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番荔枝内酯体外抑制人胃癌细胞活性研究
目的 探究番荔枝内酯对人胃癌细胞体外活性的影响.方法 分别采用MTT实验、黏附实验和划痕实验考察番荔枝内酯对4种人胃癌细胞AGS、MKN45、BGC823和SGC7901生长活性、黏附能力和迁移能力的影响.结果 番荔枝内酯抑制人胃癌细胞AGS、MKN45、BGC823和SGC7901的生长并呈剂量依赖性,其IC50值分别为5.32、6.25、5.46、4.43 μg/mL;抑制人胃癌细胞黏附能力并呈剂量依赖性;抑制人胃癌细胞的迁移能力并呈剂量依赖性.结论 番荔枝内酯体外可以有效抑制人胃癌细胞的活性,有望被开发成治疗胃癌的候选药物.
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脂质体介导反义C-FLIP对BGC823细胞凋亡的影响
目的:探讨脂质体介导下c-FLIP(Cellular-FLICE Inhibitory Protein)反义寡核苷酸对胃癌细胞系BGC823的作用.方法:RT-PCR和Western Blot方法检测c-FLIPL、c-FLIPS的mRNA和蛋白的表达;MTT法检测细胞抑制率;原位末端标记法、流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测蛋白表达变化.结果:c-FLIP基因编码的2种mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中呈阳性表达.MTT显示脂质体介导反义寡核苷酸可显著抑制BGC823细胞增殖;反义寡核苷酸作用细胞36h后,TUNEL检测可见明显阳性染色,流式细胞分析发现在G1峰前出现凋亡峰;Westem Blot可见c-FLIPL和c-FLIPS蛋白表达显著下降.结论:c-FLIPL、c-FLIPS mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中表达.脂质体介导c-FLIP反义寡核苷酸转染BGC823细胞后抑制目的蛋白表达,抑制细胞生长、促进凋亡,其作用呈剂量依赖性.研究靶向c-FLIP的反义基因治疗药物可能为胃癌的临床治疗提供新的方法和思路.
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MTT法检测C-FLIP反义寡核苷酸对BGC823细胞的抑制效果
目的探讨脂质体Lipofectamine2000介导下c-FLIP反义寡核苷酸对胃癌细胞系BGC823生长的抑制作用.方法 RT-PCR和Western Blot方法检测c-FLIPL/S的mRNA和蛋白的表达变化;原位末端标记法、流式细胞术检测细胞凋亡;MTT法检测细胞抑制率.结果 Western Blot可见c-FLIPL和c-FLIPS蛋白表达显著下降;反义寡核苷酸作用细胞36 h后,TUNEL检测可见明显阳性染色,流式细胞分析发现在G1峰前出现凋亡峰;MTT显示脂质体介导反义寡核苷酸可显著抑制BGC823细胞增殖.结论 c-FLIPL、c-FLIPS mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中表达.脂质体介导c-FLIP反义寡核苷酸转染BGC823细胞后抑制目的蛋白表达,抑制细胞生长、促进凋亡,其作用呈剂量依赖性.研究靶向c-FLIP的反义基因治疗药物可能为胃癌的临床治疗提供新的方法和思路.
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泰山白花丹参对实验肿瘤细胞体内外生长的抑制作用
丹参(Salvia miltiorrhiza bge)的白花变型,主要分布于山东境内,其他地区较为少见,属珍稀濒危药用植物.丹参功同四物(当归、熟地、芍药、川芎),具有活血化瘀、清凉消火、宁心安神之功效,是祖国药学中应用较广、价值较高的药物之一.
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KLF2过表达及敲减胃癌稳转细胞株的建立
目的 构建KLF2过表达BGC823和KLF2敲减MGC803胃癌稳转细胞株.方法 克隆人源KLF2基因,连接到AgeI/AgeI酶切后GV358载体上,构建GV358-KLF2重组质粒,转染293T细胞,包装慢病毒;构建KLF2 shRNA,连接到BamHI和EcoRI双酶切后的PHBLV-U6-ZSGreen-Puro载体上,经鉴定后转染293T细胞.采用RT-PCR及Western印迹法检测稳转细胞株中KLF2的表达.结果 利用慢病毒介导,重组质粒GV358-KLF2和KLF2-shRNA转导入BGC823细胞、MGC803细胞并稳定表达.RT-PCR和Western印迹法结果均显示过表达稳转株KLF2表达量明显升高(P＜0.05),敲减稳转株KLF2表达量明显下降(P＜0.05).结论 成功构建了KLF2过表达BGC823细胞株和KLF2敲减MGC803细胞株,为后续KLF2功能实验奠定了基础.
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重楼总皂苷提取分离及其对人胃癌细胞BGC823的抑制作用
目的:初步探索重楼总皂苷的提取分离方法,并通过比较重楼总皂苷与重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ对人胃癌细胞BGC823 生长抑制作用评价重楼总皂苷提取分离工艺和临床应用价值.方法:采用热回流提取法得到重楼醇提物,再经大孔吸附树脂分离得到重楼总皂苷.采用噻唑蓝染色法(MTT 法)和集落形成实验,比较重楼总皂苷与重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ对人胃癌BGC823 细胞增殖和集落形成的影响.结果:重楼总皂苷、重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ作用于人胃癌BGC823细胞48h 的半数抑制浓度(IC50)分别为(8.63±0.30)、(2.61±0.03)、(1.97±0.01)μg/mL.在3.13、6.25、12.5μg/mL 浓度下重楼醇提物组集落形成抑制率为30.84%、53.27%、100%,而重楼总皂苷组在各浓度范围内均无集落形成.结论:重楼总皂苷对人胃癌BGC823 细胞生长抑制作用显著优于重楼醇提物,稍弱于重楼皂苷Ⅰ,但二者IC50数值接近且均较低,从而肯定重楼总皂苷提取分离工艺和临床应用潜能.
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基因芯片技术分析BGC823细胞Zbtb7A高表达前后差异基因的表达
目的 分析胃腺癌BGC823细胞Zbtb7A高表达前后差异基因的表达.方法 应用22K人基因组寡核苷酸芯片,筛选BGC823细胞高表达Zbtb7A前后差异表达的基因,采用RT-PCR验证部分差异基因的表达.结果 发现Zbtb7A高表达前后BGC823细胞有显著性表达差异的基因共312个,其中上调基因205个,下调基因107个.经RT-PCR验证部分差异基因的表达与芯片结果一致.结论 Zbtb7A高表达前后胃腺癌BGC823细胞部分功能基因存在着显著的表达差异,多数差异表达的基因参与细胞黏附、细胞骨架形成以及细胞代谢等过程.
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pokemon通过抑制p53和上调白细胞介素6抑制胃肿瘤细胞BGC823凋亡
目的 原癌基因pokemon是转录抑制因子,高表达于多种肿瘤细胞中,但其在肿瘤发生发展中的机制仍有待阐明.文中研究pokemon在胃腺癌细胞系BGC823中的作用及机制.方法将pokemon的编码片段构建入真核表达载体pcDNA3.1( + )中.将具有靶向沉默pokemon的siRNA互补的DNA构建到pSilencer 3.1 H1-neo中.将构建的质粒pcDNA3.1-pokemon和pSilencer 3.1 H1-3#用脂质体2000转染BGC823细胞.用流式细胞仪检测细胞凋亡,用RT-PCR分析细胞内mRNA的变化,用Western blot检测pokemon蛋白的表达.结果 成功构建了pokemon过表达/干扰载体pcDNA3.1-pokemon和pSilencer 3.1 H1-3#.在BGC823细胞中,过表达的pokemon可显著抑制p53,促进白细胞介素6(IL-6)转录.干扰pokemon基因的表达可使p53的转录增强.pokemon过表达可抑制BGC823的凋亡,沉默pokemon表达可促进凋亡.结论 pokemon抑制胃肿瘤细胞BGC823凋亡,p53和IL-6是pokemon下游的靶基因.
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环孢素A对人胃癌BGC823细胞增殖与凋亡的影响
目的 研究环孢素A(CsA)对人胃癌BGC823细胞的生长增殖以及凋亡的影响.方法 MTT法检测不同浓度CsA处理24、48、72 h后对BGC823细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期、活性氧(ROS)含量及细胞线粒体膜电位(△Ψm)改变;Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.结果 CsA在5～20 μmol/L浓度范围内和24 ～ 72 h时间范围对BGC823细胞增殖有显著抑制作用,与药物剂量、作用时间呈现量效和时效的依赖性;FCM结果显示CsA浓度依耐性使细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比差异有统计学意义(F=33.45,P＜0.05,P＜0.01);细胞凋亡率随CsA作用浓度增加而增加;5～ 20μmol/L CsA浓度范围细胞内ROS含量显著增加(F =46.17,P＜0.01),细胞线粒体膜电位明显降低.结论 CsA对BGC823细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞生长周期、细胞内ROS含量增加以及线粒体膜电位下降相关.
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同源异型盒基因HOXA5对胃癌细胞BGC823侵袭能力的影响
目的 检测人胃癌组织中HOXA5基因的表达情况,观察干扰HOXA5基因的表达之后,胃癌细胞BGC823的迁移和侵袭能力的变化,为阐明HOXA5在胃癌向远处转移的分子机制中提供新的思路.方法 通过实时定量PCR(qRT-PCR)、Western blot以及免疫组织化学等技术,检测胃癌组织中HOXA5基因的表达.应用细胞转染的方法 将HOXA5基因的过表达质粒转入胃癌细胞BGC823中,经qRT-PCR和Western blot验证HOXA5表达上调之后,利用Transwell侵袭实验检测BGC823细胞侵袭能力的变化.结果 在收集的69例新鲜的胃癌组织以及相对应的癌旁组织中,免疫组织化学显示相比于癌旁组织的表达情况,胃癌组织中只有26例HOXA5的表达高于癌旁组织,比例为37.7％;qRT-PCR、Western blot检测发现相对于癌旁组织,胃癌组织中HOXA5的表达水平显著下调(mRNA水平下调3倍,蛋白水平下调2倍,差异具有统计学意义,P<0.05).BGC823细胞转染了过表达质粒之后,HOXA5的表达能够被上调.过表达了HOXA5基因的BGC823细胞的侵袭能力下降.结论 在胃癌组织中HOXA5的表达下调,而在胃癌细胞BGC823中增强HOXA5的表达能够降低细胞的侵袭能力,说明HOXA5在胃癌的发生发展和侵袭、转移中发挥着抑癌基因的作用,可作为一个新的治疗靶点.
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胃癌中microRNA-218调控BM/1基因表达的作用及机制
目的 探讨胃癌中microRNA-218(miR-218)调控BMI1基因表达的作用及机制.方法 应用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测胃癌及癌旁组织中miR-218及BMI1基因的表达.将miR-218的前体(miR-218 precursor)转染胃癌BGC823细胞,Western blot检测BMI1蛋白的表达.应用荧光素酶实验分析miR-218是否与BMI1基因3'非翻译区(3'-UTR)结合.结果 RT-PCR结果显示,相对癌旁组织,胃癌组织中miR-218的表达下调显著,而BMI1在胃癌组织中的表达则呈现明显的上调,miR-218与BMI1在胃癌及癌旁组织中的表达均为明显的负相关.在转染miR-218 precursor的胃癌BGC823细胞中,BMI1的蛋白表达显著下调.荧光素酶实验结果证实miR-218能够特异性地结合BMI1基因的3'-UTR,并与其表达呈负相关.结论 miR-218与BMI1基因的表达异常与胃癌的发生相关,BMI1基因是miR-218的靶基因,miR-218在胃癌细胞中能够靶向沉默BMI1基因.
关键词： 胃癌 microRNA-218 Bmi1 BGC823细胞 -
靶向EGFR基因RNA干扰对胃癌细胞BGC823细胞增殖和凋亡的影响
目的 利用RNA干扰技术下调表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,观察其对胃癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响.方法 将细胞分为3组,空白对照组、空载体组和实验组(转染EGFRshRNA组).构建针对EGFR基因的s和RNA真核表达载体,转染入胃癌BGC823细胞中,运用RT-PCR和Western blot检测EGFR在rnRNA和蛋白水平的变化；WST-1法检测细胞增殖的影响:Hoechst33258染色观察细胞核形态学变化.实验重复3次.结果 成功构建表达质粒pGenSil-EGFR并转染BGC823细胞,shRNA下调EGFR的表达后,与空白对照组相比EGFR在mRNA和蛋白水平的表达均下降,抑制率分别为58.6％和75.2％.shRNA转染24、48、72 h,WST-1法检测胃癌细胞BGC823的增殖情况,与空白对照组相比,24 h后三组差异不明显(F =0.326,P＞0.05),48 h及72 h后,细胞增殖明显下降(F=68.25及274.45,P＜0.001),有统计学意义.EGFRshRNA作用BGC823细胞72 h后,经Hoechst33258染色发现,实验组细胞核染色质边集,出现凋亡小体.结论 靶向EGFR基因RNA干扰能够阻抑胃癌细胞BGC823细胞的EGFR表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,EGFR基因有望成为胃癌基因治疗靶点.
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水杨醛氨基酸Schiff碱铜三元配合物对人胃癌细胞株BGC823增殖的作用及机制
背景与目的:水杨醛氨基酸Schiff碱基本结构中含C=N键,当其与金属离子配位后生物活性增强,表现出一定的抗癌、抑菌等活性.本研究主要探讨4种水杨醛氨基酸Schiff碱铜配合物(6B、7B、6P、7P)对人胃癌细胞株BGC823增殖的影响,并初步探讨其作用机制.方法:取对数生长期的BGC823细胞传代培养,24 h后加药,MTT法测定4种配合物对BDC823细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化;DNA ladder试验检测DNA损伤;免疫细胞化学法检测P53蛋白表达水平.结果:MTT实验结果:不同种类的水杨醛氨基酸Schiff碱铜配合物对BGC823细胞的生长均有明显的抑制作用,并且随配合物浓度的增大抑制作用有增强的趋势.4种配合物对BGC823细胞的IC_(50)分别为6B 18.10 μmol/L,7B 27.50 μmol/L,6P 3.61 μmol/L,7P 3.45 μmol/L.流式细胞仪检测表明4种铜配合物均可明显提高BGC823细胞凋亡率,DNA ladder试验也证实这一点;流式细胞仪检测还揭示铜配合物引起S期细胞和G_2期比率增加,G_1期细胞减少;P153蛋白免疫细胞化学染色显示,4种配合物均能够下调BGC823细胞突变型P53蛋白的表达,提示细胞凋亡的发生与p53依赖的凋亡通路有关.结论:配合物6B、7B、6P、7P在体外均能明显抑制肿瘤细胞BGC823生长增殖,诱导细胞凋亡,并造成细胞周期分布的改变.其机制可能与p53依赖的凋亡通路有关.
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大蒜素对人胃癌细胞BGC823 cyclin D1和p27Kip1表达的影响
背景与目的:在研究大蒜素抑制人胃癌细胞BGC823恶性增殖,将其阻滞于G1期并诱导BGC823细胞凋亡的分子机制及其靶基因过程中,我们发现cyclin D1和p27Kip1蛋白在G1期阻滞中起重要作用.本实验从mRNA和蛋白水平探讨大蒜素对人胃癌细胞BGC823 cyclin D1和p27Kip1表达水平的影响.方法:用25 μg/ml大蒜素处理BGC823细胞,并分别提取对照组和大蒜素处理组的总RNA和总蛋白,然后采用RT-PCR和Western blot法检测大蒜素处理前后cyclin D1和p27Kip1mRNA和蛋白的变化.结果:经25μg/ml大蒜素处理BGC823细胞24 h,cyclin D1蛋白表达下调,p27Kip1蛋白表达上调,处理48 h上述变化更明显.而mRNA水平未见明显改变.结论:大蒜素可影响cyclin D1和p27Kip1蛋白的表达,而不影响mRNA的转录.
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CTGF单克隆抗体对胃腺癌细胞BGC823生物学行为的影响
[目的]观察结缔组织生长因子(CTGF)单克隆抗体对人胃癌细胞BGC823生物学行为的影响. [方法]体外培养BGC823胃癌细胞,分别经不同浓度的CTGF单抗作用不同时间后,用MTT法测定细胞活力;通过黏附实验观察CTGF单抗对胃癌细胞黏附能力的影响;Boyden小室法观察BGC823细胞侵袭、迁移能力的改变. [结果]CTGF单抗抑制胃癌细胞的增殖,CTGF单抗处理组细胞的黏附、迁移和侵袭能力明显低于对照组(P<0.05). [结论]抗体中和CTGF抑制胃癌细胞的增殖、明显减弱细胞的粘附、迁移和侵袭能力.
