基于专利分析和社会网络分析的天然抗肿瘤药研究
摘要： [目的]基于专利文献分析天然抗肿瘤药的发展态势.[方法]采用专利计量分析、社会网络分析等方法从专利申请数量、专利生命周期、专利技术领域、网络密度、中心性等方面对天然抗肿瘤药的发展态势进行深入分析.[结果]全球天然抗肿瘤药领域共有专利申请57 728件,近几年处于稳定的发展时期;美国和中国专利数量处于绝对领先地位,专利申请量分别为21 227件和18 172件;专利申请多的机构是中国上海BODE基因发展有限公司和瑞士罗氏制药公司,专利数量分别为1172件和862件;专利技术领域主要集中在抗肿瘤活性和剂型的相关研究;研究主题主要涉及肿瘤相关的基因克隆表达及其编码蛋白的特征与功能研究、细胞生长因子及其受体对肿瘤细胞的影响及机制研究等14个领域.[结论]天然抗肿瘤药是肿瘤领域非常重要的研究方向.通过对天然抗肿瘤药的专利进行深入分析,可以了解该领域的研究现状和发展态势,为肿瘤研究和新药研发提供一定的借鉴和参考.
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miR-302c在胃癌中表达及对胃癌细胞侵袭和迁移影响的机制研究
[目的]探讨miR-302c对人胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及机制.[方法]实时荧光定量PCR法检测miR-302c在胃癌细胞系和正常胃黏膜上皮细胞中的表达情况.在SGC7901和AGS细胞中分别转染miR-302c mimic和inhibitor后,Tranwell实验检测细胞侵袭和迁移能力变化.实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染后环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1(CREB1)的变化情况.[结果]与永生化的正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-302c在胃癌细胞系SGC7901、MKN28、N87、MKN45和AGS中表达降低.转染mimic和inhibitor后,miR-302c在SGC7901和AGS中表达分别明显上调和下调(P＜0.001).Transwell实验发现,上调miR-302c后,SGC7901细胞的侵袭和迁移能力明显降低,而下调miR-302c后,AGS细胞的侵袭和迁移能力明显增强.进一步研究发现,miR-302c可抑制CREB1的表达.功能挽救实验证明CREB1可部分恢复miR-302c上调对SGC7901细胞侵袭和迁移的抑制作用.[结论]miR-302c抑制胃癌细胞的侵袭和迁移,其机制可能是通过直接靶向CREB1.
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红树莓提取物抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的实验研究
[目的]探讨红树莓提取物抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的具体机制,为红树莓提取物预防并治疗肝癌提供理论依据.[方法]体外培养SMMC-7721细胞,应用CCK8方法及集落形成实验检测不同浓度的红树莓提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖活性的影响;通过流式细胞术检测SMMC-7721细胞经不同浓度的红树莓提取物作用72h后细胞周期的变化;应用Western blot方法检测红树莓提取物处理SMMC-7721细胞72h后细胞周期相关蛋白的表达变化,以及红树莓提取物对肝癌细胞AKT通路的影响.[结果]红树莓提取物能够抑制SMMC-7721细胞的增殖活性;不同浓度红树莓提取物处理SMMC-7721细胞72h后,与对照组相比,随着浓度的增高,G0/G1期细胞数比例降低(P＜0.05),S期细胞数比例升高(P＜0.05);红树莓提取物能够降低周期相关蛋白cyclinA及CDK2的表达(P＜0.01);同时使P-AKT(Ser473)表达下降(P＜0.01).[结论]红树莓提取物能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,这种抑制作用可能与AKT通路调控的cyclinA-CDK2介导的S期阻滞相关.
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ENO1在胃癌干细胞中表达及其与胃癌侵袭转移的相关性研究
[目的]探讨ENO1在胃癌干细胞中的表达及其对胃癌侵袭转移的影响.[方法]以胃癌SNU-5模型,实时荧光定量PCR和双色细胞免疫荧光检测ENO1在其分选的CD44+细胞中的表达情况.运用慢病毒载体稳定干扰SUN-5中ENO1的表达,并用实时荧光定量PCR和Western blot检验干扰效率.流式细胞术分选稳定干扰ENO1的SNU-5中CD44+细胞后(shRNA-ENO1),实时荧光定量PCR检测其Oct-4、Sox 2以及干性相关基因Nanog的表达,同时分别进行细胞成球实验、体外侵袭与体内致瘤的胃癌干细胞生物学特性研究,Western blot检测ENO1对胃癌干细胞侵袭转移影响的相关分子机制.[结果]SNU-5的CD44+细胞中ENO1基因和蛋白表达明显高于CD44-细胞,并建立稳定干扰ENO1的SUN-5.shRNA-ENO1细胞中干性基因Oct-4、Sox 2和Nanog中mRNA的表达显著低于PLV-Ctr细胞(P＜0.05).与PLV-Ctr细胞相比较,shRNA-ENO1细胞的自我更新能力、侵袭能力和肿瘤重量显著降低.Western blot检测shRNA-ENO1细胞中Vimentin、Snail和N-cadherin下调表达,同时E-cadherin上调表达,并伴随AKT和PI3K的磷酸化水平降低,提示ENO1的作用可能通过PI3K/AKT信号通路激活.[结论]ENO1在胃癌干细胞中高表达,其在调控胃癌侵袭转移能力中发挥重要作用.
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MiR-152在膀胱癌中的表达以及对ERBB3/AKT2信号通路的调节作用
[目的]探讨miR-152对ERBB3/Akt信号通路的靶向调控作用以及对膀胱癌细胞UM-UC-3增殖、侵袭和迁移活性的影响.[方法]收集2016年7月至2018年6月接受手术治疗的56例膀胱癌患者的肿瘤组织及相应的癌旁组织,提取总RNA,检测miR-152表达水平.体外培养UM-UC-3细胞,转染miR-152 mimics(模拟物组),同时设置空白对照组(CTL)和空转染组(NC),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-152的表达.采用MTT法、划痕实验和transwell小室侵袭实验观察CTL组、NC组和模拟物组细胞增殖、迁移和侵袭能力.采用双荧光素酶报告基因方法验证ERBB3与miR-152的关系.采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测UM-UC-3细胞中Snail、ERBB3、Akt2、p-Akt、c-myc表达量.[结果]MiR-152在肿瘤组织中的表达量明显低于癌旁组织(P＜0.05).与膀胱上皮永生化细胞株SV-HUC-1相比,miR-152在膀胱癌细胞T24、UM-UC-3和J82中的表达量明显降低(P＜0.05),其中在UM-UC-3细胞中表达量低.经qRT-PCR法检测,模拟物组UM-UC-3细胞miR-152的表达量明显低于CTL组和NC组细胞(P＜0.05).模拟物组UM-UC-3细胞的增殖率、迁移活性以及划痕愈合率均明显低于CTL组和NC组细胞(P＜0.05).经双荧光素酶基因报告分析,ERBB3是miR-152的下游靶基因.模拟物组UM-UC-3细胞Snail、ERBB3、Akt2、p-Akt、c-mycmRNA和蛋白表达水平均低于CTL组和NC组细胞(P＜0.05).且miR-152表达量与ERBB3呈负相关性(r=-0.875,P＜0.05).[结论]上调miR-152可抑制ERBB3/Akt/c-myc和ERBB3/Akt/Snail信号通路的异常激活,逆转膀胱癌UM-UC-3细胞上皮一间质转化,从而降低膀胱癌生长、侵袭和迁移的风险.
关键词： 膀胱癌 miR-152 ERBB3/Akt信号通路 上皮—间质转化 侵袭 -
四跨膜蛋白CD151调节结直肠癌Notch相关信号通路的研究
[目的]研究CD151在结直肠癌Notch信号通路中的调节作用.[方法]通过Log-rank (Mantel-Cox)分析TCGA数据库中CD151与结直肠癌患者生存期的关系,应用Westernblot和实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测40例结直肠癌及癌旁组织以及慢病毒低表达CD151的HT29细胞株中Notch-1、Hes-1和Jagged-1的蛋白和mRNA的表达.[结果]通过分析TCGA数据库的数据得出CD151高表达的结直肠癌患者的2000d之内生存期明显低于CD151低表达的患者.在结直肠癌患者组织中CD151、Notch-1、Hes-1和Jagged-1的蛋白和mRNA的表达均高于癌旁组织(P均＜0.05).在敲低CD151的HT29-CD 151-KD人结肠癌细胞株中,Notch-1、Hes-1和Jagged-1的蛋白和mRNA的表达明显降低(P均＜0.05).[结论]CD151表达情况影响结直肠癌患者的生存期,CD151可明显下调结直肠癌Notch相关信号通路.
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我国不同手术方式治疗早期胃癌的经济学指标评价
[目的]对内镜黏膜下剥离术(endoscopic submucosal dissection,ESD)与外科手术两种不同手术方式治疗早期胃癌的卫生经济学指标进行系统评价.[方法]计算机检索Pubmed、Embase、the Cochrane Library(2018年4期)、中国生物医学文献数据库、中国知网学术总库、万方数据库和维普中文科技期刊数据库,获得关于ESD与外科手术治疗早期胃癌的队列研究、随机对照研究,检索时限均为建库至2018年4月.由2位评价员根据纳入及排除标准独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险,应用Stata 12.0软件进行Meta分析.[结果]共纳入14项研究,其中回顾性队列研究12项,随机对照研究2项,共涉及2087个研究对象,其中ESD组919例,外科手术组1168例.Meta分析结果显示:与外科手术组相比,ESD组的手术时间[标准化均数差(SMD) =-2.26,95％可信区间(95％CI):-2.94～-1.58,P＜0.05]和住院时间(SMD=-1.97,95％CI:-2.32～-1.61,P＜0.05]缩短,且住院费用低(SMD=-3.01,95％CI:-3.78～-2.24,P＜0.05].[结论]ESD与外科手术相比,具有手术时间短、住院天数少、住院费用低等优势.若临床能够在严格把握适应证的前提下推广应用ESD治疗早期胃癌,或可节约部分医疗资源.
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沉默LMTK2对去势抵抗性前列腺癌PC3细胞增殖的影响
[目的]研究Lemur酪氨酸激酶2(Lemur tyrosine kinase 2,LMTK2)在去势抵抗性前列腺癌(castration resistant prostate cancer,CRPC)中对雄激素受体(androgen receptor,AR)的调节作用并提出可能的作用机制.[方法]设计合成针对LMTK2基因的siRNA(siLMTK2),阴性对照siRNA(NC);采用瞬时转染法将以上siRNA转入前列腺癌PC3细胞,不转染的细胞设置为空白对照(Mock);采用Western blot检测转入LMTK2 siRNA对前列腺癌细胞及空白对照(Mock)中LMTK2蛋白表达的影响;通过克隆形成实验和细胞增殖实验考察沉默LMTK2基因对PC3细胞的肿瘤形成和增殖的影响.[结果]研究发现沉默LMTK2基因后,前列腺癌PC3细胞中LMTK2 mRNA和蛋白质表达水平显著降低;相反地,雄激素相关基因的转录显著升高.另外,LMTK2基因沉默会导致PC3细胞成瘤能力和增殖能力增强,即致癌性增强.[结论]本研究发现LMTK2是一种AR活性的负调节因子,沉默LMTK2基因能上调AR活性从而增强前列腺癌PC3细胞的增殖.这也为CRPC患者的治疗提供了一种新靶标,从而能够采取更有效的治疗方法.
关键词： Lemur酪氨酸激酶2 雄激素受体 去势抵抗性前列腺癌 PC3细胞 -
黄芪多糖对X线辐射所致骨髓间充质干细胞细胞核、染色体及DNA损伤的影响
[目的]探索黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对X线辐射所致骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSC)细胞核、染色体及DNA损伤的影响.[方法 ]采用CCK-8法检测不同浓度的APS对2Gy X线辐射后BMSC增殖能力的影响,以筛选出APS的佳作用浓度.将BMSC分为空白(CTRL)组、黄芪多糖(APS)组、辐射(IR)组、辐射+黄芪多糖(IR+APS)组;APS组、IR+APS组在第1次辐射前48h以佳作用浓度的APS干预1次,以后每次辐射后均换上含APS的新鲜培养液,CTRL组、IR组则换上不含APS的新鲜培养液,共进行5次X线辐射,每次2Gy,每48h辐射1次;末次辐射后,采用胞质分裂阻断法检测各组细胞微核率,染色体核型分析各组细胞染色体畸变率,激光共聚焦显微镜检测各组细胞53BP1 foci焦点簇数目.[结果]与CTRL组比较,辐射后BMSC增殖能力明显受到抑制,差异具有统计学意义(P＜0.05);与IR组比较,当APS为50μg/ml时对辐射后BMSC增殖的作用强,故选为佳作用浓度.在细胞核水平上,与CTRL组比较,IR组微核率显著升高(P＜0.05);与IR组比较,IR+APS组微核率降低(P＜0.05).在染色体水平上,与CTRL组比较,IR组染色体畸变率明显升高(P＜0.05);与IR组比较,IR+APS组染色体畸变率降低(P＜0.05).在DNA水平上,与CTRL组比较,IR组53BP1 foci焦点簇数目显著升高(P＜0.05);与IR组比较,IR+APS组53BP1 foci焦点簇数目降低(P＜0.05).[结论 ]黄芪多糖具有减轻X线辐射后BMSC细胞核、染色体、DNA损伤的作用.
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200例临床Ⅰa期非小细胞肺癌淋巴结转移因素研究
[目的]探讨不同临床及病理特征的临床Ⅰa期非小细胞肺癌淋巴结转移情况.[方法]自2014年7月至2016年7月,术前诊断为临床Ⅰa期非小细胞肺癌患者200例入组,所有患者接受病变所在肺叶切除加系统性淋巴结清扫.分析其临床特征、病理类型与术后淋巴结转移情况的关系.[结果]随着肿瘤直径的增大,N1淋巴结转移、N2淋巴结转移率均增高.术前CT表现为纯磨玻璃结节、实性成分＜50％、实性成分≥50％的患者N1淋巴结转移分为为0、2.82％和9.52％,N2淋巴结转移分别为0、4.23％和25.40％,差异有统计学意义(P=0.000).病理类型为鳞癌者淋巴结转移率高于腺癌,主要是N1淋巴结转移率较高(P＜0.05).病变位置位于近肺门内1/2的患者淋巴结转移率显著高于外1/2的患者(P=0.018).多元回归分析显示,与淋巴结转移相关的因素为:肿瘤大小、影像学实性成分占比、与肺门相对位置.[结论]影像学表现为纯毛玻璃结节、肿瘤位于外肺门1/2、肿瘤小于1cm等特征的临床Ⅰa期非小细胞肺癌不易发生淋巴结转移,可酌情减少淋巴结清扫范围以减少创伤.
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体质指数对乳腺癌患者辅助内分泌治疗预后的影响
[目的]探讨体质指数(BMI)对乳腺癌患者辅助内分泌治疗预后的影响.[方法]对653例乳腺癌患者进行回顾性分析,利用ROC曲线下面积方法计算出BMI的界点,并对患者进行分组,评估BMI对无病生存期(disease-free survival,DFS)及总生存(overall survival,OS)的影响.生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验,单因素和多因素分析采用Cox比例风险模型.[结果]653例乳腺癌患者均为女性,其中BMI＜25.7kg/m～2组患者458例(70.1％),BMI≥25.7kg/m～2组195例(29.9％).与BMI＜25.7kg/m～2组患者比较,BMI≥25.7kg/m～2组患者年龄较大(χ2=20.423,P＜0.001),绝经后患者所占比例多(χ2=22.261,P＜0.001).BMI＜25.7kg/m～2组患者的DFS显著地长于BMI≥25.7kg/m～2组(P＜0.001).然而,两组之间的OS差异无统计学意义(P=0.266).多因素分析显示,年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、Ki-67水平、p53表达和BMI均为影响乳腺癌患者DFS的独立不良因素.[结论]超重与肥胖是影响乳腺癌患者辅助内分泌治疗预后的不良因素.
