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雷公藤红素对卵巢癌SKOV3/DDP细胞的抑制作用及其机制
目的 探讨雷公藤红素(celastrol)对卵巢癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞SKOV3/DDP的抑制作用及其机制.方法 MTT法检测不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞增殖的影响;显微镜下观察不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞形态的影响;流式细胞术检测不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞周期及凋亡的影响;细胞划痕试验检测不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞迁移能力的影响;Transwell体外侵袭试验检测不同雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞侵袭能力的影响;Westem blot法检测SKOV3/DDP细胞中凋亡及侵袭相关蛋白的表达水平.结果 经雷公藤红素作用后,SKOV3/DDP细胞的增殖抑制率显著上升(P＜0.05);镜下观察SKOV3/DDP细胞数目显著减少(P＜0.05);G1期细胞比例明显升高(P＜0.05);细胞凋亡率显著增加(P＜0.05);细胞迁移距离明显减小(P＜0.05);穿膜细胞数目明显减少(P＜0.05);SKOV3/DDP细胞中Cyclin A、p-AKT、NF-KB、MMP-2、MMP-9和P-GP蛋白的表达水平均明显下降(P＜0.05).结论 雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞抑制作用显著,为临床晚期失去手术机会卵巢癌患者的治疗提供了参考.
关键词： 雷公藤红素 卵巢癌SKOV3/DDP细胞 细胞增殖 细胞凋亡 细胞侵袭 -
蛋白酶激活受体-2在胃间质瘤组织中的表达及其临床意义
目的 探讨蛋白酶激活受体-2(Protease activated receptor-2,PAR-2)在胃间质瘤组织中的表达及其与胃间质瘤临床病理特征之间的相关性.方法 采用RT-PCR、Western blot及免疫组化法检测PAR-2在72例胃间质瘤患者的瘤中心组织、瘤旁组织及正常胃组织中的表达,并分析其与胃间质瘤临床病理特征之间的相关性.结果 瘤旁组织和瘤中心组织中PAR-2基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显高于正常组织(P＜0.05或P＜0.01),瘤中心组织中的表达水平明显高于瘤旁组织(P＜0.01).瘤中心组织中PAR-2基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均随着NIH分级的升高而上调(P＜0.05或P＜0.01),且与黏膜受侵情况密切相关(P＜0.05).结论 胃间质瘤组织中PAR-2的表达水平明显高于瘤旁组织和正常胃组织,PAR-2的高表达可能与间质瘤的侵袭与转移相关.
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EGFR/AKT信号转导通路在调控结肠癌LoVo细胞生物学行为中的作用研究
目的:探讨EGFR/AKT(表皮生长因子受体/蛋白激酶B)信号转导通路在调控人结肠癌细胞株LoVo生物学行为中的作用机制.方法:用EGFR抑制剂AG1478处理人结肠癌细胞LoVo;用免疫细胞化学法检测p-EGFR及p-AKT蛋白表达;用MTT法检测细胞的增殖;用流式细胞仪检测细胞的凋亡水平;用Transwell小室观察体外细胞迁移能力;用Transwell小室结合Matrigel胶检测肿瘤细胞侵袭能力.结果:AG1478(20μmol/L)处理后p-EGFR及p-AKT的表达水平明显降低(P<0.05),细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05),细胞凋亡水平明显提高(P<0.05),结论:EGFR与人结肠癌细胞LoVo的增殖、凋亡、迁移和侵袭性密切相关,并可能通过AKT信号转导通路调控人结肠癌的发展.
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Cosmc基因在卵巢癌中生物学功能的研究
目的:明确Cosmc基因在卵巢癌细胞中的生物学功能.方法:本研究采用慢病毒转染技术,在卵巢癌细胞A2780和SKOV3中过表达Cosmc基因,MTT实验、细胞凋亡实验以及Transwell侵袭实验对过表达Cosmc后卵巢癌细胞在生长、凋亡、侵袭等方面的影响.结果:慢病毒转染卵巢癌细胞A2780和SKOV-3后,Cosmc的蛋白表达显著提高;MTT结果显示,与空载体对照组相比,过表达Cosmc的卵巢癌细胞生长能力显著减弱;流式细胞术结果表明Cosmc过表达的卵巢癌细胞凋亡数较空载体对照组细胞显著增加;Transwell实验显示Cosmc过表达的细胞侵袭和迁移能力较空载体对照组显著减少.结论:卵巢癌细胞系中过表达Cosmc基因能抑制卵巢癌细胞的生长和侵袭并促进细胞凋亡.
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Survivin和RhoA双基因沉默对卵巢癌细胞的增殖与侵袭影响
目的:探讨RNA干扰(RNAi)双向沉默Survivin和RhoA基因表达对人卵巢癌HO8910PM细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法:构建Survivin和RhoA基因的串联rnicroRNA干扰载体(Survivin-RhoA-microRNA),通过脂质体介导转染人卵巢癌HO8910PM细胞作为实验组,对照组为空载体转染组.转染48小时后,RT-PCR检测Survivin和RhoA的mRNA表达,Western-Blot检测Survivin和RhoA的蛋白质表达;利用MTT法、Transwell小室体外侵袭实验及流式细胞术检测转染后卵巢癌细胞的增殖、侵袭及凋亡情况.结果:Survivin-RhoA-microRNA明显抑制了HO8910PM细胞中Survivin和RhoA基因mRNA和蛋白的表达:转染48小时后,实验组Survivin mRNA和RhoA mRNA表达抑制率分别为68.82％、90.23％,Survivin和RhoA蛋白表达抑制率分别为63.91％、88.47％;MTT分析显示实验组细胞OD490的值为0.706±0.177,较对照组(1.172±0.241)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);流式细胞术检测实验组细胞凋亡率为36.41±3.34％,较对照组(2.92± 0.78％)明显升高(P＜0.01);实验组细胞侵袭百分比为12.56±6.17％,较对照组(32.96± 5.14％)明显降低(P＜0.05).结论:成功构建Survivin和RhoA串联microRNA干扰载体(Survivin-RhoA-microRNA).Survivin和RhoA双基因沉默显著抑制了卵巢癌HO8910PM细胞的增殖和侵袭能力,并增加其凋亡率,两者具有协同作用,为双靶点治疗卵巢癌提供了新的思路和策略.
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RNAi沉默Rab5a基因对乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力的的影响
目的 探讨miRNA表达载体靶向沉默Rab5a表达对人乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力的影响.方法 设计4条miRNA干扰载体分别转染乳腺癌细胞MCF-7.应用RT-PCR和Western blot筛选出一组抑制效率高的miRNA干扰载体进行Transwell小室实验检测细胞侵袭能力.结果 转染Rab5a-miRNA-2干扰载体对MCF-7细胞Rab5a表达抑制效果明显,RT-PCR结果显示其对Rab5a基因mRNA抑制率达到(50.01±2.69)%,Western Blot结果显示其对Rab5a蛋白抑制率达到(55.58±3.16)%.选择Rab5a-miRNA-2组干扰载体进行后续实验.Transwell实验显示,Rab5a-miRNA-2组穿膜细胞数为67.8±12.03,与阴性对照组和空白对照组之间均有显著性差异(P<0.01).结论 RNAi靶向沉默Rab5a基因可以抑制乳腺癌细胞MCF-7的侵袭能力.
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介绍两种新的肿瘤细胞体外侵袭实验方法
肿瘤细胞的生物学行为研究一直是近年来肿瘤研究的热点问题,肿瘤细胞浸润在肿瘤转移中起关键作用.目前,有关肿瘤体外浸润的研究主要集中在肿瘤细胞恶性程度的观察研究方面.下面介绍两种近年来肿瘤研究常用的细胞侵袭实验方法.
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微小RNA-125b对肺癌细胞95D生物学功能的影响
[目的]探讨微小RNA(miR)-125b对肺癌细胞95D生物学功能的影响. [方法]以95D细胞为实验对象,分别转染miR-125b模拟物和模拟物阴性对照,未经特殊处理为空白组.应用MTT法、流式细胞仪和Transwell小室法分别检测miR-125b表达改变对95D细胞增殖、凋亡、周期及侵袭的影响. [结果]95D细胞转染48h后,转染组miR-125b的水平提高,表达量为阴性对照组的22.32倍.与阴性对照组相比,miR-125b模拟物转染组细胞凋亡率明显降低[(13.77±0.52)％,(9.90±1.33)％,P＜0.05],细胞增殖、周期、侵袭无显著改变(P＞0.05). [结论]miR-125b基因过表达能够抑制肺癌95D细胞凋亡.
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丹参酮Ⅱ A抑制人宫颈鳞癌细胞SiHa侵袭与诱导凋亡的研究
目的 观察丹参酮Ⅱ A(Tan Ⅱ A)对宫颈癌鳞癌细胞SiHa细胞侵袭的抑制作用及诱发细胞发生凋亡情况,探讨其可能作用机制.方法 常规体外培养人宫颈鳞癌癌细胞系SiHa,加入0.5、1.0、2.0、5.0 mg/L浓度的Tan Ⅱ A,继续培养24 h.通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用MTT试验检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测Tan Ⅱ A对细胞迁移能力的影响,用Transwell小室法检测Tan Ⅱ A对SiHa细胞侵袭的抑制作用,激光共聚焦显微镜观察SiHa细胞凋亡变化.Western blotting法检测MMP-2、NF-κB p65蛋白的表达.结果 细胞形态学观察显示,不同浓度Tan Ⅱ A均可导致细胞形态学发生改变;MTT试验表明,Tan Ⅱ A对SiHa细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度的增加而增强(P ＜0.05,P＜0.01);划痕实验结果显示,随Tan Ⅱ A药物浓度的增加,SiHa细胞迁移能力下降(P ＜0.01);Transwell小室实验显示,Tan Ⅱ A对SiHa细胞体外的侵袭力具有很强的抑制作用;Western blotting结果表明,ran Ⅱ A给药能够抑制SiHa细胞MMP-2蛋白的表达与NF-κB p65的激活(P＜0.01).结论 Tan Ⅱ A能够抑制人宫颈鳞癌细胞SiHa细胞侵袭与诱导凋亡,其机制可能与抑制NF-κB蛋白的激活下调MMP-2的表达有关.
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力生长因子E肽对前交叉韧带成纤维细胞活力、迁移与侵袭的影响
目的 研究力生长因子(mechano-growth factor,MGF)E肽对前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)成纤维细胞活力、迁移与侵袭的影响.方法 以ACL成纤维细胞为研究对象:(1)经不同浓度(0、10和100μg/L)MGF E肽处理细胞24 h后,去除培养基,换成1％血清浓度DMEM低糖培养基培养6和30h后,检测细胞活力、DNA含量、细胞凋亡、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性变化及Ⅰ型胶原(COL Ⅰ)、Ⅲ型胶原(COL Ⅲ) mRNA表达;(2)使用不同浓度(0、5、10、20、50和100μ/L)MGF E肽处理ACL成纤维细胞48 h后,检测细胞活力与MMP-2活性,并利用划痕实验与Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭能力.结果 (1)6h时,10 μg/L浓度MGF E肽显著促进MMP-2、MMP-9活性,对细胞活力、增殖、凋亡及COL Ⅰ、COLⅢmRNA表达无影响.100 μg/L浓度MGF E肽显著促进MMP-2、MMP-9活性,并提高了COL Ⅰ、COLⅢ mRNA表达,但对细胞活力、增殖、凋亡无影响.30 h时,10 μg/L浓度MGF E肽显著促进MMP-9活性及COL Ⅰ、COL Ⅲ mRNA表达,对细胞活力、增殖、MMP-2活性及细胞凋亡无影响.100μg/L浓度MGF E肽显著促进MMP-9活性及COL Ⅲ mRNA表达,但对细胞活力、增殖、MMP-2活性、细胞凋亡、COL Ⅰ mRNA表达无显著性调控作用.(2) MGF E肽显著促进ACL成纤维细胞的迁移与侵袭,且呈一定程度浓度依赖性;迁移与侵袭过程可能依赖于MMP-2活性.结论 MGF E肽能够促进ACL成纤维细胞胞外基质的合成与降解,进一步提高了细胞的迁移与侵袭,有助于组织损伤修复过程中成纤维细胞向损伤部位迁移,对ACL组织修复再生与术后康复具有积极的调控作用.
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鸦胆子苦醇通过调节细胞骨架力学性质抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的侵袭行为
目的 研究鸦胆子苦醇对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)细胞骨架力学性质的调控以及对RA FLS侵袭行为的影响.方法 细胞骨架染色法检测鸦胆子苦醇对RA FLS细胞骨架力学性质的调控;Transwell小室法检测鸦胆子苦醇对RA FLS细胞骨架的调控和对RA FLS侵袭行为的影响;酶谱和Western blotting法检测鸦胆子苦醇对RA FLS中MMP-2、MMP-3表达的影响.结果 通过细胞骨架染色并在显微镜下观察发现,鸦胆子苦醇可显著减少RA FLS伪足数量的产生,通过调节细胞骨架网络的力学性质抑制细胞的运动能力,鸦胆子苦醇可抑制RA FLS的侵袭并能下调MMP-2、MMp-3的表达水平.结论 鸦胆子苦醇能调节RA FLS的细胞骨架的力学性质并抑制细胞的侵袭行为,同时鸦胆子苦醇可通过降低MMP-2、MMP-3的表达抑制RA FLS的侵袭.研究结果为进一步开发治疗RA的新药物提供了相应实验依据.
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MicroRNA-29b表达改变对卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响
目的:探讨microRNA-29b (miRNA-29b)在卵巢癌细胞中的表达差异及其对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:采用real-time PCR技术检测人卵巢癌上皮细胞系SKOV-3及正常人卵巢上皮细胞系IOSE80中miRNA-29b的表达水平;采用转染技术上调SKOV-3细胞中miRNA-29b的表达水平;采用CCK-8法检测SKOV-3细胞增殖能力;采用Transwell法检测SKOV-3细胞的侵袭能力;采用Western印迹法检测SKOV-3细胞中蛋白表达水平.结果:与IOSE80细胞相比,人卵巢癌上皮细胞系SKOV-3细胞miRNA-29b的表达下降(P＜0.05).转染miRNA-29b mimic后SKOV-3细胞中miRNA-29b的表达水平增加;从第4天开始,转染miRNA-29b的SKOV3细胞增殖能力下降(P＜0.05).转染miRNA-29b减少了通过聚碳酸酯膜的SKOV3细胞数量,抑制了SKOV3细胞的侵袭能力(P＜0.05);转染miRNA-29b mimic后,卵巢癌细胞SKOV3中抑制凋亡蛋白Bcl-2和侵袭相关蛋白MMP-9的表达均降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:miRNA-29b可通过抑制凋亡相关蛋白Bcl-2和侵袭相关蛋白MMP-9的表达来抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭.
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RNA结合蛋白LIN28A对肝癌细胞转移能力的影响
目的 研究LIN28A基因在肝肿瘤细胞及二乙基亚硝胺(DEN)诱导的大鼠原发性肝癌中的表达变化,揭示其在肝癌发生发展过程中的作用.方法 利用实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测肝癌细胞及DEN诱导的大鼠原发性肝癌模型中LIN28A信使核糖核酸(mRNA)的表达；以携带LIN28A的慢病毒(lentivirus)载体感染肝癌细胞,侵袭小室实验(transwell assay)检测过表达LIN28A对肿瘤细胞转移能力的影响.结果 RT-PCR结果显示,LIN28A在肝癌细胞及大鼠原发性肝癌中表达量上调；侵袭小室实验表明,过表达LIN28A能明显提高肝癌细胞的迁移和侵袭能力.结论 LIN28A在肝癌细胞中的表达升高,对肝癌细胞的转移能力具有促进作用.
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靶向Akt1的小分子干扰RNA对人胃癌细胞系SGC7901生长抑制的体外研究
目的 研究靶向Akt1小分子RNA对SGC7901胃癌细胞的增殖和侵袭的抑制作用.方法 通过构建人Akt1特异性siRNA并转染SGC7901胃癌细胞,应用Western blot 和real time PCR检测了Akt1-siRNA的敲低效果;流式细胞术及Transwell试验等方法分析对增殖、侵袭、凋亡的影响.结果 Akt1-siRNA可以下调Akt1的表达,并且下调Akt1后细胞的增殖活性明显受到抑制;细胞周期在G0/G1期有明显的阻滞(χ2=11.076,P=0.026);早期凋亡的细胞明显增多(F＝89.386,P＝0.00);肿瘤细胞的侵袭性生长受到了抑制(F＝21.351,P＝0.00).结论 靶向人Akt1的siRNA可以特异性的抑制Akt1的表达,进而抑制细胞的生长,siRNA可以成为胃癌靶向治疗的一种新的策略.
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siRNA沉默CXCR4基因对胃癌生物学行为的影响
背景:CXCR4在肿瘤细胞中广泛表达,参与肿瘤侵袭和转移.RNA干扰技术可有效降低或关闭基因的表达,从不同水平阻断肿瘤侵袭和转移.目的:研究胃癌组织中CXCR4 mRNA和蛋白表达及其与临床病理特征的关系,并探讨siRNA沉默CXCR4表达对胃癌生物学行为的影响.方法:选取86例胃癌及其癌旁正常黏膜组织,应用RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测CXCR4 mRNA和蛋白表达,并分析其与临床病理特征的关系.构建CXCR4干扰RNA质粒载体,并转染胃癌MKN45细胞.应用MTT法、Transwell法、流式细胞术分别评估胃癌细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡能力.结果:胃癌组织中CXCR4 mRNA和蛋白表达明显高于癌旁正常组织(P＜0.05),且其表达与TNM分期、肿瘤分化、淋巴结转移相关(P＜0.05).与阴性对照组相比,siRNA转染组转染24、48、72 h后MKN45细胞增殖力均显著降低(P＜0.05),迁移率和侵袭率均显著降低(P＜0.05),细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).结论:CXCR4在胃癌发展过程中具有重要作用;以siRNA沉默CXCR4基因后,可显著抑制MKN45细胞增殖,抑制体外细胞迁移和侵袭,促进细胞凋亡,从而为胃癌的治疗提供新策略.
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MicroRNA-129通过靶向调控HMGA2抑制胃癌细胞增殖、侵袭
背景:越来越多的研究表明microRNA在胃癌发生、发展中起重要作用.有研究表明miR-129在胃癌组织中表达异常,但其对胃癌细胞增殖、侵袭的作用仍不明确.目的:探讨miR-129在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达及其影响胃癌细胞增殖和侵袭的机制.方法:收集82例胃癌组织及其相应癌旁组织,培养人胃黏膜上皮细胞株和不同的胃癌细胞株,以qPCR法检测miR-129表达.将miR-129 mimic或miR-NC转染胃癌SGC-7901细胞后,转染HMGA2过表达质粒.以克隆形成实验观察细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞侵袭情况,Pearson相关分析评估miR-129表达与HMGA2表达的相关性,荧光素酶实验检测荧光素酶活性,qPCR和蛋白质印迹法分别检测miR-129、HMGA2 mRNA和蛋白表达.结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-129表达明显下降(P<0.05);与人胃黏膜上皮细胞株GES-1相比,各胃癌细胞株中miR-129表达明显下降(P<0.05).与miR-NC组相比,miR-129 mimic组SGC-7901细胞增殖、侵袭能力均明显下降(P<0.05).胃癌组织中HMGA2 mRNA表达明显增加(P<0.05),并与miR-129表达呈负相关(r=-0.543 9,P<0.01).野生型miR-129 mimic组荧光素酶活性显著低于miR-NC组(P<0.05);转染miR-129 mimic后HMGA2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05).与miR-129+阴性对照组相比,miR-129 mimic+HMGA2组细胞增殖、侵袭能力明显升高(P<0.05).结论:miR-129在胃癌组织和细胞中低表达,其可通过下调HMGA2抑制SGC-7901细胞的增殖和侵袭.
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Syndecan-1对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响
Syndecan-1是表达于上皮细胞表面的一种硫酸乙酰肝素蛋白聚糖,在多种肿瘤细胞中的表达下降,与肿瘤的多种生物学行为密切相关,但其在细胞水平上对结直肠癌发展的作用目前尚无深入的研究.目的:评估Syndecan-1对人结肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨可能的分子机制.方法:分别将Syndecan-1高表达质粒和Syndecan-1 siRNA转染人结肠癌细胞株SW620和SW480,分别以转染空载质粒或无关序列作为阴性对照.采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell细胞迁移实验和Matrigel细胞侵袭实验分别检测细胞迁移、侵袭能力,蛋白质印迹法检测上皮细胞间质转化主要分子标记物E-cadherin的蛋白表达.结果:与阴性对照组相比,转染Syndecan-1高表达质粒的SW620细胞生长速度、迁移细胞数和侵袭细胞数均明显降低,同时E-cadherin表达升高;转染Syndecan-1 siRNA的SW480细胞生长速度、迁移细胞数和侵袭细胞数均明显升高,同时E-cadherin表达降低.结论:Syndecan-1能抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与上皮细胞间质转化有关.
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B类 Ⅰ 型清道夫受体在食管鳞状细胞癌中的表达与其对细胞增殖和侵袭的影响
目的 探讨B类Ⅰ型清道夫受体(S R-B1)在食管鳞状细胞癌中的表达,以及其表达变化对食管鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的影响.方法 纳入2012年5月至2017年8月于河南省人民医院行手术切除治疗的63例食管鳞状细胞癌患者,收集其鳞状细胞癌组织和所对应的癌旁组织.采用免疫组织化学染色法和蛋白质印迹法检测所取组织和食管鳞状细胞癌细胞中SR-B1蛋白质的表达.使用SR-B1小干扰RNA、对照小干扰RNA、pcDNA3.1和pcDNA3.1-SR-B1分别转染食管鳞状细胞癌EC1和TE1细胞.采用蛋白质印迹法检测转染后SR-B1蛋白质的表达,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)、流式细胞术和T ranw ell小室分别检测转染后食管鳞状细胞癌EC1和T E1细胞增殖、周期和侵袭的改变.统计学分析采用卡方检验和t检验.结果 食管鳞状细胞癌组织的S R-B1蛋白质表达阳性率为60.3％(38/63),高于癌旁组织的30.2％(19/63),差异有统计学意义(χ2=11.565,P=0.001).食管鳞状细胞癌Eca109、EC9706、EC1、TE1和KYSE70细胞中SR-B1蛋白质的表达水平分别为0.244±0.012、0.285±0.018、0.455±0.016、0.479±0.019和0.390±0.022,均高于正常食管上皮细胞Het-1A的0.027±0.011,差异均有统计学意义(t=23.252、21.633、39.081、36.010、25.591,P均<0.01).S R-B1小干扰RNA下调食管鳞状细胞癌EC1和TE1细胞中SR-B1蛋白质的表达.SR-B1蛋白质的表达下调抑制食管鳞状细胞癌EC1和T E1细胞的增殖,增加EC1和T E1细胞在G0/G1期的细胞比例[分别为(64.92±1.68)％ 和(64.34±0.94)％],降低EC1和T E1细胞的侵袭能力(分别为33.33±7.51和21.67±4.04);SR-B1表达上调促进食管鳞状细胞癌EC1和TE1细胞的增殖,降低其G0/G1期的细胞比例[分别为(31.72±1.30)％ 和(33.12±1.04)％],增强其侵袭能力(分别为285.33±28.10和247.33±28.29).结论 S R-B1在食管鳞状细胞癌中的过表达可能与食管鳞状细胞癌的发生、发展密切相关,S R-B1可能成为治疗食管鳞状细胞癌的新靶点.
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微RNA-29b对胃癌腹膜高转移潜能细胞系侵袭和增殖能力的影响
目的 研究miRNA 29b在胃癌细胞株GC9811及胃癌腹膜高转移潜能细胞株GC9811 P中的表达及其对细胞侵袭、增殖及凋亡能力的影响.方法 通过实时荧光定量PCR测定miRNA 29b在GC9811和GC9811 P细胞中的相对表达量.将GC9811细胞分3组,miRNA-29b下调组转染慢病毒LV miRNA 29b抑制子,阴性对照组转染空载体,未转染细胞作为空白对照组.将GC9811P细胞分3组培养,miRNA-29b上调组转染慢病毒LV-miRNA 29b,阴性对照组转染空载体,未转染细胞作为空白对照组.Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,MTT实验检测细胞的增殖能力,平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况.实时荧光定量PCR检测胃癌细胞(GC9811-P、GC 9811、MKN28-M、MKN28-NM)中miRNA-29b与富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)基因较正常胃黏膜细胞GES的相对表达水平并进行相关性分析.两样本均数之间的比较采用两独立样本的t检验和SNK-q检验,3组样本均数之间的比较采用单因素方差分析.结果 GC9811P细胞中miRNA-29b的相对表达量(0.21±0.04)明显低于GC9811细胞(1.00±0.03,t=28.140,P＜0.01).GC9811细胞转染慢病毒LV-miRNA-29b抑制子后,细胞中miRNA-29b的表达(0.21±0.04)较阴性对照组(0.89±0.07)或空白对照组(1.00±0.04)明显降低(q=12.76、14.73,P均＜0.01),跨膜细胞数(274.33±9.03)较阴性对照组显著增多(110.67±13.69,t=9.981,P＜0.01),克隆形成能力明显增强(131.33±4.91比69.67±2.33,t=11.340,P＜0.01),MTT实验亦显示其增殖能力显著增强.GC9811-P细胞转染慢病毒LV miRNA-29b后,细胞中miRNA-29b的表达(4.08±0.20)较阴性对照组(1.15±0.05)或空白对照组(1.00±0.10)明显升高(q=21.73、22.81,P均＜0.01);跨膜细胞数(51.33±5.55)较阴性对照组(104.00±6.24)明显减少(t=6.305,P＜0.01),MTT实验亦显示其增殖能力明显减弱.细胞凋亡实验证实miRNA-29b具有促进细胞凋亡的趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05);胃癌细胞中miRNA-29b和SPARC mRNA的表达呈负相关(r=-0.97,P=0.03).结论 miRNA-29b在胃癌腹膜高转移潜能细胞系中低表达,对胃癌细胞的侵袭和增殖具有抑制作用,miRNA-29b可能成为抑制胃癌腹膜转移的一个新的靶点.
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塞来昔布对胰腺癌的放疗增敏作用及其机制研究
目的 研究环氧合酶-2选择性抑制剂塞来昔布联合放射治疗对胰腺癌的作用,并探讨其作用机制.方法 克隆形成实验和裸鼠移植瘤模型观察塞来昔布、放疗和两者联合对胰腺癌细胞SW1990体内外增殖的影响.Western印迹法检测细胞增殖相关蛋白表达.原位缺口末端标记法(TUNEL)研究胰腺癌细胞凋亡.RT-PCR检测凋亡相关基因表达的变化.体外血管生成和体外侵袭力测定方法检测塞来昔布、放疗及两者联合对胰腺癌细胞新生血管生成和细胞侵袭力的影响,RT-PCR、明胶酶谱和反式酶谱方法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及其组织抑制剂(TIMP)-1、TIMP-2的表达.结果 塞来昔布在体内外均有放射增敏作用.胰腺癌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达水平在塞来昔布组和联合放疗组均降低,联合组较塞来昔布组有进一步降低.塞来昔布诱导胰腺癌细胞凋亡,单独放疗并不能诱导SW1990细胞发生凋亡,两者联合凋亡细胞数明显增加.塞来昔布下调bcl-2 mRNA表达,而放疗诱导bcl-2 mRNA表达上调,联合组bcl-2的表达低.单剂量放疗时,裸鼠胰腺癌移植瘤的生长延迟时间为22 d,联合塞来昔布为38 d.单独放疗并不能抑制体外胰腺癌细胞的新生血管生成和侵袭,塞来昔布在体外抑制胰腺癌新生血管形成和侵袭,塞来昔布与放疗联合其抑制作用较单用塞来昔布无明显增强.塞来昔布抑制胰腺癌细胞合成、分泌和激活MMP-2、MMP-9,但对TIMP-1、TIMP-2的合成、分泌和激活无明显影响.结论 COX-2选择性抑制剂塞来昔布对胰腺癌放疗有增敏作用,其机制涉及诱导细胞凋亡,并通过抑制胰腺癌细胞新生血管生成和细胞侵袭,间接对胰腺癌的放疗起增敏作用.
