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羊肝酶解产物抑菌活性的酶解工艺优化
以羊肝为原料,采用胰蛋白酶水解,比较不同条件下酶解物的抑菌作用。结果表明,胰蛋白酶酶解物对大肠杆菌和金黄葡萄球菌均具有抑菌作用。通过对胰蛋白酶酶解条件的单因素和正交试验,得到佳工艺条件为酶解温度50℃,酶解时间7 h,酶用量4500 U/g,底物浓度为1:6,此时对大肠杆菌和金黄葡萄球菌抑菌效果均比较好。
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牛乳腺炎金黄葡萄球菌肠毒素B基因的克隆及序列分析
目的 克隆牛乳腺炎金黄葡萄球菌B(SEB)基因,并进行序列分析. 方法 根据Genlank公布的金黄葡萄球菌基因的全序列,利用生物学软件Primer5.0和Olig0 6.0设计1对特异性引物,扩增临床分离菌株的SEB基因片段.结果 扩增的基因片序列长度为466 bp,与标准菌株(CMCC26074)的SEB基因片段序列相似性为100%,与GenBank公布的金黄葡萄球菌菌株(AB479118.1)SEB基因序列相似性为99.93%. 结论 成功克隆出牛乳腺炎金黄葡萄球菌SEB基因,为建立相应的PCR快速检测牛乳SEB基因方法奠定了基础.
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抗金黄葡萄球菌的海洋细菌分离与分子鉴定
目的 为寻求新的抗金黄葡萄球菌局部和全身性感染的药物,从烟台近海海泥样品中筛选分离对金黄葡萄球菌有抑制作用的海洋细菌,并进行分子鉴定. 方法 采集海泥样品,采用稀释法和平板划线法获得纯培养,滤纸片法检测抗菌效果,16S rDNA测序和BLAST比对构建系统发育树. 结果 分离菌命名HY-1,为革兰染色阳性杆菌,产芽胞,分解淀粉,对金黄葡萄球菌具有较强的抑菌活性,而对大肠埃希菌和MRSA作用甚微;16S rDNA序列分析和同源性检索,HY-1与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌聚成一枝,同源性达100%. 结论 从形态、生理生化、16S rDNA序列同源性、系统发育学等方面分析,HY-1为蜡样芽胞杆菌,该菌对金黄葡萄球菌有抑制作用.
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左氧氟沙星对金黄葡萄球菌小RNA表达的影响
目的 研究左氧氟沙星对金黄葡萄球菌小RNA表达的影响及对细菌生长的作用. 方法 分别在不同抑菌浓度左氧氟沙星干扰情况下,培养金黄葡萄球菌实验株RN6390和RN1HG001,提取RNA,用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测小同菌株中RNAⅢ、RsaA、RsaE、RsaG、RsaH的含量,比较不同抑菌浓度左氧氟沙星作用下小RNA的表达差异. 结果 在MH培养液和BH培养液中左氧氟沙星对RN6390和RN1HG001的MIC均为0.25μg/ml.5种小RNA中,RNAⅢ的表达量多,RsaG少;当左氧氟沙星浓度≥1/4 MIC时,开始对金黄葡萄球菌的生长产生明显抑制作用,5种小RNA的表达均开始下降;在RN6390菌株,1/16 MIC和1/8 MIC的左氧氟沙星能促进RsaH表达. 结论 不同浓度左氧氟沙星对金黄葡萄球菌小RNA表达具有抑制或者促进作用,提示除了其本身具有的阻碍细菌DNA合成的功能外还可能影响细菌基因的转录.
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五种蒙药体外抑制牛乳中主要病原菌生长的效果
目的 观察大黄、黄芪、肉桂、蒲公英、丁香等5种蒙药对牛乳腺炎金黄葡萄球菌和无乳链球菌的体外抑菌效果.方法 分别将上述5种蒙药制成水煎剂,在体外对分离的致病菌进行抑菌试验.结果 大黄对金黄葡萄球菌和无乳链球菌的抑菌效果较好,黄芩、肉桂的抑菌效果次之,蒲公英和丁香的抑菌效果一般.结论 蒙药大黄、黄芪、肉桂、蒲公英、丁香对金黄葡萄球菌和无乳链球菌有抑菌作用.该实验为进一步筛选治疗牛乳腺炎的蒙药奠定了基础.
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牛乳腺炎金黄葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白基因的克隆及序列分析
目的 克隆牛乳腺炎金黄葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白基因,并进行序列分析. 方法 根据Gen-Bank上公布的金黄葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白(nEBPS)基因的全序列,利用生物学软件Primer5.0和Oligo6.0设计了1对特异性引物,采用PCR方法扩增临床分离株nEBPS基因片段. 结果 扩增的基因片段长度为720bp,与标准菌株(CMCC26074)的nEBPS基因片段序列相似性为100%,与GenBank上公布的金黄葡萄球菌菌株(U48826.2)nEBPS基因相似性为97.36%,核苷酸序列共有19处出现碱基突变. 结论 成功克隆出牛乳腺炎金黄葡萄球菌SEB基因,为建立快速检测牛乳中金黄葡萄球菌的PCR检测方法奠定了基础.
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2006~2010年长沙地区临床分离金黄葡萄球菌耐药性监测
目的 了解长沙地区2006~2010年临床分离金黄葡萄球菌的耐药特征,为临床合理应用抗菌药物提供依据.方法 收集长沙地区11家综合医院2006~2010年临床分离非重复金葡菌572株;纸片扩散法检测金葡菌对23种抗菌药物的敏感性,产色头孢菌素试验检测β-内酰胺酶,双纸片扩散法(D试验)检测诱导型克林霉素耐药;苯唑西林、头孢西丁纸片扩散法筛查耐甲氧西林金葡菌(MRSA);琼脂稀释法检测苯唑西林、头孢西丁和万古霉素的低抑菌浓度(MIC).结果 长沙地区11家医院门诊及住院病人分离的金黄葡萄球菌572株;在被检测的23种药物中,耐药率大于50%的达13种,其中,青霉素和氨苄西林耐药率高,均为96.85%;敏感率高于50%的有10种,以替考拉宁、万古霉素和利奈唑胺的敏感率高,均为100%.91.43%的金葡菌产β-内酰胺酶,59.79%的金葡菌表现为甲氧西林耐药.红霉素耐药而克林霉素敏感的58株金葡菌中有48为诱导型克林霉素耐药.苯唑西林、头孢西丁和万古霉素对金葡菌的MIC范围分别为0.125μg/ml~>25 6 μg/ml、2 μg/ml~>256 μg/ml和1 μg/ml~2 μg/ml.结论 长沙地区临床分离金葡菌多重耐药严重,对甲氧西林呈高水平耐药.临床应加强金葡菌耐药性监测,合理选用抗菌药物.
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NOD2在巨噬细胞对金黄葡萄球菌的炎性反应中的作用研究
目的 通过观察对比巨噬细胞NOD2基因沉默前后对金黄葡萄球菌感染的免疫应答,了解NOD2基因在金黄葡萄球菌感染巨噬细胞过程中所起的作用.方法 采用real-time RT-PCR的方法检测巨噬细胞NOD2基因在金黄葡萄球菌感染时的表达情况,合成针对NOD2的siRNA并干扰巨噬细胞.采用ELISA、流式细胞术等方法观察NOD2基因沉默对其在金黄葡萄球菌感染时的吞噬能力、细胞因子分泌水平、核转录因子(NF-κB)活化水平、细胞凋亡的影响.结果 金黄葡萄球菌感染巨噬细胞可引起细胞内NOD2表达增高.巨噬细胞NOD2基因沉默可导致其吞噬金黄葡萄球菌的能力降低,分泌细胞因子水平降低,NF-κB激活不足.金黄葡萄球菌可以引起巨噬细胞发生凋亡,凋亡率随时间延长而升高.结论 在金黄葡萄球菌感染巨噬细胞的过程中,位于细胞内的模式识别受体NOD2在病原体识别、信号转导、NF-κB激活中发挥关键作用.
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重组金黄葡萄球菌杀白细胞毒素体外对人肺泡巨噬细胞Toll样受体2表达的影响
金黄葡萄球菌杀白细胞毒素(panton-valentine leukocidin,PVL)是致病性金黄葡萄球菌产生的一种特异作用于中性粒细胞与单核/巨噬细胞的外毒素,是坏死性肺炎的重要毒力因子.我们用荧光定量PCR法观察重组PVL(rPVL)对人肺泡巨噬细胞Toll样受体(TLR)2表达的影响.
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金黄葡萄球菌中毒休克综合征毒素1的研究
目的 应用PCR技术,检测金黄葡萄球菌的mecA基因和染色体上编码中毒休克综合征毒素1(TSST-1)的tst基因,了解tst基因的携带情况.方法 用PCR法对我院2006年8月-2007年5月临床分离的84株金黄葡萄球菌mecA基因和tst基因进行体外扩增,建立快速、特异、灵敏的检测产TSST-1耐甲氧西林金黄葡萄球菌(MRSA)的方法.结果 成功的对金黄葡萄球菌mecA基因和tst基因进行了检测,并进行基因测序.在我院84株受检金黄葡萄球菌中,41株金黄葡萄球菌的mecA基因扩增呈阳性,阳性株占48.81%.16株tst基因阳性,阳性株占19.05%.10株金黄葡萄球菌同时扩增出mecA基因和tst基因,阳性株占24.39%(10/41).结论 tst基因阳性株在临床分离的耐甲氧西林金黄葡萄球菌中占有较高的比例,应予以足够重视.
关键词: 金黄葡萄球菌 中毒体克综合征毒素1 mecA基因 tst基因 -
耐甲氧西林的金黄葡萄球菌(MRSA)起源和分子进化的研究进展
金黄葡萄球菌(简称金葡菌)目前已经成为世界范围内引起人类感染性疾病的首要病原菌,可以引起从皮肤软组织感染到危急人类生命的一系列疾病,如心内膜炎、肺炎、毒素休克综合征(TSS)等[1].
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金黄葡萄球菌附属基因调节子与生物被膜及耐药的研究进展
近年来由于金黄葡萄球菌(Staphylococcus au-reus)感染率的增加、产生耐药速度的加快,以及其易于从急性感染向慢性、持久性、复发性感染转变等特点,金黄葡萄球菌(简称金葡菌)导致的感染已逐渐成为人们关注的焦点.其附属基因调节子(ac-cessory gene regulator,Agr)是一种重要的密度感应(quorum sensing,QS)信号系统和毒力因子调节系统,参与金葡菌的生物被膜(biofilm)形成和毒力因子(virulence factor)表达[1].本文就国外近年来有关金葡菌Agr与生物被膜和耐药性方面的研究进行综述.
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金黄葡萄球菌agrC结合小肽的筛选及初步鉴定
金黄葡萄球菌(简称金葡菌)附属基因调节系统(accessory gene regulatory system,agr)是重要的毒力因子调节系统和生物被膜形成调控系统.金葡菌几乎所有的胞外和表面毒力因子都在agr的控制之下~([1]),asrC是该系统中重要的信号转导分子.本研究通过噬菌体展示技术,以agrC蛋白为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行筛选,寻找能与agrC特异结合的多肽,将其作为靶向治疗金葡菌感染的载体,为临床研究金葡菌生物被膜形成的机制和研制新型靶向药物提供实验依据.
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使用环介导等温扩增技术快速检测金黄葡萄球菌的初步研究
目的 探索建立一种快速的、简单的检测金黄葡萄球菌的环介导等温基因扩增方法(100p-mediated isothermal amplification,LAMP).方法 针对金黄葡萄球菌clfA基因保守序列,根据LAMP方法的原理,设计LAMP检测反应体系和程序,对方法的特异性、灵敏度、重复性及初始拷贝数的对数值与反应时间(荧光信号值为1×10~4时对应的时间)之间的线性关系进行评估.结果 使用LAMP方法可以在0.5 h内获得检测结果,LAMP检测技术的灵敏度高出经典PCR技术10倍以上,与其他相关致病菌无交叉反应,平均试验间变异系数小于5%,反应时间与模板浓度有良好的线性关系(r~2=0.9501),LAMP法检测临床样本中金黄葡萄球菌的灵敏度为100%,特异度为94.4%,符合性为96.6%.结论 该方法快速、灵敏、特异、操作简单、设备要求低的特点适合基层医疗卫生机构和现场查验机构的广泛应用.
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谈医学生涯中部分难忘的病例(二十四)
病例60金黄葡萄球菌亚急性感染性心内膜炎,多种严重并发症,并发肺动脉细菌瘤破裂大咯血患者男性,27岁,砖瓦厂工人.发冷发热约3个月,入院前20余天加重,于1967-05-05收入我院.患者自当年2月11日起经常发热,有时发冷,服用汤药,3月20日至某医院就诊,检查有"肺炎",入院予服四环素,体温下降正常,食欲好转,10余天出院.出院后10余天又开始发冷发热,20余天前每日午夜1:0~2:00先觉发冷,继以发热,口渴.食欲减退,每日只能吃一两粥,进食即吐,有时为稀水便,或2~3天大便一次.两侧小腿前外侧疼痛,脚后跟痛,不能行走,前晚突觉右手中指指甲中点状疼痛.
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脉冲场电泳及脂肪酸气相色谱分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌同源性的比较
目的 分析脂肪酸气相色谱方法能否应用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的同源性分析.方法 收集2008年1月-2009年12月重症监护病房住院患者痰标本中分离的43株MRSA;分别运用脉冲场凝胶电泳和脂肪酸气相色谱进行同源性分析.结果 脉冲场凝胶电泳结果表明,43株菌有8个克隆;脂肪酸气相色谱分析结果,43株菌存在6个克隆,符合率仅32.56%.结论 在菌株同源性判断的准确性上与脉冲场电泳分型还有差距;脂肪酸气相色谱应用于MRSA的同源性分析仍需严谨.
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市售乙酰螺旋霉素片的质量考察
乙酰螺旋霉素(Acetylspiramycin)是螺旋霉素乙酰化衍生物,属半合成大环内酯抗生素.其毒性低,不良反应小,细菌对本品和其他抗生素之间没有交叉耐药性,较广泛有效地应用于金黄葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌和大肠杆菌等所致感染而引起的肺炎、支气管炎、尿路炎、中耳炎等炎症[1].乙酰螺旋霉素的制剂形式有片剂和胶囊剂.本文对本市市售7个厂家生产的24批样品进行了考察,具体分析了各样品的性状、乙酰螺旋霉素组分、溶出度和含量四个项目.
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达托霉素研究进展
临床上出现的耐甲西林金黄葡萄球菌(MRSA),耐万古霉素的肠球菌(VRE),糖肽类敏感的金葡菌(GISA)等是目前医院中传播率和致死率很高的病原体.其中的MRSA的强毒性、多重及高度耐药性、传播快等特征,一旦发生感染,病情就难以控制,因此,某些发达国家已将其与烈性传染病对等.这吸引着众多的医药研发机构投入到寻找具有抵抗这些耐药菌性质的化学物质的工作中去.
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穿琥宁注射液致过敏反应的探讨
穿琥宁(Potasslumdehrdrographolidesuccinas)注射液是从中药穿心莲叶中提取的穿心莲内酯经化学半合成的广谱抗病毒新药,化学成分为脱水穿心莲内酯琥珀酸单钾盐.具有明显的解热、抗炎、促进肾上腺皮质功能及镇静作用,可促进中性粒细胞、巨噬细胞的吞噬能力,对腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒有灭活作用,对金黄葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌等有明显的抑制作用.
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MRSA所致重症肺炎1例
目的:探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 肺炎的临床特征、预后及耐药情况,以期为预防医院内耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的发生和流行.方法:分析该院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床资料,对MRSA肺炎的易感因素、临床特征及MRSA耐药状况进行分析.结果:对于MRSA感染的肺炎患者,使用利奈唑胺能够有效抑制病原菌,并且不良反应少,治疗效果明显.结论:在治疗MRSA感染的社区获得性肺炎患者过程中,早期、正确使用抗生素能够提高患者治愈率.