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左旋精氨酸预处理对老龄大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用
目的 研究左旋精氨酸(L-arginine,L-Arg)对老龄大鼠肾缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)的保护作用并探讨其作用机制.方法 将SD大鼠分为3组,L-Arg组大鼠构建IRI模型,手术前24 h及术前30min尾静脉注射左旋精氨酸,剂量为250mg/kg;IR组大鼠构建IRI模型,仅注射生理盐水;对照组(C组)为分离肾蒂血管,注射生理盐水.观察大鼠IR后生存时间,另分别于再灌注后4、8、12、24、48、72 h处死动物,处死前下腔静脉取血,检测血肌酐(serum creatinine,Scr)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平.获取肾组织标本,用于髓过氧化物酶(my-eloperoxidase,MPO)酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测,免疫组化和Western blot检测血红素氧化酶-1 (hemeoxidase-1,HO-1)含量,以及病理学观察.结果 ①IR组存活率为37.5％,L-Arg组大鼠存活率提高至70.8％,而对照组大鼠存活率100％,各组之间有明显差异(P＜0.01).②IR组大鼠再灌注后4h时Scr和BUN水平开始逐渐升高,与C组相比,IR组Scr和BUN在各个时间段明显升高(P＜0.01),再灌注后4～72h,L-Arg组大鼠Scr均较IR组明显降低(P＜0.01).③单纯IR组大鼠再灌注后4h开始升高,各时间点肾组织MPO水平均高于C组(P＜0.01)和L-Arg组,且在再灌注后12,24,72 h显著(P＜0.01).④免疫组化和Western blot结果显示:L-Arg预处理后,肾组织中HO-1阳性细胞数量增加,L-Arg组大鼠肾脏组织HO-1表达水平明显高于IR组(P＜0.05).结论 L-Arg预处理能够改善老龄大鼠肾功能,减轻肾组织病理损伤,减少再灌注后炎症反应,提高大鼠肾缺血再灌注后生存率.L-Arg通过诱导HO-1的表达可以保护老龄大鼠肾脏的缺血再灌注损伤.
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缺氧诱导因子-1α在糖尿病肾病大鼠肾组织的表达及意义
目的 探索缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血红素氧化酶-1(HO-1)在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达情况,及其与糖尿病肾脏微血管病变的关系. 方法 用链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病肾病大鼠模型,在制模成功后2、4、8、12、16周取肾脏组织,以年龄匹配正常大鼠作为对照组,采用免疫组织化学SP方法结合图像分析检测糖尿病肾病大鼠石蜡切片中HIF-1α与HO-1的表达量.结果 免疫组化显示HIF-1α在两组均有表达,但两组比较有差异(P＜0.01).HO-1在对照组无明显表达,但模型组有明显表达,两组比较有差异(P＜0.01).模型组HIF-1α和HO-1表达量均于8周时达高峰.模型组肾小管上皮细胞胞浆中HIF-1α和HO-1表达量呈正相关.结论 糖尿病肾病存在HIF-1α和HO-1的表达上调,糖尿病肾脏存在缺氧状态,其缺氧状态可能与其微血管结构的改变有关,并参与了糖尿病肾病的发生发展.
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血红素氧化酶-1对肾性高血压的影响及其与血管紧张素Ⅱ的关系
目的:研究诱导血红素氧化酶-1(HO-1)表达对5/6肾切除大鼠血压的影响及与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的关系.方法:大鼠随机分成3组:①假手术组(Sham组),②肾大部分切除组(NX组),③hemin组(NX+氯化高铁血红素组).检测第3、10周的尿蛋白及第10周血压、血清尿素氮、肌酐,观察第10周肾脏病理改变,并用放免法检测血浆和肾组织AngⅡ,免疫组织化学方法检测肾小管HO-1的表达,应用RT-PCR检测肾组织HO-1mRNA的表达.结果:与肾大部分切除组相比,hemin组肾小管HO-1表达明显增加,血浆AngⅡ显著下降(P＜0.05),血压、血清尿素氮、肌酐降低(P＜0.01),尿蛋白排泄量明显减少(P＜0.05),肾小球系膜增生、间质损害减轻.结论:诱导HO-1表达可降低5/6肾切除大鼠血压,并且可能与血浆AngⅡ水平下降有关.
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血红素氧化酶-1与非肥胖女性多囊卵巢综合征的关联性研究
目的：探讨循环中血红素氧化酶‐1（HO‐1）是否参与了多囊卵巢综合征（PCOS）的发生。方法获得知情同意后，按照年龄和体重指数（BM I）匹配的原则，检测了80名PCOS患者和80名健康对照者的临床特征、外周血中激素水平以及糖脂代谢情况，提取并量化血清中HO‐1。分析 HO‐1与PCOS发病风险的关系，并界定其预测作用。结果PCOS组妇女较对照组存在显著增加的胰岛素抵抗（IR）、氧化应激（OS）和炎症状态，三者共同作用，对PCOS的病理生理过程形成一个恶性循环。复合模型的受试者工作特征曲线（ROC）分析显示，纳入或不纳入 HO‐1的曲线下面积分别为0.864（95％ CI 0.808～0.919）与0.953（95％ CI 0.923～0.982）（P＝0.0005）。结论血清 HO‐1可能参与了PCOS发生和发展过程，提示HO‐1可作为识别女性发生PCOS的一个早期生物学标志物。
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HO-1在姜黄素拮抗乙醇所致肝细胞氧化损伤过程中的作用
目的 研究血红素氧化酶-1(HO-1)在姜黄素拮抗乙醇氧化损伤过程中所起的作用.方法 通过亚细胞分离法提取微粒体,测定姜黄素预作用大鼠原代肝细胞中HO-1的活性,确定姜黄素对HO-1的诱导情况.通过抑制剂ZnPPⅨ和诱导剂Hemin的加入,抑制和诱导HO-1的表达与活性,通过检测细胞培养上清液中谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及肝细胞的氧化-抗氧化指标,确定HO-1在姜黄素拮抗乙醇所致肝细胞氧化损伤过程中的作用.结果姜黄素能够诱导HO-1的活性,在姜黄素15 μmol/L和提前1 h作用时HO-1水平达到高峰.且HO-1的活性和表达与肝细胞的抗氧化水平明显相关.结论 姜黄素对肝细胞有明显的保护作用,主要表现在提高细胞HO-1的活性及表达水平.
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姜黄素对高糖刺激下大鼠肾脏系膜细胞血红素氧化酶-1表达的影响
目的 观察高糖刺激下大鼠肾脏系膜细胞(mesangial cell,MC)血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达及姜黄素对HO-1表达的影响.方法 将MC分为6组,正常对照组给予正常培养液,高糖刺激各组给予含 30 mmol/L葡萄糖的培养液,分别于培养6、12、24、48 h后收集细胞,另1组给予含30 mmol/L葡萄糖和33.33 mmol/L姜黄素的培养液共孵育6 h后收集细胞.分别用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和Western blot分析法检测各组系膜细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达情况.结果 正常MC有微量的HO-1 mRNA表达,高糖刺激后HO-1 mRNA表达量明显增加,于6 h达到高峰, HO-1蛋白表达的变化趋势与mRNA变化趋势相同.MC加高糖和姜黄素共孵育6 h后,HO-1表达较单纯高糖刺激6 h组显著增强,其mRNA吸光度相对值分别为(1.987±0.236)、(1.195±0.167)(P<0.01),HO-1蛋白吸光度值分别为(23 560±1 867)、(14 072±1 333)(P<0.01).结论 高糖刺激下,系膜细胞HO-1 mRNA和蛋白表达呈时间依赖性变化,姜黄素可诱导高糖刺激下系膜细胞HO-1表达增强,从而保护细胞.
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缺氧与血红素氧化酶-1的表达
血红素氧化酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)为诱导型血红素氧化酶,是一种急性应激反应蛋白,其催化血红素代谢的产物具有扩张血管和抗氧应激损伤等保护作用.急性缺氧普遍诱导哺乳动物细胞中HO-J基因的表达,但在一些人类细胞中,缺氧却抑制HO-1的表达,显示出种属、组织和细胞的特异性.缺氧时HO-1的特异性表达可能受细胞内活性氧、MAPK途径以及HIF-1,AP-1和Bachl等转录因子的调节.
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肝硬变门静脉高压症患者血红素氧化酶-1的表达
目的探讨肝硬变门静脉高压症患者脾脏及脾血管血红素氧化酶(HO)-1mRNA的表达.方法应用原位杂交方法检测20例肝硬变门静脉高压症患者脾脏、脾动脉、脾静脉组织HO-1 mRNA的表达,以12例脾破裂患者作对照.结果对照组仅有4例脾组织可见弱阳性表达,平均阳性染色指数为0.05±0.01,其脾动、静脉组织未见HO-1 mRNA表达.肝硬变门静脉高压症组1 8例脾脏HO-1 mRNA阳性表达,平均阳性染色指数为0.68±0.12,显著高于对照组(P＜0.001).脾动、静脉HO-1 mRNA全部表达者15例,脾动、静脉阳性染色指数分别为0.5±0.1与0.56±0.1,两者差异无显著性,(P＞0.05).结论肝硬变门静脉高压症合并多种应激原刺激患者HO-1 mRNA表达增强,HO-1及其代谢产物可能参与门静脉高压症多种病理过程.
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乌司它丁对油酸致急性肺损伤大鼠肺组织血红素氧化酶-1的影响
目的:探讨乌司他丁对油酸致急性肺损伤大鼠肺组织血红素氧化酶-1表达的影响.方法 30只成年SD大鼠,随机分为3组(n＝10).正常组(A组)经大鼠尾静脉注射0.2mL/kg生理盐水;急性肺损伤组(B组)、乌司他丁组(C组)经大鼠尾静脉注射油酸0.2mL/kg制成急性肺损伤模型,随后立即给予A组、B组腹腔注射生理盐水10mL/kg,C组100ku/kg的乌司他丁腹腔注射.测取动物4h时间点呼吸频率和左心室动脉血氧分压,并于4h后取右下肺组织行HE染色和HO-1免疫组织化学检查,观察光镜下病理改变以及血红素氧化酶-1的表达.结果: 乌司他丁能显著改善油酸所致急性肺损伤所致的呼吸窘迫;肺组织血红素氧化酶-1在对照组仅有少量表达,急性肺损伤组表达增多,乌司他丁干预组表达明显增强.结论:乌司他丁可通过增加肺组织中血红素氧化酶-1的表达而发挥保护作用.
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大鼠心肌细胞低氧预处理与低氧后处理血红素氧化酶-1水平的比较
目的 比较低氧预处理和低氧后处理对大鼠心肌细胞血红素氧化酶-1水平的影响.方法 将培养的心肌细胞分为四组:对照组、低氧预处理组、低氧后处理组和联合组.分别测定各时间段细胞上清液中LDH水平和HO-1水平.结果 低氧预处理组和低氧后处理组LDH的水平明显低于对照组(均P＜0.01),HO 1水平明显高于对照组(均P ＜0.05).联合组LDH的水平及HO-1水平与低氧预处理组、低氧后处理组差异没有显著性(均P ＞0.05).结论 该研究结果提示低氧预处理和低氧后处理对心肌细胞的保护作用部分是通过HO-1水平增加来实现的,同时也说明二者很可能是通过同一传导通路来实现心肌细胞的保护作用.
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IL-10与HO-1在大鼠酒精性脂肪肝模型中的表达
目的 探讨IL-10和HO-1在酒精性脂肪肝模型中的作用和意义.方法 建立大鼠酒精性脂肪肝动物模型,检测大鼠血清IL-10以及TNF-α,肝匀浆中MDA、GSH以及SOD相关指标的变化;此外采用RT-PCR方法检测IL-10和HO-1 mRNA的表达.结果 随着肝脏损伤程度的加深,TNF-α的水平明显增加而IL-10却逐渐降低;肝匀浆中GSH和SOD的活性明显下降,但MDA却呈上升趋势;IL-10和HO-1mRNA表达也随着肝脏损伤程度的加深而减弱.结论 IL-10与HO-1的表达随着肝损伤程度的加重而逐渐降低,且构成一个新的抗炎途径参与了酒精性肝病的过程,从而为今后的酒精性肝病的临床治疗和药物研发提供新的思路.
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血红素氧化酶-1与心血管疾病
血红素氧化酶-1不仅能催化血红素生成一氧化碳,铁,胆红素,还具有多种生物活性:抗炎、抗氧化;通过促进血管内皮细胞增殖,抑制平滑肌细胞增殖有利于血管损伤的修复;抑制心肌细胞肥厚;血红素氧化酶-1甚至可以作为一种"药物"治疗心血管疾病.
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乌司他丁对失血性休克大鼠肺损伤的保护作用
目的 观察乌司他丁对失血性休克大鼠肺损伤的保护作用.方法 SD大鼠24只,随机分为3组(n=8):假手术对照组(C组)、失血性休克组(H组)、乌司他丁治疗组(U组).H组和U组经股动脉放血10 min内使平均动脉压降至(40±5)mmHg,维持60 min后回输全部失血及等量乳酸林格液进行复苏.复苏后4 h测定肺组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、血红素氧化酶-1(HO-1)、肺叶湿/干重比(W/D)及观察肺组织病理学改变.结果 H组和U组与C组相比,MDA含量、HO-1表达量及W/D比均显著增高(P<0.05),且U组低于H组(P<0.05);SOD活力则显著下降(P<0.05),且U组高于H组(P<0.05).光镜示U组肺泡结构尚完整,炎性细胞聚集及肺间质水肿程度均较H组轻.结论 乌司他丁可抑制MDA产生,增加SOD含量,降低HO-1表达,降低肺含水量,减轻肺组织病理学改变.从而减轻失血性休克大鼠肺组织的损伤.
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血液透析对终末期肾衰患者血清中血红素氧化酶-1及炎症因子的影响
目的 探讨终末期肾衰患者血液透析前后血红素氧化酶-1(HO-1)与C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、脂质过氧化物丙二醛(MDA)等指标的变化及相互之间的关系.方法 自动生化分析仪测定血红蛋白、尿素氮、肌酐浓度;采用ELISA方法定量测定血清HO-1、IL-6,化学发光法测定CRP,硫代硫巴比妥酸比色法测定MDA.结果 终末期肾衰患者透析前HO-1、CRP、IL-6、MDA水平明显升高,与对照组相比差别显著;血液透析治疗前后上述指标均有明显改变,血清HO-1、CRP水平较透前升高,IL-6、MDA水平明显下降.结论 终末期肾衰患者体内炎症加重,抗氧化防御酶水平随之提高;血液透析能够提高终末期肾衰患者血清中HO-1、CRP水平,同时血液透析能够清除一定的IL-6和MDA.
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血红素氧化酶-1抑制氧化低密度脂蛋白诱导THP-1单核细胞表达单核细胞趋化蛋白-1mRNA
目的:探讨血红素氧化酶(HO)-1对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的THP-1单核细胞上单核细胞趋化蛋白(MCP)-1 mRNA表达的影响.方法:不同浓度(0、25、50、100、200 mg/L) ox-LDL,作用不同时间(0、12、18、24、48h),刺激THP-1单核细胞;实时荧光定量(RT)-PCR检测MCP-1 mRNA表达.用锌原卟啉和钴原卟啉(CoPP)Ⅸ(均为10 μ mol/L)干预THP-1单核细胞12h后,再用ox-LDL (100 mg/L)刺激24 h;RT-PCR分别检测MCP-1和HO-1 mRNA表达.结果:ox-LDL呈浓度-时间依赖性上调MCP-1 mRNA表达(P＜0.01).与对照组比,CoPP IX组HO-1 mRNA表达明显升高(P＜0.01);与100mg/L ox-LDL组比,CoPP IX组MCP-1 mRNA表达明显下降(P＜0.01).结论:ox-LDL可上调THP-1单核细胞MCP-1的表达;诱导HO-1高表达可抑制ox-LDL诱导的THP-1源单核细胞MCP-1 mRNA表达.
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血红素氧化酶-1基因启动子区(GT)n重复序列多态性与潮汕人群2型糖尿病易感性间的关联研究
目的:探讨HO-1基因启动子区(GT)n重复序列多态性与潮汕人群2型糖尿病(T2DM)易感性间的关联.方法:采用荧光标记PCR以及毛细管电泳相结合技术检测97例糖尿病患者以及156例正常对照个体HO-1基因启动子区(GT)n重复序列多态性及其频率分布差异.重复次数n≤25,为S型等位基因,n＞25为L型等位基因.结果:等位基因、基因型频率在病例与对照组中分布差异无统计学意义.在显性遗传模型下,SL+LL与SS基因型比(OR=0.8,95CI:0.5-1.4),以及隐性模型,LL与SL+SS基因型比(OR=0.8,95CI:0.5-1.5),未发现增加个体2型糖尿病发病风险的基因型.结论:HO-1基因启动子区(GT)n重复序列多态性与潮汕人群T2DM易感性无关.
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血红素氧化酶-1在冠心病患者中的表达
目的 了解血红素氧化酶-1(HO-1)在冠心病患者中的表达情况.方法 对84例经冠状动脉造影确诊为冠心病的病例进行研究,其中急性心肌梗死35例,非急性心肌梗死49例,同时选择46例非冠心病病人作为正常对照组,采用Westem blot印迹方法,测定研究组与对照组病例外周血单个核细胞中血红素氧化酶-1的表达强度,并进行对照分析.结果 冠心病组中急性心肌梗死病例与非急性心肌梗死病例,以及非冠心病组之间的HO-1表达强度存在显著差异.结论 HO-1的表达强度与冠心痛的严重程度存在相关性.
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血红素氧化酶-1对高血糖和高血脂诱导血管内皮细胞损伤的保护作用
目的:探讨血红素氧化酶-1(HO-1)在高血糖和高血脂诱导内皮细胞损伤中的保护作用.方法:体外培养人的脐静脉内皮细胞,在D-葡萄糖25mmol/L和软脂酸250μmol/L的刺激下,分别用氯化血红素和锌原卟啉-9诱导和阻断HO-1的表达,应用逆转录-聚合酶链式反应和免疫细胞化学法检测HO-1 mRNA和蛋白的表达,酶联免疫法检测培养上清液中碳氧血红蛋白,并检测内皮细胞的存活率、乳酸脱氢酶释放率和脂质过氧化产物丙二醛的含量.结果:D-葡萄糖25mmol/L和软脂酸250μmol/L条件下,氯化血红素可以促使HO-1的表达,培养上清液中碳氧血红蛋白的含量显著增加(P＜0.05),并且显著地提高内皮细胞的存活率(P＜0.05),乳酸脱氢酶的释放率和细胞内丙二醛的含量显著减少(P＜0.05).而应用锌原卟啉-9后,HO-1的保护性作用消失.结论:在高血糖和高血脂条件下HO-1可以明显减轻血管内皮细胞的损伤,起到明显的保护性作用.
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过氧化物酶体增殖活化受体-α激活对HepG2细胞脂肪变性及血红素加氧酶-1表达的影响
目的 研究过氧化物酶体增殖活化受体-α(PPAR-α)激活对油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性及血红素加氧酶-1 (HO-1)表达的影响.方法 以油酸(OA)诱导人肝癌HepG2细胞脂肪变性为模型组,采用不同浓度的PPAR-α激动剂非诺贝特(FF)处理HepG2细胞24h,油红O染色观察细胞内脂滴数量,甘油-3-磷酸氧化酶法检测细胞内甘油三酯(TG)含量,采用实时荧光定量PCR检测各组HepG2细胞PPAR-α、HO-1 mRNA水平,采用免疫细胞化学法检测PPAR-α与HO-1蛋白表达.采用SPSS13.0软件,采用单因素方差分析及Pearaon直线相关进行相关分析.结果 (1)模型组HepG2细胞内TG含量为(379.98±23.19) mg/g,对照组为(185.03±12.68) mg/g,模型组HepG2细胞内TG含量明显增加,t=24.385,P＜0.01.PPAR-α的mRNA及蛋白相对表达水平模型组分别为0.42±0.38和0.47±0.14,对照组分别为1.00±0.00和1.85±0.12,模型组明显降低,t=0.583和1.382P值均＜0.01.HO-1的mRNA及蛋白相对表达水平模型组分别为0.36±0.66和0.26±0.10,对照组分别为1.00±0.00和1.22±0.12,模型组明显降低,t=0.637和t=0.967,P值均＜0.01;(2)FF浓度在5、10、50μmol/L时,HepG2细胞内TG值分别为(294.00±19.80) mg/g、(250.33±9.96)mg/g和(196.99±9.14) mg/g,t值分别为10.747、16.200和22.873, F=148.555;P值均＜0.01 ;PPAR-α的mRNA相对表达量分别为0.55±0.65,0.85±0.61,1.31±0.36,t值分别为0.137、0.430和0.893,F=177.637,P值均＜0.01;PPAR-α蛋白累积光密度值分别为0.82±0.11、1.31±0.16和1.75±0.13,t值分别为0.352,0.840,1.280,F=120.764,P值均＜0.01;HO-1的mRNA相对表达量分别为0.62±0.05、0.84±0.07和1.30±0.11,t值分别为0.257,0.480,0.937,F=74.768,P值均＜0.01;HO-1蛋白累积光密度值分别为0.44±0.08、0.81±0.08和1.20±0.10,t值分别为0.180,0.553,0.943,F=119.903,P值均＜0.01.结论 PPAR-α的激活可以抑制HepG2细胞脂肪变性,HO-1可能是其重要下游因子.
关键词： 脂肪肝 血红素氧化酶-1 油酸 过氧化物酶体增殖活化受体-α HepG2细胞 -
大鼠液压冲击脑损伤Nrf2、HO-1和NQO-1动态表达变化及意义
目的 探讨大鼠液压冲击伤后水肿脑组织核因子2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NADPH quinineoxidoreductase-1,NQO-1)的表达变化及其意义.方法 成年雄性SD大鼠56只制作液压冲击颅脑损伤模型,术后1h、6h、12 h、24 h、3d、7d用干湿质量法测定脑组织含水量,Westernblot测定Nrf2胞浆、胞核蛋白以及HO-1、NQO-1蛋白;用实时荧光定量PCR测定Nrf2 mRNA表达.结果 自冲击伤后6h,脑组织含水量开始增加,24h达高峰,持续至3d,然后开始下降(P＜0.05).组织学观察印证了脑水肿趋势.Western blot检测结果显示胞浆Nrf2蛋白于伤后12 h开始持续降低,而胞核Nrf2蛋白则于1h开始升高,24 h达到高峰,3d时降低,7d后明显降低,但仍高于NC组(P＜0.05).HO-1和NQO-1蛋白表达与胞核Nrf2蛋白趋势一致.实时荧光定量PCR显示TBI组术后各时间点Nrf2 mRNA表达水平无明显变化(P＞0.05).结论 液压冲击伤后出现核因子Nrf2转位激活,可能通过上调HO-1、NQO-1蛋白表达发挥神经保护作用.
