茶多酚、茶色素对人肝癌细胞株HepG2端粒酶活性的影响

目的利用人肝癌细胞株HepG2观察茶多酚和茶色素对端粒酶活性的影响.方法采用TRAP-PCR-ELISA方法对HepG2细胞端粒酶活性进行定性和定量检测.结果 TRAP-PCR定性分析表明空白对照组、茶多酚组和茶色素组均端粒酶阳性;ELISA定量结果显示,50 mg/L和100 mg/L茶多酚组端粒酶活性(A450～690值)分别为1.56和1.46;50 mg/L和100 mg/L茶色素处理组为1.55和1.49,与空白对照组(A450～690值为2.11)相比,茶多酚和茶色素处理后HepG2细胞端粒酶活性有统计学意义.结论茶多酚和茶色素显著抑制HepG2细胞端粒酶活性,端粒酶活性可能是癌症化学预防研究的一个有用的生物标志物.

三种增塑剂对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响

目的观察对-壬基酚(NP)、双酚A(BisA)和邻苯二甲酸酯二丁酯(DBP)对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响.方法将MCF-7细胞在达尔克(DMEM)培养液(含10%小牛血清)中采用开放式单层贴壁培养,开始实验前将培养细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后改在无酚红DMEM(含5%胎牛血清)中培养继续4 d以耗尽其内源性雌激素.实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及3种受试物各4个剂量组,采用噻唑蓝(MTT)法、3H-TdR掺入法及流式细胞术对MCF-7细胞的增殖情况进行分析.结果与对照组相比,NP、BisA和DBP对细胞处理24 h,分别在96×10-7mol/L、96×10-7mol/L、96×10-6mol/L可促进MCF-7细胞增殖和细胞DNA合成,并推进G0/G1期细胞进入S期,提高细胞增殖指数;随着培养时间延长至96 h,3种化合物在较低浓度条件下也表现促进细胞增殖的效果.结论对-壬基酚、双酚A和邻苯二甲酸酯二丁酯可促进雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7的增殖,可能具有雌激素样作用.

环氧合酶-2在c9,t11-共轭亚油酸抑制肿瘤细胞转移中的作用

目的 研究c9,t11-共轭亚油酸(c9,t11-CLA)抑制人胃腺癌细胞(SGC-7901)转移作用与亚油酸代谢途径中限速酶环氧合酶-2(COX-2)的关系.方法 采用体外细胞培养方法,用COX-2的选择性抑制剂NS-398抑制SGC-7901细胞中COX-2的活性,再加入200、100、50和25 μmol/L浓度的c9,t11-CLA,利用重组基底膜侵袭实验、黏附实验、趋向运动实验检测c9,t11-CLA抑制肿瘤细胞转移的作用与COX-2的关系.结果 与NS-398组比较,NS-398+100 μmol/L c9,t11-CLA和NS-398+200 μmol/L c9,t11-CLA对SGC-7901细胞的侵袭有明显的抑制作用,穿过膜的细胞数分别为48.7±1.5(F=14.309,P=0.000)和43.7±4.0(F=19.005,P=0.000);NS-398+200 μmol/L c9,t11-CLA组能显著降低SGC-7901细胞对基质成分层粘连蛋白、纤维粘连蛋白和基质胶的黏附作用,所测吸光度值(A值)分别为0.052±0.011,0.058±0.008(F=3.063,P=0.021)和0.042±0.004(F=6.692,P=0.001;F=11.999,P=0.000);NS-398+200μmol/L c9,t11-CLA对SGC-7901细胞的趋向运动能力无明显的抑制作用(F=1.380,P=0.276),其中NS-398+200μmol/L c9,t11-CLA组细胞数为26.6±3.4.结论 c9,t11-CLA具有抑制SGC-7901细胞体外侵袭能力、黏附能力和趋向运动能力,这种抑制作用可能与COX-2途径有关.

顺铂对A549细胞DNA损伤修复生物标记物表达的影响

目的研究顺铂对肺癌A549细胞中切除修复鼠缺陷交叉互补基因2(ERCC2)蛋白、尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)、细胞增殖核抗原(PCNA)在肺癌和食管癌组织中表达水平的影响.方法通过彗星试验、RT-PCR和蛋白印记法研究3种生物标记物在顺铂处理和未处理A549细胞之间的表达水平.分为染毒前、染毒12 h、染毒24 h、停止染毒12 h、停止染毒24 h 5个不同时间段组,每组细胞数均为1×106个/ml.结果在低浓度顺铂(IC20剂量)作用下,染毒24 h内DNA损伤程度的变化与作用时间成正比,染毒12 h、24 h尾相(单位:mm)分别为5.02 ±0.68和7.22±0.53,与阴性对照的尾相2.73±0.29比较有明显差异 .停止染毒24 h尾相为3.64±0.70,与阴性对照比较无明显差异.ERCC2、UDG和PCNA的mRNA水平和蛋白质水平在细胞染毒后均明显升高,染毒24 h后mRNA水平分别为0.71±0.08、0.74±0.06和0.82±0.09,均明显高于阴性对照(分别为0.28±0.05、0.31±0.05和0.37±0.06);蛋白质表达水平分别为4.37±0.57、5.47±0.46和2.21±0.47,均明显高于阴性对照(分别为2.21±0.47、2.54±0.38和3.21±0.47).停止染毒后3种酶的mRNA分别为0.31±0.08、0.33±0.05和0.43±0.05,与阴性对照比较无明显差异;蛋白质水平分别为2.80±0.35、3.03±0.57和3.57±0.67,与阴性对照无明显差异.在停止染毒后24 h mRNA水平均逐渐恢复正常.蛋白质的改变则比mRNA缓慢.结论 DNA损伤对ERCC2、UDG和PCNA有快速正性调节作用,首先促进mRNA表达水平的增加,然后促进蛋白水平的增加.但这种调节作用时间不长,停止染毒后短时间内可恢复到染毒前水平.

共轭亚油酸对人乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的研究共轭亚油酸(c9,t11-CLA)对人乳腺癌细胞(MCF-7)生长的影响.方法采用细胞核分裂指数、细胞生长曲线、细胞集落形成试验、3H-TdR掺入试验和软琼脂培养方法,所设剂量(μmol/L)为25,50,100,200,以96%乙醇为溶剂对照.结果在细胞核分裂指数、细胞生长曲线和细胞集落形成试验中,可见c9,t11-CLA对MCF-7细胞生长有明显的抑制作用,其作用于MCF-7细胞8 d后的抑制率(%)分别为27.18、35.43、91.05和92.86;在3H-TdR掺入试验中,可见随着c9,t11-CLA剂量的增加,3H-TdR掺入到MCF-7细胞中明显的减少,与阴性对照组相比差异有显著性;由软琼脂培养试验结果可见,随着c9,t11-CLA剂量的增加,MCF-7细胞的集落形成逐渐降低,除了25 μmol/L剂量组外与阴性对照组相比差异有显著性.结论 c9,t11-CLA对MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用.

ERCC1反义RNA降低肺癌细胞对苯并(a)芘所致DNA损伤的修复能力

目的探讨核苷酸切除修复基因ERCC1在肺癌细胞修复苯并(a)芘所致DNA损伤中的作用.方法构建表达ERCC1反义RNA的重组质粒,Lipofectin转染肺癌A549细胞,潮霉素筛选出稳定转染的细胞克隆;噻唑蓝法检测24 h细胞生存力;Northern Blot分析细胞ERCC1基因mRNA表达水平;单细胞凝胶电泳技术检测DNA损伤程度,每组计算50个细胞损伤情况.结果筛选出表达ERCC1反义RNA的7个阳性克隆,其生长特性与亲本细胞差别无显著性;内源性mRNA表达水平不同程度降低,为亲本细胞的12%～86%;DNA损伤修复速度减慢,10μmol/L苯并(a)芘作用24 h后再孵育24 h,修复程度为亲本细胞的29%～71%;相关分析表明DNA损伤修复程度与ERCC1mRNA水平显著相关.结论ERCC1反义RNA降低肺癌细胞对苯并(a)芘所致DNA损伤的修复能力.

反义寡核苷酸体外抗乙型肝炎病毒研究

目的探讨反义寡核苷酸的体外抗病毒作用,为基因水平上防治乙型肝炎病毒(HBV)感染及HBV相关肝细胞癌的基因治疗提供实验依据.方法用PCR方法分别合成了互补于HBV X基因的翻译起始区、DR2区、ENⅡ区的反义寡核苷酸(AsON)及无关序列,其中针对ENⅡ设计的AsON,目前尚未见互补于该区段反义寡核苷酸的报道.以HBV DNA转染的HepG2.2.15细胞为靶细胞,ELISA法检测AsON作用前后细胞上清中的HBsAg和HBeAg分泌情况.结果当AsON的佳作用浓度为10 μmol/L时,3种反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg抑制率分别为:57%、60%、52%和56%、45%、56%,AsON 对HBV抗原的抑制作用具双峰现象.无关序列无明显抑制作用(<12%).利用锥虫蓝染色、四甲基偶氮唑盐比色试验观察到当AsON作用浓度为40 μmol/L时,对细胞代谢无明显毒副作用.结论反义寡核苷酸封闭HBV X基因区的关键区段,可有效抑制HBV抗原的分泌.

共轭亚油酸对肿瘤细胞亚油酸代谢途径中限速酶的影响

目的采用体外细胞培养方法,研究不同浓度c9,t11-共轭亚油酸(c9,t11-CLA)对人胃腺癌细胞(SGC-7901)中亚油酸代谢途径的限速酶的影响.方法用200、100、50和25 μmol/L浓度的c9,t11-CLA处理SGC-7901细胞24 h,四甲基偶氮唑盐实验检测c9,t11-CLA对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,采用逆转录聚合酶链反应检测c9,t11-CLA对SGC-7901细胞中亚油酸代谢途径的Δ6-脱氢酶、Δ5-脱氢酶、环氧合酶(COX)-1、COX-2和5-脂氧合酶(5-LOX)mRNA表达的影响.结果在200、100、50和25 μmol/L浓度时,c9,t11-CLA对SGC-7901增殖的抑制率分别为54.3%、20.5%、10.5%、2.93%;均可下调COX-2 mRNA的表达,上调Δ6-脱氢酶、COX-1 mRNA的表达,但对Δ5-脱氢酶和5-LOX mRNA表达的影响不显著.结论 c9,t11-CLA可通过调节Δ6-脱氢酶和COX的表达抑制肿瘤细胞的增殖,说明c9,t11-CLA通过影响亚油酸代谢途径中限速酶的基因表达而改变类二十碳烷酸的形成,推测c9,t11-CLA影响肿瘤细胞中亚油酸代谢途径的限速酶是其发挥抗癌活性的另一作用机制.

1800 MHz射频电磁场对人乳腺癌细胞基因表达的影响

目的了解GSM 1800 MHz射频电磁场对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞基因表达谱的影响,筛选射频电磁场的可能反应基因,判断射频电磁场对细胞功能的影响.方法体外传代培养的MCF-7细胞分为2组,分别接受GSM 1800 MHz射频电磁场辐照和假辐照24 h,辐照组细胞受比吸收率为2.0 W/kg或3.5 W/kg的射频电磁场间断辐照(5 min开、10 min关),辐照结束后,立即抽提细胞总RNA,用基因芯片进行全基因转录组水平分析,芯片实验数据采用MAS 5.0软件和DMT 3.0软件进行分析.采用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)验证基因芯片分析筛选到的候选差异表达基因.结果 MAS软件分析结果表明,MCF-7细胞受辐照后,有少量基因的表达水平发生变化.用DMT软件进行重复性和一致性分析后,在比吸收率为2.0 W/kg的射频电磁场辐照组,未找到100%一致变化的差异基因;在比吸收率为3.5 W/kg的射频电磁场辐照组,找到5个100%一致变化的候选差异基因,但定量RT-PCR结果未能验证基因芯片分析筛选到的差异基因.结论在本实验条件下,未能检测到GSM 1800 MHz射频电磁场明显影响MCF-7细胞的基因表达谱,提示所用的射频电磁场辐照不影响本研究中所用的MCF-7 细胞功能,或该MCF-7细胞对射频电磁场辐照反应性低.

1800 MHz射频电磁场对人乳腺癌细胞蛋白质表达的影响

目的采用高通量的蛋白质组学技术研究人乳腺癌细胞株MCF-7细胞受GSM 1800 MHz射频电磁场辐照后,其蛋白质表达谱的变化,以探索移动电话信号对细胞正常生理功能的可能影响.方法比吸收率为3.5 W/kg时,采用不同时间(1、3、6、12和24 h)和辐照模式(间断辐射和连续辐射)的GSM 1800 MHz射频电磁场处理MCF-7细胞后,直接抽提蛋白质,然后进行双向凝胶电泳.凝胶经银染后,使用PDQuest软件分析假辐照组与电磁场辐照组间的差异表达蛋白质斑点.每个实验重复3次.结果凝胶上平均可检测到1100个蛋白斑点.3.5 W/kg连续辐射6 h未发现差异点,其他暴露情况下均可检测到不同数量的差异蛋白,以3.5 W/kg间断辐射3 h和连续辐照12 h检测的差异蛋白点较多,分别为18个和7个.通过搜索SWISS-PROT蛋白数据库,对差异蛋白的类别和功能进行了初步推测,结果表明差异蛋白主要与生物分子的合成和调控、信号转导、DNA损伤修复等功能相关.结论 GSM 1800 MHz射频电磁场对MCF-7细胞蛋白质表达谱具有一定程度的影响,且依赖于暴露的强度、时间和模式,影响环节可能涉及多个生物学过程.

大豆异黄酮和玉米赤霉烯酮对卵巢癌细胞株PEO4增殖的影响

目的通过观察大豆异黄酮(genistein,GS)和玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对卵巢癌细胞(PEO4)增殖的影响探讨其雌激素效应.方法雌激素受体阳性卵巢癌细胞株PEO4在达克尔培养基(DMEM,含小牛血清10%)中采用开放式单层贴壁培养,于加受试物5 d前将细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后改在无酚红高糖DMEM(含活性碳-葡聚糖苷处理过的胎牛血清5%)中培养,实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照和2种受试物各4个剂量组,采用噻唑蓝法、3H-TdR掺入法及流式细胞术对PEO4细胞的增殖情况进行分析.结果与溶剂对照组相比较,96μmol/L GS对PEO4处理24 h,可明显抑制PEO4细胞增殖和细胞DNA合成,并将细胞周期阻滞在G2/M;随着培养时间延长至48 h,32 μmol/L GS也能明显抑制PEO4细胞增殖,在浓度低于8 μmol/L时,GS有促进细胞增殖的趋势.ZEA对PEO4增殖的影响与雌二醇类似,96 nmol/L ZEA对细胞处理24h可明显促进PEO4细胞增殖和细胞DNA合成,并将细胞周期由G0/G1向S期推进,提高细胞分裂增殖指数.结论ZEA具有较强的雌激素效应,在较低的浓度条件下(8 nmol/L,92 h)即可促进雌激素受体阳性细胞PEO4的增殖作用;GS对PEO4细胞的影响作用比较复杂,较低浓度的GS(＜10 nmol/L)促进细胞的增殖作用,而在高浓度的处理条件下则抑制细胞的增殖作用.这些资料提示高剂量的GS有抗卵巢癌的作用,而ZEA具有雌激素样效应.

毛细管胶束电动色谱测定基因组DNA甲基化水平

DNA甲基化作为表遗传学的重要研究内容,是哺乳动物表达调控的主要表遗传学形式.研究表明,DNA甲基化与肿瘤关系密切[1-2],全基因组DNA低甲基化是肿瘤细胞基本特征之一[3-4],在肿瘤的发生和发展中存在DNA甲基化水平和模式的混乱.DNA甲基化改变能否作为生物标志用于临床早期诊断已成为当前研究的热点.目前,用于DNA整体甲基化水平检测方法有多种,但能真正从定量的角度进行快速、精确分析的方法却很少.笔者采用毛细管胶束电动色谱(miceller electrokinetic capillary chromatography,MECC)法同时分离DNA酶解后5类单核苷酸(包括mdC),建立了一种快速检测基因组DNA整体甲基化水平的方法.

磁性氧化铁蛋白纳米颗粒在肿瘤组织中的定位和成像

近年来,应用纳米技术进行恶性肿瘤早期诊断与治疗的研究在世界范围内已全面展开,研究人员利用无机纳米材料,仿生合成了一种新型纳米肿瘤诊断试剂——铁蛋白纳米颗粒,它是由氧化铁纳米内核及铁蛋白外壳两部分组成的双功能纳米小体,蛋白外壳能够特异识别肿瘤细胞,氧化铁纳米内核能够催化底物使肿瘤显色,以此区分正常细胞和肿瘤细胞.

关于囊肿,你认识多少?

囊肿是一种良性疾病,它可以长在人体表面,也可以长在内脏里;囊肿就是长在体内某一脏器、囊状的良性包块,其内容物的性质是液态的.常见的囊肿有“肾囊肿”、“肝囊肿”、“单纯性的卵巢囊肿”和“巧克力囊肿”.肾囊肿又分为单纯的孤立性肾囊肿和多囊肾.囊肿和肿瘤是不同的.它可能长在人体表面,也可能长在内脏里.而肿瘤就是具有增生能力的肿瘤细胞所形成的.囊肿和肿瘤有本质区别.囊肿是一种良性疾病,一般都不会癌变.很多囊肿是先天遗传的,有的囊肿甚至终生不会被察觉.中医学认为此病由于气滞血瘀,湿浊缠绵,恶瘀内阻而形成积聚.因久病致气血不和,或情志失调,肝气郁结日久,致气血瘀滞,加之湿热稽留下焦,膀胱气化失司而得病.

鳖血保健真尤物

鳖,俗称甲鱼,在休眠时不吃、不喝、不动,仅保持微弱的心跳和血液循环,却能抵御任何病毒、细菌和肿瘤细胞的入侵,始终保持健康的机体和旺盛的精力.

让肿瘤疾病成为慢性病

正常情况下,人体的免疫系统对肿瘤细胞是起着监控作用的,一旦发现异常,就会启动免疫应答机制来消灭肿瘤细胞.肿瘤疾病从某种意义上讲也是一种慢性免疫疾病,肿瘤的发生可以解释为是人体免疫系统监控肿瘤的功能缺失,所以肿瘤发生了,这是肿瘤与患者的免疫系统长期斗争及调和的结果.

软硬兼施巧治癌

对付癌症,经典的西医治疗方法是寻找并破坏癌细胞,直到消灭后一个癌细胞,这看起来是一个不错的方法.手术切除肿瘤,放、化疗直接杀死肿瘤细胞的对策方法,我们把它叫做"硬对策".据西方科学家统计,约有45%的癌症患者可以通过"硬对策"而临床治愈,贡献率依次为手术22%,放疗18%,化疗及其它方法5%.对于曾经是"绝症"的癌症患者来说,这些已是了不起的成就了(据我们对上万病人的长期追踪观察,仅借助中医药,可使超过15%的癌症患者长期健康地活着,其中,有约4～5%的患者临床检查癌症消失,我们并不认为这是完全杀尽癌细胞的结果).即便如此,仍意味着还有多达40～50%的患者无法临床治愈.

警惕!春天癌症容易复发

春天是个美丽的季节,万物复苏,春暖花开.可是,就在这个生机勃勃的季节里,很多旧病痼疾也很容易复发,这其中就包括让人谈之色变的癌症.☆癌症患者春天需警惕中医讲,春生夏长,秋收冬藏.在春天这个生发的季节里,人体内的阳气会顺应自然呈现出勃发之势,体内循环系统功能自然也就会随之增强.与此同时,癌症患者体内的肿瘤细胞也会随之活跃起来,出现生长、增殖异常旺盛的现象,当肿瘤细胞的生长速度超出了临床治疗及免疫系统所能控制的速度时,就出现了癌症的复发、转移.另外,春天各种细菌、病毒的生长繁殖也很活跃,癌症患者的体质一般都比较虚弱,很容易遭到细菌病毒的侵袭引发疾病,导致患者的免疫功能进一步下降,这也为肿瘤的复发转移创造了条件.

要让生命更强大--肿瘤想像疗法

肿瘤想像疗法是运用大脑中的想像,以意识调动自身精神调节机制,提高机体免疫能力,杀灭肿瘤细胞的方法.想像疗法通常将自身的免疫机制想像为猎手的形像,而将治疗的癌症想像为被杀伤和消灭的靶子,通过一段反复的练习将想像中的杀灭过程转变为机体内在的调节机制,从而达到防治肿瘤的目的.

155 黄酮类化合物对MK2和C6肿瘤细胞的体外细胞毒活性