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组织因子表达与胃癌微血管生成的关系及其临床意义
背景与目的:组织因子(tissue factor,TF)生理功能为凝血过程的启动者.近来发现TF参与多种恶性肿瘤微血管形成的过程.本研究旨在探讨胃癌组织中表达的组织因子与其微血管形成过程之间的关系和临床意义.方法:应用免疫组织化学EnVisionTM法,检测了80例胃癌和20例正常胃组织标本中TF、VEGF(血管内皮生长因子)的表达情况和CD34单克隆抗体标记的MVD值(肿瘤微血管密度).结果:胃癌组织中TF和VEGF的阳性表达率分别为65.00%(52/80)和67.50%(54/80),MVD值为36.14±9.94;正常胃组织中TF和VEGF的阳性表达率分别为5.00%(1/20)和5.00%(1/20),MVD值为12.10±3.27.胃癌组织中TF的表达与VEGF的表达和MVD值之间均存在相关性(P＜0.05),组织中TF表达越高,相应VEGF的表达越高,MVD值也越大.TF与患者的总生存期、TNM分期和肝脏转移状况有关.结论:胃癌组织中异常表达增高的TF与胃癌微血管形成过程和患者预后有关.
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丹红注射液对家兔颈动脉PTA术后内膜增生及bFGF、TF表达的影响
目的 探讨丹红注射液对家兔颈动脉经皮腔内血管成形(PTA)术后内膜增生和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及组织因子(TF)表达的影响.方法 50只新西兰大白兔按随机数字表法分为5组:假手术组、模型组和低、中、高剂量丹红注射液治疗组,每组10只;每组再按检测时间点分为术后7 d、28 d 2个亚组,每亚组各5只.假手术组仅结扎颈外动脉,后四组采用球囊损伤颈动脉法制备家兔颈动脉PTA术后狭窄模型.各治疗组于球囊损伤术前第1天开始分别静脉注射丹红注射液1 mL/(kg·d)、2 mL/(kg·d)、4 mL/(kg·d),连续7 d或14 d.假手术组及模型组给予静脉注射生理盐水2 mL/(kg·d).术后7、28 d时分别取模型靶血管进行组织学观察,免疫组化染色检测bFGF和TF的表达,图像分析系统进行半定量分析.结果 术后7 d时模型组新生内膜面积、新生内膜面积/中层面积(I/M)与其他组比较差异无统计学意义(P>0.05);术后28 d时模型组新生内膜面积、I/M比值较假手术组明显增加,而中、高剂量丹红注射液治疗组较模型组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).与模型组相比,中、高剂量丹红注射液治疗组血管壁bFGF和TF表达量均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),而低剂量丹红注射液治疗组差异无统计学意义(P>0.05).结论 中、高剂量组丹红注射液可抑制家兔颈动脉PTA术后内膜增生,其机制可能是通过下调动脉壁bFGF和TF的表达来实现的.
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抗凝血药物新亮点
凝血起始过程抑制剂TFPI动物实验证明,组织因子通路抑制因子(TFPI)可减弱凝血过程并提高败血症患者生存率.有关重组TFPI可否应用于人体的评估也已进行,Ⅲ期大型临床试验结果并不太令人满意,进一步的试验暂停.但TFPI的相关资料不完全,对其评价尚有争议.
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组织因子通路抑制因子TFPI
组织因子通路抑制因子(TFPI)是近年来受到国内外高度重视的一种新的生理性凝血调节因子.这个抑制剂属于库尼氏型丝氨酸蛋白酶抑制剂类,曾称为抗Ⅶ因子(AC)、外源性通路抑制剂(EPI)和与脂蛋白有关的凝血抑制因子(LACI),现称为组织因子通路抑制因子(TFPI).
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MCP-3对人脐静脉内皮细胞表达ICAM-1,VCAM-1、TF/TFPI及其凋亡的影响
目的 研究单核细胞趋化因子-3(MCP-3)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达ICAM-1、VCAM-1、TF、TFPI及其凋亡的影响.方法 分离、培养人脐静脉内皮细胞,分别给予0～3.0 ng/ml的MCP-3进行干预,确定MCP-3对HUVECs的适作用浓度,以此浓度干预HUVECs,在MCP-3加药之前1h分别给予MCP-3抗体(20 ng/ml)、PI3K抑制剂LY-294002(5 mmol/ml)处理细胞,MCP-3作用24 h后提取各组总RNA、总蛋白,用RT-PCR、Western blot分别检测干预后的ICAM-1、VCAM-1 、TF、TFPI的表达.模拟病理状态,用ox-LDL干预HUVECs与空白组对照,24 h后提取各组总RNA、总蛋白,用RT-PCR、Western Blot分别检测各组MCP-3表达情况.后,用MCP-3及MCP-3+CCR2拮抗剂RS102895 (6μmol/L)分别干预HUVECs,作用24、48 h分别检测HUVECs凋亡率及caspase3的表达,并与空白对照组比较.结果 MCP-3对HUVECs的适作用浓度为0.3 ng/ml (P＜0.05)；MCP-3可诱导HUVECs细胞中ICAM-1、VCAM-1、TF表达的增加,同时可抑制TFPI表达(P＜0.05);MCP-3抗体和LY-294002可分别拮抗、抑制此作用(P＜0.05)；ox-LDL可上调HUVECs表达MCP-3 (P＜0.05)；作用24、48 h后MCP-3可明显诱导HUVECs凋亡,CCR2抑制剂可拮抗此作用.结论 ox-LDL可诱导HUVECs表达MCP-3,MCP-3可诱导HUVECs凋亡,且可能部分通过PI3K信号通路影响HUVECs功能.
关键词： 单核细胞趋化因子-3 内皮细胞 粘附分子 组织因子 凋亡 -
模拟微重力对单核细胞增殖及组织因子mRNA表达的影响
目的 探讨模拟微重力对单核细胞增殖及组织因子(TF)mRNA表达的影响.方法 将单核细胞株THP-1细胞置于RCCS系统中进行培养,以细胞计数和流式细胞术测定THP-1细胞的增殖能力;RT-PCR检测THP-1细胞TFmRNA的表达.结果 模拟微重力条件下THP-1细胞计数显著低于静止组(P<0.01).培养24 h后,微重力组G0/G1期细胞(67.64±2.71)%明显高于静止组(46.57±1.64)%(P<0.05).THP-1细胞未受LPS刺激时,微重力组和静止组均低表达TF mRNA,两者间无统计学差异;加入LPS培养4 h后,微重力组和静止组THP-1细胞TF mRNA表达均增加,但微重力组(2.301±0.179)明显低于静止LPS刺激组(9.210±1.328)(P<0.05).结论 模拟微重力可抑制单核细胞的增殖以及LPS刺激下TFmRNA表达的增加.
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川芎嗪对凝血酶诱导血管内皮细胞组织因子表达的影响
目的 观察川芎嗪(TMP)对凝血酶诱导脐静脉血管内皮细胞株ECV304表达组织因子(TF)的影响.方法 ECV304细胞培养采用RPMI 1640完全培养基;一期凝同法测总的细胞促凝活性(PCA);RT-PCR的方法检测TFmRNA.结果 凝血酶增强ECV304细胞的促凝活性(PCA),并具有明显的量-效依赖关系(r=0.9602,P<0.01).通过乏FVII血浆与TF单克隆抗体法确认PCA来自TF活性.单用TMP(125～1000μg/ml)对ECV304细胞TF表达没有影响(P>0.05).在给予凝血酶之前30 min用TMP(125～1000 μg/ml)预处理ECV304细胞,TMP可呈剂量依赖式地抑制凝血酶(20 U/ml)诱导ECV304细胞PCA(r=-0.9644,P<0.01)和TF mRNA(r=-0.9576,P<0.05)增加的作用,在1000μg/ml时抑制作用达到强;在凝血酶刺激ECV304细胞后4、6、8、10、12 h,TMP(1000 μg/ml)均可以抑制凝血酶诱导的ECV304细胞PCA增加,在8 h时明显(P＜0.05).结论 TMP可抑制凝血酶诱导ECV304细胞TF的表达,这一作用是在mRNA水平上实现的.
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丹参酮ⅡA对RAW264.7细胞分泌MMP-12、TF的影响
目的 观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对RAW264.7细胞中组织因子(TF)和基质金属蛋白酶-12(MMP-12)表达的影响,从而探讨TanⅡA对急性冠脉综合征(ACS)的防治作用.方法 体外培养RAW 264.7细胞,以ox-LDL作为刺激因子,采用MTT法测定了巨噬细胞的增殖,采用ELISA法测定培养细胞上清液中TF浓度,分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥法测定上清液中超氧化物歧化酶活(SOD)和丙二醛浓度(MDA),并采用Western-blot法测定细胞中MMP-12的表达,从而观察TanⅡA对ox-LDL引起的巨噬细胞增殖、脂质过氧化及其MMP-12、TF分泌的影响.结果 15、30、60、120 μg/ml TanⅡA可剂量依赖性抑制50 μg/ml ox-LDL引起的RAW264.7细胞的增殖;30、60、120 μg/ml TanⅡA可明显增加细胞上清液中SOD活性、降低MDA浓度及TF浓度,并降低细胞内MMP-12的表达.结论 TanⅡA可抑制ox-LDL引起的RAW264.7细胞的增殖,可抑制该细胞中TF和MMP-12的表达,并且这种作用可能与其抗氧化作用有关.
关键词： 丹参酮ⅡA 组织因子 基质金属蛋白酶-12 SOD MDA -
RNA干扰人脐静脉血管内皮细胞组织因子基因表达
目的 利用RNA干扰技术沉默脐静脉内皮细胞中组织因子基因,实现瞬时沉默,为进行组织因子(TF)表达干扰的体内试验进行探索.方法 设立3种处理方法:①空白未干扰;②假干扰;③RNA干扰,每种实验方法各有3个样本.将合成的人组织因子基因(NM 001993)干扰片段shRNA序列,扩增、提取、测序正确后,转染至人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),分别对3种处理方法后TF基因沉默前后mRNA的表达采用Gel-Pro Analyzer软件进行区带灰度值扫描并分析、TF蛋白水平的表达采用免疫荧光检查进行观察.结果 shRNA转染到HUVECs后TFmRNA的表达处理间差异显著,F=27.657,P=0.001,未干扰和假干扰之间没有显著性差异(P=0.103,>0.05),未干扰和干扰之间(P=0.000,<0.05)有显著性差异.空白未干扰TF免疫荧光检测呈现"满天星"的表现,在阴性对照组荧光染色略有减少,在RNA干扰组TF蛋白表达明显减少.结论 HUVECs中TF的表达被所构建的pENTRTM/U6-TF-shRNA载体明显抑制,有可能成为未来出凝血及其它疾病的新的治疗手段之一.
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沉默组织因子重组腺病毒的构建和胰岛中沉默效果检测
目的 构建复制缺陷型重组腺病毒介导短发夹RNA(shRNA):干扰组织因子(TF)在胰岛表达.方法 设计并合成四对单链寡核苷酸(ss oligo),经变性退火为双链寡核苷酸(ds oligo)插入穿梭质粒pENTR/U6载体,测序正确后经脂质体介导入成人胰岛,通过实时定量RT-PCR方法筛选对TF沉默效果佳穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,然后与腺病毒骨架质粒行同源重组.筛选出正确重组子,用293A细胞包装出表达TF-shRNA的复制缺陷型重组腺病毒并测定其病毒滴度.通过实时定量RT-PCR腺病毒沉默TF效果予以检测.结果 测序结果提示所构建的pENTR/U6-shRNA质粒正确,并从四对ds oligos筛选出对组织因子沉默效果佳的穿梭质粒pENIR/U6-shRNA,经同源重组后成功构建了介导shRNA-TF复制缺陷型重组腺病毒.转染胰岛后,通过实时定量RT-PCR方法检测发现shRNA-TF腺病毒感染胰岛后对TF mRNA的沉默效果4 d后达佳效果,为54.29%(P＜0.05 vs NC).结论 成功构建的介导shRNA复制缺陷型重组腺病毒可以体外抑制胰岛细胞中组织因子的表达.
关键词： 重组腺病毒 组织因子 短发夹RNA(shRNA) 胰岛 基因沉默 -
益母草对人脐静脉内皮细胞组织因子转录及表达的影响
目的 探讨益母草(Leonurus Heterophyllus Sweet,LHS)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)表达和转录的影响.方法 HUVECs的培养按Jaffe法,选用第2代细胞进行试验.测定不同浓度LHS处理前后组织因子表达,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TF mRNA水平.结果 LHS对HUVECs TF活性及TFmRNA转录的影响与正常对照组相比差异有明显统计学意义(P＜0.01).结论 LHS能下凋HUVECs TF的表达,干预HUVECsTFmRNA的转录.
关键词： 益母草 组织因子 人脐静脉血管内皮细胞 反转录聚合酶链反应 -
2型糖尿病患者尿液组织因子及其促凝血活性检测的意义
目的 探讨尿液组织因子(TF)含量及其促凝血活性(PCA)在不同尿微白蛋白水平的2型糖尿病(DM)患者中的变化及其意义.方法 86名2型DM患者按照尿白蛋白/肌酐(UACR)比共分为3组,即UACR<30 mg/g的正常蛋白尿组42例,30mg/g≤UACR<300mg/g的微量白蛋白尿组26例,UACP≥300 mg/g的大量白蛋白尿组18例,21名健康体检者为对照组.ELISA法测定各组尿液TF含量和一步凝固法检测TF-PCA活性.常规检测空腹血糖、糖化血红蛋白、超敏CRP(Hs-CRP)、肾功能.结果 DM组TF含量和PCA活性随尿蛋白水平升高而升高,在不同糖尿病组别间存在差异;尿液TF活性与尿素、肌酐、胱抑素C、hs-CRP、UACR、空腹血糖呈正相关(P<0.05),与其他测定指标无相关性,而尿液TF含量仅与hs-CRP、UACR呈正相关.结论 2型DM尤其是早期糖尿病肾病患者尿液TF呈高表达,可能与糖尿病肾病的发病机制、病程进展相关.
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急性心肌梗死及脑梗死患者组织因子、组织因子途径抑制物、因子Ⅶ的检测及临床意义
目的 探讨急性心肌梗死及脑梗死患者组织因子途径相关凝血因子的变化及其临床意义.方法 观察分析69例急性心肌梗死、71例急性脑梗死患者以及50名健康老年人组织因子、组织因子途径抑制物、因子Ⅶ等指标.血浆中组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)活性测定采用发色底物法,抗原测定用ELISA法;凝血因子Ⅶ(FⅦ)促凝活性测定采用一期凝固法,FⅦa水平测定采用重组可溶性组织因子法.结果 与对照组相比,急性心肌梗死患者血浆中TF活性、TF抗原、TFPI活性与TFPI抗原均显著增加(P均＜0.05),而血浆中FⅦ:C无显著变化(P＞0.05),但FⅦa显著增加(P＜0.05);急性脑梗死患者血浆中TF活性、TF抗原均升高(P均＜0.05),TFPI活性、TFPI抗原均降低(P均＜0.05),而血浆中FⅦ:C、FⅦa显著增加(P均＜0.05).两病例组相比,急性心肌梗死组TF活性、抗原升高更为显著(P均＜0.05);急性心肌梗死组TFPI活性、抗原增加,而急性脑梗死组均降低,差异具有显著性意义(P均＜0.05);FⅦ:C在急性脑梗死组显著升高(P＜0.05),而FⅦa两组差异并无显著性(P＞0.05).结论 急性心肌梗死和急性脑梗死患者均存在组织因子途径的启动,血栓形成风险增加,测定上述指标对了解疾病发展趋势具有辅助作用.
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早期生长反应因子-1和组织因子在大鼠胰腺炎组织中的表达
目的观察早期生长反应因子-1(Egr-1)和组织因子(TF)在实验性大鼠急性胰腺炎组织中的表达.方法以大剂量雨蛙素(每小时腹腔注射20μg/kg·b.w.,连续4h)诱导建立大鼠急性实验性胰腺炎模型.观察刺激后30min至4h时急性胰腺炎组织Egr-1mRNA和蛋白的表达以及TFmRNA的表达,并进行免疫组织化学检测.结果大剂量雨蛙素刺激后,大鼠胰腺呈典型的胰腺炎改变.刺激后30min胰腺组织Egr-1mRNA表达达到高峰,然后逐渐下降.但Egr-1蛋白水平在刺激后2h达到高峰.组织学观察发现,刺激后2h,几乎每个胰腺腺泡细胞均表达Egr-1蛋白,并大多集中在细胞核.TFmRNA的表达在刺激后1h出现,并在4h内逐渐增高.大剂量的蛙皮素刺激胰腺组织仅引起少量的Egr-1mRNA的表达.结论Egr-1作为一种前炎性转录因子在急性胰腺炎的发生中可能起着重要的作用,这一作用在一定程度上可能是通过调节TF的表达而实现的.
关键词： 早期生长反应因子-1 急性胰腺炎 组织因子 雨蛙素 蛙皮素 -
TF/FⅦa抑制剂的研究现状
组织因子(TF)和凝血因子Ⅶ(FⅦa)是外源性凝血途径的启动因子,在凝血级联反应中起着重要作用.该文综述了TF/FⅦa抑制剂及其应用研究现状,以期为抗凝新药研发提供新思路.
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组织因子在肿瘤中的作用
组织因子(tissue factor,TF)与肿瘤的血栓形成、血管新生、侵袭和转移等密切相关.本文就TF在肿瘤中的作用作一综述.
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凝血与纤溶因子蛋白高表达与肝细胞癌的关系
[目的]检测TF、uPA、uPAR在肝癌组织中的蛋白表达并探讨其临床意义.[方法]利用westernblot法对肝癌、癌旁、正常组织各27例进行TF、uPA、uPAR蛋白检测并结合临床病理资料进行分析.[结果]TF、uPA、uPAR在肝癌组织中用性率分别为74.07%(20/27)、74.07%(20/27)、74.07%(20/27);相对表达强度分别为4.093±1.256、1.376±0.403、1.314±0.440均较癌旁组织及正常组织升高,显著有差异性(P＜0.05).肝细胞癌患者中TF、uPA、uPAR相对表达强度在部分侵袭转移指标表达升高,显著有差异性(P＜0.05).[结论]TF、uPA、uPAR在肝癌组织及部分侵袭转移指标中表达升高,提示三者可能参与了肝细胞癌的发生及侵袭转移
关键词： 肝癌 组织因子 尿激酶型纤溶酶原激活因子 尿激酶型受体 -
血清组织因子及其途径抑制物与2型糖尿病视网膜病变的相关性
目的：探讨血清组织因子（ TF）、组织因子途径抑制物（ TFPI）与2型糖尿病（ T2DM）视网膜病变的关系。方法采用ELISA方法分别测定58例T2DM无视网膜病变（DR）患者（T2DM组）、65例T2DM合并视网膜病变患者（T2DM＋DR组）及40例正常人（NC）的血清TF、TFPI水平，分析TF、TFPI与糖尿病视网膜病变的相关性。结果 T2DM组TF、TFPI、TF／TFPI比值较NC组显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.01）；T2DM＋DR组TF、TF／TFPI比值较NC组显著升高，差异有统计学意义（ P＜0.01）；T2DM＋DR组TFPI较NC组差异无统计学意义（P＞0.05）；T2DM＋DR组TF、TF／TFPI比值较T2DM组显著升高，TFPI较T2DM组显著降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。多因素logistic回归分析显示TF是DR的独立影响因素。结论 DR患者TF、TF／TFPI升高，TFPI降低，提示TF、TFPI可能参与了DR的发生发展。
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组织因子和血管内皮生长因子在子宫内膜异位症组织中的表达及意义
目的：探讨组织因子（ TF）和血管内皮生长因子（ VEGF）在子宫内膜异位症（ EMs）组织中的表达及意义。方法通过腹腔镜活检或开腹手术，取得60例卵巢子宫内膜异位病灶组织及在位内膜40例，另取同期子宫肌瘤手术患者的正常子宫内膜组织25例作为对照，应用免疫组织化学技术对组织中的TF和VEGF蛋白的表达情况进行检测。结果 TF在EMs中异位内膜的表达与在位内膜中的表达差异无统计学意义（P＞0.05），异位内膜及在位内膜中的表达明显高于正常子宫内膜（P＜0.05）；VEGF在EMs中异位内膜的表达与在位内膜中的表达差异无统计学意义（P＞0.05），异位内膜及在位内膜中的表达明显高于正常子宫内膜（P＜0.05）。结论 TF和VEGF在EMs中诱导血管生成，促进EMs的发生发展。
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颅脑外伤后血浆凝血及纤溶指标的变化及意义
目的 检测脑外伤患者的凝血及纤溶指标,分析其脑外伤后的变化及与伤情和预后的关系.方法 选取80例脑外伤患者,测定入院时、伤后第4及第8天血浆组织因子(TF)和D-二聚体(D-D)水平,与对照组比较,再按格拉斯哥昏迷评分(GCS)及预后进行组间比较.结果 脑外伤患者的TF、D-D水平于入院时较对照组显著升高(P<0.01),此后逐渐下降,第4天时仍高于对照组(P<0.01),第8天时接近正常范围.GCS≤8分组的TF、D-D水平持续高于GCS>8分组和对照组(P<0.01);GCS>8分组伤后8 d时的TF水平基本降为正常值,而GCS≤8分组TF、D-D水平持续高于对照组和GCS>8分组(P<0.01).预后不良和死亡组同样高于预后良好组(P<0.01).结论 脑外伤患者早期存在高凝和继发性纤溶功能亢进,早期检测凝血纤溶功能对脑外伤伤情评估和预后具有重要的临床意义.
