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选择性组蛋白脱乙酰酶抑制剂MS-275对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠的神经保护作用及机制研究
目的 探讨选择性组蛋白脱乙酰酶抑制剂MS-275对癫痫所致脑损伤的保护作用及可能机制.方法 将75只Sprague-Dawley大鼠随机分为5组:对照组、匹鲁卡品组、治疗I组(致痫后7d连续腹腔注射MS-275,20 mg/kg,1次/d)、治疗Ⅱ组(致痫后7d连续腹腔注射MS-275,40 mg/kg,1次/d)、MS-275预处理组.通过氯化锂-匹鲁卡品诱导大鼠癫痫发作.观察各组大鼠行为学差异;致痫后72 h Nissl染色观察各组大鼠海马区的病理学改变并计数海马CA1及CA3区的神经元存活数,免疫组织化学法测定大鼠海马CA1及CA3区组蛋白乙酰化水平;致痫后11d,Morris水迷宫测定大鼠的认知功能.结果 与匹鲁卡品组相比,MS-275预处理组大鼠出现癫痫持续状态的潜伏期可延长且致痫大鼠死亡率降低(P＜0.05).与匹鲁卡品组相比,治疗Ⅰ组及治疗Ⅱ组大鼠海马CA1、CA3区神经元变性的程度降低,治疗Ⅰ组及治疗Ⅱ组大鼠海马CA1及CA3区的组蛋白乙酰化水平比匹鲁卡品组高(P＜0.05).与对照组、MS-275预处理组、治疗Ⅰ、Ⅱ组比较,匹鲁卡品组的逃避潜伏期均出现明显延长(P＜0.05).结论 MS-275对氯化锂-匹鲁卡品致痫后大鼠海马的神经元损伤、组蛋白脱乙酰化程度以及大鼠的认知功能下降有改善作用,对大鼠癫痫所致脑损伤有一定的保护作用,其作用机制可能与其抗炎作用相关.
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MS-275对急性肝衰竭小鼠肝脏的保护作用
目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对急性肝衰竭（ ALF）小鼠肝脏的保护作用及对NF-κB信号通路的影响。方法选取SPF级C57 BL／6雄性小鼠30只，并随机分为健康对照组、ALF模型组和MS-275治疗组，每组10只。 ALF模型组和MS-275治疗组小鼠采用D-氨基半乳糖以及脂多糖（ LPS）联合诱导小鼠ALF模型，其中MS-275治疗组小鼠在制备ALF模型前2 h腹腔注射MS-275。24 h后观察检测各组小组血清丙氨酸转氨酶（ ALT）、天冬氨酸转氨酶（ AST）、总胆红素（TBil）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、干扰素（IFN）γ、白介素（IL）-1β、高迁移率族蛋白1（HMGB1）水平，取肝组织做HE染色观察肝组织结构并检测肝组织HDAC1、HDAC3、P65蛋白表达及乙酰化组蛋白、乙酰化、磷酸化P65蛋白的表达。采用t检验比较组间上述指标的差异。结果 HE染色结果显示，与ALF模型组相比，MS-275治疗组小鼠肝细胞损害程度明显降低，炎症细胞浸润减少。与ALF模型组相比，MS-275治疗组小鼠血清中 ALT、AST 和 TBil 水平明显降低（ t ＝－22．215、－11．914和－12．160，P值均＜0．05），但仍高于健康对照组（t ＝14．852、11．692和8．333，P值均＜0．05）；MS-275治疗组小鼠血清TNF-α、IFNγ、IL-1β、HMGB1表达水平也明显降低（ t＝－7．926、－3．427、－2．475和－5．920，P值均＜0．05），但仍高于健康对照组，其中TNF-α和IFNγ水平与健康对照组比较，差异有统计学意义（t＝5．541和5．514，P值均＜0．05）；MS-275治疗组小鼠肝组织中HDAC1和HDAC3蛋白表达明显下降（t＝－3．676和－10．576，P值均＜0．05），肝组织中乙酰化H3、H4和P65蛋白表达明显增加（t＝3．976、5．559和4．588，P值均＜0．05）。免疫组化结果提示，MS-275治疗组小鼠肝组织中P65表达总数及入核率均低于ALF模型组。结论 MS-275对ALF小鼠肝脏有保护作用，可能与非组蛋白的乙酰化调控有关。
关键词： 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 肝功能衰竭 急性 MS-275 p65 -
MS-275抑制肠癌细胞增殖与侵袭及其机制的研究
目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs) MS275对肠癌增殖及侵袭的影响.方法:采用MTT法检测MS-275对肠癌细胞Caco-2增殖的抑制作用,用Transwell实验检测MS-275对肠癌细胞Caco-2侵袭能力的影响,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶-7 (MMP-7)蛋白表达量的变化.结果:经MS-275处理后,Caco-2细胞的增殖活性明显降低,8μmol/L的MS-275处理细胞48 h,其对细胞活性抑制率高达54.50％,与对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.01;经MS-275处理后,Caco-2细胞侵袭能力明显降低,8μmol/L的MS-275处理细胞24 h,细胞侵袭率降低至15.70％,与对照组细胞相比较,差异有统计学意义,P＜0.01；MMP-7的蛋白表达随着MS-275的浓度升高而降低,其中8 μmol/L的MS-275处理细胞24 h,与对照组相比,MMP-7蛋白表达量降低至18.00％,差异有统计学意义,P＜0.01.结论:MS-275能有效抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖活性；MS-275能有效抑制结肠癌细胞Caco-2中MMP-7蛋白表达量；MS-275通过抑制MMP-7蛋白的表达能有效抑制结肠癌细胞Caco-2的侵袭能力.
关键词： 肠肿瘤 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 MS-275 细胞增殖 细胞侵袭 -
MS-275与姜黄素联用阻断细胞生存信号通路诱导前列腺癌细胞凋亡
目的 探讨小剂量姜黄素和组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275联用诱导前列腺癌细胞系DU145凋亡的作用机制.方法 DU145细胞分为对照组,MS-275组(分别用1、2、4、8μmol/L的MS-275 单独处理细胞24、48h)、姜黄素组(分别用10、20、40、80μmol/L的姜黄素处理细胞24、48h)、MS-275+姜黄素组(1μmol/L MS-275+20μmol/L姜黄素处理细胞24、48h).采用MTT比色法测定药物单用或联用对细胞的杀伤效应,流式细胞术分析细胞周期的改变,Western blotting 检测细胞内蛋白表达水平的变化.结果 MS-275和姜黄素单用都能够呈剂量和时间依赖性地杀伤DU145细胞;小剂量MS-275(1μmol/L)+姜黄素(20μmol/L)联用时能够协同杀伤细胞,两种药物联合处理细胞48h后,细胞的生存率仅为45.9%;细胞周期检测表明MS-275和姜黄素联用导致细胞出现明显的亚G1峰,提示DU145细胞被诱导凋亡;Western blotting 结果证实联合用药48h后,细胞内生存信号蛋白激酶Akt和ERK的磷酸化水平下降,同时凋亡标志蛋白 PARP 发生剪切.结论 MS-275和姜黄素联用可以协同杀伤 DU145细胞,并通过抑制细胞内Akt和ERK生存信号通路的活性来诱导细胞凋亡.
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HDAC抑制剂MS-275诱导人肺腺癌细胞系A549基因表达谱分析
目的 研究HDAC抑制剂MS-275对人肺腺癌A549细胞基因表达谱的影响,探讨MS-275抗肿瘤的分子机制.方法 运用制备的包含8 064个人类基因的cDNA芯片检测MS-275诱导人肺腺癌A549细胞基因表达谱的变化.结果 MS-275(2μmol · L-1)处理A549细胞16h后,cDNA芯片分析筛选出MS-275对A549细胞的影响基因803个,其中上调基因440个,下调基因363个,其中包括许多与细胞凋亡、细胞分化、DNA修复等相关基因如p21、DR6.结论 MS-275通过外源性凋亡信号、内源性凋亡信号和细胞周期阻滞等多种分子机制诱导A549细胞凋亡.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对U266细胞增殖的影响
目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤细胞U266增殖的影响.方法 将不同浓度的MS-275以不同时间作用于U266细胞,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响;瑞氏-姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;Western Blot检测P21、Cdk4、Acetyl-histone H3及PARP等的蛋白表达.结果 MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期,细胞发生明显变化.出现P21表达增加,Cdk4表达下降,同时出现PARP的裂解.结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275具有抑制人骨髓瘤细胞U266增殖作用,使细胞阻滞在G0/G1期,终诱导U266细胞凋亡.
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MS-275促进口腔鳞状细胞癌凋亡的实验研究
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对口腔鳞状细胞癌(Tca-8113)生长抑制情况以及促进凋亡的作用.方法 采用0、0.5、1、2、4、8μmol/L MS-275对口腔鳞状细胞癌进行干预,倒置相差显微镜观察细胞形态改变;MTT法检测细胞增殖活性;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪定量检测细胞凋亡,流式细胞仪分析细胞周期.结果 ①倒置相差显微镜下观察到对照组细胞呈多边形,贴壁,生长活跃;实验组细胞形态改变明显,大部分细胞核固缩,细胞变小、变圆、脱壁.②细胞生长曲线显示,随MS-275浓度增加、时间延长,Tca-8113细胞生长明显受到抑制,各实验组细胞生长抑制率与对照组相比,P<0.05,差别有统计学意义.③2、4μmol/L MS-275作用48h,细胞总凋亡率分别为41.28%和53.71%,细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比,差别有统计学意义.结论 MS-275体外抑制口腔鳞状细胞癌生长,呈时间-剂量依赖性,并促进细胞凋亡,阻滞细胞周期.
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MS-275抑制肝癌细胞HepG2增殖及其相关信号传导机制的体外实验研究
目的 研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂MS-275诱导人肝癌细胞株HepG2细胞周期阻滞作用,并对其信号传导机制进行初步探讨.方法 体外培养人肝癌细胞株HepG2;应用MTT比色法观察MS-275对HepG2的生长抑制作用,应用流式细胞仪检测MS-275对细胞周期的影响;Westem印迹分析细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p-p38MAPK三种蛋白表达的差异.结果 HDAC抑制剂MS-275能抑制肝癌细胞生长,具有时间和剂量的依赖性.可以引起细胞周期Go-G1期阻滞.MS-275可以使HepG2细胞p21蛋白表达提高,Cyclin D1蛋白表达降低,在SB203580组两蛋白的表达又恢复到对照组水平.p-p38MAPK蛋白在两组表达均提高.结论 MS-275能诱导肝癌细胞株的细胞周期阻滞,这种作用可能是通过p8MAPK信号传导途径介导的,与下调Cyclin D1的表达、上调p21的表达有关.
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MS-275联合平阳霉素对Tca-8113细胞生长和凋亡的影响
目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)MS-275联合抗生素类化疗药物平阳霉素(PYM)对口腔鳞状癌细胞Tca-8113的生长及凋亡的影响.方法:以体外培养的口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞为研究对象,应用MTT法检测不同浓度(0、1、2、4、8μmol/L)MS-275、(0、0.05、0.1、0.2、0.4μmol/L)平阳霉素(PYM)单独和联合用药对Tca-8113细胞增殖活性的影响;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞术定量检测细胞的凋亡情况.结果:不同浓度(1、2、4、8μmol/L)MS-275和(0.05、0.1、0.2、0.4μmol/L)PYM均可显著抑制Tca-8113细胞的增殖,并促进其凋亡,且呈浓度依赖性(P＜0.05).4μmol/L MS-275和0.2 μmol/LPYM联合应用时,其抑制Tca-8113细胞增殖和促进其凋亡的作用均显著高于单独应用MS-275或PYM(P＜0.05).结论:MS-275能有效增强口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞对平阳霉素(PYM)的敏感性,体外实验中呈现较好的抗肿瘤效应.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275在体外抑制胃癌细胞的实验研究
背景与目的:组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACis)对于很多肿瘤细胞具有选择性的诱导凋亡及分化作用,而对正常细胞的细胞毒性作用很低,这一选择性杀伤作用使HDACis成为目前抗肿瘤分子靶向药物的研究热点.本文研究了HDACis MS-275对人胃癌细胞SGC-7901、人胃黏膜正常细胞GES-1和张氏肝细胞(CHANG-LIVER)的选择性作用及机制,为HDACis的临床应用提供了理论依据.方法:不同终浓度MS-275处理SGC-7901细胞、GES-1和张氏肝细胞,用WST-1方法检测药物对细胞的生长抑制作用;AnnexinV、PI双标流式细胞术检测MS-275对肿瘤细胞SGC-7901和正常细胞的选择性杀伤作用;TUNEL染色观察肿瘤细胞核内凋亡情况.结果:MS-275对胃癌细胞SGC-7901具有明显的生长抑制作用,并且这种作用具有时间及剂量依赖性;MS-275的杀伤作用具有选择性,对正常细胞GES-1和张氏肝细胞并不表现出促凋亡作用;TUNEL染色证明MS-275能诱导SGC-7901细胞核内发生DNA断裂,是细胞发生凋亡的重要指标.结论:MS-275具有体外选择性杀伤胃癌细胞的作用,对正常细胞没有明显的杀伤作用,有希望成为新一代的胃癌临床治疗的肿瘤分子靶向药物.
关键词： 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 MS-275 细胞凋亡 胃癌 -
组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人宫颈癌SiHa细胞增殖及凋亡的影响
目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的机制.方法:以MS-275(0、5、10、20 μmol/L)作用于人宫颈癌SiHa细胞,MTT法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡,Western blotting法检测细胞内乙酰化组蛋白H4(acetylhistone4,Ac-H4)水平,RT-PCR检测p21和p53 mRNA的表达.结果:MS-275作用后,人宫颈癌SiHa细胞增殖受到抑制、细胞凋亡增加,20 μmol/L MS-275作用下,细胞增殖率仅为(13.95±8.91)％,凋亡率高达(38.38±1.78)％,显著高于其他各组(P＜0.01).MS-275作用后,细胞内Ac-H4水平增加(P＜0.01),p21和p53 mRNA表达增加(均P＜0.01).结论:MS-275可抑制人宫颈癌SiHa细胞的增殖,诱导SiHa细胞凋亡;上调p21和p53表达、提高组蛋白乙酰化水平可能是其作用机制之一.
关键词： 宫颈癌 组蛋白脱乙酰化酶抑制剂 MS-275 增殖 凋亡 -
MS-275对胃腺癌细胞抑制作用及其机制研究
目的采用分子靶向药物治疗胃癌是近年研究热点。探讨组蛋白去乙酰化酶抑制因子MS-275通过多种途径选择性杀伤人胃低分化腺癌细胞株SGC-7901的机制。方法10～100μmol/L 药物浓度梯度的MS-275分别与SGC-7901、人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1共培养24 h后，采用WST-1法检测SGC-7901及GES-1细胞存活率，流式细胞仪检测分析SGC-7901细胞线粒体膜电位变化，Western blot、实时荧光定量聚合酶链反应（RTQ-PCR）分别检测处理后胃癌细胞中p21、p27、p57、cyclin B1、cyclin D1基因及相应蛋白表达情况。结果 MS-275可使SGC-7901细胞存活率降低（P＜0.05），其作用随药物浓度增大更明显，对GES-1细胞无显著影响；MS-275可降低SGC-7901细胞线粒体膜电位（P＜0.05）；MS-275显著提升p21、p27、p57基因及相应蛋白相对含量，同时降低cyclin B1、cyclin D1基因及其蛋白相对含量（P＜0.05）。结论 MS-275可选择性杀伤胃腺癌细胞SGC-7901，这一作用可能是通过线粒体凋亡途径及调控细胞周期相关基因和蛋白表达实现的。
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MS-275对食管鳞癌KYSE-70细胞存活、细胞周期、凋亡及迁移的影响
目的:观察MS-275对食管鳞癌KYSE-70细胞存活、细胞周期、凋亡以及迁移的影响,并分析其对PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白p-Akt1和p-mTOR的影响.方法:采用qRT-PCR和Western blot检测KYSE-70细胞和正常食管上皮Het-1A细胞中HDAC1 mRNA及蛋白的表达;CCK-8法检测不同浓度(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00μmol/L)MS-275对KYSE-70细胞存活的影响;以0.00、0.25、0.50、1.00和2.00μmol/L MS-275处理KYSE-70细胞,48 h后流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移情况,Western blot检测细胞中Cyclin D1、Cleaved caspase-3、E-cadherin、p-Akt1和p-mTOR蛋白的表达情况.结果:与Het-1A细胞相比,KYSE-70细胞中HDAC1 mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.05);MS-275对KYSE-70细胞存活的影响具有时间和剂量依赖性(P<0.05);随着MS-275处理浓度的增加,KYSE-70 G0/G1期细胞增加、S期细胞降低,细胞凋亡率提高,划痕愈合率降低(P<0.05).MS-275可提高Cleaved caspase-3和E-cadherin蛋白的表达,降低Cyclin D1、p-Akt1和p-mTOR蛋白的表达(P<0.05).结论:MS-275可降低KYSE-70细胞存活率,有效抑制细胞迁移,阻滞细胞于G0/G1期,促进细胞凋亡,其作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路的抑制有关.
关键词： MS-275 食管鳞癌 组蛋白去乙酰化酶 PI3K/Akt/mTOR -
组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导骨髓瘤细胞株U266凋亡过程中Survivin的表达
背景与目的:组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi)是一类具有抗肿瘤活性的新型药物,主要通过诱导细胞凋亡发挥作用.本实验研究HDACi(MS-275)对人骨髓瘤细胞系U266细胞增殖和凋亡的影响及其与Survivin表达的关系.方法:将不同浓度的MS-275作用于U266细胞不同时间后,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响:通过瑞氏-姬姆萨染色观察药物作用后细胞形态学的变化;用流式细胞仪分析细胞周期;用Western blot检测Survivin、P21和Cdk4等的蛋白表达,以及凋亡信号通路中Caspase-3活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的裂解情况.结果:MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期.MS-275作用U266细胞48 h时的IC50为1.39 μmol/L;2 μmol/L的MS-275作用U266细胞24 h后,G0/G1期细胞占66.39%,36 h后G0/G1期细胞占89.80%.瑞氏-姬姆萨染色显示细胞形态发生明显变化.Western blot检测结果显示,MS-275作用U266细胞后,Survivin和Cdk4表达下降,P21表达增加,Caspase3被裂解活化,其底物蛋白PARP发生剪切.结论:MS-275抑制人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖并诱导细胞凋亡,可能与下调Survivin蛋白的表达有关.
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MS-275对异烟肼致肝细胞损伤中内质网应激的影响
目的 探讨MS-275对异烟肼( INH)致肝细胞损伤过程中内质网应激( ERS)的影响.方法人正常肝细胞HL-7702接种于6孔板,预培养24 h,随机分为对照组、INH组(1 000 μg/mL INH)、MS-275组(5 μmol/L MS-275)、INH+MS-275组(1 000 μg/mL INH+5 μmol/L MS-275),共4个组,经不同药物处理6 h后,收获细胞. RT -PCR 法检测 HDAC1、GRP78 和 CHOP 的 mRNA 水平,ELISA 法检测 HDAC1、GRP78和CHOP的蛋白含量,CCK8法检测细胞存活率.结果 INH处理6 h后肝细胞即出现损伤.给予组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS -275 后,细胞内 ERS 标志性分子 GRP78 的 mRNA 和蛋白水平显著增加( P ＜0.05);而CHOP的mRNA和蛋白表达则显著下降(P＜0.05),且肝细胞存活率明显增加(P＜0.05).结论INH致肝损伤过程中MS-275可以通过调控ERS缓解肝细胞损伤.
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Ⅰ型去乙酰化酶抑制剂MS-275对间充质干细胞C3H/10T1/2成脂分化的影响
目的 探讨Ⅰ型去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)MS-275对间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成脂分化的影响.方法 利用噻唑蓝(MTT)和碘化乙啶(PI)染色结合流式细胞术(FCM)分别检测不同浓度MS-275对C3H/10T1/2细胞活性和细胞周期的影响；油红0染色分析MS-275对C3H/10T1/2细胞成脂分化能力的影响；同时应用实时定量PCR( real-time PCR)检测MS-275对成脂分化标志物:脂结合蛋白(aP2)、围脂素(perilipin)、脂联素(Adipoq),以及成脂分化关键转录因子:过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPAR-γ2)mRNA转录水平的影响.结果 随着MS-275浓度升高,其对C3H/10T1/2细胞的抑制率也随着增高,IC50约为8μmol/L(P ＜0.05)；流式结果表明,MS-275将C3H/10T1/2细胞周期阻滞在G0/G1期；0.5 μmol/L的MS-275明显减少C3H/10T1/2细胞的脂滴积累；同时成脂分化标志物aP2、perilipin、Adipoq及成脂关键转录因子PPAR-γ2的转录水平也显著降低(P＜0.05).结论 MS-275减弱了间充质干细胞成脂分化的能力,表明抑制Ⅰ型HDACs的活性可部分抑制MSCs向成脂分化.
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组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂MS-275对胃癌细胞增殖的影响
目的:探讨组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂MS-275对胃癌细胞(MKN-45)和人正常胃黏膜细胞(GES-1)及张氏肝细胞(changliver)生长及凋亡的影响.方法:用不同浓度的MS-275分别处理体外培养的胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞及张氏肝细胞,用水溶性四唑盐(WST-1)法检测对细胞的增殖抑制作用；流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:MS-275可明显抑制胃癌细胞的生长且呈时间和浓度依赖性,细胞凋亡率明显增加,但对正常细胞没有促凋亡作用.低浓度的MS-275能诱导MKN-45细胞发生G0/G1期阻滞,随着药物处理时间的延长,可以明显检测到G0/G1期比例增大.结论:去乙酰化转移酶抑制剂MS-275对胃癌细胞MKN-45具有选择性细胞毒作用,为其临床应用提供了有价值的实验依据,有望成为新的抗胃癌药物.
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MS-275通过上调ROS释放选择性杀伤胃癌细胞
目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275通过线粒体凋亡途径，选择性杀伤胃癌细胞的具体作用机制。方法：MS-275分别处理GES-1、MKN-45细胞，通过WST-1法检测细胞存活率，分析MS-275细胞毒性及选择性杀伤作用；通过流式细胞术检测线粒体膜电位变化，及ROS抑制剂对MS-275凋亡诱导作用的影响；Western blot、PCR分别检测处理后胃癌细胞中p21、p57、cyclin D1、cyclin E1、和TBP-2的mRNA及蛋白水平表达情况。结果：MS -275对正常胃黏膜上皮细胞GES -1存活率无显著性影响，但对胃癌细胞MKN-45影响显著（P＜0．05）。MS-275对胃癌细胞MKN-45线粒体膜电位影响不显著，但能够诱导ROS显著升高，ROS抑制剂显著降低由MS-275诱导的ROS释放。MS-275显著激活肿瘤抑制基因p21、p57、TBP-2以及细胞周期蛋白相关基因cyclin D1、cyclin E1的表达。结论：MS-275通过促进细胞周期阻滞因子、凋亡诱导基因、肿瘤抑制基因的表达，诱导ROS生成，选择性杀伤胃癌细胞。
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U266细胞在组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导下凋亡观察
目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发件骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响.方法:台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏-姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;Western Blot检测凋亡信号通路中Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]裂解情况.结果:MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期.MS-275作用48 h的IC50为1.39 μmol/L;2 μmol/L MS-275作用细胞24 h后,G0/G1期64.57%;36 h占82.20%.瑞氏-姬姆萨染色显示细胞发生明显变化.Western Blot检测表明MS-275作用U266细胞后,Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9被裂解活化,其底物蛋白聚ADP核糖聚合酶发生剪切,细胞发生凋亡.结论:MS-275可抑制细胞增殖,并使细胞阻滞在G0/G1期,通过激活细胞内外2条凋亡级联信号通路诱导U266细胞凋亡.
关键词： 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 多发性骨髓瘤 细胞系U266 MS-275 凋亡
