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低剂量X射线对人树突状细胞体外迁移能力的影响及其机制
目的 研究低剂量X射线对人树突状细胞(DC)体外迁移能力影响并探讨其机制.方法 分离人外周血单个核细胞(PBMC),以人GM-CSF和IL-4共同诱导分化为DC,于培养的第5天加入TNF-α促进成熟,在培养的第6天用X射线照射DC,受照剂量分别是0、0.05、0.1、0.2、0.5 Gy,照射后48 h收获DC;采用RT-PCR法及Western blot法分别检测CCR7 mRNA及蛋白表达水平;Transwell迁移实验法检测DC的体外迁移能力.结果 与0 Gy相比,0.2和0.5 Gy照射后,CCR7 mRNA的相对表达量显著高于其他剂量(t=14.72、4.72,P＜0.05);0.2 Gy照射后,CCR7蛋白表达量高于其他剂量(t=4.46,P＜0.05),DC迁移能力显著高于其他剂量(t=2.95,P＜0.05);以抗CCR7单克隆抗体封闭CCR7蛋白活性,在接受同等剂量照射时,DC细胞迁移能力显著降低(t=4.63～8.96,P＜0.05).结论 受到0.2 Gy X射线照射的DC,体外迁移能力显著增强,其机制可能与受照后DC表达CCR7 mRNA及蛋白水平升高有关.
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电离辐射诱导结肠癌细胞自噬以及自噬在辐射中的作用
目的 观察辐射诱导结肠癌SW480细胞发生自噬的情况,以及自噬在辐射中的作用.方法 采用透射电镜观察细胞超微结构,免疫荧光观察自噬泡,蛋白质免疫印迹法检测LC3水平,MTT检测细胞增殖情况,Tanswell小室观察细胞的侵袭,划痕实验观察细胞迁移.结果 重离子与X射线辐射能够诱导SW480细胞发生自噬,且自噬水平随辐射剂量的增加而增加(F =458.526,P＜0.05);雷帕霉素(rapamycin,RAPM)能够诱导SW480细胞发生自噬,联合照射时,具有协同作用(F=189.393,P＜0.05);氯喹(chloroquine,CQ)能够抑制辐射所诱导的SW480细胞发生的自噬;单纯照射组、照射联合RAPM组细胞的侵袭力、迁移力及活性减弱(F=194.692、629.917、302.903,P ＜0.05);辐射与CQ联合处理组细胞的侵袭力、迁移力及活性增强(F=194.692、629.917、302.903,P＜0.05).结论 电离辐射可诱导结肠癌SW480细胞发生自噬,自噬对细胞有杀伤作用.
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低剂量X射线照射对脐带间充质干细胞增殖及成脂成骨分化的影响
目的 探讨低剂量照射对人脐带间充质干细胞(hucMSCs)增殖及成脂、成骨分化的影响.方法 采用组织块贴壁法从人脐带沃顿胶样组织中分离出hucMSCs,并采用流式细胞术检测表面特异性标记.随机分为未予照射的对照组,以及50、100和200 mGy照射组.采用MTT法检测hucMSC在不同照射剂量和不同时间(1～7 d)的增殖情况.取第3代细胞,随机分为照射组(给予200 mGy照射)和对照组(不予照射),在体外诱导其向脂肪、成骨细胞分化,并通过油红O染色、检测碱性磷酸酶(ALP)活性,用RT-PCR检测成骨细胞核结合因子α1的mRNA表达,比较照射组与对照组细胞成脂、成骨分化的不同.结果 9～12 d开始有成纤维细胞从组织块游出贴壁,2周左右达到80%.低剂量照射后2、3、4、5和6 d,不同照射剂量组的细胞增殖均高于对照组(F=159.17、448.81、265.15、183.93、181.83,均P＜0.01),其中以100 mGy组促进细胞增殖作用明显.照射组成脂诱导2 d后细胞内即有脂滴出现,且第21天成脂率明显高于对照组(t=28.25,P＜0.01).成骨诱导后,照射组ALP活性明显高于对照组(t=16.87,P＜0.01),且成骨细胞核结合因子α1的mRNA水平明显增高(t=14.16,P＜0.01).结论 低剂量照射可以促进hucMSC增殖,并加速其向成脂、成骨细胞分化.
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小剂量X射线照射对人树突状细胞抗原递呈及白介素-12分泌的影响
目的 探讨小剂量x射线照射对体外不同培养时间的人外周血树突状细胞( dendritic cell,DC)抗原递呈及白介素-12(IL-12)分泌的影响.方法 分离人外周血单个核细胞(PBMC),以人粒-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)及IL-4等诱导分化成DC.实验分为3组,A组:DC培养至第2天接受X射线照射；B组:DC培养至第6天接受X射线照射,A、B组受照剂量均为0.05、0.1、0.2和0.5 Gy;C组:即对照组,为同期培养的未受X射线照射的DC细胞.各组DC培养至第8天时,以DC致敏T 细胞,CCK-8( cell counting kit-8)法检测混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR),以评估抗原递呈能力；MTT法检测致敏T细胞杀伤人肺腺癌A549细胞；酶联免疫吸附试验( ELISA)检测DC细胞培养液中IL-12水平.结果 0.2、0.5 Gy照射后的DC抗原递呈能力,A组显著低于对照组(t =2.79和3.71,P＜0.05),B组显著高于对照组(t=3.60和3.11,P＜0.05)；检测致敏T细胞对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制能力,与对照组相比,A组抑制A549增殖能力减弱(t =2.89和2.91,P＜0.05),B组抑制A549增殖能力明显增强(t=2.91和2.82,P＜0.05)；A组IL-12分泌量下降(t=4.44和6.93,P＜0.05),而B组明显上升(t=3.51和4.12,P＜0.05).结论 DC在培养早期阶段接受0.5 Gy以下的X射线照射,会降低抗原递呈能力及致敏T细胞杀伤A549能力,在培养阶段的后期给予此剂量照射则会增强.
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X射线对人肺癌A549细胞CCR7表达影响的研究
目的 研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对人肺癌A549细胞CC-趋化因子受体7(CCR7)表达的影响.方法 体外培养A549细胞,实验组采用直线加速器X射线一次性照射,细胞吸收剂量分别为2、4、6和8 Gy(源皮距100 cm;剂量率442.89 cGy/min),照射后4、12、24、48和72 h分别采用实时荧光定量PCR技术及Western blot方法分别进行CCR7 mRNA及蛋白质表达水平检测;对照组A549细胞除不接受x射线照射外,余处理同实验组.结果 A549细胞经2、4、6和8 Gy的X射线照射后,CCR7 mRNA及蛋白质在照射4 h后开始表达升高,达到高峰后相继出现下降;72 h后6和8 Gy组mRNA表达量仍高于对照组水平(t=6.75～7.26,P＜0.01),2和6 Gy组蛋白质表达量高于对照组(t=11.13～14.17,P＜0.01),而4和8 Gy组蛋白质表达量在48和72 h已降至对照组水平.结论 2、4、6和8 Gy的X射线照射A549细胞后,A549细胞CCR7mRNA及蛋白质的表达量明显增加,可能与一定剂量X射线辐射促进A549细胞增殖和转移有关.
关键词： 肺癌 CC-趋化因子受体7 X射线 -
乏氧诱导因子1α在电离辐射诱导人乳腺癌细胞自噬性死亡中的作用
目的 探讨乏氧诱导因子1α(HIF-1α)在辐射诱导人乳腺癌MCF-7细胞自噬性死亡中的作用.方法 将人乳腺癌MCF-7细胞分为对照组(常氧组,21％氧气)、照射组(8GyX射线)、乏氧组(150 μmol/L CoCl2)、乏氧加照射组(150 μmol/L CoCl2+8 Gy).150 μmol/L CoCl2处理细胞模拟乏氧条件.Western blot法检测HIF-1α及MAPLC3蛋白表达；MDC及Hoechst染色方法分别用于检测细胞自噬和凋亡变化情况；克隆形成方法检测细胞辐射敏感性.构建携带人靶向HIF-1α-siRNA的反转录病毒载体,建立MCF-7 HIF-1α Ri沉默细胞模型,将细胞分为对照组(常氧组)、照射组(8 Gy)、乏氧组(CoCl2处理)、乏氧加照射组(CoCl2+8 Gy),检测细胞辐射敏感性、自噬及凋亡情况.结果 与对照组和照射组相比,HIF-1蛋白在乏氧组和乏氧加照射组表达明显增加,分别为0、0、1.00和1.89.与对照组相比,MAPLC3蛋白在照射组、乏氧组、乏氧加照射组的表达均明显上调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值分别为1.15、1.73、2.38和3.60.细胞辐射敏感性顺次降低,常氧+三甲基腺嘌呤(3MA)组＞常氧组＞乏氧+3MA组＞乏氧组.成功构建HIF-1α沉默模型(pSUPER-HIF-1α Ri)与空载体对照模型(pSUPER),并检测了2种细胞的辐射敏感性.与常氧组相比,乏氧组MCF-7-pSUPER细胞存活分数显著增加(t=3.080、6.946、6.658、6.380,P＜0.05),辐射敏感性降低.而MCF-7-pSUPER-HIF-1α Ri细胞,常氧与乏氧条件下细胞存活分数无明显改变.不同处理组(照射组、乏氧组和乏氧加照射组)的MCF-7-pSUPER-HIF-1α Ri细胞与MCF-7-pSUPER细胞相比较,自噬百分率分别降低21.1％、25.5％和15.5％(t=-4.635、-4.738、-6.354,P＜0.05),但凋亡百分率差异无统计学意义.结论 在人乳腺癌MCF-7细胞中HIF-1α可增加辐射诱导的自噬,同时降低辐射敏感性,对细胞凋亡无影响.
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薏苡仁注射液提高人肝癌细胞Bel-7402放射敏感性的机制研究
目的 观察薏苡仁注射液对人肝癌细胞Bel-7402活性和放射敏感性的影响.方法 将Bel-7402细胞分为空白对照组、薏苡仁组、单纯照射组和联合处理组.采用X射线照射,同时联合薏苡仁注射液处理,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖活性的变化,流式细胞术观察细胞凋亡率的变化,应用RT-PCR和Western blot法检测肝癌细胞中Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达变化.采用细胞克隆形成法观察存活细胞数,单击多靶模型拟合剂量存活曲线,计算细胞平均致死剂量(D0)值.结果 薏苡仁注射液和X射线对肝癌细胞的生长均有明显抑制作用,其中联合处理组的细胞抑制率明显高于薏苡仁组和单纯照射组(8 Gy),差异有统计学意义(t=17.03、11.26,P＜0.05);与薏苡仁组和单纯照射组相比,联合处理组的细胞凋亡率明显增加(t =24.80、20.19,P＜0.05).薏苡仁组、单纯照射组及联合处理组Bax的mRNA和蛋白水平依次升高(F=437.92、67.91,P＜0.05),而Bcl-2的mRNA和蛋白水平逐渐降低(F=31.18、48.50,P＜0.05).单纯照射和联合处理组D0值分别是4.27和3.34,放射增敏比为1.27.结论 薏苡仁注射液可能通过凋亡相关因子Bax和Bcl-2抑制肝癌细胞生长,诱导凋亡,具有放射增敏作用.
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缝隙连接蛋白43在X射线诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用及机制研究
目的 研究缝隙连接蛋白43(Cx43)在X射线致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡中的作用并探讨其机制.方法 采用流式细胞术检测10 Gy X射线照射后48 ～96 h以及不同剂量X射线照射后72 h HUVEC细胞凋亡的变化.Western blot检测0、5、10、20Gy X射线照射后72 hHUVEC中Cx43和cleaved caspase-3蛋白的表达.采用RNA干扰技术使细胞Cx43表达沉默,或转染Cx43高表达质粒使Cx43过表达.流式细胞术和Western blot分别检测Cx43沉默和过表达对受照HUVEC凋亡的影响以及cleaved caspase-3蛋白表达水平的变化.结果 X射线照射后48～96 hHUVEC凋亡增加并且呈现剂量依赖性.在0～20 Gy范围内,Cx43表达随剂量增加而降低,cleavedcaspase-3表达随剂量增加而增高.Cx43沉默组HUVEC细胞早期凋亡及凋亡死亡细胞比例明显高于无意义序列组(t =3.674、6.375,P＜0.05);Cx43过表达组HUVEC细胞早期凋亡及凋亡死亡细胞比例明显低于空载体组(￡=9.399、11.190,P＜0.05);Cx43沉默组较无意义序列组cleavedcaspase-3表达增强,而过表达组低于空载体组.结论 Cx43通过调控cleaved caspase-3活化,抑制HUVEC细胞凋亡,从而对X射线照射的HUVEC细胞发挥保护作用.
关键词： X射线 HUVEC细胞 Cx43 凋亡 Cleaved Caspase-3 -
活体荧光成像技术评价X射线对小鼠乳腺癌移植瘤的治疗效果
目的 建立荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞爪垫淋巴结转移模型,监测肿瘤早期淋巴结转移,并用荧光成像评价X射线局部治疗效果.方法 将表达荧光素酶的小鼠乳腺癌细胞系4T1-Luc接种至裸鼠爪垫皮下,建立爪垫皮下淋巴结转移模型.通过裸鼠活体荧光成像系统连续观察肿瘤细胞在淋巴结中的转移情况,并将有早期淋巴转移的荷瘤裸鼠按随机数字表法分为对照组和治疗组,活体荧光成像系统观察治疗效果,HE染色观察评价病理形态学变化.结果 成功建立了小鼠乳腺癌淋巴结转移模型,爪垫原发灶肿瘤体积与荧光光子数呈正相关性(r=0.958,P ＜0.001),在肿瘤接种的第24天,治疗组爪垫肿瘤和腘窝处肿瘤部位的荧光光子数较对照组呈显著性降低(t=32.58,P＜0.05);用荧光光子数计算抑瘤率高达85％以上.HE染色观察到治疗组较对照组移植瘤坏死明显.结论 运用活体生物发光成像技术能够动态、客观、灵敏、可视化地评估X射线对小鼠乳腺癌肿瘤的抑瘤效应.
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沉默Rev1基因对人结肠癌细胞放射敏感性的影响
目的 探讨沉默Rev1基因对人高分化结肠癌细胞THC8307 X射线照射后增殖、凋亡的影响.方法 利用RNA干扰技术将Rev1基因的特异性片段转染THC8307细胞,用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染后细胞中目的基因的表达;实验分空白对照组、阴性对照组、Rev1 siRNA组.分别给予0、6 GyX射线照射,运用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同时段(0、24、48、72、96 h)细胞增殖情况,并绘制增殖曲线;流式细胞仪(FCM)检测不同剂量X射线处理后的细胞凋亡;Western blot检测各组PCNA、γ-H2AX、P53、Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 与空白对照组相比,6 GyX射线照射后,沉默Rev1基因组细胞增殖速率明显降低(t=7.53,P＜0.05),凋亡明显增加(t =6.23,P＜0.05),增殖细胞抗原(PCNA)表达下降(t=4.39,P＜0.05),γ-H2AX表达升高(t=5.48,P＜0.05),P53表达升高(t=5.09,P＜0.05)、Bax表达升高(t=3.32,P＜0.05)、Bcl-2表达降低(t =6.13,P＜0.05).结论 沉默Rev1基因,抑制了X射线作用下的结肠癌细胞THC8307的增殖,促进了凋亡,增加了其对X射线的放射敏感性.
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PI3K/Akt信号通路与肝星状细胞活化的关系及其在放射性肝纤维化中的作用
目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3 K/Akt)信号通路与肝星状细胞(HSC)活化的关系及其在放射性肝纤维化中的作用.方法 6MVX射线照射,联合PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂处理HSC,分为空白对照组、抑制剂组、10 Gy照射组、10 Gy+抑制剂组、20 Gy照射组和20 Gy+抑制剂组.检测各组的细胞凋亡率、细胞上清液转化生长因子β1(TGF-β1)浓度、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达量和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达量.结果 与空白对照组相比,10和20 Gy照射组细胞的凋亡率随照射剂量的增加而增加(=8.43、11.63,P＜0.05);与10和20 Gy照射组比较,分别加抑制剂后细胞的凋亡率降低(t=8.09、4.88,P＜0.05).与10 Gy照射组比较,20 Gy照射组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量增加(t=6.91、7.80、9.28,P＜0.05),10 Gy+抑制剂组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量降低(t=6.17、15.11、10.34,P＜0.05).与20 Gy照射组比较,20 Gy+抑制剂组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量同样降低(t=10.04、6.85、23.84,P＜0.05).结论 X射线通过激活PI3K/Akt信号通路使HSC活化,导致放射性肝纤维化的发生.
关键词： X射线 肝星状细胞 放射性肝纤维化 PI3K/Akt信号通路 -
电离辐射诱导乳腺癌细胞自噬相关基因DRAM表达的研究
目的 研究电离辐射对乳腺癌细胞株MCF-7自噬相关基因DRAM表达变化的影响.方法 采用GFP-LC3转染法检测自噬泡,实时荧光定量PCR方法检测DRAM基因表达,Western blot方法检测LC3和DRAM蛋白的表达,采用磷酸钙共转染法构建DRAM沉默细胞模型.结果 与假照组相比,8 GyX射线照射后细胞中GFP-LC3表达升高；时间-效应关系表明,在8 Gy照射后,自噬溶酶体蛋白LC3表达在2、4、8、16、24和32 h上升变化显著,各组均高于假照组(F=5.38、8.72、10.63、15.23、20.78和55.23,P＜0.05)；DRAM蛋白表达在8 Gy照射后以时间依赖性增加,从2h开始上升,32 h达至高值(F=116.34,P＜0.05).DRAM沉默细胞模型组中LC3和DRAM蛋白的表达明显低于假照组(F=20.36和40.35,P＜0.05)；对DRAM沉默细胞模型组进行8 Gy照射后,DRAM蛋白表达与假照组相比虽有所增加,但仍低于8 Gy照射组；DRAM沉默细胞模型组LC3蛋白的表达也低于照射组,沉默前后差异均有统计学意义(F=50.34,P＜0.05).结论 X射线可能通过激活DRAM基因来促进乳腺癌细胞株MCF-7发生自噬.
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复方树莓籽粉对急性放射性损伤作用的研究
目的：探究复方树莓籽粉对急性放射性损伤大鼠的防护作用。方法40只Wistar大鼠，采用随机数字表法分为4组：空白对照组、单纯照射组、维生素组、复方树莓籽粉组，每组10只。维生素组和复方树莓籽粉组，给予相应药物连续灌胃7 d，第7天灌胃结束1 h后单纯照射组、维生素组、复方树莓籽粉组进行8 Gy一次性全身X射线照射，建立急性X射线损伤模型，24 h后处死4组大鼠，检测各组大鼠白细胞数、血小板数、血浆超氧化物歧化酶（ SOD ）活力、丙二醛（ MDA）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（ GSH-PX）活力，用单细胞凝胶电泳法测定淋巴细胞DNA损伤。结果与单纯照射组比较，维生素组、复方树莓籽粉组大鼠白细胞和血小板数量、SOD 活力、MDA含量、 GSH-PX 活力升高，差异均有统计学意义（ F ＝14.869、6.376、7.705、3.851、3.134， P＜0.05）；单纯照射组大鼠淋巴细胞DNA损伤情况较其他3组严重（F ＝5.493， P＜0.05）。结论预防性补充复方树莓籽粉对急性放射性损伤大鼠有较好的防护作用。
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硫酸镁抑制经辐射后人脐静脉血管内皮细胞γ-H2AX的表达
目的 探讨不同浓度硫酸镁对照射后人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial,HUVEC)存活率及γ-H2AX表达的影响.方法 CCK-8法检测不同浓度的硫酸镁对HUVEC存活率的影响;激光共聚焦显微镜检测4GyX射线照射后不同时间HUVEC中γ-H2AX簇集点(foci)的数量;流式细胞术和Western blot检测γ-H2AX蛋白的表达情况.结果 CCK-8法显示,1.25 mg/ml浓度的硫酸镁能提高照射后的细胞存活率(t=-6.34,P＜0.05);细胞免疫荧光结果显示,照射后0.5～1 hfoci焦点数达到高值,平均达45个,随着时间的延长loci点数变少,强度减弱,具有时间依赖性,而硫酸镁在照后0.5、1、2、6、12 h均可以明显减少loci的形成(t=12.62、6.36、11.93、5.75、9.43,P＜0.05);流式细胞仪检测表明,硫酸镁在照后0.5、1、2h可以抑制X射线照射后γ-H2AX蛋白表达量的增加(t=6.07、5.32、11.85,P＜0.05);Western blot结果与细胞免疫荧光结果一致.结论 硫酸镁可以增加照射后HUVEC的存活率,降低X射线诱导的DNA损伤蛋白γ-H2AX的表达.
关键词： 硫酸镁 人脐静脉血管内皮细胞 X射线 CCK-8 γ-H2AX -
胶原蛋白肽对X射线照射小鼠免疫功能的影响
目的 了解胶原蛋白肽(CP)对X射线照射小鼠免疫功能的调节作用.方法 ICR小鼠按体重分层随机分为5组,分别为健康对照组、2 Gy、5 Gy、2 Gy +CP 600 mg·kg-1 ·d-组(2 GyCP)和5 Gy +CP600 mg·kg-1·d-1组(5 Gy CP).6MVX射线单次全身照射诱导免疫抑制小鼠模型,剂量率为6 Gy/min.2 Gy CP和5 Gy CP组的小鼠连续7d腹腔注射给予胶原蛋白肽600 mg/kg.测量小鼠体质量、胸腺和脾脏质量,计算胸腺和脾脏指数;检测刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾脏T淋巴细胞增殖能力及脾脏T淋巴细胞分泌的白介素-2(IL-2)的水平.结果 与健康对照组相比,X射线照射小鼠的胸腺指数、脾脏指数、脾脏T淋巴细胞增殖能力及IL-2浓度显著降低(F=76.857、181.870、63.133、8.499,P＜0.05).腹腔注射胶原蛋白肽后,与同等剂量单纯照射小鼠比较,上述指标均有所恢复.结论 腹腔注射胶原蛋白肽能够增强X射线照射小鼠的免疫功能.
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X射线照射对原代培养海马神经元突起生长的作用
目的 探讨X射线照射对离体培养原代海马神经元突起生长的作用.方法 采用离体的方式培养原代海马神经元,分别给予0、2、4、8、10和12 Gy剂量照射,在照射后第1天和第3天,采用MTT法检测电离辐射对原代海马神经元死亡的影响,免疫荧光染色检测电离辐射对原代海马神经元神经突起的影响.结果 在照射后第1天和第3天,随着剂量的增加,海马神经元细胞死亡增多,差异有统计学意义(F=123.068、43.370,P＜0.05),但4、8、10和12 Gy照射组间差异无统计学意义(P＞0.05).不同剂量照射后第1天,神经突起长度、总树突分支长度(TDBL)差异均有统计学意义(F=9.169、7.856,P＜0.05),照后第3天神经突起长度、TDBL和总树突分支点数(TDBTN)差异均有统计学意义(F=23.797、6.565、6.021,P＜0.05).结论 X射线照射对离体培养的原代海马神经元突起的生长具有抑制作用.
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NF-kB抑制与X射线诱导的人非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡的研究
目的 探讨NF-kB p65对X射线诱导人非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma,NHL)细胞凋亡的作用及其调控机制.方法 以NF-kB p65抑制剂quinazoline (QNZ)处理人NHL细胞.将NHL细胞株Namalwa、Ramos和Raji细胞分为空白对照组、单纯照射组(IR)和X射线+QNZ实验组( IR+ QNZ),采用Annexin-V染色方法检测肿瘤细胞凋亡水平的变化,采用Western blot方法检测各细胞株中Survivin及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3的表达水平；应用实时定量PCR方法检测Survivin mRNA水平.结果 应用流式细胞仪检测凋亡细胞百分比,结果显示,QNZ处理后进行照射与单纯照射组相比凋亡细胞明显增加,且具有药物浓度依赖性(t=2.93～12.52,P＜0.05),Western blot法检测结果显示,电离辐射可显著增加人NHL细胞中Survivin蛋白的表达.而应用1、10和50 nmol/L QNZ处理人NHL细胞24 h后进行照射,可显著下调电离辐射所诱导的NHL细胞中的Survivin蛋白表达.随药物浓度增加其作用更为明显(t=3.29～ 16.72,P＜0.05).同时凋亡相关蛋白Bcl-2表达减低,而Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值明显降低,与单纯照射组相比,差异有统计学意义(t =6.20 ～9.91,P＜0.05).预处理QNZ后射线诱导的3种NHL细胞Survivin mRNA均不同程度下降.结论 抑制NF-kB能够增加X射线诱导的NHL细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin蛋白表达水平及对凋亡相关蛋白Bcl-2家族的调节有关.
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含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响与ATM激酶的关系
目的 探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸( unmcthylated cytosine-phosphateguanine oligodeoxynucleotides,CpG ODN) 7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响及毛细血管扩张共济失调突变( ATM)激酶磷酸化在这一过程中的作用.方法 人肺腺癌A549细胞用随机表法分为5组,对照组、CpG组、单纯照射组、CpG+X射线组和ATM siRNA+CpG+X射线组.采用集落形成法观察细胞存活率.流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.Western blot检测ATM激酶及其下游底物周期检测点激酶2(checkpoint kinase 2,Chk2)和P53蛋白的表达.结果 A549细胞经CpG ODN7909预处理后,在X射线照射下生长缓慢,集落形成明显减少,与单纯照射组比较,差异有统计学意义(t=13.41,P＜0.05)；增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞G2/M期阻滞和凋亡,与单纯照射组比较,差异有统计学意义(t=17.32和7.71,P＜0.05)；明显增加了X射线诱导的ATM、Chk2及P53蛋白磷酸化水平；小分子干扰RNA暂时性抑制ATM的表达后,CpG ODN7909对X射线诱导G2/M期阻滞及凋亡的作用减弱,与CpG+X射线组比较,差异有统计学意义(t=26.84和2.98,P＜0.05).结论 CpG ODN7909在体外增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞ATM激酶磷酸化,这一作用可能参与G2/M期阻滞和凋亡的调节.
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重离子与X射线照射肺癌细胞A549的生物学效应比较
目的 比较碳重离子与X射线对肺癌细胞的生物学效应.方法 对A549细胞分别进行碳重离子和X射线照射,通过克隆形成实验检测照射后细胞存活情况;流式细胞术检测细胞周期分布;通过Hoechst 33258荧光染料对照射后固定的细胞进行染色,计算凋亡率;采用实时荧光定量PCR方法检测照射后48 h细胞内DNA依赖性蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)和H2AX的mRNA表达水平.结果 细胞存活曲线显示,碳重离子造成的细胞存活分数远低于X射线,并将细胞周期阻滞于G2/M期(t=4.77、14.53、14.54,P＜0.05),导致大部分细胞进入凋亡途径.碳重离子与X射线辐照后DNA-PKcs的表达上调(t=10.91、5.05,P＜0.05).结论 碳重离子照射对肺癌细胞造成生物学效应远高于X射线.
关键词： 重离子 X射线 细胞凋亡 DNA依赖性蛋白激酶催化亚单位 -
不同类型心血管介入手术辐射剂量分析
目的 分析不同类型心血管介入手术患者所受X射线辐射剂量以及影响辐射剂量的因素.方法 按照甲、乙、丙3位术者的患者资料,抽取本院接受心血管介入手术的患者442例,包括单行冠状动脉造影术(CAG)、冠状动脉介入术(PCI)、射频消融术(RFCA)、先天性心脏病介入术(CHD)和永久性心脏起搏器植入术(PCPI).采集患者的皮肤表面累积入射剂量(CD)、剂量面积乘积(DAP)、透视时间.结果 CAG、PCI、RFCA、CHD、PCPI各组患者的CD值分别为(0.34 ±0.23)、(1.33±0.76)、(0.71±0.43)、(0.27±0.22)和(0.92±0.42) Gy,DAP值分别为(34.18±23.33)、( 135.92±81.14)、( 79.79±50.66)、(27.93±23.66)和(94.60±48.11) Gy.cm2.透视时间分别为(4.82±3.73)、(16.64±9.01)、(17.04±15.29)、(9.60±5.97)和(7.31±6.45) min.DAP值与透视时间呈高度相关性(r =0.84,P＜0.05).结论 不同类型心血管介入手术患者所受的平均辐射剂量不同.辐射剂量和透视时间与手术难易度和术者操作熟练程度有关,可通过提高操作技术水平、减少透视时间降低患者辐射剂量.
