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MS-275抑制肠癌细胞增殖与侵袭及其机制的研究
目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs) MS275对肠癌增殖及侵袭的影响.方法:采用MTT法检测MS-275对肠癌细胞Caco-2增殖的抑制作用,用Transwell实验检测MS-275对肠癌细胞Caco-2侵袭能力的影响,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶-7 (MMP-7)蛋白表达量的变化.结果:经MS-275处理后,Caco-2细胞的增殖活性明显降低,8μmol/L的MS-275处理细胞48 h,其对细胞活性抑制率高达54.50％,与对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.01;经MS-275处理后,Caco-2细胞侵袭能力明显降低,8μmol/L的MS-275处理细胞24 h,细胞侵袭率降低至15.70％,与对照组细胞相比较,差异有统计学意义,P＜0.01；MMP-7的蛋白表达随着MS-275的浓度升高而降低,其中8 μmol/L的MS-275处理细胞24 h,与对照组相比,MMP-7蛋白表达量降低至18.00％,差异有统计学意义,P＜0.01.结论:MS-275能有效抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖活性；MS-275能有效抑制结肠癌细胞Caco-2中MMP-7蛋白表达量；MS-275通过抑制MMP-7蛋白的表达能有效抑制结肠癌细胞Caco-2的侵袭能力.
关键词： 肠肿瘤 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 MS-275 细胞增殖 细胞侵袭 -
下调FNDC3B表达对舌鳞癌细胞增殖和侵袭迁移影响
目的 转移和复发是舌鳞癌治疗失败的主要原因,明确其转移复发的机制是提高疗效和预后的关键.本研究旨在检测Ⅲ型纤维连接蛋白域蛋白3B(fibronectin type Ⅲ domain containing 3B,FNDC3B)在舌鳞癌细胞株中的表达,并探讨下调其表达对人舌鳞癌细胞体外增殖和侵袭迁移能力的影响.方法 实时定量荧光PCR (realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,PCR)及蛋白质印迹法检测舌鳞癌细胞株中FNDC3B的表达情况,构建稳定沉默FNDC3B舌鳞癌细胞株并通过Real-time PCR及蛋白质印迹法检测沉默的效率.平板克隆、四唑盐(methyl thiazolyl tetrazolim,MTT)比色法和Transwell实验分别检测沉默FNDC3B对舌鳞癌细胞增殖及侵袭迁移的影响.结果 Realtime PCR及蛋白质印迹法结果证实,FNDC3B在舌鳞癌细胞中的表达明显高于人正常舌上皮细胞.Transwell侵袭和迁移实验发现,3组沉默组TCA8113侵袭细胞数目分别为26.67±2.96、59.33±5.36和102.0±7.55,明显少于对照组的172.7±13.28,F=60.347,P＜0.05;3组沉默组TCA8113迁移细胞数目分别为39.33±7.31、75.33±5.36和117.3±6.57,明显少于对照组的207.0±10.21,F=90.903,P＜0.05.与空载体对照组相比,稳定沉默FNDC3B的舌鳞癌细胞株的增殖及侵袭迁移能力明显降低,P＜0.05.结论 FNDC3B在舌鳞癌细胞中高表达,下调FNDC3B表达显著降低舌鳞癌细胞的增殖及侵袭迁移能力.
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siRNA干扰MACC1表达对前列腺癌细胞株PC-3生长与侵袭影响研究
目的 结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer 1,MACC1)在肿瘤侵袭和转移中起重要作用,在前列腺癌中的研究较少,本研究探讨siRNA转染下调MACC1表达对前列腺癌细胞株PC-3增殖和侵袭的影响.方法采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)法检测10例前列腺癌和其癌旁组织及4种前列腺癌细胞株(LNCap、PC-3、DU145、C4-2) MACC1 mRNA的表达;将前列腺癌细胞株PC-3分为实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组转染MACC1特异性小干扰RNA(small RNA interference,siRNA) (MACC1 siRNA),阴性对照组转染阴性对照siRNA,空白对照组不做处理.RT-PCR法及蛋白质印迹法检测siRNA转染前后MACC1 mRNA及蛋白水平的变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测转染后PC-3细胞增殖变化,Transwell小室法检测PC-3细胞侵袭能力的变化,蛋白质印迹法检测Met/MAPK信号通路蛋白改变.结果 10例前列腺癌组织中MACC1 mRNA相对表达量为0.82±0.27,高于癌旁组织的0.09±0.05,t=23.20,P＜0.001;前列腺癌细胞株PC-3、DU145和C4-2 MACC1 mR-NA的表达分别为0.86±0.19、0.65±0.23和0.77±0.23,高于LNCap细胞的0.17±0.07.实验组PC-3细胞转染siRNA后,MACC1 mRNA表达为0.16±0.03,低于阴性对照组的0.79±0.04,t=7.91,P＜0.001;也低于空白对照组的0.81±0.34,t=8.61,P＜0.001.实验组MACC1蛋白表达量为0.10±0.01,显著低于阴性对照组的0.39±0.045,t=11.21,P＜0.001;也低于空白对照组的0.41±0.10,t=11.73,P＜0.001;MACC1 siRNA组PC-3细胞增殖能力在72 h分别为0.58±0.65,低于阴性对照组的1.18±0.10和空白对照组的1.23±0.05,P＜0.001;MACC1 siRNA组PC-3细胞侵袭的细胞数目为126.0±9.8,低于阴性对照组233.3±12.0及空白对照组242.3±11.5,P＜0.05.转染后Met、p-MEK1/2和p-ERK1/2的MACC1 siRNA蛋白相对表达量分别为0.47±0.03、0.34±0.03和0.94±0.03,较对照组的0.26±0.04、0.10±0.11和0.10±0.12明显降低,P＜0.05;MEK1/2和ERK1/2蛋白相对表达量无明显下降,P＞0.05.结论MACC1可能通过上调Met和MAPK信号通路促进前列腺癌细胞的恶性行为.
关键词： 前列腺癌 SiRNA干扰 结肠癌转移相关基因1 细胞增殖 细胞侵袭 -
miRNA-200c对卵巢癌细胞侵袭能力影响观察
目的:探讨miRNA-200c的表达对卵巢癌细胞侵袭能力的影响,并初步分析其可能的作用机制.方法:应用Lipofectamine 2000瞬时上调ES-2细胞中miR-200c的表达,并通过荧光定量PCR验证;Transwll侵袭小室检测细胞侵袭能力的变化;生物信息学的方法预测miR-200c的靶基因,同时荧光素酶报告基因实验验证E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box bingding homeobox 2,ZEB2)是miR-200c的靶基因;蛋白印迹法检测E-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平.结果:pre-miR-200c转柒ES-2细胞后,转染组miR-200c的表达(4.82±1.73)较对照组(1.00±0.16)明显升高,t=67.28,P＜0.001;上调miR-200c后,转染组(27.70±1.19)与对照组(57.30±2.01)相比,细胞的侵袭能力明显减弱,t=11.17,P＜0.001;蛋白印迹法的结果显示,转染组ZEB2的表达水平为0.38±0.015,较对照组的0.66±0.024明显下降,t=94.67,P＜0.001.采用生物信息学的方法预测ZEB2是miR-200c的靶基因;且荧光素酶报告实验结果证实,共转染野生型荧光素酶质粒和pre-miR-200c,与其他各组相比,荧光素酶活性明显降低,差异有统计学意义,P＜0.001;转染pre-miR-200c后,转染组E-钙黏蛋白的表达(0.75±0.023)较对照组(0.32±0.014)明显增加,t=-97.77,P＜0.001,波形蛋白的表达为0.28±0.010,较对照组0.67±0.129明显降低,t=71.64,P＜0.001.结论:miR-200c能通过靶向ZEB2抑制人卵巢癌细胞的侵袭能力,其异常表达与卵巢癌细胞的生物学行为密切相关.
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miR-216b通过靶向调控蛋白激酶Cα基因的表达抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭
目的 明确miR-216b是否通过靶向调控蛋白激酶Cα(PKCα)基因的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭.方法 构建PKCα 3'非编码区(UTR)-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告系统检测miR-216b对PKCα 3'UTR-荧光素酶活性的影响.将miR-216b模拟物转染鼻咽癌细胞CNE2,采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测PKCα mRNA和蛋白的表达水平.将PKCαsiRNA转染CNE2细胞,通过MTS细胞增殖实验和Transwell侵袭实验观察PKCα基因表达下调对CNE2细胞增殖和侵袭的影响.将PKCα重组质粒与miR-216b模拟物共转染CNE2细胞,通过MTS细胞增殖实验检测CNE2细胞的增殖能力.结果 双荧光素酶报告检测结果显示,miR-216b能特异性地与PKCα mRNA的3'UTR结合,下调荧光素酶活性,其活性约为转染对照模拟物细胞的62.4％.过表达miR-216b的CNE2细胞中PKCα mRNA和蛋白的表达水平均降低,与对照细胞比较,分别降低49.1％和55.7％.siRNA干扰PKCα表达能抑制CNE2细胞的增殖和侵袭能力,能部分模拟miR-216b的抑瘤功能.过表达PKCα能部分逆转miR-216b对CNE2细胞的增殖抑制作用.结论 miR-216b通过靶向调控PKCα基因的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭.
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烯酯酰辅酶A水解酶1过表达对小鼠低淋巴道转移潜能肝癌细胞株Hca-P生物学行为的影响
目的 探讨烯酯酰辅酶A水解酶1(Ech1)过表达对小鼠低淋巴道转移潜能肝癌细胞株Hca-P体外增殖生长、迁移和侵袭能力的影响,及其Ech1表达水平与肝癌淋巴道转移潜能的关系.方法 将pcDNA3.1(+)-Ech1重组质粒和空载体pcDNA3.1(+)分别稳定转染Hca-P细胞,通过半定量逆转录聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测目的基因及其蛋白表达水平；在获得过表达Ech1的PEch1细胞株和实验对照组P空载体细胞株后,采用CCK-8法检测细胞分裂增殖能力,Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验评估Ech1过表达对Hca-P细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 PEch1组和P空载体组细胞中Ech1 mRNA相对表达水平分别为3.21±0.43和1.44±0.03,差异有统计学意义(P=0.029).PEch1组、P空载体组和未经处理的Hca-P组(P组)细胞中Ech1蛋白表达水平分别为0.140±0.005、0.088±0.003和0.078 ±0.006,差异有统计学意义(P＜0.05).PEch1组的细胞增殖能力明显高于P空载体组和P组(P＜0.05).Transwell迁移实验显示,PEch1组、P空载体组和P组穿膜细胞数分别为(143.00±7.25)个、(95.73±3.88)个和(106.67±3.54)个,PEch1组与P空载体组和P组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).Transwell侵袭实验显示,PEch1组、P空载体组和P组穿膜细胞数分别为(77.20±5.46)个、(46.34±4.35)个和(49.80±5.21)个,PEch1组与P空载体组和P组比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).结论 Ech1过表达可以显著促进Hca-P细胞增殖,增强其迁移和侵袭能力.Ech1有望成为临床基因治疗肝癌的靶点之一.
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鞘氨醇激酶1通过调控黏着斑激酶和黏附分子的表达促进结肠癌细胞的增殖和侵袭
目的 探讨鞘氨醇激酶l(SphKl)对人结肠癌LoVo细胞增殖、侵袭、迁移、黏着斑激酶(FAK)通路以及细胞间黏附分子1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的影响.方法 采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)和N,N-二甲基鞘氨醇(DMS)诱导和抑制人结肠癌LoVo细胞SphK1的活性,放射自显影法检测SphK1的活性,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性,Boyden小室观察细胞迁移和侵袭能力的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定可溶性ICAM-1(sICAM-1)和可溶性VCAM-1(sVCAM-1)浓度,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测FAK、ICAM-1和VCAM-1 mRNA的表达,Western blot法检测FAK和磷酸化FAK(p-FAK)蛋白的表达.结果 PMA和DMS能分别显著地诱导和抑制SphK1活性,PMA呈时间-剂量依赖性促进细胞的增殖,而DMS则呈时间-剂量依赖性抑制细胞的增殖.PMA和DMS处理24 h后,对照组、PMA组和DMS组迁移细胞数分别为(75.48±6.12)个、(143.36±8.73)个和(38.57 ±3.24)个,侵袭细胞数分别为(64.19±5.36)个、(118.46±6.25)个和(32.48±4.27)个,与对照组比较,PMA组迁移和侵袭细胞数明显增多,DMS组则显著减少(均P＜0.01).对照组、PMA组和DMS组的FAK mRNA相对表达水平分别为0.42±0.04、0.82±0.06和0.23±0.02,ICAM-1 mRNA的相对表达水平分别为0.49±0.06、0.74±0.05和0.26±0.03,VCAM-1 mRNA的相对表达水平分别为0.69±0.04、0.89±0.09和0.37±0.04,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01).对照组、PMA组和DMS组的FAK蛋白相对表达水平分别为0.34±0.04、0.52±0.06和0.20±0.03,p-FAK蛋白相对表达水平分别为0.37 ±0.05、0.51±0.06和0.09±0.02,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01).slCAM-1和sVCAM-1浓度随着SphK1活性的增强而升高,随着SphK1活性的抑制而降低,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 SphK1可能通过激活FAK通路上调ICAM-1和VCAM-1的表达,从而促进LoVo细胞的增殖、迁移和侵袭.
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细胞表面热休克蛋白90在人前列腺癌细胞中的表达及其对侵袭能力的影响
目的 观察细胞表面热休克蛋白90(HsPgo)在高侵袭性人前列腺癌细胞PC3中的表达,及其对细胞侵袭能力的影响,探讨其可能的作用机制.方法 采用免疫荧光染色和膜蛋白生物素标记法,检测HSPgO在PC3细胞表面的表达;采用Boyden小室侵袭实验观察细胞侵袭能力的改变;采用Western blot和免疫共沉淀法,检测局部黏着斑激酶(FAK)、c-Src蛋白磷酸化水平及其两者相互作用的变化;采用RNA干扰技术下调FAK蛋白表达,应用抑制剂PP2抑制Src激酶活性,观察细胞FAK/Src信号通路及其侵袭能力的改变.结果 PC3细胞表面表达HSP00.HSPg0特异性抗体可显著降低PC3细胞体外侵袭能力,且伴有FAK tyr 397、576、577、925及c-Src tyr 416磷酸化水平的显著下降,以及FAK与c-Src蛋白相互结合的明显减弱.经小分子干扰RNA(siRNA)有效干扰FAK表达,或采用PP2抑制Src激酶活性,均可显著抑制PC3细胞的侵袭性,但同时联合应用抗HSPg0抗体,未有协同作用.小室侵袭实验结果显示,PC3细胞经抗HSPg0抗体作用后,穿膜细胞数为(39.57 4±7.54)个,而对照组和lgG对照组分别为(105.70±12.16)个和(110.60 4±11.61)个,差异均有统计学意义(P<0.001).结论 细胞表面HSP90可经FAK/c-Src信号通路促进体外培养前列腺癌细胞的侵袭,提示其可能是潜在的对肿瘤转移实施防治的一个靶点.
关键词： 前列腺肿瘤 热休克蛋白90 细胞侵袭 FAK/c-Scr信号通路 -
转录因子性别决定区Y框18对子宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响
目的 探讨转录因子性别决定区Y框18(SOX18)对子宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其相关机制.方法 采用pCI-SOX18表达质粒转染HeLa细胞(实验组),设空白对照组和阴性对照组;Western blot法检测各组中SOX18和基质金属蛋白酶7(MMP-7)的表达情况.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SOX18对HeLa细胞增殖的影响;Transwell法观察SOX18对HeLa细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 在增殖实验中,各时间点实验组细胞数目与阴性对照组、空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);实验组SOX18相对表达量为1.16±0.13,空白对照组为0.23±0.05,阴性对照组为0.28±0.07,差异具有统计学意义(F=218.14,P<0.05);实验组MMP-7蛋白相对表达量为0.95±0.09,空白对照组为0.71±0.07,阴性对照组为0.68±0.06,三组差异有统计学意义(F=116.84,P<0.05).迁移实验中,实验组迁出细胞数量为(175.71±17.17)个,阴性对照组为(95.19±8.18)个,空白对照组为(93.34±9.72)个,实验组与对照组差异均有统计学意义(t=75.47,t=77.35,均P<0.05).侵袭实验中,实验组细胞迁出的数量为(247.12±36.82)个,阴性对照组为(98.63±14.62)个,空白对照组为(96.57±13.95)个,实验组与对照组差异均有统计学意义(t=98.02,t=99.34,均P<0.05).结论 过表达SOX18对HeLa细胞增殖无影响,可促进细胞迁移和侵袭,该作用可能是通过SOX18正性调节MMP-7实现的.
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尼日菌素对人上皮性卵巢癌细胞的抑制作用及其机制研究
目的 探讨尼日菌素对人上皮性卵巢癌(EOC)A2780和SKOV3细胞的抑制作用,以及尼日菌素抑制细胞迁移和侵袭可能的分子机制.方法 用不同浓度(0.312 5、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L)尼日菌素分别作用于A2780和SKOV3细胞,二甲基亚砜(DMSO)处理细胞作为对照组,通过CCK-8法检测不同浓度的尼日菌素对EOC细胞增殖的影响.将A2780和SKOV3细胞分别分为3组:尼日菌素5、10、20 μmol/L处理组,同时以DMSO处理作为对照组,通过Transwell实验分析尼日菌素对EOC细胞迁移及侵袭能力的影响.采用蛋白质印迹法检测经不同浓度尼日菌素处理后上皮细胞-间充质细胞转化(EMT)过程中上皮细胞标志物 E-cadherin、间叶细胞标志物Vimentin以及相关转录因子Slug、Snail 和Twist 的表达,并分析Wnt-β-catenin 信号通路相关蛋白Gsk-3β、p-Gsk-3β和β-catenin的表达变化情况.结果 CCK-8实验结果发现,尼日菌素对A2780细胞[半抑制浓度(IC50)(16.19± 0.26)μmol/L]和SKOV3细胞[IC50(11.87±0.21)μmol/L]具有细胞毒性作用(P＜0.05).Transwell迁移实验结果显示,随着尼日菌素作用浓度(5、10、20 μmol/L)的增加,穿膜的A2780和SKOV3细胞数较对照组减少[(121±9)、(92±7)、(59±5)个/高倍视野和(120.4±2.6)、(91.8±5.5)、(80.0± 4.0)个/高倍视野,均P＜0.05];Transwell侵袭实验显示,A2780和SKOV3细胞的侵袭能力同样随着尼日菌素作用浓度的增加而受到抑制,并呈浓度依赖性下降[(61.2±3.7)、(43.2±4.3)、(23.6± 2.1)个/高倍视野和(85.2±7.0)、(65.2±4.6)、(45.6±4.4)个/高倍视野,均P＜0.05].E-cadherin的表达随着尼日菌素作用浓度(5、10、20 μmol/L)的增加而升高,而Vimentin、Slug、Snail、Twist、p-Gsk3β、β-catenin的表达呈浓度依赖性减少(P＜0.05).结论 尼日菌素可能通过激活Wnt-β-catenin 信号通路诱导EOC细胞发生EMT,从而促进EOC细胞的迁移和侵袭.
关键词： 卵巢肿瘤 尼日菌素 上皮细胞-间充质细胞转换 细胞迁移 细胞侵袭 -
高温对人舌癌细胞株基质金属蛋白酶-组织抑制物表达的影响
高温治癌作为一种新的治疗手段,正受到各国学者的普遍重视,但对其抑制细胞侵袭、转移的确切机制尚不明了.我们通过检测高温处理与未处理的人舌癌细胞株Tca-8113 MMP-9、MMP-2和TIMP-2表达量变化,探讨其表达量高低与高温治癌的关系.
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白细胞介素1β增强口腔鳞状细胞癌细胞体外侵袭能力及其机制研究
目的 探讨白细胞介素1β(IL-1β)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞体外侵袭能力的影响及相关机制.方法 以OSCC系SCC-9为研究对象,用IL-1β与其体外共培养.CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测 HIF-1α、VEGF、CXCR1的mRNA的表达情况.结果 IL-1β刺激对SCC-9细胞的增殖能力无影响;IL-Iβ与SCC-9细胞共培养8 h可显著增强其细胞侵袭能力(P<0.05);IL-1β可以显著地提高CXCR1和HIF-1α的转录水平(P<0.05);SCC-9细胞经600 ng/ml的IL-1β刺激后,VEGF的mRNA表达出现上调(P<0.05).结论 IL-1β可以增强SCC-9细胞的体外侵袭能力,并可能与HIF-1α、VEGF、CXCR1等基因的上调有关.
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关键词：
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STAT3抑制剂Stattic对肝癌细胞Bel-7402生长、迁移、侵袭和放射敏感性的影响
目的 观察信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)抑制剂Stattic(Y705)对人肝癌细胞系Bel-7402的生长、迁移、侵袭和放射敏感性的影响.方法 将人肝癌细胞系Bel-7402分为4组,空白对照组、Stattic组、单纯照射组和Stattic联合照射组(联合组).CCK8检测细胞的生长和增殖;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别检测各组细胞的迁移能力和侵袭能力;克隆形成实验观察Stattic对Bel-7402细胞放射敏感性的影响;Western blot检测各组STAT3、p-STAT3、Bax,Bcl-2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平.结果 Stattic明显抑制人肝癌Bel-7402细胞的生长,并表现出剂量-效应关系,Stattic作用于细胞48 h后的IC50为2.5 μmol/L.1.0 μmol/L的Stattic与8 Gy射线照射联用,两者在细胞增殖抑制率上,表现出协同作用,抑制率下降了(15.00±1.87)％(F=63.30,P＜0.05).划痕愈合实验显示联合组细胞的迁移能力明显降低,Transwell侵袭实验显示联合组滤膜细胞数明显减少.克隆形成实验显示,联合组与单纯照射组相比,克隆形成能力下降,SF2、D0、Dq均下降,(=4.20、6.92、9.32,P＜0.05).Stattic在0.5 μmol/L时放射增敏比(SERSF2)为1.22.Western blot结果显示与单纯照射组相比,联合组的p-STAT3、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(=5.32、6.02、13.26,P＜0.05).Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(t=-7.82、-14.09,P＜0.05).Bcl-2蛋白的表达下降(t=18.43,P ＜0.05).结论 Stattic通过抑制肝癌细胞Bel-7402的p-STAT3激活,一方面诱导凋亡增加肿瘤细胞的放射敏感性;另一方面降低了金属基质蛋白酶的上升,从而降低了肿瘤细胞迁移和侵袭能力.
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亚硝酸盐和铵盐联合暴露通过ROS/ODC途径促进肝癌细胞侵袭
近发现肿瘤微环境内含有较高水平的亚硝酸盐和氨,但是它们对癌细胞的影响还不清楚.本研究旨在探讨亚硝酸盐和铵盐联合暴露对人肝癌细胞侵袭能力的影响及活性氧(ROS)/鸟氨酸脱羧酶(ODC)途径在其中的作用.经亚硝酸钠、氯化铵、亚硝酸钠和氯化铵混合物处理的SMMC-7721细胞,采用MTT实验检测细胞活力,transwell小室检测细胞侵袭能力,ROS检测试剂盒检测细胞内ROS水平,免疫荧光检测细胞内ODC,Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和ODC的蛋白表达.结果表明,亚硝酸钠和氯化铵混合物能够增强SMMC-7721细胞侵袭能力,促进细胞内ROS水平增加,促进ODC蛋白表达,ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)可以逆转上述现象;ODC特异性抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)可以增加细胞内ROS水平,降低细胞侵袭能力.综上所述,亚硝酸钠和氯化铵混合物通过增强ROS/ODC途径,促进人肝癌SMMC-7721细胞侵袭.
关键词： 亚硝酸盐 铵盐 人肝癌SMMC-7721细胞 活性氧 细胞侵袭 -
EGFL7单克隆抗体体外抑制小鼠ACTH垂体腺瘤AtT-20细胞增殖和侵袭的作用研究
目的 观察EGFL7单克隆抗体对小鼠ACTH垂体腺瘤AtT-20细胞增殖和侵袭的影响.方法 MTS试验检测不同浓度EGFL7单克隆抗体处理AtT-20细胞24、48、72 h后细胞增殖活力.ELISA检测不同浓度的EGFL7单克隆抗体处理AtT-20细胞72 h后细胞上清中ACTH的分泌水平.Real-time PCR检测AtT-20细胞经EGFL7单克隆抗体处理24 h后细胞中侵袭相关基因E-cadherin、snail、vimentin的mRNA表达水平.结果 EGFL7单克隆抗体能够有效抑制AtT-20细胞增殖,并呈现良好的时间依赖性与浓度依赖性;同时能够显著降低AtT-20细胞分泌ACTH,呈现良好的剂量依赖作用.Real-time-PCR结果表明EGFL7单克隆抗体能够显著抑制AtT-20细胞中侵袭相关基因E-cadherin、snail、vimentin的mRNA表达.结论 EGFL7单克隆抗体可以显著抑制AtT-20细胞的增殖和侵袭.
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姜黄素对人脑胶质瘤U251细胞侵袭与迁移的抑制作用
目的 探讨姜黄素对人脑胶质瘤U251细胞侵袭与迁移的抑制作用.方法 采用四甲基偶氮唑蓝法筛选姜黄素实验浓度;采用细胞划痕实验观察姜黄素作用0、6、12和24h后胶质瘤U251细胞的迁移情况,并且测量24 h后迁移的距离;采用Transwell实验观察穿膜细胞数,以判断细胞的侵袭能力;采用Western blotting实验检测胶质瘤U251细胞中侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP2)和基质金属蛋白酶9的表达.结果 四甲基偶氮唑蓝法筛选的姜黄素浓度为10和20 μmol·L-1;与空白对照组相比,在姜黄素作用24 h后,胶质瘤U251细胞迁移的距离和穿膜细胞数皆明显减少,且与药物浓度呈正相关(P＜0.01);与空白对照组相比,姜黄素组胶质瘤U251细胞内基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白的表达明显下降(P＜0.01),在姜黄素10和20μmol·L-1组基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白的表达差异明显(P＜0.05).结论 姜黄素能够抑制人脑胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭,可能是通过下调细胞内基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白的表达引起的.
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甘草次酸下调Bloom综合征解旋酶的表达及PC3细胞的增殖凋亡和侵袭迁移
目的 在甘草次酸处理前列腺癌细胞(PC3细胞)的基础上,检测细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡及Bloom综合征(BLM)解旋酶和细胞凋亡因子Caspase-3的表达.方法 通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell小室、划痕法检和Hoechst/PI双染分别检测细胞的增殖能力、侵袭能力、迁移能力和凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western-blot分别检测检测BLM和CaSpase-3基因的转录和蛋白表达.结果 MTT法表明,甘草次酸浓度在0.12 mol·L-1以下时,对细胞的增殖能力没有影响,大于0.12 mol·L-1时,随着药物浓度的增大,细胞的增殖能力逐渐下降;侵袭和划痕表明,甘草次酸浓度在0.16 mol·L-1以上时,细胞的侵袭和迁移能力均显著减小;Hoechst/PI双染显示,甘草次酸浓度在0.12 mol·L-1以上时,细胞发生明显的凋亡;荧光定量PCR表明,甘草次酸浓度在0.12 mol·L-1以上时,随着浓度的增大,PC3细胞中的BLM基因的mRNA的表达量逐渐下降,而Caspase-3基因的表达量逐渐上升;Western blot表明,甘草次酸浓度在0.12 mol·L-1时,BLM解旋酶的表达量明显降低,而Caspase-3蛋白的表达量明显升高.结论 甘草次酸抑制PC3细胞的增殖、侵袭和迁移与BLM解旋酶的低表达有关,而甘草次酸促进PC3细胞发生凋亡与细胞凋亡因子Caspase-3高表达有关.
关键词： 甘草次酸 Bloom综合征解旋酶 细胞增殖 细胞侵袭 细胞凋亡 -
SOX10对前列腺癌细胞增殖及侵袭的影响
目的:探讨SOX10对前列腺癌细胞增殖及侵袭能力的影响.方法:利用Western blotting方法检测SOX10蛋白在前列腺癌细胞系PC3、DU145及LNcap中的表达水平.利用si-RNA干扰的方法下调前列腺癌细胞系PC3及DU145中SOX10的表达,通过细胞增殖及侵袭实验评估SOX10对前列腺癌细胞增殖能力和侵袭能力的影响.结果:下调SOX10后,前列腺癌细胞的增殖能力明显降低,表现为实验组中前列腺癌细胞PC3及DU145的光密度值明显低于对照组(细胞系PC3:0 d:0.166±0.01,0.162±0.012 vs.0.155±0.01,P＞0.05;1 d:0.210±0.011,0.211±0.018vs.0.252±0.023,P＞0.05;2 d:0.293±0.017,0.280±0.028vs.0.433±0.030,P＜0.01;3 d:0.363±0.071,0.411±0.038vs.0.754±0.045,P＜0.01;4d:0.592±0.065,0.670±0.093vs.1.456±0.111,P＜0.01.细胞系DU145:0 d:0.168±0.018,0.164±0.01 vs.0.153±0.012,P＞0.05;1 d:0.218±0.007,0.206±0.024vs.0.255±0.02,P＞0.05;2 d:0.297±0.013,0.291±0.012 vs.0.444±0.023,P＜0.05;3 d:0.378±0.058,0.419±0.026vs.0.762±0.039,P＜0.01;4 d:0.681±0.094,0.618±0.050 vs.1.419±0.170,P＜0.01);同时,下调SOX10后前列腺癌细胞的侵袭能力也明显受到抑制,与对照组相比,实验组迁出的细胞数明显减少(细胞系PC3:142±38,171±17vs.304±55;细胞系DU145:96±22,134±23vs.341±34),差异均具有统计学意义(P均＜0.05).结论:SOX10可能通过促进前列腺癌细胞的增殖和侵袭能力促进前列腺癌的发生及进展,并且可能成为前列腺癌潜在的治疗靶点.
关键词： 性别决定区Y框蛋白10 前列腺癌 细胞增殖 细胞侵袭 -
siRNA干扰FOXF2对人宫颈癌SiHa细胞体外转移的影响
目的 研究siRNA干扰叉头框转录因子F2(FOXF2)对人宫颈癌SiHa细胞体外转移能力的影响及其作用机制.方法 采用RT-PCR、Western blot分别检测siRNA-FOXF2转染前后,SiHa细胞中FOXF2 mRNA、蛋白的表达变化;同时用划痕试验和Transwell侵袭试验分别检测siRNA-FOXF2转染前后细胞的迁移和侵袭能力,CCK8检测siRNA-FOXF2转染前后细胞的增殖能力.结果 SiHa细胞内FOXF2敲除后,RT-PCR、WB检测显示siRNA-FOXF2转染组FOXF2的蛋白、mRNA均明显下降;划痕试验和Transwell侵袭试验显示细胞侵袭、迁移能力增强;CCK8检测显示siRNA-FOXF2转染组促进细胞增殖能力(P＜0.01).结论 siRNA干扰FOXF2促进SiHa细胞的体外转移能力及细胞增殖能力,进而促进宫颈癌的发生发展.
