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实验性糖尿病大鼠胰腺组织Kir6.2表达及药物干预
目的:观察实验性糖尿病大鼠胰腺组织KATP,通道的Kir 6.2亚基表达变化,以及那格列奈、丹参素对其干预.方法:Wistar大鼠建立糖尿病模型后,随机分为模型组、西药组、中药组,并设空白组,激光共聚焦显微镜观察免疫荧光染色的各组胰腺组织Kir6.2的表达变化.结果:模型组大鼠胰腺Kir6.2表达显著下降,两药物组Kir6.2的组织表达水平较模型组有不同程度上调(P<0.01).结论:糖尿病大鼠表现出胰腺组织Kir6.2表达降低,可能是β细胞适应高血糖和胰岛素抵抗的一种代偿机制;那格列奈、丹参素对其表达有一定的上调作用,可能是二者的一个重要降糖机制.
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格列苯脲对缺血预适应心肌再灌注心律失常的影响
目的 探讨KATP 通道抑制剂格列苯脲对心肌缺血预适应心律失常的影响.方法 将SD 大鼠随机均分为心肌缺血预适应组( IPC 组) 、格列苯脲组(GLC组) 、格列苯脲+ IPC 组(G-P 组) 和对照组(C 组),(均n=12).心肌缺血预适应由3 次5 min 缺血/10 min 再灌注组成.所有大鼠均接受30min 缺血/60min 再灌注.使用medlab501H 多功能动物生理功能记录仪Ⅱ导联记录心脏室性心律失常.结果 IPC 可减少缺血/ 再灌注所致的室性心律失常的发生,但这种保护作用不能被格列苯脲所阻断.结论 格列苯脲对IPC 的心律失常有影响.
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吡那地尔及二氮嗪对长期低氧大鼠肺动脉平滑肌KATP通道蛋白表达的影响
目的:研究慢性低氧对大鼠肺动脉平滑肌ATP敏感钾通道(KATP)蛋白表达的影响及KATP开放剂吡那地尔及二氮嗪的作用.方法:SD雄性大鼠35只随机分成对照组、低氧组、吡那地尔干预组[吡那地尔2.0 mg/(kg·d),ig]、二氮嗪干预组[二氮嗪1.5 ms/(ks·d),ig]、5-羟癸酸(5-HD)+二氮嗪干预组[5-HD 3.0 ms/(kg·d),ig;二氮嗪1.5 ms/(ks·d),ig],每组7只.将低氧组和各干预组大鼠放入常压低氧舱内[O2(10.0%±0.5%)],每周6天,每天6 h 4周后测定平均肺动脉压(mPAP)并采用Western-blot技术,分析各组肺动脉主干平滑肌KATP蛋白表达.结果:①慢性低氧组大鼠的mPAP显著高于正常对照组,吡那地尔干预组肺动脉压较低氧组显著下降.二氮嗪干预组加重慢性低氧所致的肺动脉压力升高,5.HD+Z.氮嗪干预组的mPAP显著低于二氮嗪干预组,P均<0.05.②低氧组调节亚基磺酰脲受体2B(SUR2B)蛋白水平显著低于正常组,吡那地尔干预组SUR2B显著高于低氧组,二氮嗪干预组SUR2B蛋白水平显著低于低氧组,5-HD+二氮嗪干预组SUR2B显著高于二氮嗪于预组,与低氧组亦有显著统计学差异,P均<0.05.各组内向整流性孔区6.1(Kir6.1)蛋白没有显著差异(P<0.05).结论:慢性低氧抑制KATP通道蛋白的表达,而吡那地尔能提高表达,对慢性低氧所致的肺动脉高压和肺血管壁重构具有较好的预防和逆转作用;二氮嗪能加重低氧性肺动脉压升高,并抑制KATP通道蛋白的表达.
关键词： KATP 吡那地尔 二氮嗪 Western-Blot -
纳他卡林激活内皮细胞ATP敏感性钾通道SUR2B/Kir6.1亚型对eNOS磷酸化的调节作用
目的 纳他卡林可选择性激活ATP敏感性钾通道(KATP)SUR2B/Kir6.1亚型,引起胞内Ca2+浓度升高,一氧化氮合酶(eNOS)活性增强,NO释放增加.eNOS活性与eNOS磷酸化密切相关,研究表明eNOS-Ser1177、eNOS-Ser635、eNOS-Ser615磷酸化增强eNOS活性,eNOS-Thr495、eNOS-Ser116磷酸化抑制eNOS活性.本文研究纳他卡林激活KATP对eNOS各磷酸化位点的影响,以此认识纳他卡林增强eNOS活性的作用特点.方法 在培养的内皮细胞上给予(1)10-9~10-5mol·L-1不同浓度的纳他卡林孵育5 min,(2)预孵育0.01～1 μmol·L-1格列苯脲30 min,给予1μmol·L-1纳他卡林孵育5 min,提取细胞总蛋白,用Western blot法检测eNOS-Ser1177、eNOS-Ser635、eNOS-Ser615、eNOS-Thr495、eNOS-Ser116磷酸化的变化.结果 纳他卡林可浓度依赖性的升高eNOS-Ser1177、eNOS-Ser635的磷酸化及eNOS-Thr495的去磷酸化,而对eNOS-Ser615和eNOS-Ser116磷酸化无影响.此作用可被KATP特异性阻断剂格列苯脲拮抗.结论纳他卡林通过激活内皮细胞KATP,调节eNOS-Ser1177、eNOS-Ser635的磷酸化及eNOS-Thr495的去磷酸化,但不影响eNOS-Ser615和eNOS-Ser116磷酸化,从而增强eNOS活性.
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埃他卡林对长期低氧大鼠肺组织eNOS mRNA和蛋白表达的影响
目的 研究长期低氧对大鼠肺组织Enos Mrna及蛋白表达的影响及新型ATP敏感性钾(KATP)通道开放剂埃他卡林(iptakalim,IPT)的作用.方法 SD ♂大鼠60只,随机分成对照组、低氧组、IPT低剂量组(IPT 0.75 mg·kg~(-1)·d~(-1),ig)、IPT高剂量组(IPT 1.5 mg·kg~(-1)·d~(-1),ig),每组15只.将低氧组、IPT低剂量和高剂量组大鼠放入常压低氧舱内[O_2(10%±0.5%)],每周6 d,每天8 h,4 wk后测定平均肺动脉压(Mpap)、RV/(LV+S)和血浆NO浓度.采用RT-PCR技术,分析各组肺组织Enos Mrna表达;采用Western blot技术,分析各组肺组织Enos蛋白表达.结果 ①低氧组大鼠Mpap和RV/(LV+S)高于对照组,IPT低剂量组和高剂量组较低氧组下降,P均<0.05.②低氧组大鼠血浆NO浓度低于正常对照组,IPT低剂量和高剂量组较低氧组上升,P均<0.05.③低氧组Enos Mrna及蛋白水平均低于对照组(P<0.05),IPT低剂量和高剂量组Enos高于低氧组(P<0.05),其中高剂量组更加明显.结论 长期低氧导致肺血管内皮细胞功能障碍,NO生成减少、Enos Mrna和蛋白水平表达下降,而IPT可改善内皮细胞功能障碍,增加Enos的表达和NO的释放,逆转低氧性肺动脉高压.
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线粒体ATP敏感性钾通道不参与异丙酚预处理的心肌保护
目的观察异丙酚预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护机制是否通过开放线粒体ATP敏感性K通道(KATP).方法非循环式Langendorff离体心脏灌注模型,灌注1 h,常温下行全心缺血25 min,恢复再灌注30 min.通过Maclab仪记录左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左室压上升和下降大速率(±dp/dtmax).测恢复再灌注末心肌组织MDA含量.结果恢复再灌注30 min末,对照组(Con)、异丙酚预处理组(PP)、5-HD+PP和5-HD组心肌组织的MDA含量分别为(113.7±20.9)、(89.4±13.7)、(91.9±14.4)和(114.8±19.7) nmol*100 mg-1.PP组和 5-HD+PP组的心肌MDA含量都明显低于Con组和 5-HD组(P<0.05);PP组和5-HD+PP组两组间的MDA差异无显著性(P>0.05).恢复再灌注30 min末,Con组、PP组、5-HD+PP组和5-HD组的LVEDP值分别为基础值的5.1、3.2、3.6和5.3倍.PP组和 5-HD+PP组LVEDP值的上升幅度均明显低于Con组和 5-HD组(P<0.05),而5-HD+PP组和PP组之间差异无显著性(P>0.05).结论异丙酚预处理的心肌保护不是通过开放线粒体ATP敏感性K通道,其心肌保护作用和线粒体KATP无关.
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尼可地尔对TGF-β1诱导人气道平滑肌细胞肥大的实验研究
目的 研究ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂对人气道平滑肌细胞(HASMCs)肥大的影响及其可能的作用机制.方法 用TGF-β1诱导HASMCs肥大,ATP敏感性钾通道开放剂尼可地尔(Nico)进行干预,将实验分成Control组、TGF-β1组、TGF-β1+Nico组、Nico组.显微镜下及免疫荧光法观察细胞形态变化及α-SMA表达情况;Western Blot法测定细胞α-SMA蛋白表达和CaMK Ⅱ、CREB磷酸化情况.结果 免疫荧光实验表明TGF-β1能浓度依赖性地促进细胞肥大和α-SMA表达,Nico能下调α-SMA的表达,减轻细胞肥大;Western blot实验表明TGF-β1能升高α-SMA表达和CaMK Ⅱ、CREB磷酸化水平,Nico能抑制α-SMA的表达,降低CaMK Ⅱ、CREB磷酸化水平.结论 Nico能减轻TGF-β1诱导的HASMCs肥大,可能与抑制CaMK Ⅱ/CREB信号通路传导有关.
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扩张型心肌病患者E23K多态性与心功能的关系
目的:研究扩张型心肌病(DCM)患者KATP通道亚单位Kir6.2上E23K多态性与心功能的关系.方法:选取DCM患者89例,采用心脏多普勒超声二维成像技术,检测左室舒张末期内径(LVEDD)和左房内径(LAD),并运用PCR等分子生物学技术,对KATP通道上的亚单位Kir6.2进行扩增测序.结果:89例DCM患者中,E23K突变55例,E23K无突变34例.在E23K突变组和E23K无突变组中LVEDD分别为(65.52±1.27)mm和(61.31±1.02)mm(P＝0.017);LAD分别为(46.24±1.39)mm和(42.54±1.18) mm(P=0.044).结论:E23K突变组LVEDD和LAD较无突变组显著扩大.
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缺氧海马神经元中KATP对p53下游基因α-tubulin表达的影响
目的 了解缺氧海马神经元中,KATV对p53下游基因α-tubulin表达的影响.方法 原代培养7d后,将神经元随机分为常氧组、常氧+药物(KATP激动剂二氮嗪和抑制剂甲苯磺丁脲)组、单纯缺氧组(5%CO2,和95%N2)、缺氧+药物(KATP激动剂二氮嗪和抑制剂甲苯磺丁脲)组,采用倒置显微镜和NF免疫组织化学法观察细胞生长和形态,MTT法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测各下游基因的mRNA表达水平.结果 单纯缺氧组、缺氧+二氮嗪组和缺氧+甲苯磺丁脲组的多级神经元的百分率分别是(20.6±2.0)%、(26.1±1.7)%和(8.7±1.7)%,各加药组与单纯缺氧组比较均有统计学意义(P<0.01);细胞存活率分别是(75.7±2.8)%、(55.7±2.5)%和(81.1±2.4)%,各缺氧+药物组与单纯缺氧组比较差异有统计学意义(P<0.01).缺氧组中α-tubulin的mRNA表达水平与常氧时比较明显下降(P<0.01),缺氧+二氮嗪组和缺氧+甲苯磺丁脲组的mRNA表达水平与单纯缺氧组相比差异无统计学意义(P>0.05).而在常氧时各用药组中多极神经元的百分率、细胞存活率以及α-tubulin的mRNA表达水平与常氧组相比差异没有统计学意义.结论 缺氧时KATP对细胞具有保护作用,KATP对α-tubulin的表达没有显著性影响.
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缺氧海马神经元中KATP对基因Bax表达的影响
目的 研究缺氧海马神经元中KATP对基因Bax表达的影响.方法 对原代海马神经元进行缺氧和药物处理,倒置显微镜和NF免疫组织化学法观察细胞生长和形态,MTT法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Bax基因Mrna表达水平.结果 与单纯缺氧组比较,缺氧+二氮嗪组和缺氧+甲苯磺丁脲组的多级神经元百分率和细胞存活率差异有显著性(P<0.01).缺氧+二氮嗪组中基因Bax的Mrna表达水平与单纯缺氧组相比下降(P<0.01),缺氧+甲苯磺丁脲组中基因Bax的Mrna表达水平相对于单纯缺氧组也有提高(P<0.05).结论 缺氧时KATP的开放对细胞具有保护作用,它通过降低Bax的表达抑制缺氧海马神经元的凋亡.
