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白细胞介素8参与CD133+肝癌细胞的侵袭与转移
背景：白细胞介素8是一种重要的炎性趋化因子，其在调节肿瘤细胞增殖、血管新生方面发挥了重要作用。
目的：探讨白细胞介素8对CD133+肝癌细胞侵袭转移能力的影响。
方法：分离培养人肝癌MHCC97-H细胞株，免疫磁珠分选出CD133+/CD133-MHCC97-H细胞，流式细胞仪检测CD133表达，ELISA检测上清液白细胞介素8水平。克隆形成实验、裸鼠成瘤实验、Transwell小室分别检测CD133+/CD133-MHCC97-H细胞克隆形成率、小鼠成瘤能力、细胞迁移侵袭能力。另外，采用白细胞介素8中和抗体处理细胞，比较CD133+/CD133-MHCC97-H细胞CD133表达、上清液中白细胞介素8水平及细胞克隆形成能力和迁移、侵袭能力。
结果与结论：①CD133+MHCC97-H细胞的CD133表达率、上清液白细胞介素8水平及克隆形成率均显著大于 CD133-MHCC97-H 细胞(P <0.05)；②细胞浓度为1×106 L-1和1×107 L-1的 CD133+MHCC97-H细胞接种后有部分小鼠出现皮下移植瘤，但CD133-MHCC97-H细胞在同样细胞浓度下，均未出现皮下移植瘤；③CD133+MHCC97-H细胞的透膜细胞数量均显著大于CD133-MHCC97-H细胞(P<0.05)；④经白细胞介素8中和抗体处理之后，CD133+/CD133-MHCC97-H细胞的CD133表达率、上清液中白细胞介素8水平、克隆形成率均显著下降(P<0.05)，且CD133+MHCC97-H细胞下降程度更大(P<0.01)；CD133+MHCC97-H细胞的迁移、侵袭透膜细胞数显著减少(P<0.05)，CD133-MHCC97-H细胞则未出现明显的改变(P>0.05)；⑤结果表明，白细胞介素8可以特异性参与调节CD133+MHCC97-H细胞侵袭、转移能力。 -
miR-15家族促进CD133+胰腺癌干样细胞的迁移和侵袭
背景:一些研究表明,CD133是包括胰腺癌在内的多种肿瘤细胞的干细胞标记,与癌症的预后不良有关.miR-15家族参与凋亡、细胞分化与周期调控、应激等重要细胞功能活动的调节,具有潜在的干预价值.目的:探讨miR-15家族对CD133+胰腺癌干样细胞迁移和侵袭的影响.方法:首先构建高迁移性胰腺癌细胞亚系CD133+Capan-1M9,经鉴定具有干样细胞特征,在此基础上通过慢病毒转导的方式构建过表达miR-15a、miR-15b和miR-15c的CD133+Capan-1M9细胞系,同时将稳定转染NC-miRNA的细胞系作为阴性对照组.qRT-PCR检测过表达细胞系中miR-15a、miR-15b和miR-15c表达情况及上皮-间充质转化相关蛋白纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素mRNA表达;MTT法检测过表达细胞系增殖能力和吉西他滨抗性;球体形成实验检测过表达细胞系自我更新能力;细胞迁移和侵袭实验检测过表达细胞系的迁移和侵袭能力;Western blot检测过表达细胞系中上皮-间充质转化相关蛋白纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素表达.结果与结论:①与阴性对照组相比,过表达CD133+Capan-1M9细胞系中miR-15a、miR-15b和miR-15c表达量分别升高了8.3,10,9.5倍,而纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素mRNA和蛋白表达也显著升高(P<0.05);②过表达CD133+Capan-1M9细胞系增殖能力与阴性对照组相比差异无显著性意义(P>0.05),而对吉西他滨的抗性显著增强(P<0.05);③与阴性对照组相比,过表达CD133+Capan-1M9细胞系的球体数量和体积没有显著变化(P>0.05);④与阴性对照组相比,过表达CD133+Capan-1M9细胞系的细胞迁移和侵袭能力显著增强(P<0.05);⑤miR-15家族能够调控上皮-间质转化进而促进CD133+胰腺癌干样细胞的迁移与侵袭.
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SATB1基因沉默抑制食管鳞状细胞癌TE-1中肿瘤干细胞样细胞侵袭及迁移能力
背景:近来有研究证实SATB1与肿瘤的发生及发展有关,但其在肿瘤转移中的机制尚不明确.目的:观察特异性干扰SATB1基因表达对食管鳞状细胞癌TE-1中肿瘤干细胞样细胞侵袭、迁移的影响.方法:采用免疫磁珠分选法从人食管鳞状细胞癌TE-1中分选p75NTR阳性细胞与p75NTR阴性细胞,检测p75NTR阳性细胞的体外增殖能力及克隆形成能力.取对数生长期的 p75NTR阳性肿瘤干细胞样细胞,转染组利用Lipofectamine 2000脂质体法将SATB1基因siRNA转染至细胞中,同时设置空载体转染的p75NTR阳性细胞为对照,转染后72 h,采用Western blot法检测2组细胞SATB1蛋白表达,Transwell小室实验检测2组细胞的迁移及侵袭能力,Western blot与qRT-PCR法检测基质金属蛋白酶2/9的表达.结果与结论:①与p75NTR阴性细胞比较,p75NTR阳性细胞培养3,5,7 d的细胞增殖明显加快(P < 0.05);②p75NTR阳性细胞的克隆形成率明显高于p75NTR阴性细胞(P < 0.05);③转染后72 h后,转染组SATB1基因蛋白表达明显低于对照组(P < 0.05),迁移能力与侵袭能力明显低于对照组(P < 0.05),基质金属蛋白酶2/9的基因及蛋白表达明显低于对照组(P < 0.05);④结果提示,以siRNA干扰SATB1基因后,可抑制食管鳞状细胞癌TE-1肿瘤干细胞样细胞侵袭、迁移,可能与其下调基质金属蛋白酶2/9的表达有关.
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Wnt/β-catenin信号通路在卵巢癌干细胞增殖、迁移和侵袭中的作用
背景:在肿瘤细胞中,β-catenin降解障碍导致胞浆内游离的β-catenin聚集并与TCF/LEF结合进入细胞核内,启动下游基因转录,诱发Wnt/β-catenin信号通路异常改变.因此,研究β-catenin与卵巢癌干细胞的关系,可为特异性抑制卵巢癌干细胞提供新的思路.目的:观察β-catenin基因沉默后卵巢癌干细胞增殖、迁移与侵袭能力的变化.方法:采用免疫磁珠法从人卵巢癌细胞A2780中分离CD133阳性卵巢癌干细胞.选取70%-80%融合的CD133阳性细胞,分别转染慢病毒pLKO.1-shRNA-β-catenin(实验组)与pLKO.1-shRNA-ctrl(对照组)质粒,转染后72 h,采用Western blot检测两组细胞β-catenin、上皮表型分子E-cadherin和间质表型分子Vimentin的表达,MTT法检测两组细胞增殖活性,Transwel小室实验检测两组细胞迁移与侵袭能力.结果与结论:①转染后72 h,实验组细胞β-catenin蛋白明显低于对照组(P<0.05);②实验组培养2,3 d的细胞增殖能力低于对照组(P<0.05);③转染后72 h,实验组细胞迁移能力、侵袭能力明显低于对照组(P<0.05);④转染后72 h,实验组上皮表型分子E-cadherin蛋白表达高于对照组(P<0.05),间质表型分子Vimentin蛋白表达低于对照组(P<0.05);⑤结果表明,Wnt/β-catenin信号通路参与了卵巢癌干细胞的迁移与侵袭,沉默β-catenin基因表达可抑制卵巢癌干细胞的增殖、迁移及侵袭能力.
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胰岛素样生长因子结合蛋白2促进神经胶质瘤干细胞的增殖与迁移侵袭
背景:目前关于血清胰岛素样生长因子结合蛋白2(recombinant insulin like growth factor binding protein 2, IGFBP-2)对神经胶质瘤影响的分子机制仍不明确,并且内源性IGFBP-2无法解释血清中IGFBP-2的一系列作用,需进一步阐明外源性IGFBP-2的作用.目的:观察IGFBP-2干预后神经胶质瘤干细胞的增殖与迁移侵袭能力变化.方法:采用免疫磁珠技术从人胶质瘤细胞 U251 细胞中分离 CD133+胶质瘤干细胞,免疫荧光染色检测细胞CD133、Nestin的表达进行鉴定;将CD133+胶质瘤干细胞分2组干预,以500 μg/L IGFBP-2干预48 h作为实验组,未经IGFBP-2干预作为对照组.CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,采用Western blot检测PCNA、Ki-67、ERK及p-ERK蛋白表达.结果与结论:①实验组培养2-5 d的吸光度值明显高于对照组,差异有显著性意义(P < 0.05);实验组细胞增殖相关蛋白PCNA、Ki-67表达高于对照组,差异有显著性意义(P < 0.05);②实验组迁移细胞数明显多于对照组,差异有显著性意义(P < 0.05);③实验组侵袭细胞数明显多于对照组,差异有显著性意义(P < 0.05);④两组ERK蛋白表达无差异,但实验组p-ERK蛋白明显高于对照组,差异有显著性意义(P < 0.05);⑤结果表明,IGFBP-2可促进神经胶质瘤干细胞的增殖、迁移与侵袭,并且ERK通路可能在其中发挥了一定的作用.
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甲状腺乳头状癌肿瘤干细胞增殖、凋亡、侵袭与miR-93的影响
背景:前期研究发现,miR-93作为保护因子而非致病因子参与甲状腺腺瘤及其应激胰岛素抵抗的发生和发展.目的:研究miR-93对甲状腺乳头状癌肿瘤干细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法:采用流式细胞技术从人甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中分选CD44+CD24-肿瘤干细胞与非CD44+CD24-细胞,检测两种细胞中miR-93基因的表达.取CD44+CD24-肿瘤干细胞,分别转染miR-93模拟物与miRNA模拟物对照,采用CCK-8法、流式细胞技术、Transwel小室检测细胞增殖、凋亡、侵袭能力,采用Western Blot检测细胞增殖蛋白Ki67、凋亡蛋白Bax及Bcl-2、侵袭标志蛋白MMP-2及MMP-9的表达.结果与结论:①CD44+CD24-细胞中的miR-93表达明显低于非CD44+CD24-细胞(P<0.05);②转染miR-93模拟物的CD44+CD24-肿瘤干细胞的增殖速度明显慢于转染miRNA模拟物对照组(P<0.05),细胞增殖蛋白Ki67表达明显低于转染miRNA模拟物对照组(P<0.05);③转染miR-93模拟物的CD44+CD24-肿瘤干细胞的凋亡率明显高于转染miRNA模拟物对照组(P<0.05),促凋亡蛋白Bax表达高于转染miRNA模拟物对照组(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达低于转染miRNA模拟物对照组(P<0.05);④转染miR-93模拟物的CD44+CD24-肿瘤干细胞的侵袭能力、侵袭标志蛋白MMP-2及MMP-9表达均明显低于转染miRNA模拟物对照组(P<0.05);⑤结果表明,miR-93可抑制甲状腺乳头状癌肿瘤干细胞的增殖及侵袭能力,促进其凋亡.
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miR-34a调节SIRT1表达抑制结肠癌干细胞增殖和侵袭
背景:miR-34a是一种起抑癌作用的miRNA,它能调节多个靶基因的表达,有可能成为治疗肿瘤的新靶点.目的:探讨miR-34a及其靶基因SIRT1对结肠癌干细胞体外增殖、凋亡、侵袭能力的影响.方法:采用无血清悬浮培养法从人结肠癌细胞株HCT116中富集肿瘤干细胞,流式细胞仪检测CD44+/CD133+细胞所占的比例进行鉴定.利用脂质体转染法将miR-34a模拟物转染结肠癌干细胞,并设miRNA无序阴性对照物和未转染组.CCK-8增殖实验、细胞凋亡实验、细胞侵袭实验检测结肠癌干细胞增殖、凋亡、侵袭情况.采用qRT-PCR和Western blot法检测miR-34a转染后细胞中SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平.结果与结论:①无血清悬浮培养法富集的肿瘤干细胞球中含有较高比例的 CD44+/CD133+表型细胞,所占比例为(78.3±6.7)%;②miR-34a转染组的miR-34a表达量高于未转染组和miR-34a对照组(P < 0.05);③与未转染组和miR-34a对照组比较,miR-34a转染组的细胞增殖能力明显降低(P < 0.05);细胞凋亡率明显升高(P < 0.05);侵袭细胞数明显降低(P < 0.05);④miR-34a过表达后,miR-34a转染组的SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平均明显低于未转染组和miR-34a对照组(P < 0.05);⑤结果表明,过表达miR-34a可抑制结肠癌干细胞增殖、侵袭并诱导凋亡,可能与其下调SIRT1的表达有关.
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上调miR-206对婴幼儿血管瘤内皮细胞生长状态和侵袭能力的影响
目的 研究上调婴幼儿血管瘤内皮细胞miR-206水平对细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响.方法 通过CD31磁珠提取婴幼儿血管瘤内皮细胞,经转染miR-206模拟物提高HemECs细胞内miR-206水平,研究miR-206对该细胞功能的影响.以cck-8法检测细胞增殖能力的改变,AV-PI凋亡试剂盒经流式细胞仪检测凋亡水平变化,并经Transwell侵袭实验检测侵袭能力变化.结果 转染miR-206模拟物进入HemECs细胞内48 h后,能够明显抑制细胞增殖,抑制率为(34.2±6.8)％;转染48 h后相比于对照组(1.7±1.6)％的凋亡细胞比率,miR-206模拟物组细胞凋亡比率提高到(23.9±5.1)％,差异具有统计学意义;转染后24h侵袭实验显示,细胞穿透Transwell小室至下室面细胞数在对照组为30.3 ±2.4,在miR-206模拟物组细胞数减少至14.3±3.0.结论 上调HemECs细胞内miR-206水平可明显抑制细胞增殖,增加细胞凋亡水平,减少细胞侵袭能力.提示miR-206可能通过调节瘤体细胞生物活性,对婴幼儿血管瘤疾病进程起到重要的调控作用.
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整合素α6与子宫内膜异位症
子宫内膜异位症(endometriosis,EM,内异症)具有肿瘤细胞侵袭与转移的恶性行为.研究整合素(integrin)目的在于进一步了解其在EM中的发病机制.近年来实验证实肿瘤常伴有整合素α6(integrin alpha 6,CD49f)表达水平的变化,因而从分子水平探讨整合素α6相关的细胞外基质(ECM),进行肿瘤细胞侵袭、转移及EM的研究,寻找干扰整合素与配体相互作用、选择性增加或减少其在内异症中表达的物质,为阻断侵袭与转移,研究治疗药物,进一步提供临床治疗策略具有深远影响.
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菝葜皂苷元对结肠癌细胞.Lovo黏附和侵袭能力的影响
目的:本研究旨在探讨菝葜皂苷元体外对人结肠癌细胞Lovo增殖、黏附、侵袭的影响.方法:采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭实验,观察菝葜皂苷元对人结肠癌细胞Lovo增殖、黏附和侵袭能力的影响.结果:①菝葜皂苷元有抑制人结肠癌细胞Lovo增殖的作用,与对照组比较,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大(P＜0.01).②菝葜皂苷元作用人结肠癌细胞Lovo后,细胞的黏附能力明显降低(P＜0.01).③菝葜皂苷元作用人结肠癌细胞Lovo 24h后,侵袭的细胞数较对照组明显减少(P＜0.01).结论:菝葜皂苷元对人结肠癌细胞Lovo的增殖具有抑制作用;菝葜皂苷元能抑制人结肠癌细胞Lovo的黏附能力和侵袭能力.
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健脾化瘀方对肝癌HepG2细胞生物行为学的影响
目的:本研究旨在探讨:①健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的生物行为学影响；②健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响.方法:①采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭迁移实验,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的影响；②利用流式细胞仪,AnnexinV/PI双染色法,研究不同浓度健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2早期凋亡的诱导作用.结果:①健脾化瘀方有抑制人肝癌细胞株HepG2增殖的作用,并呈一定的浓度依赖性:同一时间不同浓度各组细胞的生长抑制率有明显差异(P＜0.01).②健脾化瘀方高、中浓度(2、1mg/mL)作用HepG 2细胞40、60和120min时,细胞的黏附能力明显降低(P＜0.01).健脾化瘀方作用HepG 2细胞24h后,侵袭的细胞数减少(P＜0.05).③健脾化瘀方对人肝癌细胞HepG2作用48h后,有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用(P＜0.05).结论:①健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2的增殖具有抑制作用；②健脾化瘀方能抑制人肝癌细胞株HepG2的黏附能力和侵袭能力；③健脾化瘀方有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用.
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SDF-1和PI3K/Akt通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响研究
目的:探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号传导通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制.方法:将卵巢癌CAOV3细胞分为对照组(未给药),实验组1(100 ng/ml SDF-1),实验组2(50 μmol/L PI3K/Akt信号传导通路抑制剂LY294002)和实验组3(50 μmol/L LY294002,作用0.5h后加入100 ng/ml SDF-1).采用MTT法检测卵巢癌CAOV3细胞经不同药物处理后24、48和72 h的细胞增殖能力.采用Transwell体外细胞侵袭实验和Western Blot法检测经不同药物处理48h后卵巢癌CAOV3细胞的侵袭能力、Akt磷酸化程度和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平.结果:SDF-1可以明显促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05),LY294002可以抑制卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05);实验组3卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭能力与实验组2比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:SDF-1能够通过PI3K/Akt信号传导通路诱导MMP-9蛋白表达上调,增强卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力;应用LY294002阻断PI3 K/Akt信号传导通路可显著抑制SDF-1对人卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭的促进作用.
关键词： 卵巢肿瘤 基质细胞衍生因子-1 PI3K/AKT信号传导通路 细胞增殖 细胞侵袭 -
扶正解毒通络方对人肝癌HepG2细胞MMP-2、MMP-9表达及细胞侵袭作用的影响
目的:探讨扶正解毒通络方对肝癌HepG2细胞侵袭作用和基质金属蛋白酶(Matrix metallo proteinases,MMP)-2、MMP-9表达水平的影响及可能的作用机制.方法:CCK8实验检测扶正解毒通络方对HepG2细胞活性影响;Transwell侵袭实验检测扶正解毒通络方对HepG2侵袭能力的影响;ELISA法检测扶正解毒通络方干预HepG2细胞后 MMP-2和MMP-9的表达水平.结果:CCK8实验结果显示,扶正解毒通络方对HepG2细胞意志呈剂量时间相关性.Transwell 侵袭实验显示,2.65 mg/ml扶正解毒通络方对HepG2细胞侵袭力抑制率为52.45% (P<0.05).ELISA检测结果显示,扶正解毒通络方干预后 HepG2 细胞上清液中MMP-2 和 MMP-9表达水平下降(P<0.05).结论:扶正解毒通络方可以抑制肝癌HepG2细胞的生长和侵袭,其机制可能是通过下调MMP-2、MMP-9在肝癌细胞HepG2的表达.
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妊高征患者TM、β-H CG、sVCAM-1水平检测及临床意义
妊娠高血压综合征（pregnancy-induced hyper-tension syndrome，PIH），简称妊高征，是妇女妊娠期常见的多发病。目前病因尚不清楚，发病因素可能涉及母体、胎盘和胎儿等多种因素，包括有滋养细胞侵袭异常、免疫调节功能异常、内皮细胞损伤、遗传因素和营养因素等。做为产科常见并发症之一，严重威胁到母婴生命安全。本研究通过对妊高征患者与正常妊娠妇女血清β绒毛膜促性腺激素（β-HCG）可溶性血管细胞粘附分子-1（sVCAM-1）、血浆的凝血酶调节蛋白（TM）水平的变化探讨它们在妊高征发病中的作用及与病情发展的关系。
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新的肿瘤抑素对C6脑神经胶质瘤体外实验研究
神经胶质瘤是颅内常见的原发肿瘤，呈浸润性生长，且术后复发率高，严重威胁患者的生命健康。目前神经胶质瘤的发病机制尚未十分清楚，据文献报道，神经胶质瘤的发生、发展与细胞凋亡密切相关［1-3］。其传统的治疗原则是术后先放疗后化疗，或单独放疗／化疗，但都难以提高其临床疗效［4］，治愈率仍较低。近年来，研究者们通过大量的基础研究正在寻求治疗脑神经胶质瘤的新策略。目前国内外已研究出的抗肿瘤药物众多，但多数价格昂贵且不良反应大，同时也存在耐药性问题，使其临床应用受到一定限制［5-7］。为此，寻找高效、低毒、价廉的新的治疗药物成为近年来研究的热点。本实验旨在研究一种新的肿瘤抑素对 C6脑神经胶质瘤细胞作用的影响，并通过检测神经胶质瘤细胞侵袭及细胞周期蛋白 D1表达变化，初步探讨其抑制神经胶质瘤细胞的可能作用机制，为进一步研究新的肿瘤抑素在临床上治疗神经胶质瘤提供了新的理论依据。
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槲皮素对胃癌细胞增殖及侵袭的调控作用及机制
目的 探讨抗肿瘤药物槲皮素对胃癌细胞增殖及侵袭能力的调控作用及其可能的分子机制.方法 以不同浓度的槲皮素处理胃癌细胞SGC-7901,采用噻唑蓝(MTT)比色法观察胃癌细胞增殖情况,采用Transwell小室法观察胃癌细胞的侵袭情况,并用Western印迹法检测胃癌细胞相关蛋白Caveolin(Cav)-1的表达情况.结果 槲皮素不同浓度组胃癌细胞的增殖抑制率和侵袭细胞数量及Cav-1蛋白的表达均显著低于对照组(均P<0.05),且胃癌细胞的增殖、侵袭能力和Cav-1的表达情况均与槲皮素的浓度呈现依赖性(均P<0.05).结论 槲皮素对胃癌细胞的增殖及侵袭有一定的抑制作用,其机制可能与Cav-1表达下降有关.
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沉默WNT4基因对稳定转染PAX2基因大鼠肾小管上皮细胞迁移和侵袭能力的影响
目的:探讨沉默WNT4基因对稳定转染配对盒基因2(PAX2)大鼠肾小管上皮细胞迁移和侵袭能力的影响,阐明PAX2基因是否通过WNT4基因调控细胞生物学活性.方法:选取对数生长期的PAX2基因稳转细胞系,分为稳转组和对照组.稳转组细胞分为稳转对照组(不应用WNT siRNA沉默)和沉默72 h组(应用WNT siRNA沉默72 h).Western blotting法检测稳转组和对照组大鼠肾小管上皮细胞中PAX2和WNT4蛋白的相对表达量,Real time PCR法检测稳转对照组和沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞中WNT4 mRNA相对表达量,细胞划痕实验检测稳转对照组和沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率,Transwell实验检测稳转对照组和沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的穿膜细胞数.结果:Western blotting法检测,稳转组大鼠肾小管上皮细胞中PAX2和WNT4蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05).Real-time PCR法检测,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞中WNT4 mRNA相对表达量低于稳转对照组(P<0.05).细胞划痕实验10 h后,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率低于稳转对照组,但组间比较差异无统计学意义(P>0.05);细胞划痕实验18 h后,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率低于稳转对照组(P>0.05).Transwwell实验,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的穿膜细胞数低于稳转对照组(P<0.05).结论:PAX2基因可能通过WNT4基因调控细胞的生物学活性.
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丝氨酸-苏氨酸激酶11基因沉默对人前列腺癌RWPE-1细胞侵袭及迁移能力的影响及其作用机制
目的 探讨丝氨酸-苏氨酸激酶11 (liver kinase B1/serine-threonine kinase 11,LKB1)基因沉默对人前列腺癌RWPE-1细胞侵袭及迁移能力的影响及其作用机制.方法 将质粒LKB1-shRNA1及shNC分别转染至RWPE-1细胞中,同时设空白对照组(未转染),经G418筛选出稳定表达细胞株.RT-PCR及Western blot法检测RWPE-1细胞中LKB1基因mRNA转录及蛋白表达水平;划痕试验及Transwell小室试验分别检测LKB1基因沉默对RWPE-1细胞迁移及侵袭能力的影响;RT-PCR及Westem blot法检测RWPE-1细胞中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及MMP-9基因mRNA转录及蛋白的表达水平.结果 与shNC组及空白对照组比较,LKB1-shRNA1组RWPE-1细胞中LKB1基因mRNA转录及蛋白表达水平明显降低(P＜0.001);细胞划痕愈合能力及侵袭细胞数明显升高(P＜0.001);TGF-β1、MMP-2及MMP-9基因mRNA转录及蛋白表达水平均明显上升(P＜0.01).结论 LKB1基因沉默可显著提高RWPE-1细胞的转移及侵袭能力,可能是通过上调TGF-β1、MMP-2及MMP-9表达水平产生作用的.
关键词： 丝氨酸-苏氨酸激酶11 基因沉默 前列腺癌RWPE-1细胞 细胞侵袭 细胞迁移 -
舌鳞状细胞癌永生化细胞系细胞的侵袭性
目的 比较从转移灶中富集出的舌鳞状细胞癌永生化细胞系Tca8113-Ml细胞与原发灶组织获得的Tca8113细胞系细胞侵袭能力的差异,探讨舌鳞状细胞癌永生化细胞系细胞侵袭特性与转移肿瘤干细胞(migratingcancerstem cell,MCSC)的相关性.方法 采用Transwell小室侵袭试验和BALB/c裸鼠移植瘤试验分析Tca8113和Tca8113-Ml细胞的侵袭能力.结果 Tca8113-Ml组的穿膜细胞数(93.8±4.4)明显多于Tea8113组(34.0±1.6),且差异有统计学意义(P＜0.01);Tca8113-M1组裸鼠更易形成移植瘤,且移植瘤形成较快,生长速度也较快,成瘤率为6/6,而Tca8113组成瘤率为4/6.结论 舌鳞状细胞癌永生化细胞系Tca8113-Ml细胞的侵袭能力较强,表明从转移灶中富集出的细胞系细胞具有明显的“干性”,提示肿瘤转移与MCSC之间存在相关性.
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miR-25-3p调控CPEB4基因对人肺癌A549细胞侵袭和迁移的影响
目的 探讨miR-25-3p和CPEB4基因在人肺癌A549细胞中的表达,阐明miR-25-3p对CPEB4基因的靶向作用及其对A549细胞侵袭和迁移的影响.方法 采用免疫荧光化学技术检测CPEB4在A549细胞中的表达;运用生物信息学方法对miR-25-3p和CPEB4基因的靶向配对关系进行预测;脂质体2000转染miR-25-3p模拟物以及干扰CPEB4基因的siRNA后,采用Real-time PCR检测miR-25-3p和CPEB4基因mRNA在癌细胞中的表达;Western blot法检测CPEB4蛋白在癌细胞中的表达;Transwell小室试验检测癌细胞体外的侵袭性;细胞划痕试验检测癌细胞的迁移情况.结果 A549细胞胞质内CPEB4蛋白高表达,呈绿色荧光;miR-25-3p和CPEB4基因二者靶向配对良好;过表达miR-25-3p能降低A549细胞中CPEB4基因mRNA和蛋白的表达,抑制A549细胞的侵袭和迁移.结论 miR-25-3p通过下调人肺癌A549细胞中CPEB4基因的表达,进而抑制癌细胞的侵袭和迁移.
