量的细胞坏死现象.qRT-PCR结果显示,空白对照组和药物组中均有一定量DNMT及MeCP的mRNA产物,但其mRNA表达量无显著差异(P>0.05).结论:5-Aza-CdR能够诱导体外培养的HeLa肿瘤细胞凋亡,而对于肿瘤细胞中甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的DNA转录无显著的影响.
关键词： 子宫颈癌 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 甲基化转移酶 甲基CpG结合蛋白 凋亡 -
5-杂氮-2'-脱氧胞苷对前列腺癌PC3细胞系生长以及抑癌基因GSTP1、RASSF1A转录的影响
目的:观察DNA去甲基化药物5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对前列腺癌细胞株PC3抑癌基因GSTP1和RASSF1A 转录改变以及细胞增殖活性的影响.方法:用不同浓度5-aza-CdR(2、5、10 μmol/L)处理前列腺癌细胞株PC3,利用甲基化特异性PCR(MSP)法检测用药前PC3细胞株GSTP1、RASSF1A启动子甲基化状态;采用实时荧光定量RT-PCR法检测用药过程中GSTP1和RASSF1A mRNA转录改变;用MTT法和流式细胞术检测用药前后PC3肿瘤细胞增殖活性改变.结果: GSTP1、RASSF1A启动子区域出现甲基化现象.与对照组相比,药物组培养24 h后 GSTP1和RASSF1A mRNA表达未发生明显改变;培养48 h后5、10 μmol/L药物组GSTP1和RASSF1A mRNA表达出现上调;72 h后各浓度药物组均检测出两基因mRNA表达升高(P<0.05).药物组培养24和48 h未出现明显的细胞增殖抑制现象和细胞周期改变;培养72 h后,药物组细胞增殖抑制显著(P<0.05),细胞周期改变明显(P<0.05),阻滞于G0/G1期.结论:GSTP1和RASSF1A基因在PC3前列腺癌细胞系中的失表达可能与其启动子CpG岛高甲基化有关;5-aza-CdR能在一定程度上抑制PC3细胞增殖,干扰细胞周期,提高GSTP1和RASSF1A的转录水平.
-
胃癌中IRX1的表达与启动子区甲基化的相关性
目的 探讨胃癌中同源盒基因IRX1的表达与启动子区甲基化修饰之间的关系.方法 生物信息学软件分析IRX1基因启动子区;RT-PCR检测胃癌细胞株及手术切除胃癌组织IRX1基因mRNA表达水平;MSP及BSP法检测启动子区甲基化状态;检测去甲基化试剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷的干预对胃癌细胞IRX1基因表达的逆转效应.结果 经生物信息学预测IRX1基因转录起始点上游启动子区富含CpG岛;胃癌细胞株及胃癌组织IRX1基因表达有不同程度下调;MSP及BSP检测显示所有胃癌细胞株启动子区呈高甲基化状态;经5-Aza-CdR处理的细胞株IRX1基因的表达有不同程度上调.结论 胃癌中IRX1基因的表达下调与启动子区甲基化修饰有一定关系,为探讨IRX1基因作为去甲基化治疗靶点的可能性提供了实验数据.
关键词： IRX1 同源盒基因 胃癌 甲基化 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 -
5-杂氮-2'-脱氧胞苷调控HOXA10对子宫内膜异位症患者在位内膜容受性的影响
目的:研究甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'deoxycytidine,AZA)对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜容受性的影响.方法:体外原代培养内异症子宫内膜上皮细胞,AZA作用24 h后,亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite Sequencing)检测HOXA10的甲基化水平的变化;实时定量PCR和Western Blot方法检测HOXA的转录和蛋白水平的变化.结果:AZA作用24h后,子宫内膜上皮细胞HOXA10的甲基化水平下降;同时HOXA10的表达增加.结论:AZA可通过抑制内异症子宫内膜上皮细胞中HOXA10的高甲基化,上调HOXA10的表达,从而促进子宫内膜容受性的建立.
关键词： 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 子宫内膜异位症 子宫内膜容受性 HOXA10 甲基化 -
5-杂氮-2'-脱氧胞苷对卵巢癌HO8910细胞WWOX基因甲基化状态及其生物学行为的影响
目的:检测卵巢癌HO8910细胞株中WWOX基因甲基化状态,探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对WWOX基因甲基化状态及其对HO8910细胞株生物学行为的影响.方法:将HO8910细胞分为对照组与5-Aza-CdR处理组,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测两组细胞WWOX基因甲基化状态；蛋白印迹法检测两组细胞WWOX蛋白的表达.体外实验:分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、体外侵袭实验及流式细胞仪等分析5-Aza-CdR对HO8910细胞生物学活性的影响.体内实验:用处理前后的HO8910细胞株分别接种于BALB/c裸鼠腹腔,观察两组裸鼠的生存时间及肿瘤生长情况,并采用Western blot分别检测两组裸鼠肿瘤组织中WWOX蛋白的表达.结果:(1) WWOX基因在HO8910细胞株中呈甲基化状态,经5-Aza-CdR处理后呈去甲基化状态.(2) Western blot检测结果显示,5-Aza-CdR处理组WWOX蛋白表达水平高于对照组(0.71±0.023 vs 0.13±0.012,P＜0.05).(3)5-Aza-CdR处理组各时间点的细胞增殖能力较对照组下降(P＜0.05).(4)体外侵袭实验显示,5-Aza-CdR处理组穿膜细胞数较对照组少(92.2±4.7 vs 172.1 ±5.2,P＜0.05).(5)流式细胞检测显示5-Aza-CdR处理组中67.13％的细胞阻滞于G0/G1期,较对照组高(21.52％,P＜0.05).(6)裸鼠体内实验表明,5-Aza-CdR处理组裸鼠体内的致瘤能力明显低于对照组,且5-Aza-CdR处理组WWOX蛋白表达水平明显高于对照组(0.65±0.031 vs 0.25±0.047,P＜0.05).结论:5-Aza-CdR能逆转HO8910细胞WWOX基因甲基化状态,并抑制细胞增殖.
关键词： 卵巢肿瘤 WWOX基因 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 小鼠 裸 -
5-氮-2'-脱氧胞苷对RPMI8226细胞增殖、凋亡及SOCS-1基因表达的影响
目的 研究DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226生物学活性以及SOCS-1基因表达的影响.方法 不同浓度5-Aza-CdR(0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 μmol/L)对RPMI8226细胞干预后,采用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的改变:Real-time PCR法检测各组细胞SOCS-1 mRNA的表达.结果 5-Aza-CdR对RPMI8226细胞的生长抑制有明显的时间和剂量依赖性(P<0.05);流式检测结果显示,0.1、0.5、1.0.2.0、5.0 μmol/L 5-Aza-CdR作用于RPMI8226细胞72 h后,细胞凋亡率分别为(29.62±2.87)%、(39.98±2.53)%、(49.07±3.51)%、(60.15±4.54)%和(69.88±3.49)%,且呈剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比,5-Aza-CdR 处理 RPMI8226细胞72h后,细胞阻滞于G0/G1期;Real-time PCR结果显示,SOCS-1基因在RPMI8226细胞中微弱表达,5-Aza-CdR作用后,SOCS-1 mRNA表达水平呈剂量依赖性逐渐升高(P<0.05).结论 5-Aza-CdR显著抑制多发性骨髓瘤细胞RPMI8226增殖,可能与诱导SOCS-1基因去甲基化和SOCS-1再表达有关.
-
5-杂氮-2'-脱氧胞苷对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及机制
目的 观察5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌细胞(SW480)株增殖凋亡的影响并探讨其机制.方法 以2.5、5.0、10.0μmol/L的5-Aza-CdR作用于SW480细胞72 h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率；甲基化测序聚合酶链反应(BSP)检测Disable-2 (DAB2)胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG)岛的甲基化状态；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测DAB2mRNA的表达；激光共聚焦显微镜检测DAB2蛋白的表达.结果 (1)5-Aza-CdR对SW480细胞生长有抑制作用,用药处理后细胞凋亡率分别为(12.89±0.59)％、(16.74±1.80)％、(33.02±3.30)％,(P＜0.01)；(2) 5-Aza-CdR处理前甲基化程度为89.09％,处理后依次为70.00％、55.45％、10.91％,启动子甲基化水平明显降低(P＜0.01)；(3)5-Aza-CdR处理前RT-PCR可以少量扩增出DAB2 mRNA特异性条带(平均灰度比值为0.266±0.013),5-Aza-CdR处理后可见DAB2 mRNA转录水平增加,且mRNA水平与药物的浓度呈正相关,平均灰度比值2.5 μmol/L组为0.363±0.009,5.0 μmol/L组为0.490±0.021；10.0 μmol/L组为0.753±0.028(P＜0.01)；(4) 5-Aza-CdR处理前有少量DAB2蛋白表达于细胞质及细胞核中(荧光强度为:94.50±13.39),予以5-Aza-CdR处理之后DAB2的表达量增加(荧光强度为:123.75±15.19,P＜0.01).结论 5-Aza-CdR能诱导结肠癌SW480细胞株凋亡的作用,其机制可能是5-Aza-CdR能逆转SW480细胞DAB2启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达.
关键词： 结肠癌 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 甲基化 脱噬作用 -
5-杂氮-2'-脱氧胞苷对三阴性乳腺癌细胞肺转移的抑制作用
目的 探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞实验性肺转移的影响及其机制.方法 将 MDA-MB-231细胞分对照组与5-Aza-CdR处理组,分别通过半定量逆转录-聚合酶链反应(SqRT-PCR)与甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1)、CXC趋化因子受体4(CXCR4)基因的mRNA表达与启动子区甲基化状况.然后通过边缘尾静脉将2×105个细胞注射到每只BALB/C nu/nu裸鼠体内(每组5只),5周后,通过荧光定量RT-PCR(FqRT-PCR)检测裸鼠肺组织内目的基因HPRT mRNA丰度来确定癌细胞肺转移程度.结果 对照组与处理组细胞的BRMS1相对灰度值(IDV)分别为0与0.390±0.001,处理组BRMS1 mRNA表达明显上调(P＜0.05),5-Aza-CdR使BRMS1启动子区甲基化的CpG岛B完全去甲基化;CXCR4相对IDV分别为0.580±0.003与0.580±0.010,两组之间差异无统计学意义(P＞0.05),CXCR4启动子区CpG岛1的非甲基化状态亦无明显改变;接种对照组与处理组细胞的裸鼠肺脏HPRT、GAPDH的Ct值分别为:24.75±1.55、16.19±0.69与27.61±1.67、17.48±0.96,2-△△Ct=0.34,转移抑制率为66%,处理组裸鼠肺脏HPRT mRNA丰度低,转移的癌组织较少.结论 5-Aza-CdR通过去甲基化机制重新激活了肿瘤转移抑制基因BRMS1的表达,降低了TNBC MDA-MB-231细胞实验性肺转移的能力.
关键词： 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 甲基化 乳腺癌 转移 -
三氧化二砷联合5-杂氮-2'-脱氧胞苷对U937细胞SHP-1、JAK3、TYK2基因表达的影响
目的 探讨甲基化抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)联合三氧化二砷(As2O3)对白血病细胞株U937中JAK3、TYK2和造血细胞磷酸酶SHP-1表达水平的影响,并探讨它们在白血病发病中的作用.方法 5-aza-CdR、As2O3单用及联合处理U937细胞,5-aza-CdR浓度为0.5、l、2μmol/L,As2O3的浓度为1、2.5、5μmol/L,As2O3 1μmol/L+ 5-aza-CdR 0.5μmol/L、As2O32.5 μmol/L+ 5-aza-CdR l μmol/L、As2O3 35 μmol/L+ 5-aza-CdR 2 μmol/L及不加药物组,分别处理24、48、72 h后提取细胞总RNA,荧光实时定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RQ-PCR)检测JAK3、TYK2及SHP-1的表达.结果 As2O3和5-aza-CdR单独作用及两药合用时,SHP-1 mRNA在U937细胞中的表达呈剂量及时间依赖性,其表达逐渐升高;JAK3 mRNA的表达呈剂量及时间依赖性,其表达逐渐降低;TYK2mRNA的表达呈剂量及时间依赖性,其表达逐渐降低;SHP-1与JAK3、TYK2负相关,JAK3所受影响较TYK2更为显著.结论 (1)甲基化抑制剂5-aza-CdR和As2O3可使SHP-1表达升高,JAK3、TYK2表达降低,与浓度及作用时间有关.(2) SHP-1基因的重新表达与其发生去甲基化有关,对JAK/STAT通路有负调控作用.
关键词： 甲基化抑制剂 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 SHP-1 JAK3 TYK2 -
5-Aza-dC和TSA对人喉癌细胞系中CHFR基因启动子甲基化及mRNA表达水平的影响
目的:探讨5-杂氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-dC)和制霉菌素A(TSA)对人喉癌细胞系中CHFR基因启动子区甲基化与mRNA表达水平的影响.方法:采用荧光定量PCR技术和甲基化特异性PCR技术检测5-Aza-dC和TSA处理前后的Hep-2人喉癌细胞系基因CHFR启动子区甲基化与mRNA表达水平的变化.结果:在对照组Hep-2人喉癌细胞系中CHFR基因启动子区显示DNA甲基化,用5-Aza-dC作用后DNA甲基化程度明显减弱,mRNA表达量上调(1.75±0.21)；用TSA作用后DNA甲基化程度和mRNA表达量(1.05±0.13)无明显变化.联合使用5-Aza-dC和TSA后DNA甲基化程度明显减弱,mRNA表达量明显上调(2.15±0.18).结论:CHFR基因启动子区DNA甲基化在喉癌的发生、发展中是一个频发事件,是导致其mRNA表达下调的主要原因,5-Aza-dC单独应用和联合TSA能够逆转DNA甲基化状态,从而调控其基因表达,为临床使用药物治疗喉癌提供了新思路.
关键词： 喉肿瘤 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 制霉菌素A Chfr基因 DNA甲基化 -
5-杂氮-2'-脱氧胞苷抑制人鼻咽癌CNE细胞生长的机制
目的 探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制人鼻咽癌CNE细胞系生长增殖的机制,寻找鼻咽癌治疗的新靶点.方法 用5-Aza-CdR处理人鼻咽癌CNE细胞,应用MTT试验观察不同浓度的5-Aza-CdR对癌细胞生长增殖的影响.用甲基化特异性PCR(MSP)分析死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因甲基化状态;逆转录聚合酶链反应、免疫细胞化学、流式细胞仪检测用药前后DAPK mRNA、蛋白的表达情况及细胞凋亡和细胞周期的变化.结果 从CNE细胞生长曲线知各浓度的5-Aza-CdR对细胞生长均有抑制作用.未经5-Aza-CdR处理的CNE细胞中DAPK基因CpG岛过甲基化,且DAPK mRNA不表达.经5-Aza-CdR处理后,甲基化的DAPK基因部分去甲基化,用药组的细胞中均有DAPK mRNA表达,且表达随药物浓度增高而增强.免疫细胞化学结果显示,经药物处理后的CNE细胞中DAPK蛋白表达呈阳性,而对照组不表达.流式细胞分析结果显示,药物处理后细胞凋亡率明显增加,且G0/G1期细胞增加,G2/M期减少.结论 5-Aza-CdR对体外培养的鼻咽癌细胞生长增殖的抑制作用,可能是由于其能使因甲基化而失活的DAPK基因再转录,诱导该基因重新表达的结果.
关键词： 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 死亡相关蛋白激酶 CNE细胞系 甲基化 -
5-杂氮-2'-脱氧胞苷联合苯丁酸钠对人结肠癌细胞HT29的抑制作用
日的:探讨DNA甲基化抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2dC)联合组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(SPB)的抗肿瘤效应及其机制.方法:将HT29细胞分为:对照组、SPB(1 mmol/L)处理组、5-aza-2dC(10 μmol/L)处理组、5-aza-2dC(10 μmol/L)+SPB(1 mmol/L)处理组.MTT法测定各处理组细胞的生存曲线,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率和细胞周期.结果:生长曲线结果提示:5-aza-2dC和SPB均能抑制HT29细胞的生长增殖,但差异不明显,联合应用后,细胞增殖得到明显抑制;流式细胞术检测细胞凋亡结果显示:SPB、5-aza-2dC、SPB+5-aza-2dC处理HT29后,细胞凋亡率分别为11.32%、20.25%和42.37%,三者比较有统计学差异(P<0.05);细胞周期分布检测显示:与对照组相比,单用SPB处理细胞,细胞周期分布变化不明显,5-aza-2dC处理细胞后,59.02%的细胞周期阻滞在G1期,而SPB联合5-aza-2dC后,S期细胞比例明显减少,G1期细胞比例可达73.7%,4组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:5-杂氮-2'-脱氧胞苷联合苯丁酸钠可通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞发挥抗肿瘤作用.
关键词： DNA甲基化 HT29 苯丁酸钠 5-杂氮-2'-脱氧胞苷
