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Toll样受体及其通路是中医药干预艾滋病免疫重建的可能作用靶点
Toll样受体(Toll like receptor,TLR)是广泛存在于昆虫、脊椎动物、植物中序列高度保守而古老的家族,与果蝇Toll蛋白同源的人类Toll样蛋白基因及其编码的TLR于1997年被首次发现[1].
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APOE对鼠RAW264.7细胞系内TLR信号通路的调节
目的 分析载脂蛋白E基因(APOE)对RAW264.7细胞内的TLR信号通路的调节作用.方法 克隆鼠APOE基因并建立表达APOE的RAW264.7稳定细胞系,使用各种Toll样受体(Toll-llke receptors,TLR)配体进行刺激,用报告基因化学发光检测转录因子活性,流式细胞仪检测细胞表面免疫分子.结果 在LPS刺激下,APOE基因抑制NF-κB的活性(P＜0.05),但对AP-1活性有促进作用(P0.05);在PolyI:C刺激下,APOE促进NF-κB和AP-1两者的活性(P0.05).在PGN刺激时,APOE明显上调B7-H1的表达,但对CD86、PD-1、CDllc及Gr-1的表达有抑制作用.结论 APOE基因可以调节TLR信号通路中NF-κB的活性,也可调节多个具有免疫调节功能的表面分子的表达,这样APOE可能具有免疫调节功能.
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TLR接头蛋白研究进展
Toll样受体(TLR)是近年来备受关注的一类病原体识别受体,能选择性地识别侵入机体的病原微生物所携带的病原相关分子模式(PAMPs),继而激活信号级联放大,产生免疫应答.目前研究发现,TLR识别相应配体后,由一类包含TLR结构域的接头蛋白MYD88、MAL、TRIF、TRAM和SARM通过MYD88依赖途径或MYD88非依赖/TRIF途径进行信号传导.
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Caco-2细胞TLR2和TLR4对微小隐孢子虫刺激信号的识别
目的 研究Caco-2细胞在微小隐孢子虫感染后TLRs的激活情况.方法 微小隐孢子虫子孢子刺激Caco-2细胞后,通过qRT-PCR检测TLRs mRNA的表达水平,采用Western blot检测NF-κB激活情况,采用ELISA检测IL-8的分泌量.同时,在微小隐孢子虫子孢子感染Caco-2细胞前加入TLR2或TLR4的抑制剂,检测NF-κB激活情况以及IL-8的分泌情况.结果 将Caco-2细胞感染微小隐孢子虫子孢子2h后,提取的RNA反转成cDNA,采用普通PCR进行检测,结果表明Caco-2能够表达所有10种人TLRs;qRT-PCR检测刺激组与对照组TLRs表达量,经spss分析,p＜0.01,刺激组TLR2和TLR4的表达量较对照组显著上调.对Caco-2细胞感染微小隐孢子虫子孢子1h后提取的细胞全蛋白进行Western blot,显示NF-κB激活水平较对照组显著上调;Caco-2细胞感染微小隐孢子虫子孢子12h后收集的细胞培养上清经ELISA检测,IL-8分泌量由刺激前的65.23 pg/ml显著上调至488.23 pg/ml.而在微小隐孢子虫子孢子感染Caco-2细胞前加入TLR2或TLR4的抑制剂,NF-κB激活水平和IL-8的分泌量较未加抑制剂感染组均显著下调,IL-8的分泌量分别降至204.02 pg/ml(抑制TLR2活性后)和142.79 pg/ml(抑制TLR4活性后).结论 Caco-2细胞的TLR2和TLR4参与对微小隐孢子虫子孢子的识别.
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重组金黄葡萄球菌杀白细胞毒素体外对人肺泡巨噬细胞Toll样受体2表达的影响
金黄葡萄球菌杀白细胞毒素(panton-valentine leukocidin,PVL)是致病性金黄葡萄球菌产生的一种特异作用于中性粒细胞与单核/巨噬细胞的外毒素,是坏死性肺炎的重要毒力因子.我们用荧光定量PCR法观察重组PVL(rPVL)对人肺泡巨噬细胞Toll样受体(TLR)2表达的影响.
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人外周血单个核细胞和肿瘤细胞中吲哚胺2,3双加氧酶mRNA水平的实时定量RT-PCR分析
目的 定量分析HIV-1感染者及高危人群外周血单个核细胞(PBMC)和人源肿瘤细胞在Toll样受体(TLR)配体刺激前后吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的表达水平.方法 建立人IDO mRNA的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法;检测HIV-1阳性个体和高危人群PBMC中IDO mRNA水平;检测TLR4、TLR7/8、TLR9配体刺激前后人黏膜(T84、Caco2、Hela)和白细胞(THP-1、MT-4)来源肿瘤细胞中IDO mRNA的水平.结果 HIV-1阳性个体PBMC中IDO mRNA水平较高危人群高(103.42拷贝IDO mRNA/106拷贝GAPDH mRNA);但也有部分高危人群个体的PBMC含有较高水平的IDO mRNA;肿瘤细胞在TLR配体刺激后IDO mRNA的水平可以显著升高,因细胞系和TLR配体种类不同而异.结论 本研究表明IDO可能在我国HIV-1感染者体内病毒免疫逃逸和肿瘤发生中起作用,值得深入研究.
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原发性脑出血患者外周血中TLR2的动态变化及意义
目的 探讨原发性脑出血患者外周血中(toll-like receptor 2,TLR2)的水平变化,从而评估患者病情严重程度及预后的临床价值.方法 选择2015年1月-2017年1月中南大学湘雅医学院附属海口医院收治的50例原发性脑出血患者(脑出血组)与同期健康体检者50例作为正常对照组,其中脑出血组均为发病2 h就诊,按发病距采血时间分为2 h组,24 h组,72 h组,7 d组,各组分别采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA).检测其外周血中(toll-like receptor 2,TLR2)的水平,同时记录各时间点的卒中量表(national institute of health stroke scale,NIHSS)及脑出血量,并于发病后90 d行改良RANKIN量表(modified rankin scale,mRS)评分采用Logistic回归分析TLR2的表达与预后的关系.结果 ①各实验组外周血清中TLR2的表达均高于对照组(t=7.147,t=3.979,t=8.894,t=5.378),差异均有统计学意义(P<0.05);72 h组TLR2的表达高于其他组,差异有统计学意义;②各时间点血清TLR2水平随着出血量的增多而增高;③各时间点血清TLR2水平随着神经功能缺损程度加重而增高,差异有统计学意义(P<0.05);④ROC曲线分析示,血清TLR2的截断点为148.85 ng/mL,曲线下面积为0.836,灵敏度91.7％,特异度为73.2％.Logistic回归分析显示TLR2的表达>148.85 ng/mL(OR=1.04,95％CI=0.62～1.78)、脑出血量(OR=1.67,95％CI=1.12～4.25)NIHSS评分(OR=0.78,95％CI=0.57-1.23)是原发性脑出血患者独立预后危险因素之一.结论 TLR2参与了脑出血的病理生理过程,与脑出血量、神经功能损伤密切相关,可作为评估脑出血患者预后的参考指标之一.
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S-HPM辐射对大鼠睾丸TLR表达的影响
目的 探讨S波段高功率微波(S band high power microwave,S-HPM)辐射对大鼠睾丸Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)表达的影响.方法 60只雄性Wistar大鼠经0 mW/cm2、30 mW/cm2和100 mW/cm2的S-HPM辐射20 min,通过TUNEL方法检测辐射后6h、3d、7d和14d睾丸生精细胞的凋亡.采用Real-time PCR和Western blotting检测辐射后睾丸组织TLR2、TLR3、TLR4和TLR5的mRNA和蛋白水平的表达变化.结果 经30 mW/cm2和100 mW/cm2的S-HPM辐射后,生精细胞凋亡率随时间延长而增加,100 mW/cm2组重于30 mW/cm2组(P＜0.05);S-HPM辐射后6h、3d和7d可见TLR2-5 mRNA表达不同程度的增加(P＜0.05,P＜0.01);辐射后7d可见TLR2-5蛋白表达的增加,100 mW/cm2与30 mW/cm2组相比无显著差异.结论 S-HPM辐射可致睾丸生精组织凋亡,TLR2-5的表达上调,参与了微波辐射致生精细胞凋亡的病理生理过程.
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Toll样受体在中耳炎发病中的作用及研究进展
Toll样受体（Toll-like receptors，TLR）是天然免疫的重要组成成分，在识别致病原和启动宿主防御反应方面发挥关键作用，中耳黏膜是抵抗致病原入侵的第一道防线，其识别并清除致病原的能力对于维持正常中耳功能至关重要，TLR介导的中耳局部免疫广泛参与中耳炎的病理生理过程。本文着重对TLR及其信号通路、TLR在中耳炎中的作用及机制等方面作一综述，以期为中耳炎性疾病的防治提供新思路。
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幽门螺杆菌的免疫反应及疫苗研究进展
Hp的自然免疫Hp可激活胃黏膜中多种天然防御体系,如同时激活Toll样受体(TLR)和Nod样受体(NLR),终会导致T辅助(Th)1细胞的强烈反应.Hp的不同菌体成分均能激活免疫细胞,其中Hp-中性粒细胞激活蛋白(NAP)是Hp激活TLR的重要因子.
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不同免疫方案建立实验性自身免疫性心肌炎小鼠模型的分析与评价
目的 探讨不同免疫方案建立Balb/c小鼠实验性自身免疫性心肌炎模型的优劣.方法 取6周龄雄性Balb/c小鼠,设计三种造模方案,并均设正常对照组和模型组.经不同方案免疫动物后行动物超声影像系统检测心功能,病理形态观察心肌炎症和纤维化,并计算心指数和脾指数,qRT-PCR检测小鼠心脏和脾脏组织TLR2、TLR4基因的表达水平.结果 与正常对照组相比,方案一中模型组小鼠心指数和脾指数无明显差异,超声检测中射血分数(EF)及各室壁厚度均无明显差异,心肌炎症改变不明显,纤维化不明显,TLR2、TLR4 mRNA的表达量无明显变化;方案二中模型组EF、左室舒张末内径(LVEDd)以及左室收缩末内径(LVEDs)明显降低,但舒张期室间隔厚度(IVSd)及收缩期室间隔厚度(IVSs)与对照组相比无统计学意义;病理形态观察可见心肌出现少量单核细胞浸润,心肌细胞肿胀,心肌间质及外膜可见少量的纤维化,同时脾指数明显增加,心脏与脾脏组织TLR2、TLR4的mRNA表达量无明显变化;方案三中模型组EF、LVEDd、LVEDs均明显降低,而IVSd及IVSs未见显著改变,病理学检测可见心肌大量炎细胞浸润,心肌细胞肿胀,心肌间质及外膜可见少量的纤维化,伴有脾指数的显著增加,心脏与脾脏组织TLR2 mRNA的表达量升高,而TLR4的mRNA表达量无明显变化.结论 与方案一模型组和方案二模型组相比,方案三模型组的造模效果更好,其免疫方案可用于自身免疫性心肌炎相关研究,具有较好的参考价值.
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真菌TLR配体增强TSLP表达及在获得性免疫中作用
胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是过敏反应及炎症反应中至关重要的细胞因子.TSLP可以通过TLRs和NF-kB信号通路,建立固有免疫和获得性之间的潜在联系.文中将探讨真菌TLR配体在TSLP表达中的作用,以及TSLP在获得性免疫中所扮演的角色,为抗真菌感染新药的研发提供靶点.
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紫癜方对ITP模型小鼠TGF-β1和TLR4表达的影响
目的:观察两种制备方法获取的紫癜方提取物对特发性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠TGF- β1和TLR4表达的影响.方法:免疫法建立ITP模型,设立正常组(C)、模型组(M)、醋酸泼尼松组(DC)、血美安组(X)、紫癜水提组(S)和紫癜醇提加水提组(G),采用RT-PCR和Western Blot检测各组小鼠脾TGF-β1和TLR4的表达.结果:与M组比较,DC组、X组、S组和G组脾TGF-β1和TLR4 mRNA和蛋白表达升高；与DC组比较,S组和G组脾TGF-β1 mRNA和蛋白表达升高,G组脾TLR4蛋白表达水平升高；与X组比较,S组和G组脾TGF-β1、TLR,mRNA和蛋白表达升高.结论:两种制备方法的紫癜方治疗ITP可能与上调脾组织TGF-β1和TLR4的表达有关.
关键词： 特发性血小板减少性紫癜 紫癜方 TGF-β1 TLR -
TLR模式识别受体在病毒性心肌炎固有免疫中的作用
固有免疫是生物种系在长期进化中逐渐形成的,存在于多细胞动物中,是抵抗外来入侵病原体的天然的、原始的、广泛的免疫屏障.
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云芝糖肽对乳腺癌患者PBMC中TLR信号通路MyD88途径的调节机制
目的:探讨云芝糖肽(PSP)对乳腺癌患者外周血单个核细胞(PBMC)中TLR信号通路MyD88途径的免疫调节机制.方法:体外分离乳腺癌患者(20例)PBMC并将每份细胞分为2组,设为对照组和PSP组,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测各组PBMC中TLR信号通路MyD88途径相关基因的表达情况并进行定量分析,同时使用Western blot检测信号末端蛋白的表达情况.结果:PSP能够显著提高TLR信号通路中TLR4、TLR5、TLR6、IRAK4、TRAF6、IRF5 、TAK1、IKKα、NF-κB、ERK、P38、JNK、AP-1、IL-1β和IL-8基因的相对表达量(P＜0.01),信号末端蛋白NF-κB、AP-1和IRF5均有上调.结论:PSP对乳腺癌患者PBMC中TLR通路的调控可能主要是通过MyD88途径促使终端效应因子的释放从而发挥其免疫调节作用.
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TLR4,TLR9 mRNA在P0 180-199诱导Lewis大鼠EAN模型中的动态表达及TWP对其的影响
目的:观察TLR4,TLR9 mRNA在P0 180-199诱导Lewis大鼠FAN模型中动态表达,以及雷公藤多甙对其的影响.方法:以周围神经髓鞘蛋白P0 180-199免疫Lewis大鼠,给予雷公藤多甙灌胃,TWP 40 mg/(kg·d)干预治疗.观察免疫后大鼠症状和组织病理学改变及TWP对其的影响,利用RT-PCR检测TLR4,TLR9的mRNA表达水平.结果IEAN组出现EAN行为学改变、炎性细胞浸润和髓鞘脱失,TLR4、TLR9的表达高于ETA组(P＜0.05).EAN+TWP组大鼠症状较FAN+NS组稍改善,炎性浸润减少,FAN+TWP组,TLR4和TLR9的表达低于EAN+NS组(P＜0.05).CFA组大鼠无症状,TLR4和TLR9的表达高于NS组(P＜0.05).结论:TLR4和TLR9可能参与EAN发病;雷公藤多甙可能通过抑制TLR4和TLR9的功能来减轻EAN的发病.
关键词： 实验自身免疫性神经炎 TLR 抗原呈递细胞 雷公藤多甙 -
自身免疫调节因子(AIRE)对TLRs表达的影响
目的:探讨AIRE对外周抗原提呈细胞(APC)TLRs表达的影响.方法:①脂质体法将pEGFPC3-AIRE质粒转染RAW264.7细胞.②共聚焦荧光显微镜观察转染效果.③RT-PCR法检测转染后不同时间点(36、48、72、96小时)RAW264.7细胞上AJRE及TLR1-9的表达水平.结果:①成功将质粒转入RAW264.7细胞,转染效率约为60%～70%.②建立了AIRE转染的RAW264.7细胞,确定转染后72小时为转染佳时间点.③AIRE转染后72小时,RAW264.7细胞上TLR1、4、5、9表达升高,TLR3、7、8表达降低,转染后96小时,TLR2、6表达升高.结论:AIRE可能通过调控APC上TLRs的表达,调节机体的免疫应答.通过对不同的TLRs的影响,来维持对病原微生物有效应答的同时,维持对自身组织的耐受状态.
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固有免疫中TLR和NOD的研究现状
固有免疫是机体防御感染性疾病的第一道防线.随着模式识别理论的提出和Toll样受体(TLR),细胞质内的核苷酸结合寡聚化结构城(NOD)的发现,为了解机体识别细菌和炎症防御机制方面开阔了视野.了解TLR和NOD的结构、表达、分布和信号途径,相互影响和与疾病的关系以及研究TLR和NOD的意义很重要.
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MAPKKK与TLR信号转导研究进展
Toll样受体(TLRs)是一类模式识别受体,该家族成员可选择性识别保守的微生物成分(如细菌脂多糖、病毒双链RNA)而启动天然免疫并调节获得性免疫,因此,TLR在宿主的免疫识别与免疫应答调控中具有重要作用.TLR可激活一系列的信号转导通路,其中包括丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)家族和NF-κB通路.MAPK信号通路的激活调控了一系列的细胞活动,在细胞的增殖、分化、凋亡等过程中起着重要的作用.越来越多的研究表明,中间分子MAPKKK(MAP3K)在不同的细胞或在不同的细胞外刺激下激活不同的MAPK信号途径.
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Toll样受体与脑缺血
脑缺血是临床上的常见病,目前已成为导致人类死亡的主要原因之一,脑缺血后存在一个十分复杂的病理生理过程,涉及很多机制.包括离子稳态的破坏,自由基的损伤作用,兴奋性氨基酸的毒性作用,免疫炎症作用和细凋亡等机制.TOLL样受体即TLR(Toll-like receptor TLR),是一类介导天然免疫的跨膜信号传递受体家族,在细胞活化信号传导中发挥着重要作用,已成为联系天然免疫和后天性免疫的桥梁.现在共发现了13中TOLL样体,近发现Toll样受体能诱发机体的固有免疫应答,介导炎症因子细胞因子的释放,与全身多种重要器官的缺血再灌注损伤有关,研究表明部分TOLL样受体在脑缺血损伤中发挥十分重要的作用.本文就TLR的结构、分布、配体、信号转导通路及其脑缺血中的作用综述如下.
