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JAK激酶抑制剂AG490对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和凋亡的影响
背景与目的:目前研究表明,JAK-STAT3信号通路的异常激活与细胞恶性转化密切相关.本实验观察JAK激酶抑制剂AG490对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因Survivin、Mcl-1表达的影响,探讨JAK-STAT3信号通路在CNE-2Z细胞凋亡调控中的作用.方法:AG490作用于体外培养的CNE-2Z细胞.M1T法检测细胞增殖,Hoechst33342荧光活染、流式细胞术检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription.polymerase chain reaction,RT-PCR)检测STAT3、Survivin和McI-1 mRNA表达,Western blot检测STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、Survivin和Mcl-1蛋白表达.结果:100μmol/L AG490作用24、48 h后对CNE-2Z细胞增殖抑制率分别为37.95%和52.99%.流式细胞术显示,经50μmol/L和100 μmol/L AG490作用24 h后,细胞凋亡率由处理前的1.37%分别提高到9.30%和9.00%(P＜0.01).荧光显微镜下可见到典型的细胞凋亡形态学改变.细胞STAT3活化程度降低,Survivin、Mcl-1基因表达下调.结论:阻断JAK-STAT3信号通路可抑制CNE-2Z细胞增殖.并可能通过下调凋亡抑制基因Survivin、Mcl-1表达诱导细胞凋亡.
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JAK抑制剂AG490诱导乳腺癌细胞凋亡及对Survivin表达的影响
背景与目的:已有研究证实Survivin在多种乳腺癌中可呈高表达且与肿瘤的恶性程度和患者预后密切相关,但是Survivin在乳腺癌细胞中高表达的相关机制尚有待深入了解.本实验拟研究JAK-STAT信号通路抑制剂AG490在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中对Survivin表达以及对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响.方法:以MDA-MB-231细胞为研究对象,应用AG490后,用Western blot检测细胞中P-STAT3、Survivin的蛋白表达变化、RT-PCR检测Survivin mRNA的变化;用MTT法检测细胞增殖活性的改变;用流式细胞术检测细胞凋亡的情况.结果:AG490使MDA-MB-231细胞中P-STAT3和Survivin的蛋白表达减少,同时细胞的增殖活性降低,凋亡增多.P-STAT3/β-actin用药前为0.74,AG490 40 μmol/L作用24 h后为0.21;Survivin/β-actin用药前为1.09,40 μmol/L AG490作用24 h后为0.28.40μmoL/L AG490作用24 h后细胞出现"亚Gl"峰,凋亡率为5.62%;AG490 40μmol/L,作用48 h后细胞凋亡率为28.81%.结论:AG490可诱导MDA-MB-231细胞凋亡、减少Survivin的表达.
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STAT3在匹罗卡品致(癎)大鼠星形胶质细胞增生中的作用
目的 探讨致(癎)状态下大鼠海马内信号转导与转录激活因子3(STA3)与星形胶质细胞增生的关系.方法 匹罗卡品(PILO)腹腔注射建立大鼠颞叶癫(癎)模型,免疫组织化学方法观察阻滞JAK/STAT通路前后大鼠海马p-STAT3与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞的表达规律,双重免疫荧光方法观察p-STAT3与GFAP阳性细胞的关系.结果 癫(癎)发作3 h(SE 3 h)时即出现STAT3在海马内被激活,SE 3 d时达高峰,之后渐降低,至SE 30 d时仍维持在较正常时略高的水平上;GFAP阳性细胞数的变化规律与之类似.预先用AG490阻断STAT3通路后,海马区p-STAT3乃及GFAP阳性细胞数均明显减少.双重免疫荧光结果发现p-STAT3阳性胞核位于GFAP阳性细胞胞浆中.结论 匹罗卡品导致的癫(癎)伴有大鼠海马星形胶质细胞内STAT3的激活,STAT3的活化可能促进星形胶质细胞的反应性增生.
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电针对不同时间段局灶性脑缺血模型大鼠p-STAT5表达的影响
[目的]观察电针对局灶性脑缺血大鼠缺血灶周围区不同时间段磷酸化信号传导转录活化因子5(p-STAT5)表达的影响,探讨电针治疗脑缺血疾病的可能作用机制.[方法]将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组(电针百会、大椎)、AG490(阻滞剂)组和AC490+电针组,各组又分为术后2h、1d、3d、7d、21d5个时段组.采用电凝闭大脑中动脉法复制局灶性脑缺血(MCAO)模型,AG490组及AG490+电针组于术前20 min行右侧脑室注射AG490进行干预.采用免疫荧光及蛋白印迹技术检测病灶侧皮质p-STAT5的表达含量.[结果]各组各时间段的p-STAT5表达在免疫荧光及蛋白印迹检测中具有相似的发展趋势.假手术组在各时间段的检测中均只有少量表达,模型组2h至7d时间段p-STAT5表达较假手术组显著升高(均P＜0.01);电针组3d至7d时间段免疫荧光检测p-STAT5表达较模型组显著升高(P＜0.05或P＜0.01),在3d时间段蛋白印迹检测p-STAT5表达较模型组显著升高(P＜0.01);AG490组和AG490+电针组2h至3d时间段免疫荧光检测p-STAT5表达较模型组与电针组均显著降低(P＜0.05或P＜0.01),7d时间段p-STAT5表达较电针组显著降低(P＜0.01);而在2h至7d时间段蛋白印迹检测p-STAT5蛋白表达较模型组与电针组显著降低(P＜0.05或P＜0.01).[结论]电针改善缺血性脑损伤的内在机制可能与电针通过激活JAK2从而提高脑缺血病灶区p-STAT5的表达水平有关.
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AG490下调STAT3活化增强葫芦素B对B16F10黑素瘤细胞的抑制作用
目的:研究Jak2/STAT3特异性抑制剂AG490对葫芦素B(CuB)抑制B16F10黑素瘤细胞效应的影响,并探讨其作用机制.方法:用MTS法检测细胞增殖状态；用碘化丙锭(PI)染色分析细胞凋亡和细胞周期分布；用免疫印迹检测p-STAT3以及STAT3蛋白的表达情况.结果:CuB以时间与浓度依赖方式抑制BI6F10黑素瘤细胞的生长,AG490预处理能增强CuB对B16F10细胞的抑制作用；PI染色分析显示,AG490能增强CuB诱导B16F10细胞凋亡的比率；免疫印迹检测表明,CuB引起Bi6F10细胞中STAT3的活化(p-STAT3),AG490能明显下调pSTAT3蛋白的表达水平.结论:阻断Jak/STAT3的活化可增强CuB对B16F10黑素瘤细胞的抑制作用.
关键词： AG490 葫芦素B B16F10黑素瘤细胞 STAT3 -
JAK2、STAT1在油酸型ARDS大鼠中的作用及GCs对其调控研究
目的:探讨JAK2/STAT1信号通路在油酸型大鼠急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress svndrome,ARDS)中的表达意义,以及GCs(糖皮质激素)对该通路的调控作用,以阐明ARDS发生和治疗机制.方法:成年健康雄性SD大鼠72只,随机分为Ⅰ(ARDS)组、Ⅱ(ARDS+AG490)组、Ⅲ(ARDS+GCs)组、Ⅳ(正常对照)组,每组分为2、4、8h三个时间点.腹主动脉取血,ELISA检测大鼠血清中白血病抑制因子(LIF)的含量;取肺组织做HE染色并进行病理学观察,实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织中STAT1 mRNA的表达变化.结果:Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组在各时间点LIF和STAT1 mRNA表达水平均高于正常对照组(P<0.05),Ⅱ、Ⅲ组各时间点的该促炎因子和mRNA表达水平均低于Ⅰ(ARDS)组(P<0.05);病理学观察显示:Ⅱ、Ⅲ组肺损伤程度介于Ⅰ和Ⅳ组之间.结论:JAK2/STAT1信号通路在大鼠ARDS中发挥重要作用,GCs能够抑制该通路在其中的表达,且抑制程度和对ARDS的疗效与单纯抑制JAK2/STAT通路相似,表明GCs对ARDS的治疗可能通过抑制JAK2/STAT信号通路而实现.
关键词： 呼吸窘迫综合征 成人 JAK2/STAT1 GCS AG490 -
AG490单用或联合顺铂对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用
目的:了解顺铂(DDP)、AG490单独及联合应用对宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用.方法:裸鼠背侧近右后肢处皮下接种人宫颈癌hela细胞,30 d后分4组治疗,对照组腹腔注射无菌生理盐水;DDP组腹腔注射5 mg/kg;AG490组腹腔注射8 mg/kg;DDP+AG490组腹腔注射DDP 5 mg/kg+AG490 8mg/kg;上述药物均每3 d注射1次.共注射4次,治疗期间观察并记录各组裸鼠皮下移植瘤的生长情况,计算肿瘤体积、肿瘤生长抑制率,绘制肿瘤生长曲线,观察用药后裸鼠体重变化.结果:各治疗组治疗后肿瘤体积和抑瘤率与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05);与DDP及AG490组比较,DDP+A0490组肿瘤体积明显减小(P<0.05),抑瘤率明显增高(P<0.05);DDP组与DDP+AG490组相比体重明显减轻(P<0.05),AG490组与对照组比较体重变化差异无显著性(P=0.19).结论:DDP与AG490比两药单独应用抑制肿瘤生长的作用更强,二者具有协同抗癌作用,AG490可以增强DDP的药物敏感性并且减轻药物副作用.
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AG490对人胃癌裸鼠移植瘤中瘦素、JAK2/STAT3信号通路的影响
目的：探讨在AG490干预下,瘦素(leptin)和JAK2/STAT3信号通路对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响,以及与其基因表达水平之间的关系。方法建立人胃癌 SGC-7901细胞 BALB/c-nu雄性裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机平均分为4组,A组为空白对照组,B组腹腔注射 AG490,C 组腹腔注射 AG490和碧生源牌减肥茶灌胃,D组腹腔注射5-FU。记录各组裸鼠肿瘤重量,计算肿瘤生长抑制率,RT-PCR 检测肿瘤中 leptin、JAK2、STAT3 mRNA 表达水平。结果AG490、5-FU可抑制人胃癌移植瘤的生长,同时均可降低 leptin表达水平；AG490可同时降低JAK2、STAT3 mRNA的表达水平,而5-FU不能降低JAK2、STAT3 mRNA的表达；碧生源牌减肥茶对瘤重和leptin、JAK2、STAT3 mRNA表达水平无影响。结论 AG490可能通过阻断JAK2/STAT3信号通路降低leptin的表达,进一步抑制胃癌细胞增殖。leptin的调控除了JAK2/STAT3信号通路外可能还存在其他途径。
关键词： AG490 瘦素 JAK2/STAT3 信号通路 人胃癌裸鼠移植瘤 -
AG490通过JAK2/STAT3信号通路对肝癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及机制
目的:探讨JAK2/STAT3信号通路在AG490干预下对人肝细胞癌裸鼠移植瘤生长、凋亡的影响以及与相关基因表达之间的关系.方法:建立人肝癌细胞裸鼠移植瘤模型,将BALB/C-nu裸鼠随机平均分成3组,按照实验设计分为对照组(生理盐水)、低浓度AG490组(浓度4 mg/kg的AG490)、高浓度AG490组(浓度为8 mg/kg的AG490),而后按照实验设计分别给予生理盐水或AG490处理裸鼠.观察期间记录各组裸鼠体质量、瘤重、肿瘤体积、计算肿瘤生长抑制率;通过流式细胞法检测细胞周期变化和凋亡情况;蛋白质印迹法检测细胞中p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3、MMP-2、Bcl-2、Bcl-xl及Bax蛋白表达的变化;免疫组织化学检测移植瘤组织中p-JAK2和p-STAT3蛋白表达.结果:实验组裸鼠瘤重、肿瘤体积均小于对照组,抑瘤率高于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞分析结果显示低浓度AG490组(73.98±0.90)％、高浓度AG490组(81.39±1.66)％的细胞周期G0/G1期较对照组(59.30±1.13)％明显增加(P＜0.05),同样低浓度AG490组(33.32±1.16)％和高浓度AG490组(52.22±1.06)％的细胞凋亡率较对照组(1.50±0.12)％明显增高(P＜0.05).Western blot结果显示低浓度AG490组(1.073土0.028)、(0.955±0.025)和高浓度AG490组(0.763±0.023)、(0.751±0.037)的p-JAK2,p-STAT3蛋白表达均较对照组(1.265±0.012)、(1.477±0.020)明显降低(P＜0.05).同时下调通路下游蛋白MMP-2,Bcl-2,Bcl-xl和上调Bax表达水平.免疫组化结果显示AG490组移植瘤肿瘤组织p-JAK2和p-STAT3蛋白表达较对照组明显降低(P＜0.05).结论:AG490能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路促进人肝癌细胞的凋亡、抑制增殖和侵袭作用达到抑制裸鼠移植瘤的生长,提示JAK2/STAT3通路在肝细胞癌恶性演进过程中发挥了重要作用.
关键词： JAK2/STAT3信号通路 AG490 肝癌裸鼠移植瘤 -
AG490对食管鳞癌Eca-109细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响
目的 研究Janus激酶抑制剂AG490对食管鳞癌Eca-109细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响,并探讨其作用机制.方法 用不同浓度(0、25、50、100μmol/L)的AG490处理Eca-109细胞,采用MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞放疗敏感性,Western blot检测各组细胞Stat3、p-Stat3、Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 与对照组比较,AG490各浓度组(25、50、100μmol/L)在AG490作用后第1～5天Eca-109细胞增殖减慢,呈量效-时效关系(P＜0.05,P＜0.01).与对照组比较,AG490各浓度组(25、50、100μmol/L)在AG490作用48 h后Eca-109细胞凋亡率增加,呈量效关系(P＜0.01).与对照组比较,各剂量X射线照射后50 μmol/L组细胞存活率降低,放射生物学参数SF2、D0、Dq、N值均降低(P＜0.05),SERD0和SERDq值增加(P＜0.05).与对照组比较,AG49050μmol/L +4Gy组和AG490 50μmol/L组p-Stat3蛋白表达下调(P ＜0.05,P＜0.01).与对照组比较,AG490各浓度(50和100 μmol/L)组Bcl-2的表达降低(P＜0.05)、Bax的表达增加(P＜0.05).结论 AG490抑制Eca-109细胞增殖,增加细胞凋亡,增加放疗敏感性,其机制可能是通过阻断Stat3蛋白的活化,调控凋亡蛋白(Bcl-2和Bax)的表达.
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JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中的作用
目的 探讨JAK2/STAT3通路在肝癌细胞QGY-7701侵袭及血管生成拟态中的作用.方法 JAK2抑制剂AG490(5、10 μmol/L)处理肝癌细胞48 h,Transwell小室、体外成管实验分别检测各组细胞的体外侵袭能力和成管能力,RT-PCR检测Twist1及MMP-2 mRNA表达差异,Western blot检测STAT3、p-STAT3、Twistl和MMP-2蛋白表达差异.结果 与对照组相比,Transwell小室穿膜细胞数减少,形成管道结构数目减少,Twist1及MMP-2 mRNA表达减少,Twist1、MMP-2和p-STAT3蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05),STAT3蛋白表达无差异(P＞0.05).结论 AG490能有效抑制肝癌细胞侵袭及成管的能力,JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中起促进作用.
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JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞侵袭转移的影响
目的 研究JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移的影响,探讨JAK-STAT3信号转导通路在乳腺癌侵袭转移调控中的作用.方法 以乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象,应用JAK激酶抑 制剂AG490处理细胞,用MTT法检测细胞对人工基底膜的粘附能力变化;Transwel l小室进行人工重组基底膜侵袭和运动实验;Western blot检测细胞中P-STAT3水平.结果 JAK激酶抑制剂AG490可使人乳腺癌细胞MDA-MB-231中P-STAT3表达减弱,同时可使细胞粘附、侵袭、迁移能力下降.结论 JAK-STAT3信号转导通路参与乳腺癌细胞侵袭转移调控,阻断通路活化可以抑制乳腺癌细胞的侵袭转移.
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抑制Jak3激酶活性诱导NALM-6白血病细胞凋亡
目的研究Jak3的活化与急性淋巴细胞白血病(ALL)之间的关系.方法在不同浓度的Jak3抑制剂AG490处理Jak3活化的ALL前B细胞株NALM-6细胞后,用流式细胞术及噻唑蓝法分析细胞的凋亡、增殖情况.结果除5μmol/L组外,经10、15、20μmol/L AG49 0处理后NALM-6细胞均有明显的亚G1峰,与DMSO对照相比,凋亡率均有显著增加(P ＜0.05);噻唑蓝法示除5μmol/L组外,与DMSO对照相比,10、15、20μmol/L AG490均能显著抑制NALM-6 细胞的增殖(P＜0.05).以上作用呈剂量依赖性关系.结论 Jak3抑制剂AG 490能抑制NALM-6细胞的增殖并诱导凋亡,提示Jak3的活化与前B型ALL的发病相关.
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AG490抑制DOCI-LY8和Raji细胞生长及与STAT3信号的关系
目的:研究AG490对伯基特淋巴瘤(BL) Raji细胞和弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL) OCI-LY8细胞生长的影响及分子机制.方法:用不含AG490(对照组)和不同浓度(25、50、75及100 mg/L) AG490(试验组)分别培养Raji细胞和OCI-LY8细胞24、48及72 h,用MTT法检查2株细胞的代谢生长情况,RT-qPCR检测对照组和各试验组培养48 h时2株细胞STAT3、TIMP-1的mRNA表达;用Western blot检测AG490 50 mg/L培养48 h时Raji细胞的STAT3、p-STAT3及TIMP-1蛋白的表达,流式细胞术检测2株细胞的细胞周期变化.结果:在2株细胞中加入AG490后,细胞生长较对照组明显减弱(P＜0.05);与相应对照组比较,AG490试验组的Raji细胞和OCI-LY8细胞的G1期细胞都明显增多(P＜0.05),处于S期的Raji细胞无明显改变、而OCI-LY8细胞则明显减少(P＜0.05),G2-M期的Raji细胞明显减少(P＜0.05)、G2-M期的OCI-LY8细胞亦有减少的趋势;STAT3和TIMP-1的mRNA表达明显降低,且呈现出药物浓度依赖关系(P＜0.05);2株细胞内TIMP-1与STA T3的mRNA表达呈正相关关系(Raji r=0.744,P=0.034;OCI-LY8 r=0.984,P=0.000);AG490组Raji细胞中p-STAT3、STAT3和TIMP-1蛋白表达较对照组明显降低.结论:AG490对Raji细胞和OCI-ly8细胞生长有明显抑制作用,TIMP-1的表达可能与SATA3的活化有关,STAT3活化及其下游靶基因TIMP-1的上调表达可能是AG490影响2株细胞生长的重要分子机制.
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苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490减轻中性粒细胞性哮喘模型小鼠气道炎症
目的 观察苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490对中性粒细胞性哮喘模型小鼠气道炎症的影响.方法 无特定病原体(SPF)级C57BL雌性小鼠54只,按随机数字表法分成中性粒细胞性哮喘(NA)组、AG490处理的NA(NAAG)组和正常(NC)组,每组18只.NA、NAAG组小鼠于第0、6、13天经气道滴卵清蛋白(OVA)、脂多糖(LPS)致敏.NAAG组小鼠于实验第0天起经腹腔注射AG490每只500 μg,3次/周,连续3周.于第21天连续2d雾化吸入10 g/L OVA激发,每次1h.后1次雾化结束后24h时,收集小鼠标本并检测相关指标.收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并检测其有核细胞总数及分类比例;分离肺组织行HE染色及过碘酸希夫(PAS)染色,光镜下观察肺组织病理变化和杯状细胞增生;采用流式细胞术检测肺脏Th17细胞和调节性T细胞(Treg)的频数;采用ELISA检测小鼠BALF中IL-17的水平.结果 与NA组相比,NAAG组BALF有核细胞计数、中性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞百分比均明显降低,NAAG组肺组织病理学改变及杯状细胞增生较NA组明显减轻.与NA组相比,NAAG组BALF IL-17水平降低、肺组织Th17细胞比例减少、Treg比例增加.结论 NA小鼠致敏阶段给予AG490处理,可增加小鼠激发阶段肺组织Treg数量、减少Th17细胞数量,减轻NA小鼠气道炎症.
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AG490抑制甲状腺髓样癌TT细胞增殖并提高其放射敏感性
目的 研究AG490对体外培养甲状腺髓样癌TT细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响.方法 采用(0、25、50、100) μmol/L AG490处理甲状腺髓样癌TT细胞,MTT法和流式细胞术进行细胞增殖和凋亡检测,克隆形成实验检测其放射敏感性、Western blot法检测各组细胞Janus激酶2(JAK2)、磷酸化的信号转导子与转录激活子3(p-STAT3)、Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 与对照组相比,(25、50、100) μmol/L AG490组的抑制作用增强,呈浓度和时间依赖性;随着AG490药物浓度的增加凋亡率逐渐增加;与对照组相比,50 μmol/L组细胞存活率显著降低,放射生物学参数:射线为2Gy时的存活分数(SF2)、平均致死剂量(D0)、准阈剂量(Dq)和外推数(N)降低;D0时放射增敏比(SER D0)、Dq时放射增敏比(SERDq)则增加.Western blot结果显示JAK2、p-STAT3和Bcl-2的蛋白表达量随着药物浓度的升高而逐渐降低,Bax蛋白表达量随着药物浓度的升高而逐渐增加.结论 AG490可抑制甲状腺髓样癌TT细胞增殖、增加细胞凋亡、提高放射敏感性.
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槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT通路的影响
目的:研究槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT传导通路的影响.方法:实验分组为胃癌细胞组(只加入MGC-803细胞)、槲皮素处理组(40μmol/L槲皮素)和阳性对照组(40 μmol/L AG490,AG490为JAK2激酶抑制剂).采用免疫组织化学法和Western blot法检测槲皮素对胃腺癌MGC-803细胞中Leptin、Leptin receptor 和P-STAT3蛋白阳性表达率的影响.应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测槲皮素对Leptin、Leptin receptor mRNA表达水平的抑制作用.采用流式细胞术(FCM)测定槲皮素对MGC-803细胞的周期阻滞.应用AnnecxinV标记检测细胞凋亡率.结果:槲皮素处理MGC-803细胞后Leptin、Leptinreceptor、P-STAT3蛋白水平减少,Leptin、Leptin receptor mRNA水平减少,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),瘦素和P-STAT3蛋白之间呈直线相关关系(r=0.741,P＜0.05),瘦素受体和P-STAT3蛋白之间也呈直线相关关系(r=0.693,P＜0.05)；FCM显示细胞周期阻滞于G2/M期,凋亡率明显增加；随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加.结论:槲皮素可能通过JAK-STAT途径有效的下调胃癌中瘦素、瘦素受体和P-STAT3表达而发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用.
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酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制Jurkat T细胞增殖
目的:通过AG490对Jurkat T细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响.探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制Jurkat T细胞生长的可能性及其初步机制.方法:以Jurkat T细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测AG490对Jurkat T细胞表面分子CD69和CD25表达的影响;利用噻唑蓝(MTT)比色法观察AG490对Jurkat T细胞增殖的影响;采用碘化丙锭(PI)染色检测AG490对Jurkat T细胞周期的影响;应用Annexin V-FITC和PI双染色检测AG490对Jurkat T细胞凋亡的影响;Western blot检测AG490对Jurkat T细胞中ICBP90蛋白表达的影响以确定其与AG490抑制Jurkat T细胞增殖的关系.结果:随着AG490浓度从1 mmol/L增至30 mmol/L,细胞停滞于G0/G1期,阻止其进入S期和G2/M期,导致Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达显著降低;AG490对细胞的抑制作用于24 h为明显,抑制率可达27.37%,呈剂量依赖关系;AG490不能明显抑制Jurkat T细胞的活化或促进其凋亡.结论:AG490能明显抑制Jurkat T细胞的生长,其抑制作用可能通过下调Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达与细胞周期阻滞有关,而不是通过促进细胞凋亡而实现.
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AG490阻断肝癌细胞Stat3信号通路逆转免疫抑制的实验研究
目的:检测Stat3 mRNA在肿瘤细胞中的表达,研究JAK酶抑制剂AG490阻断Stat3信号通路对免疫抑制因子基因表达的影响,探讨应用AG490阻断肿瘤细胞Stat3信号通路逆转免疫抑制的可行性.方法:RT-PCR法检测Stat3mRNA表达;动态检测AG490作用前后肝癌细胞Stat3 mRNA表达以及VEGF、TGF-β和IL-10等免疫抑制因子基因的表达情况.结果:在所检测的人肿瘤细胞中5种有Stat3 mRNA的表达;AG490阻断肝癌细胞Stat3通路后,免疫抑制因子VEGF、TGF-β和IL-10等的mRNA表达减弱甚至消失.结论:AG490可通过阻断Stat3信号转导通路逆转免疫抑制,发挥抗肿瘤效应.
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AG490对高糖环境中人晶状体上皮细胞向间充质转化的抑制作用
目的：研究在高糖诱导人晶状体上皮细胞向间充质转化的过程中JAK-STAT通路的作用及AG490对此过程的影响。
方法：低糖(5.5 mmol/L ) DMEM 培养液体外培养人晶状体上皮细胞系 SRA01/04。高糖(30.5 mmol/L )处理细胞,按照是否加入AG490及其浓度的不同分为实验组和对照组。 CCK-8试剂盒检测晶状体上皮细胞的活性,选择实验组AG490浓度为10μmol/L和50μmol/L,处理时间分别为6,12,24和48 h；细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化；RT-PCR方法半定量检测TGF-β1,FN和α-SMA的mRNA表达量变化。
结果：在不同的处理时间(6,12,24,48 h ),高糖组( HG组)与低糖组相比,细胞的迁移能力增加(P<0.05),TGF-β1, FN和α-SMA表达量增高( P<0.05)；AG490组与HG组相比,细胞的迁移能力降低(P<0.05),TGF-β1,FN和α-SMA的mRNA表达量下降。
结论：JAK-STAT通路通过影响TGF-β1和细胞外基质转录表达参与了高糖诱导的人晶状体上皮细胞向间充质转化的过程。 JAK抑制剂AG490对此过程有抑制作用,且随着AG490浓度的增加其抑制作用增强。关键词： 晶状体上皮细胞 高糖 JAK-STAT通路 AG490 上皮向间充质转化
