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消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞端粒酶及凋亡相关基因mRNA表达的影响
目的:探讨消癌解毒方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721细胞端粒酶及凋亡相关基因mRNA表达的影响.方法:消癌解毒方含药血清作用于人肝癌SMMC-7721细胞,ELISA试剂盒检测各组端粒酶浓度,采用实时荧光定量PCR方法检测药物作用前后各组SMMC-7721细胞Bax、Bcl-2、CytC、Caspase-3 mRNA表达水平.结果:消癌解毒方含药血清作用于人肝癌SMMC-7721细胞可以降低其端粒酶浓度,且呈剂量依赖性;可使Bcl-2 mRNA表达水平下调,使Bax、CytC、Caspase-3 mRNA表达水平上调,下调Bcl-2/Bax mRNA比例,且中、高剂量组与对照组比较效果明显(P＜0.01,P＜0.05).结论:消癌解毒方含药血清可能通过抑制端粒酶活性,调控凋亡相关基因mRNA的表达,抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,促使其凋亡,在肝癌治疗中发挥疗效.
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PTEN依赖其磷酸酶活性诱导肝癌细胞发生失巢凋亡机制的探讨
目的研究抑癌基因PTEN对人肝癌SMMC-7721细胞失巢凋亡的影响并探讨其可能的机制.方法 A将携有野生型PTEN基因及无磷酸活性的突变型C124A-PTEN基因的真核表达载体转染SMMC-7721细胞,利用Western印迹杂交法,检测PTEN蛋白表达与蛋白激酶B(PKB/Akt)、焦点黏附激酶(FAK)磷酸化水平的变化,并应用流式细胞仪技术和激光共聚焦显微镜技术,分析各种细胞在黏附与失黏附状态下的凋亡.结果与对照细胞相比,转染野生型PTEN的SMMC-7721细胞中,FAK和Akt的磷酸化水平分别降低了65.2%和89.1%,且失巢凋亡率由9.5%增至31.3%;而转染C124A-PTEN的SMMC-7721细胞中,FAK和Akt的磷酸化水平及失巢凋亡率均无明显变化.结论抑癌基因PTEN可依赖其磷酸酶活性抑制FAK和Akt的磷酸化,并诱导肝癌细胞发生失巢调亡.
关键词： 抑癌基因PTEN 人肝癌SMMC-7721细胞 失巢凋亡 -
12C6+离子诱导TNFα基因在SMMC-7721细胞中的表达
目的用Polyfect转染试剂将重组质粒pEgr-TNFα转染人肝癌细胞SMMC-7721,研究该重组质粒经12C6+离子作用后在细胞中的表达.方法用ELISA方法检测TNFα的蛋白表达,用RTPCR方法检测TNFα转录水平的变化.结果转染pEgr-TNFα后在SMMC-7721细胞中TNFα的蛋白表达量为2.06 ng/ml,2 Gy 12C6+离子照射后,表达量增高为2.11 ng/ml,明显高于未转染组和转染空载体组;RNA转录水平也明显增高,2 Gy 12 C6+离子照射后增高更明显.结论12 C6+离子联合重组质粒pEgr-TNFα,在被转染的SMMC-7721细胞中表达量明显增高.
关键词： 12 C6+离子 人肝癌SMMC-7721细胞 TNFα表达 -
亚硝酸盐和铵盐联合暴露通过ROS/ODC途径促进肝癌细胞侵袭
近发现肿瘤微环境内含有较高水平的亚硝酸盐和氨,但是它们对癌细胞的影响还不清楚.本研究旨在探讨亚硝酸盐和铵盐联合暴露对人肝癌细胞侵袭能力的影响及活性氧(ROS)/鸟氨酸脱羧酶(ODC)途径在其中的作用.经亚硝酸钠、氯化铵、亚硝酸钠和氯化铵混合物处理的SMMC-7721细胞,采用MTT实验检测细胞活力,transwell小室检测细胞侵袭能力,ROS检测试剂盒检测细胞内ROS水平,免疫荧光检测细胞内ODC,Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和ODC的蛋白表达.结果表明,亚硝酸钠和氯化铵混合物能够增强SMMC-7721细胞侵袭能力,促进细胞内ROS水平增加,促进ODC蛋白表达,ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)可以逆转上述现象;ODC特异性抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)可以增加细胞内ROS水平,降低细胞侵袭能力.综上所述,亚硝酸钠和氯化铵混合物通过增强ROS/ODC途径,促进人肝癌SMMC-7721细胞侵袭.
关键词： 亚硝酸盐 铵盐 人肝癌SMMC-7721细胞 活性氧 细胞侵袭 -
人参皂苷结构修饰物对人肝癌SMMC-7721细胞体外抗肿瘤活性研究
目的:考察人参皂苷结构修饰物HRG对人肝癌SMMC-7721细胞的体外抗肿瘤作用及机制.方法:采用MTT、划痕实验、细胞集落实验和Transwell小室穿膜试验观察HRG对SMMC-7721细胞增殖、迁移及侵袭的影响;应用流式细胞术检测HRG对SMMC-7721细胞周期的影响;Western blot检测HRG对人肝癌SMMC-7721细胞迁移相关蛋白表达的情况.结果:SMMC-7721细胞经25,50,100 μg· mL-1 HRG处理后,各组细胞形态均发生不同程度的改变;HRG能够抑制肿瘤细胞的增殖,抑制肿瘤细胞的集落形成率,对肿瘤细胞S时相有明显阻滞作用,使进入分裂期的细胞减少,可明显降低肿瘤细胞的迁移能力和侵袭作用,抑制肿瘤细胞迁移相关蛋白整合素(αvβ3)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达.结论:HRG在体外对人肝癌SMMC-7721细胞具有良好的抗肿瘤活性.
关键词： 人参皂苷结构修饰物 人肝癌SMMC-7721细胞 抗肿瘤 -
鲨鱼软骨制剂对人肝癌SMMC-7721细胞中Bcl-2和Caspase-3表达的影响
[目的]检测鲨鱼软骨制剂(shark cartilage preparation,SCP)对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制效果及对凋亡调控蛋白Bcl-2和Caspase-3的影响.[方法]以不同浓度SCP加入体外培养的对人肝癌SMMC-7721细胞中,MTT法检测SCP对细胞生长抑制作用;Hoechst33342/PI双荧光染色法考察SCP对细胞凋亡的影响;采用流式细胞术比较不同处理后的对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡水平;免疫细胞化学染色法检测不同组别细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平;Westernblotting检测Bcl-2蛋白和切割型Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)蛋白的表达.[结果]SCP明显抑制对人肝癌SMMC-7721细胞生长,且抑制作用呈浓度-作用时间依赖性(P＜0.05),其24、48和72 h的IC50值分别为1.27、1.86和0.84 mg.1 mg/ml SCP处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,随着处理时间延长,细胞凋亡比例明显增大并表现出时间依赖性(P＜0.05);免疫细胞化学、Western blotting检测显示SCP诱导细胞凋亡过程中Bcl-2蛋白表达减弱,Caspase-3蛋白表达明显增强.[结论]SCP可以抑制对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其诱导凋亡可能与下调Bcl-2蛋白表达并上调Caspase-3蛋白的表达有关.
关键词： 鲨鱼软骨制剂 人肝癌SMMC-7721细胞 细胞凋亡 -
透骨草提取物对人肝癌 SMMC-7721细胞增殖的影响
目的：观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响，进一步探讨透骨草提取物对SMMC-7721细胞增殖抑制的分子机制。方法 MTT法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞增殖的影响，免疫组化方法检测SMMC-7721细胞β-catenin和cyclin D1蛋白的表达。结果6．25～100μg/ml透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞增殖抑制率与对照组相比显著增加（ P ＜0．05），而且随透骨草浓度的增加，抑制率逐渐增加。透骨草提取物对 SMMC-7721细胞的半数抑制浓度（ IC50）为40．91μg/ml。40．91μg/ml透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞β-catenin和cyclin D1的表达明显低于对照组（ P ＜0．05）。结论透骨草提取物对SMMC-7721细胞的增殖有抑制作用，其机制可能与下调β-catenin和cyclin D1的蛋白表达有关。
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马红丸含药血清对人肝癌smmc-7721细胞bcl-2和baxmRNA表达的影响
目的 探讨马红丸(马钱子、红娘子、全蝎等)含药血清对人肝癌smmc-7721细胞bcl-2和bax mRNA表达的影响.方法 采用血清药理学方法制备马红丸(MHP)和阿霉素(ADM)含药血清以及对照血清,作用于smmc-7721细胞.MTT 法检测含药血清对srmmc-7721细胞增殖的影响；测定含药血清对smmc-7721细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放量；流式细胞术检测细胞凋亡率；RT-PCR检测含药血清对smmc-7721细胞bcl-2mRNA和bax mRNA表达的影响.结果 30％体积的马红丸和阿霉素含药血清作用于srmmc-7721细胞72 h,明显抑制细胞的增殖(P＜0.01),培养液中LDH的释放量和细胞凋亡率明显高于空白血清组(P＜0.01),bcl-2 mRNA表达下降,bax mRNA表达升高(P＜0.01).结论 30％马红丸含药血清作用于人肝癌smmc-7721细胞72 h,可明显抑制细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞中bcl-2mRNA表达,促进bax mRNA表达有关.
关键词： 马红丸 血清药理学 人肝癌SMMC-7721细胞 凋亡 -
蛇莓中齐墩果酸对肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用
目的:探讨蛇莓中齐墩果酸(OA)对人肝癌SMMC-7721细胞增值的抑制作用.方法:建立人肝癌SMMC-7721细胞体外培养模型.MTT法检测不同浓度OA对人肝癌SMMC-7721细胞的影响.结果:与对照组比较,药物组在24h对肝癌细胞具有明显的抑制作用(P<0.05),并在48h内随着浓度的增加,抑制率增加.结论:OA对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用具有时间和浓度的依赖性,OA有良好的体外抗肿瘤作用.
关键词： 齐墩果酸 蛇莓 人肝癌SMMC-7721细胞 抗癌活性 -
甘草黄酮诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对相关蛋白survivin表达的影响
目的:探讨甘草黄酮(GF9)对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用及其机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测GF9对人肝癌细胞SMMC-7721细胞生长的影响,Hoechst染色法和电镜观察GF9诱导细胞凋亡的形态变化,流式细胞仪检测GF9诱导的细胞凋亡率,并通过免疫印迹法检测凋亡相关蛋白survivin和pro-caspase-3表达水平的变化.结果:GF9可抑制SMMC-7721细胞增殖,并呈时间剂量效应;400 μmol/L GF9可诱导细胞凋亡,呈时间依赖性;随着GF9作用时间的延长,survivin和pro-caspase-3表达下调.结论:GF9能诱导SMMC-7721细胞凋亡,这可能与GF9能够引起抑制凋亡蛋白survivin的下调有关.
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表阿霉素对人肝癌SMMC-7721细胞bcl-2蛋白表达的影响
目的探讨表阿霉素诱导SMMC-7721细胞凋亡的可能分子机制.方法采用流式细胞仪间接免疫荧光法检测表阿霉素作用于人肝癌SMMC-7721细胞后bcl-2蛋白的表达.结果随着表阿霉素的浓度增加,作用于SMMC-7721细胞时间的延长,细胞bcl-2蛋白的表达逐渐降低,SMMC7721细胞bcl-2蛋白的表达与表阿霉素作用浓度EY时间呈负相关.结论Bcl-2基因表达下调可能是表阿霉素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的重要机制之一.
关键词： 表阿霉素 BCL-2蛋白 细胞凋亡 人肝癌SMMC-7721细胞 -
表阿霉素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究
进一步探讨表阿霉素治疗原发性肝癌的作用机理.方法应用DNA电泳、电镜、流式细胞仪分析技术,观察表阿霉素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡模式.结果 0.1μg/ml表阿霉素作用细胞12、24、36、48小时及0.1、1.0、10.0、100μg/ml表阿霉素作用细胞24小时均可出现细胞凋亡现象,其诱导凋亡效率与剂量、时间呈正相关.结论表阿霉素可诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用.
关键词： 表阿霉素 细胞凋亡 人肝癌SMMC-7721细胞 -
苦参素含药血清对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖活性的影响
目的：探讨苦参素含药血清对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖活性的影响，为苦参素应用于肝癌的治疗提供科学依据。方法昆明种小鼠灌胃给药，采血并制备含药血清。以SMMC-7721细胞株为研究对象，以小鼠含药血清为药物，应用MTT显色法分析苦参素含药血清对瘤细胞的抑制作用，观察不同给药剂量及不同培养时间对抑制作用的影响。结果苦参素含药血清对SMMC-7721细胞具有不同程度的抑制作用。与细胞对照组和生理盐水组（阴性血清对照组）比较，差异显著（P<0.05或P<0.01）；高剂量40%浓度的苦参素含药血清组与5-氟尿嘧啶（5-Fu）含药血清组（阳性血清对照组）比较，其抑制作用无明显差异（P>0.05)。含药血清对瘤细胞的抑制作用呈一定的量效关系。含药血清与瘤细胞共同培养24h和48h的抑制作用强于72h。结论苦参素含药血清具有良好的体外抗肝癌的药效作用。
关键词： 苦参素 人肝癌SMMC-7721细胞 血清药理学 MTT法 增殖活性 -
黄芪水提物对人肝癌细胞和瘤鼠免疫细胞的影响
目的:研究中药黄芪水提物对体外培养的人肝癌细胞的抑癌活性.方法:黄芪经粉碎、浸提、超速离心、减压浓缩、冷冻干燥后得黄芪水提物.人肝癌SMMC-7721细胞经黄芪水提物处理不同时间后以MTT法测其线粒体代谢活性,以细胞记数法观察其对细胞增殖的影响,同时测定小鼠移植性S180实体瘤、小鼠免疫细胞、吞噬细胞活性.结果:①经700 μg/ml黄芪水提物处理24 h的人肝癌SMMC-7721细胞,其线粒体代谢活性为对照组的72.7%,48 h为0.9%,72 h为41.9%;②经700μg/ml黄芪水提物处理24 h的人肝癌细胞恢复培养24 h后,其线粒体代谢活性为对照组的76%,48 h后为91%,72 h后为83.6%;③经700μg/ml黄芪水提物处理24 h后的人肝癌细胞,恢复培养,其细胞数目与对照组相比24 h后为68.8%,48 h后为42%,72 h后为39.3%,96 h后为36.1%,120 h后为46.3%;④经700μg/ml黄芪水提物连续处理7 d,线粒体活性与对照组相比24 h后无明显降低,48 h后为45%,7 d后降为起始浓度的10.2%,与对照组相差62.9倍;⑤黄芪水提物对荷瘤小鼠的抑瘤率为47.70%;⑥注射黄芪水提物的小鼠T/B为0.628,对照小鼠为0.498;⑦注射黄芪水提物的小鼠吞噬指数为4.129,对照组为0.592(P＜0.01).结论:中药黄芪水提物含抑癌活性物质,能抑制体外培养的肝癌细胞增殖和降低线粒体代谢活性、提高小鼠抗瘤能力、促进小鼠免疫功能、增强小鼠腹腔吞噬细胞活性.
关键词： 黄芪水提物 人肝癌SMMC-7721细胞 S180实体瘤 腹腔吞噬细胞 -
陕重楼甾体皂苷类单体B(BM-61)对SMMC-7721细胞增殖的影响
目的:观察陕重楼甾体皂苷单体B(BM-61)对人肝癌SMMC-7721细胞的影响.方法:将不同浓度BM-61与人体肝癌SMMC-7721细胞分别在24 h、48 h、72 h处理后,采用MTI法,测定吸光度OD值,并计算细胞增殖抑制率,检测陕重楼单体B对肿瘤细胞增殖的影响.结果:本品1.6 mg·L-1、8 mg· L-1、40 mg-L-1、200 mg·L-1、1 000 mg· L-1剂量组在24 h、48 h、72 h与对照组比较吸光度A值有显著性降低(P＜0.01或P＜0.05),本品0.3 mg·L-1剂量在24 h、48 h吸光度A值也有显著性降低(P＜0.05),其中8 mg·L-1在24 h、48 h、72 h吸光度小,抑制率分别为19％、23％、17％.结论:陕重楼BM-61对人肝癌SMMC-7721细胞具有一定的抑制作用,且强抑制浓度为8 mg·L-1.
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消癌解毒方对人肝癌SMMC-7721细胞相关趋化因子蛋白表达的影响
目的 观察消癌解毒方对人肝癌SMMC-7721细胞相关趋化因子蛋白表达的影响,探讨消癌解毒方抗肿瘤的作用机制.方法 消癌解毒方作用于人肝癌SMMC-7721细胞8h后采用蛋白芯片技术检测药物作用前后各组相关趋化因子蛋白表达水平,采用Western blot法检测用药后各组单核细胞趋化蛋白3(MCP-3)蛋白的表达.结果 与模型组比较,共有9个趋化因子蛋白下调,其中,消癌解毒方4 mg· mL-1组有3个蛋白表达下调,分别是MCP-3、Eotaxin 1、ENA 78;消癌解毒方2 mg· mL-1组有3个蛋白表达下调,分别是MCP-3、CCL28、BLC;顺铂组共有6个蛋白表达下调,分别是CXCL16、ENA 78、Eotaxin 1、XCL1、MIP-3 beta、MPIF 1.Western blot结果显示,与模型组比较,消癌解毒方4 mg· mL-1组、2 mg· mL-1组MCP-3蛋白均出现下调,顺铂组无明显差异.结论 消癌解毒方可能是通过影响趋化因子信号通路中的某些蛋白来发挥抗肿瘤的作用.
关键词： 消癌解毒方 人肝癌SMMC-7721细胞 蛋白芯片 趋化因子 -
葛根提取物对肝癌细胞增殖及细胞周期的作用
目的:探讨中药葛根提取物的抗癌活性并试图建立一种筛选药物的方法.方法:用MTT快速测定法及流式细胞仪分析法分析葛根提取物(PR)对靶细胞人肝癌SMMC-7721细胞的抗癌药效及细胞分裂周期各时象DNA变化.结果:葛根提取物有比较强的抗癌活性,与阴性对照组相比差异非常显著(P<0.01),与丝裂霉素MMC联合用药抗癌活性显著增强,与单独用药组比差异非常显著(P<0.01).流式细胞仪分析细胞分裂周期各时象DNA变化显示药物作用后S期细胞明显减少,增殖指数(PI)降低,并可诱导凋亡峰(AP峰).结论:提示葛根提取物具有一定抗癌活性,并为建立筛选抗癌中药的方法提供一条新途径.
关键词： 葛根提取物 人肝癌SMMC-7721细胞 MTT流式细胞仪 -
白毛藤提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用
目的 观察白毛藤水提液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及c-myc基因mRNA表达水平的影响,探讨中药白毛藤的抗癌作用机制.方法 用不同浓度白毛藤水提取物处理肝癌SMMC-7721细胞,观察细胞形态变化,用台盼兰染色并作细胞计数,cck-8试剂盒检测不同药物浓度组的细胞增殖抑制情况.RT-PCR检测c-myc基因mRNA表达水平.结果 倒置显微镜下可见给药组细胞数目明显减少,且随药物浓度增加其抑制效果增强.WST-8法显示,在药物浓度为2,4,8,16 mg/ml时,细胞增殖明显受到剂量依赖性抑制,其抑制率分别为24.37%,50.07,66.14%,83.23%.细胞中c-myc基因mRNA表达水平降低,并与药物浓度呈明显的量效关系.结论 白毛藤可显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,下调c-myc基因mRNA表达,这可能是白毛藤的抗癌作用的部分机制.
关键词： 白毛藤 人肝癌SMMC-7721细胞 c-myc基因 mRNA 细胞增殖 -
高良姜素对人肝癌SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路的影响
目的:观察高良姜素对人肝癌SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通的影响.方法:采用MTT法检测高良姜素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Westem印迹法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白及Caspase-9蛋白表达情况.结果:高良姜素抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖作用明显,且呈浓度和时间依赖性,顺铂和高良姜素(5.4、10.8、21.6、43.2、86.4μg/ml),72 h抑制率分别为69.4％、34.3％、44.9％、60.8％、73.9％、79.1％.流式细胞术检测结果显示高良姜素(10.8、21.6、43.2μg/ml)可使细胞周期阻滞于G1期.高良姜素(10.8、21.6、43.2 μg/ml)处理24h凋亡率分别为9.8％、15.3％、18.6％.Western印迹法检测相关蛋白,药物处理组PI3K、AKT、P-AKT的表达受抑制,PTEN,Caspase-9蛋白的表达率随着药物浓度的增加而增加.结论:高良姜素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导人肝癌SMMC-772细胞凋亡.
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左氧氟喹诺酮查尔酮类衍生物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡和自噬的影响
目的 研究左氧氟喹诺酮查尔酮类衍生物6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-3-[2-(4-甲氧苯甲酰基)-乙烯-1-基]-喹啉-4-(1H)-酮(HGQ5)对人肝癌细胞凋亡和自噬的诱导作用.方法 采用MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖,TUNEL法测定细胞的凋亡率,采用自噬抑制剂氯喹处理细胞来验证HGQ5对细胞增殖和凋亡的影响;用Western blot法检测细胞自噬标志性蛋白LC3B的表达.结果 HGQ5对SMMC-7721细胞的增殖具显著抑制作用,24、48 h的IC50分别为5.0、4.8 μmol· L-;各给药组细胞经HGQ5作用24 h后,细胞凋亡率显著高于对照组的;HGQ5导致细胞中LC3B-Ⅱ的表达量增加,6～24 h达到高,之后明显下降;氯喹可增强低剂量HGQ5(0.3～ 2.5 μmol·L-)对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,但降低高剂量HGQ5(5～ 10 μmol·L-1)对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用.结论 HGQ5能够显著诱导SMMC-7721细胞的凋亡和自噬,低剂量HGQ5作用于SMMC-7721细胞时,自噬对细胞具有保护作用;高浓度HGQ5作用时,自噬作用则降低了细胞增殖率,促进了细胞凋亡.
